Artigo originAl

Implante autlogo de condrcitos para o tratamento de leso do cndilo femoral e talo

Autologous chondrocyte implantation to treat femoral condyle and talar lesions
Moises Cohen1, Caio Nery2, Maria Stella Peccin3, Cibele Ramos Rssio4, Incio Diogo Asaumi5, Christiane Bertachini Lombello6

rESUMo
objetivo: Relatar os primeiros casos de implante autlogo de condrcitos no Brasil. Mtodos: Foram selecionados pacientes jovens, com leses traumticas localizadas no cndilo femoral e talo. A avaliao clnica foi realizada com exames imaginolgicos e artroscopias. resultados: Foi observado o preenchimento da leso com o tecido neoformado. Os pacientes apresentaram melhora de qualidade de vida, retomando as atividades cotidianas e esportivas. Concluses: Concluiu-se que o implante autlogo de condrcitos uma tcnica promissora para o tratamento de leses condrais do cndilo femoral e do talo. Descritores: Traumatologia; Cartilagem; Condrcitos; Biotecnologia; Tcnicas de cultura de clulas

ABStrACt
objective: To show the first Brazilian autologous chondrocyte implantation. Methods: Young patients with localized lesions in femoral condyle and talus were selected. The clinical evaluation was complemented with the imaginologic resources. results: The neoformed cartilage tissue occupies the defect. The patients showed improve in the quality life, returning to the daily and sport activities. Conclusions: It was possible to concluded that the autologous chondrocyte implantation is a promising technique for the treatment of femoral condyle and talar condral lesions. Keywords: Traumatology; Cartilage; Chondrocytes; Biotechnology; Cell culture techniques

introDUo A dificuldade de reparo de leses condrais um desafio para os ortopedistas. Alternativas convencionais(1) e cirrgicas(2) normalmente resultam em alvio de sintomas do paciente sem, no entanto, a formao de tecido hialino no local da leso. As tcnicas cirrgicas, como a microfratura, so baseadas no princpio de preenchimento da leso condral com clulas mesenquimais provenientes da medula ssea(3), resultando na formao de um tecido fibroso, com constituio e propriedades biomecnicas distintas do tecido hialino originalmente presente(4). O implante autlogo de condrcitos, tambm denominado de transplante autlogo de condrcitos por alguns autores, uma tcnica desenvolvida no final dos anos 1980 na Sucia, que utiliza os princpios da Biotecnologia para o tratamento de leses condrais(5-7). A tcnica possibilita a regenerao da cartilagem hialina lesada, restaurando a biomecnica articular. As clulas utilizadas na tcnica so autlogas, obtidas por artroscopia com coleta de bipsia de cartilagem de uma rea de pouca carga da articulao(6). Esta amostra de cartilagem submetida digesto enzimtica para o isolamento dos condrcitos as clulas da cartilagem(8-9). Os condrcitos so, ento, proliferados in vitro, uma vez que esta condio no obtida in vivo, devido ausncia de inervao e vascularizao do tecido associado alta especializao dos condrcitos. Foram estabelecidos

Trabalho realizado no Departamento de Traumatologia da Universidade Federal de So Paulo Unifesp, So Paulo (SP), Brasil.
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Livre-Docente, Professor do Departamento de Ortopedia e Traumatologia da Universidade Federal de So Paulo UNIFESP; Chefe do Centro de Traumatologia do Esporte do Departamento de Ortopedia e Traumatolgia da Universidade Federal de So Paulo UNIFESP; Instituto Cohen de Ortopedia, Reabilitao e Medicina do Esporte So Paulo (SP), Brasil. Livre-Docente, Professor do Departamento de Ortopedia e Traumatologia da Universidade Federal de So Paulo UNIFESP, So Paulo (SP), Brasil. Professora Adjunta, Departamento da Cincia da Sade da Universidade Federal de So Paulo UNIFESP, So Paulo (SP), Brasil. Ps-Graduanda pela Universidade Federal de So Paulo UNIFESP, So Paulo (SP), Brasil. Mdico do Hospital Estadual de Diadema So Paulo (SP), Brasil. Doutora em Biologia Celular e Gerente de Pesquisa e Desenvolvimento, GMReis, Campinas (SP), Brasil. Autor correspondente: Christiane Bertachini Lombello Travessa Perez Y Marin Guanabara CEP 13020-250 Campinas (SP), Brasil Tel.: 19 3233-0020 e-mail: clombello@hotmail.com No h conflito de interesse dos autores. Data de submisso: 31/7/2007 Data de aceite: 16/1/2008 einstein. 2008; 6(1):37-41

