Janeiro 2008

Relatrio I

Observao de indivduos de Drosophila melanogaster

Escola Secundria Garcia de Orta rea de Projecto 07/08 Por Gisela Brando Pereira (10), Mafalda Marques Cirne Machado Carvalho (22), Maria Beatriz Brito Oliveira (25) e Pedro Manuel Correia Rodrigues (28), do 12 ano, turma B Professora responsvel: Dr. Rosa Soares

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Relatrio I, realizado no mbito da disciplina de rea de Projecto de 12 ano, leccionada na Escola Secundria Garcia de Orta Porto, com vista documentao da actividade de Observao de indivduos de Drosophila melanogaster, no projecto Drosophila melanogaster no estudo da Gentica, integrado no Projecto MoKiDros Cincia Viva, no ano lectivo 2007/2008.

O presente documento da autoria do grupo de trabalho responsvel, nomeadamente Gisela Brando Pereira (10), Mafalda Marques Cirne Machado Carvalho (22), Maria Beatriz Brito Oliveira (25) e Pedro Manuel Correia Rodrigues (28) alunos da turma B do 12 ano da escola em cima considerada, inscritos na disciplina de rea de Projecto - a ser leccionada pela Professora Rosa Soares -, tendo sido formulado em Janeiro de 2008. O grupo refere, desde j, que o presente relatrio funcionar como um registo de resultados e primeira reflexo acerca dos mesmos, e no como um relatrio complexo de ndole cientfica.

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Sumrio
1. Objectivos .................................................................................................................................. 3 2. Introduo terica .................................................................................................................... 3 3. Protocolo experimental ............................................................................................................ 6 3.1. Material ............................................................................................................................. 6 3.2. Procedimento .................................................................................................................... 7 4. Registo dos resultados ............................................................................................................. 8 5. Discusso dos resultados ........................................................................................................ 12 6. Concluso ............................................................................................................................... 14 7. Bibliografia e sitogafia ............................................................................................................ 15

1. Objectivos
- Observar exemplares de organismos de Drosophila melanogaster; - Distinguir machos de fmeas; - Distinguir fmeas virgens; - Caracterizar alguns mutantes; - Distinguir as fases do ciclo de vida de Drosophila melanogaster; - Familiarizao com os mtodos de manipulao de Drosophila melanogaster.

2. Introduo terica
A Drosophila melanogaster conhecida por mosca da fruta constitui um organismo modelo em estudos de Gentica, tendo permitido obter dados importantes sobre a estrutura e funcionamento dos genes, evoluo e desenvolvimento embrionrio.
Universidade do Porto Faculdade de Cincias

Foi Thomas Morgan, um importante embriologista da Universidade de Colmbia (NY EUA), quem realizou, a partir de 1910, aprofundados trabalhos e estudos genticos com Drosophila melanogaster. Em 1933, acabou por receber o Prmio Nobel.

Na verdade, a mosca-da-fruta (ou, mais correctamente, mosca-do-vinagre) um excelente material biolgico para trabalhos experimentais de Gentica devido s seguintes caractersticas: - reduzidas dimenses (3 a 4 mm); - fcil conservao, alimentao e manuseamento; - ciclo de vida curto;
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- descendncia em nmero elevado; - fcil distino dos sexos; - grande variedade de caracteres de fcil distino; - caritipo com apenas 4 pares de cromossomas.

Quanto sua morfologia, Drosophila apresenta o corpo dividido em cabea, trax e abdmen. Na cabea, distinguem-se as antenas, os olhos e as peas bucais; no trax, que constitudo por 3 segmentos, apresenta 3 pares de patas; no abdmen, possui uma ntida segmentao e este que constitui o centro de nutrio. A classificao da espcie considerada actualmente mais correcta a seguinte: Tipo: ARTHROPODA Classe: INSECTA Ordem: DIPTERA Famlia: DROSOPHILIDAE Gnero: Drosophila Espcie: Drosophila melanogaster
Imagem 1. Forma selvagem

semelhana do que se verifica na maioria dos seres vivos, o ciclo de vida da Drosophila melanogaster depende das condies ambientais. O tempo mdio de vida das fmeas de 26 dias e de 33 para o macho, sendo que os mutantes podem apresentar um tempo de vida mais curto. O seu ciclo de vida apresenta 4 fases: ovo, larvas, pupas e a fase adulta.