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protocolos de cultura que permitem a eficiente proliferao celular. Quantidade considervel de clulas (106) injetada diretamente no stio da leso condral(6-7). Para a inoculao das clulas cultivadas, foi descrita uma tcnica cirrgica especfica, criando uma cavidade fechada na leso condral, com a sutura ao redor da leso de uma membrana de peristeo retirada da tbia do paciente. Os condrcitos implantados tm a capacidade de se reorganizar para a produo de matriz hialina, com as mesmas caractersticas da cartilagem hialina original. Observa-se a integrao do tecido neoformado, preenchendo toda a profundidade da leso(6). Dados demonstram 71% de preenchimento nas primeiras oito semanas aps o tratamento com tecido de natureza basicamente hialina, simulando a formao embriolgica da cartilagem(7). A partir dos primeiros resultados clnicos publicados em 1994(6), outros relatos cientficos demonstram a regenerao da cartilagem lesada e a retomada de qualidade de vida dos pacientes(10-13). Estudos posteriores possibilitaram o aprimoramento da tcnica, por meio de utilizao de duas camadas de peristeo para o preparo da leso tcnica sandwich(14), uso de fatores de crescimento nas culturas de condrcitos(15), uso de bioreatores(16) e, principalmente, desenvolvimento de biomateriais utilizados como carreadores celulares para os condrcitos(17-18).

haviam sido submetidos anteriormente a tratamentos conservadores e cirrgicos sem resultados satisfatrios. Resumidamente os critrios de seleo dos pacientes incluram: ausncia de processos degenerativos articulares; pacientes jovens e ativos (idades entre 15 e 55 anos); tratamento prvio (cirrgico ou convencional) ineficaz; persistncia de dor e limitao de movimentos. Dos pacientes com leso do cndilo femoral (condromalcea grau IV), dois eram do sexo feminino e um do masculino. As leses tinham dimenso mdia de 46 mm (variando entre 40 e 50 mm). Os pacientes com leso osteocondral do talo, dois do sexo feminino e um do masculino, apresentavam leses com dimenso mdia de 22 mm (variando entre 20 e 24 mm). As leses eram localizadas na metade medial do talo, envolvendo as pores central e posterior. O tratamento constou de trs fases distintas: artroscopia para coleta de bipsia de cartilagem; cultura celular para proliferao dos condrcitos; artrotomia para implante das clulas.

oBJEtiVo O objetivo deste estudo foi relatar os primeiros casos clnicos do implante autlogo de condrcitos realizados no Brasil. MtoDoS Pacientes Foram includos neste trabalho seis pacientes jovens, com idade mdia de 30 anos (variando entre 20 a 39), apresentando leso condral traumtica, sendo trs pacientes com leso de cndilo femoral e trs com leso osteocondral do talo (Quadro 1). Os pacientes
Quadro 1. Pacientes submetidos ao transplante autlogo de condrcitos durante o perodo de 2003 a 2005. Dados referentes aos pacientes Paciente idade Sexo I II III IV V VI 39 36 29 25 20 35 F F M M F F leso Cndilo femoral Cndilo femoral Cndilo femoral Talo Talo Talo lado Dimenso D E D D D D 40 mm 48 mm 50 mm 24 mm 23 mm 20 mm tratamento prvio Artrotomia + artroscopia Artroscopia Conservador Artroscopia Artroscopia + artrotomia Artrotomia