Imagem 2. Ciclo de vida de Drosophila melanogaster

So vrias as diferenas morfolgicas existentes entre o macho e a fmea dimorfismo sexual. Contudo, e tendo em conta o objectivo deste trabalho, essa abordagem ser feita na Interpretao/Concluso. Sero ainda tidos em conta os traos distintivos das fmeas virgens.
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A Drosophila apenas apresenta quatro pares de cromossomas, dos quais trs so autossomas e um corresponde ao par de cromossomas sexuais. As fmeas so homogamticas e os machos heterogamticos.

Imagem 3. Caritipo feminino esquerda e caritipo masculino direita

A forma de Drosophila melanogaster predominante denomina-se forma selvagem wild tipe (wt) e apresenta olhos vermelhos, corpo cinzento e asas longas. Contudo, so vrios os mutantes j descritos, apresentando caractersticas morfolgicas distintivas evidentes. As mutaes podem ocorrer espontaneamente ou serem induzidas a nvel laboratorial (raios X, raios gama e agentes qumicos mutagnicos). So vrias as caractersticas que podem variar nos mutantes, desde as asas ao corpo, passando pelos olhos. A Tabela 1 faz referncia a trs exemplos de indivduos mutantes que sero considerados na actividade experimental.

Mutante
Cinabar White Vestigial

Cromossoma mutado
2 X 2

Designao
cn w vg

Tabela 1. Mutantes utilizados na actividade decorrida

Em suma, toda a aparente simplicidade que revela a Drosophila melanogaster permite que esta constitua um importante modelo para o estudo da transmisso de caractersticas hereditrias. Para que esse estudo seja possvel, necessrio proceder observao e familiarizao com o insecto. Assim, a actividade experimental considerada ter uma importncia muito relevante em trabalhos futuros. Mais informaes tericas podem ser obtidas mediante consulta dos vrios documentos presentes no Dossier de Projecto.
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3. Protocolo experimental
3.1. Material
- Populao de Drosophila melanogaster (machos e fmeas), do tipo Cinabar, Yellow e Vestigial (ver Tabela 1); - Tubos de cultura - Estufa - Pincis - Pinas - Frasco de vidro alto - Falcon ou tubo plstico - Funil - Algodo - ter - Papel branco - Placa de Petri - Lupa com ligao ao computador - Mquina digital

Tubo de plstico ter Frasco com algodo Pincel Placa de Petri com papel Pina
Imagem 4. Algum material referido pelo protocolo e utilizado

Imagens 5 e 6. Tubos de cultura e lupa com ligao ao computador

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3.2. Procedimento
Montagem da cmara de adormecimento - Perfurar o tubo de plstico com uma agulha previamente aquecida; - Colocar o algodo no interior do frasco de vidro; - Embeber um pouco de ter no algodo; - Colocar o tubo de plstico dentro do frasco de vidro, mas este no deve contactar directamente no algodo; - Colocar um funil por cima do tubo de plstico.
Imagem 7. Adormecimento

Observao de exemplares de Drosophila melanogaster - Adormecer alguns exemplares, colocando-os no interior do tubo de plstico; - Quando as moscas estiverem imveis, observar lupa sob um fundo branco (para tal, utilizar, por exemplo, um pouco de folha de papel branca); - Distinguir o corpo dividido em cabea, trax e abdmen; - Observar os segmentos do corpo, nmero de patas, parte genital, as asas, plos, olhos, pente sexual no caso dos machos;

Imagens 8, 9 e 10. Observao de Drosophila melanogaster

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Seleco de fmeas virgens - Separam-se as fmeas dos machos, adormecidos na placa de Petri, com a ajuda de um pincel ou uma pina, observando este procedimento pela lupa electrnica. - Das fmeas, selecciona-se as que apresentam um corpo mais claro e uma mancha escura na parte posterior do abdmen (na maior parte dos casos), ou seja, as virgens. Deve-se realizar esta recolha 10 horas aps a ecloso das moscas, perodo durante o qual no h acasalamentos. - Colocam-se em cada tubo cerca de quatro fmeas virgens e dois machos (os machos no precisam de ser virgens). por vezes necessrio repetir o procedimento de adormecimento das moscas, visto que elas devem estar adormecidas durante todo o procedimento. - Identificam-se os tubos com o nmero de moscas de cada sexo, o tipo de mutante e a data. - Guardaram-se os tubos na estufa entre 21C e 25C.