Artroscopia Os pacientes selecionados foram submetidos artroscopia para coleta de amostra e cartilagem de uma rea de pouca carga do cndilo femoral medial superior (mesmo para leses do talo). As amostras de cartilagem, pesando aproximadamente 400 mg, foram coletadas com pina artroscpica e depositadas em meio de cultura(6). Nessa etapa cirrgica, foi realizado o preparo, desbridamento da leso, bem como a avaliao da necessidade de enxertia ssea. isolamento e cultura dos condrcitos As amostras de cartilagem articular foram transportadas at um laboratrio de engenharia de tecidos, onde foram submetidas ao processo de digesto enzimtica para o isolamento das clulas(8-9). Os condrcitos foram ento cultivados na presena de meio HamF12 contendo 1% de penicilina/estreptomicina e 10% de soro autlogo por perodos de aproximadamente 30 dias. Foram realizadas avaliaes microbiolgicas e teste de identidade de tecidos. Ao trmino da cultura as clulas, foram tripsinizadas, centrifugadas e concentradas em 0,3 ml de meio. implante dos condrcitos joelho Para o implante dos condrcitos cultivados no cndilo femoral foi realizada tcnica cirrgica descrita previamente(6). Os pacientes com anestesia geral foram submetidos artrotomia com torniquete para acesso leso condral. A cartilagem ao redor da leso foi desbridada, e pequenos sangramentos foram contidos

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com o uso de noradrenalina. Foi realizado um molde da leso condral em papel estril para a retirada de uma membrana de peristeo da tbia, por meio de uma segunda inciso. O peristeo foi suturado sobre a leso condral com fio reabsorvvel 6-0 (Vicryl, Johnson & Johnson) umedecido em glicerina estril, para criar uma cavidade fechada. A sutura foi selada com cola de fibrina, tendo sido deixado apenas um orifcio para injeo da suspenso celular. Aps a inoculao das clulas e finalizao da sutura do peristeo, foi realizada a sutura da cpsula articular, retinculo e pele.

Orthopaedic Foot and Ankle Score (AOFAS). Foi adotado o nvel de significncia de p < 0,05. Foram realizadas ressonncias magnticas para acompanhamento dos pacientes e artroscopia posterior ao implante em cinco pacientes, com bipsia da rea tratada.

implante dos condrcitos talo Para o implante dos condrcitos cultivados no tornozelo, foi realizada tcnica cirrgica descrita previamente(1921) . Os pacientes com anestesia geral foram submetidos artrotomia do tornozelo com osteotomia do malolo medial. A cartilagem ao redor da leso foi desbridada e foi feito um molde da leso em papel estril. Segundo a tcnica sandwich, duas membranas de peristeo obtidas da tbia (por meio de segunda inciso) foram utilizadas para criar uma cavidade na leso condral. A primeira membrana de peristeo foi colocada na base da leso com cola de fibrina, mantendo a orientao parietal voltada para o osso subcondral. A segunda membrana foi suturada ao redor da leso, criando uma cavidade fechada. A sutura seguiu os passos descritos anteriormente. Aps a inoculao das clulas, o malolo medial foi fixado ao seu local de origem e os planos superficiais foram fechados de maneira usual. reabilitao A fase inicial da reabilitao deve ser cuidadosa e adaptada para cada leso especificamente. A movimentao da articulao com CPM (do ingls continuous passive motion) ou no aparelho suropodlico foi iniciada no ps-operatrio imediato. Os exerccios isomtricos foram iniciados precocemente e a liberao da carga foi iniciada nas primeiras oito semanas aps a cirurgia. Aps o stimo ms, foram retomadas as atividades de baixo impacto. Aps 12 meses, os pacientes retomaram inclusive atividades de impacto repetitivo e alto impacto. Avaliao Os pacientes foram avaliados clinicamente segundo o questionrio especfico para sintomas do joelho de Lysholm e o instrumento genrico de qualidade de vida (SF-36). Para avaliar os sintomas de tornozelo, o teste t de Student permitiu comparar as mdias da Escala Analgica da Dor e o teste de Wilcoxon foi realizado para comparar os valores do escore da American

rESUltADoS A fase de cultura celular foi realizada, em mdia, em 30 dias. No foram detectados contaminantes em nenhuma das culturas celulares. As cirurgias transcorreram normalmente, sem intercorrncias. O tempo cirrgico da segunda etapa, a artrotomia, foi de aproximadamente duas horas, devido principalmente sutura da camada de peristeo sobre a leso condral (Figura 1). A sintomatologia dos pacientes tratados no joelho foi consideravelmente reduzida aps a cirurgia, segundo o questionrio Lysholm (Quadro 2), e todos os domnios do SF-36 apresentaram melhora significativa, com valores mdios de 90-100 (mximo de 100). Resultados semelhantes so apresentados pelos pacientes tratados no tornozelo, a partir de dados relativos dor e ao escore da AOFAS (Quadro 3). Os pacientes alcanaram

Figura 1. Paciente IV, leso talar. Tcnica de implante autlogo de condrcitos. A. Mensurao da leso condral; B. Desbridamento da leso condral e preparo do osso subcondral; C. Fixao da primeira membrana de peristeo sobre o osso subcondral (apenas nas cirurgias de talus); D. Sutura da membrana de peristeo superior ao redor da leso condral para criar uma cavidade fechada, possibilitando a injeo dos condrcitos cultivados

Quadro 2. Valores numricos e nominais da escala de Lysholm questionrio especfico para sintomas do joelho Paciente Pr-operatrio Ps-operatrio Second look I 62 (ruim) 95 (excelente) 9 meses II 37 (ruim) 100 (excelente) 4 meses III 65 (regular) 89 (bom) --Avaliao final 30 meses 30 meses 24 meses

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Quadro 3. Resultados da dor e escore AOFAS para os sintomas de tornozelo Paciente IV V VI Dor pr-operatrio 8 8 7 Dor ps-operatrio* AoFAS pr-operatrio AoFAS ps-operatrio* 0 39 100 3 38 90 2 55 87 Second look 14 meses 12 meses 13 meses Avaliao final 34 meses 31 meses 30 meses

* Comparaes pr x ps-operatrias significativas para p < 0,05

a consolidao das osteotomias dos malolos entre a sexta e oitava semanas do ps-operatrio. As ressonncias magnticas demonstraram a formao de tecido semelhante ao tecido original, confirmado com as artroscopias posteriores (second look, conforme Figura 2). Foi possvel observar a integrao do peristeo na superfcie articular e a formao de tecido abaixo do peristeo preenchendo a cavidade condral. A identao do tecido no apresentava o mesmo padro de reas vizinhas ao implante, principalmente nas avaliaes anteriores aos 12 meses, mas um padro tpico de condromalcea grau I. O pequeno intervalo de tempo at a realizao da artroscopia justifica esse achado, uma vez que a regenerao tecidual ocorre a partir do osso subcondral at a superfcie articular. Os pacientes submetidos artroscopia por volta de 12 meses aps o implante apresentavam identao semelhantes cartilagem vizinha, sadia.