4. Registo dos Resultados

Foram observadas 3 populaes de mutantes de Drosophila melanogaster distintas, j referidas inicialmente. Recolheram-se os seguintes dados relativos aos 3 ensaios: Nmero do ensaio 1 2 3 Mutante Cinabar White Vestigial Presena de larvas No No No Presena de pupas No No No Fmeas - Virgens 1 2 0 Total 5 4 4 Machos - 10 16 9

Tabela 2. Registo da contagem de fmeas e machos nos 3 ensaios realizados, bem como da presena de larvas e pupas nos mutantes considerados

Imagem 11. Larva 2 estdio (fotografia anterior actividade)

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Imagem 12. Pupa (fotografia anterior actividade)

Imagem 13. Cinnabar

Imagem 14. White

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Imagem 15. Wild type

Caractersticas morfolgicas gerais (Ver Tabela 5 para esquema/observao) Corpo dividido em cabea, trax e abdmen; Trax dividido em trs segmentos; Trs pares de patas, um em cada segmento do trax; Par de asas (total de 2) no 2 segmento do trax; Asas finas e membranosas; Halteres no 3 segmento; Plos espalhados pelo corpo; Olhos compostos multifacetados.
Tabela 3. Registo das principais caractersticas morfolgicas observadas

Na distino dos sexos (entre os machos e as fmeas), salientaram-se as seguintes caractersticas: Principais caractersticas distintivas (Ver Tabela 5 para esquema/observao) Machos - Fmeas - Tamanho relativo do corpo menor; Tamanho relativo do corpo maior; Extremidade do abdmen negra; Extremidade do abdmen tpica de listas Extremidade do abdmen mais arredondada; claras e escuras; Parte ventral com pnis e arco genital; Parte ventral com placa vaginal. Presena de um pente sexual na base do Extremidade do abdmen menos metatarso do par de patas anterior. * arredondada; Inexistncia de pente sexual. Fmeas virgens Corpo mais claro; Presena de uma mancha escura na parte posterior do abdmen, numa posio lateral; Asas pouco distendidas.
Tabela 4. Principais caractersticas distintivas observadas (* - primeiro par de patas junto cabea)

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Imagem 15. Fmea virgem (MoKiDros 06/07)

Imagem 16. Morfologia (MoKiDros 06/07)

No que diz respeito s suas caractersticas morfolgicas mutagnicas, verificou-se o seguinte: Nmero do ensaio 1 2 3 Mutante Cinabar White Vestigial Caracterstica mutante Olhos Corpo Asas Aspectos morfolgicos Olhos Corpo Asas Vermelho vivo Cinzento Longas Brancos Cinzento Longas Vermelho Cinzento Vestigiais

Tabela 5. Registo da caracterstica mutante e dos aspectos morfolgicos das trs populaes estudadas

NOTA: A referncia caracterstica olhos remete para a sua cor, assim como quando se fala no corpo. No que diz respeito s asas, considera-se o seu desenvolvimento (tamanho).

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Surgem ainda outros registos relevantes:

Tempo mdio de adormecimento dos exemplares: 2 minutos. Dois exemplares acordaram e foram novamente anestesiados; um dos exemplares morreu. Em nenhum dos trs tubos observados pelo grupo de trabalho se verificaram quaisquer tipos de mutantes diferentes dos indicados na sua referncia.
Tabela 6. Registo da caracterstica mutante e dos aspectos morfolgicos das trs populaes estudadas

5. Interpretao dos resultados

Analisando de uma forma global os dados obtidos, possvel concluir que os resultados vo de encontro aos objectivos inicialmente definidos. Na verdade, foi possvel observar trs populaes distintas de Drosophila melanogaster, bem como um stock da forma selvagem, que serviu de base para o estudo do dimorfismo sexual que se verifica na espcie. No foram observadas, em nenhum dos tubos utilizados, pupas ou larvas. De certa forma, este facto um pouco contraditrio, uma vez que o nmero de fmeas virgens registado baixo. Contudo, a situao pode ser justificada pelo longo tempo que ter passado desde a instalao das populaes nos tubos, o que j pode ter permitido a ecloso de possveis descendentes. Ao mesmo tempo, no se verificaram tambm mutantes distintos dos que, partida, estariam no interior do tubo. Isto pode ser justificado, por exemplo, pela no ocorrncia de cruzamentos ou apenas pela transmisso da informao para a caracterstica identificada no tubo e no para outra contrastante (segregao factorial). Um outro facto interessante que a existncia de mais do que um macho para cada fmea. Na verdade, esta situao que permite a cpula, uma vez que permite fenmenos de interaco e luta entre os exemplares. Ainda neste contexto, verifica-se que o tubo com maior nmero de fmeas virgens tambm aquele que tem maior nmero de machos, o que , eventualmente, contraditrio. De qualquer das formas, tendo em conta a complexidade dos mecanismos de acasalamento associados Drosophila melanogaster, o valor aceitvel. As caractersticas morfolgicas gerais da espcie so bem visveis lupa. Na realidade, os registos efectuados vo de encontro s indicaes bibliogrficas consultadas. Por trs de toda a arquitectura anatmica da mosca-da-fruta encontram-se uma srie de mecanismos gnicos que controlam o seu desenvolvimento embrionrio, que culminam nas caractersticas observadas.

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A segmentao do seu corpo permite uma maior organizao morfolgica. de citar o pormenor de existirem trs segmentos torcicos e de todos eles possurem um par de patas. As asas precedem os halteres, que permitem o seu equilbrio, sendo estas finas e membranosas, com vista a facilitar o seu rpido voo. O dimorfismo sexual verificado curioso. Os traos distintivos entre o macho e a fmea so muito claros, de onde se salientam o abdmen e o pente sexual. Os machos, de dimenses inferiores s fmeas (estas necessitam de ter um abdmen por razes bvias: transportaro a descendncia no seu interior), apresentam uma colorao homognea do abdmen, contrariamente s segundas. Ao mesmo tempo, manifestam ainda a existncia de um pente sexual caracterstico, essencial no momento da cpula. Todas estas caractersticas, associadas a fenmenos de quimiotaxia, permitem que o acasalamento seja eficaz e que ocorra a transmisso das caractersticas hereditrias aos descendentes da espcie. de referir ainda o contraste verificado entre o pnis () e a placa vaginal (). Tendo em conta registos bibliogrficos, rapidamente se compreende a existncia de uma mancha negra no abdmen (parte posterior, numa posio lateral) das fmeas virgens mancha de mecnio. Na verdade, esta resulta de restos de alimento fornecidos pelo embrio. Algumas apresentaram as asas pouco distendidas, o que pode estar relacionado com o facto de ainda no terem interagido, na actividade da cpula, com o macho. Apesar de no se ter observado todo o stock disponvel, evidente a diversidade de mutantes possveis para a espcie em causa. interessante verificar que, normalmente, apenas uma caracterstica muito particular varia (apesar de poderem ser mais), o que remete para a complexa organizao do material gentico da Drosophila. Este aspecto importante. Na realidade, a observao da variao de trs tipos de caractersticas (olhos, corpo e asas) permitiu fazer um contraste com a forma selvagem e concluir que as mutaes actuam, a nvel fenotpico, sobre aspectos distintos. Por exemplo, no tipo Cinabar, apenas a cor dos olhos varia relatiamente ao Wild type, contrariamente a que se verifica, por exemplo, no mutante Vestigial, onde apenas as asas sofrem alteraes. Tendo agora em conta outros procedimentos registados, salienta-se, em primeiro lugar, a necessidade de bater com os tubos na banca de trabalho, com vista a proceder de fora mais eficaz sua transferncia. Esta atitude permite obter um maior nmero de moscas para observao lupa. Um outro aspecto importante a forma de arquitectar a estratgia de adormecimento/anestesia. Quantidades excessivas de ter no algodo poderiam levar morte imediata dos exemplares, pelo que as gotas a colocadas foram cuidadosamente quantificadas. Nos trs ensaios realizados, o tempo mdio de adormecimento foi de 2 minutos. A durao escolhida foi determinada pelo primeiro adormecimento, que se mostrou eficaz no tempo dispendido. O facto de dois exemplares terem acordado levou necessidade de os colocar de novo no tubo de adormecimento. Contudo, devido ao tempo excessivo que uma das moscas ficou em contacto com o ter, esta acabou por morrer. De citar que no surgiram quaisquer