Figura 3. Histologia da rea tratada 12 meses aps o tratamento com a formao de tecido hialino no local da leso. A. Paciente IV (20x); B. Paciente V (40x)

Figura 2. Paciente I, leso de cndilo femoral. A. Medio intra-operatria da leso condral; B. 12 semanas de ps-operatrio, evidncia da formao tecidual na rea tratada; C. Artroscopia com 36 semanas ps-operatrias, integrao do peristeo; D. Regenerao tecidual 12 meses aps a cirurgia

As bipsias realizadas demonstram a integrao do peristeo e a neoformao de tecido cartilaginoso hialino na rea do implante celular (Figura 3). Em um dos pacientes, foi relatada a adeso da articulao do joelho, sendo resolvida por artroscopia. Os pacientes retomaram as atividades cotidianas e esportivas no prazo de 12 meses. Os resultados clnicos e imaginolgicos permaneceram durante o tempo de acompanhamento dos pacientes.
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DiSCUSSo A dificuldade de regenerao do tecido condral permanece at os dias de hoje. No entanto, o avano da Biotecnologia trouxe alternativas, como o uso de fatores de crescimento(22) ou biomateriais(23). O avano mais significativo na rea de regenerao condral est relacionado terapia celular(6,8,19). Desde 1987, tem sido proposto o reparo de leses condrais com o uso de clulas autlogas(5). Os estudos experimentais demonstraram no apenas o reparo tecidual, mas a regenerao de cartilagem hialina originalmente presente na articulao(7). Esses dados foram comprovados posteriormente em estudos com humanos(6). Os condrcitos cultivados in vitro sofrem um processo de desdiferenciao celular induzido por fatores fsicos e bioqumicos(24-27). Nessa condio, os condrcitos aderem ao substrato de cultura e apresentam morfologia alongada, tpica de fibroblastos. A alterao fenotpica tambm acompanhada por alterao de expresso gnica e os condrcitos passam a sintetizar preferencialmente colgeno do tipo I, com a diminuio da sntese de colgeno tipo II e do proteoglicano agregan(24-25). A alterao fenotpica e genotpica favorece a proliferao celular. As clulas proliferadas so capazes de retornar condio diferenciada por meio de estmulos bioqumicos e por interao com substratos pouco adesivos(8,25-26). Uma vez implantadas em uma leso condral, as clulas tm a capacidade de adeso ao osso subcondral, retomando o fentipo e gentipo caractersticos e regenerando a rea lesada. A presena de clulas desdiferenciadas em alta densidade na leso condral simula a formao embriolgica da cartilagem(6). Estudos publicados demonstram a formao de cartilagem hialina no local tratado, justificando a retomada de atividade dos pacientes e o alvio da sintomatologia resultados considerados permanentes(10-12,19-21,28-30). No presente trabalho, observou-se a significativa melhora na qualidade de vida dos pacientes tratados, com a retomada das atividades e ausncia de sintomatologia

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posterior ao tratamento. O perodo de reabilitao de extrema importncia para o sucesso do tratamento e deve ser cuidadosamente seguido pelo paciente. A regenerao tecidual pode ser observada nos exames imaginolgicos, e os resultados foram comprovados com artroscopias e bipsia. A realizao das artroscopias posteriores com coleta de bipsia possibilitou observar a integrao do peristeo e a formao de tecido com o pleno restabelecimento da leso. No foram observados efeitos adversos ao tratamento. Uma das pacientes apresentou adeso da articulao tratada por artroscopia. A partir da cirurgia, a paciente no apresentou demais sintomas. A evoluo dos pacientes tratados segue o padro descrito na literatura, bem como as imagens obtidas durante o acompanhamento dos pacientes, tanto de ressonncia magntica quanto de artroscopia. Esses resultados indicam a adequao tcnica do implante realizado em nosso meio.

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ConClUSES Concluiu-se, apesar do nmero de pacientes, que o implante autlogo de condrcitos uma tcnica promissora para o tratamento de leses condrais traumticas, possibilitando a recuperao da rea lesada. Novos estudos envolvendo o desenvolvimento de biomateriais e o aprimoramento da tcnica cirrgica so perspectivas futuras para esse procedimento. AgrADECiMEntoS Agradecemos ao Instituto Israelita de Ensino e Pesquisa Albert Einstein, pelo suporte financeiro, e empresa GMReis, pela doao das culturas celulares. rEFErnCiAS
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