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problemas com o adormecimento dos mutantes vestigial, uma vez que praticamente no voam, apesar de se movimentarem na placa. O facto de no se ter observado pupas ou larvas nos trs tubos considerados e observados pelo grupo pode ser justificado pela temperatura na qual os exemplares se encontravam. Na verdade, uma temperatura de 25o C seria muito mais adequada ao desenvolvimento e copulao. Contudo, uma vez que se encontravam a 18oC, tais acontecimentos podero no se ter verificado. O facto de no se verificarem invlucros (pertencentes s supostas pupas) vazios nos tubos pode erradicar a hiptese de que a descendncia j ter nascido e terminado o seu desenvolvimento at forma adulta. Em suma, foram bastantes os registos adquiridos na actividade realizada, no se tendo verificado qualquer tipo de situao anmala grave. De referir que podem ter sido cometidos erros de contagem. Os objectivos foram cumpridos e o trabalho experimental realizado na normalidade, sem qualquer tipo de obstculos ou acidentes, excepo da morte de um dos exemplares, que no pode ser considerada significativa.

6. Concluso
Tal como referido no ponto 5, o trabalho decorreu sem quaisquer tipo de problemas e os objectivos iniciais foram cumpridos. As caractersticas morfolgicas de Drosophila melanogaster so bastante evidentes lupa, o que permitiu obter os resultados pretendidos. Na verdade, toda a actividade permitiu conhecer melhor a Drosophila melanogaster, que tem grande relevncia nos estudos da Gentica, assim como as suas tcnicas de manipulao laboratorial, que no apresentaram quaisquer dificuldades. Alm disso, tendo em conta a sua importncia actual e futura, pensamos que esta abordagem laboratorial ao modelo animal um grande contributo para a fomentao do conhecimento cientfico adquirido, normalmente, pelos manuais. magnfico verificar laboratorialmente dados que, partida, no seriam mais do que fundamentos tericos. A morfologia da mosca estudada est direccionada para a sua sobrevivncia associada ao voo e para a cpula, elementos essenciais permanncia de qualquer espcie. Mais interessante ainda compreender que todos estes mecanismos esto associados informao gentica que esta possui, que posta em evidncia com a observao de mutantes. Aps esta actividade de familiarizao com a espcie, pensamos que ser possvel compreender melhor os conhecimentos tericos relacionados com a transmisso das suas caractersticas hereditrias descendncia. A observao de indivduos de Drosophila , sem dvida, o ponto de partida para algo maior. Sem dvida que nos permitir ter um melhor desempenho em actividades futuras, como os cruzamentos.

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Em concluso, a Drosophila melanogaster um ptimo modelo animal para estudo gentico laboratorial, tal como foi referido bibliograficamente no incio do relatrio.

7. Bibliografia e sitiografia Livros

SILVA, Amparo Dias et al. Terra, Universo de Vida Biologia 12 ano Porto Editora, Porto, 1 edio, 2006 RIBEIRO, Elsa et al. Biodesafios Biologia 12 ano Edies ASA, Porto, 1 edio, 2005

Artigos e outros documentos

Actividade Experimental Zero: Observao () melanogaster (Protocolo), ESGO/Projecto MoKiDros, 2006 Como elaborar () cientfico, ESGO, 2007 Protocolo: utilizao de () Gentica: 1 Parte, Ordem dos Bilogos, 2001

Sitiografia
http://www.ordembiologos.pt/Publicacoes/Biologias/Droshort%20--%2001Jan01.pdf http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/D/Drosophila.htm http://www.ceolas.org/fly/ http://biblioteca.universia.net/html_bura/ficha/params/id/3894745.html http://sdb.bio.purdue.edu/flyaimain/11aahome.htm http://bioweb.wku.edu/couses/Biol114/Vfly1.asp http://br.geocities.com/supersabbath/insetos-drosofila.html http://pt.wikipedia.org/wiki/Drosophila_melanogaster http://www.scb.org.br/fc/FC61_03.HTM http://www.cientic.com/ http://www.yale.edu/ynhti/curriculum/1996/5/96.05.01.x.html http://drosophila.herpetoloy.com/

CD-Rom/DVD-Rom
Diciopdia 2008, Porto Editora Multimdia, 2007

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