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120
100
v (U/mg prot)
80
60
40
cooperatividad negativa
20
0 0 2 4 6 8 10
[S] (mM)
Rosario A. Muoz-Clares
Rosario A. Muoz-Clares
La unin del efector alostrico (inhibidor o activador) es cada vez ms fcil a medida que la enzima se satura ms y ms por eeste ligando. Dependencia sigmoidal de la velocidad inicial vs la concentracin del efector alostrico.
Rosario A. Muoz-Clares
10
cooperatividad positiva
v (U/mg prot.)
no cooperatividad
4
v(U/mg prot)
sin cooperatividad
cooperatividad positiva
2
0 0 1 2 3 4
0 0 1 2 3 4 5
[Inhibidor] (mM)
[Activador] (mM)
Rosario A. Muoz-Clares
Son enzimas oligomricas que poseen varios sitios activos y varios sitios alostricos y exhiben una cintica de saturacin por sus sustratos y/o efectores alostricos de tipo sigmoidal, resultado de una unin cooperativa de estos ligandos.
Rosario A. Muoz-Clares
Rosario A. Muoz-Clares
Permiten amortiguar cambios grandes en la concentracin de ligandos, respondiendo con cambios pequeos en la velocidad de la reaccin catalizada.
Rosario A. Muoz-Clares
Estos valores son igualmente vlidos para la saturacin por activadores o inhibidores
Rosario A. Muoz-Clares
Rosario A. Muoz-Clares
ECUACIN DE HILL
Vmax [S]nH v =
nH S0.5
nH [S]
Rosario A. Muoz-Clares
Vmax = velocidad lmite a la que tiende la reaccin cuando toda la enzima est saturada por el sustrato. S0.5 = concentracin de sustrato a la que se alcanza la mitad de la Vmax, es decir, el 50% de saturacin de la enzima por el sustrato (no confundir con Km que es un parmetro que slo existe cuando la cintica de saturacin es Michaeliana). nH = nmero de Hill, que indica el tipo y el grado de cooperatividad en la unin del ligando.
Rosario A. Muoz-Clares
nH > 1 nH = 1 nH < 1
Rosario A. Muoz-Clares
En la cooperatividad negativa
Indica el grado de cooperatividad entre los sitios para unir al ligando.
Rosario A. Muoz-Clares
log
v (Vmax - v)
= nHlog[S] nHlogS0.5
Rosario A. Muoz-Clares
Log(v/(Vmax-v))
-1
-2
-3
LogS0.5
Log[S]
Rosario A. Muoz-Clares
Rosario A. Muoz-Clares
Regulacin traduccional
Sntesis de la protena
Regulacin postraduccional
Degradacin de la protena
Rosario A. Muoz-Clares
Reversible
Adicin de un grupo qumico Oxidacin-reduccin de cistenas
Rosario A. Muoz-Clares
ZIMGENOS
Formas inactivas de enzimas que son convertidas a las formas activas por proteolisis en sitios especficos. En general son enzimas proteolticas que de sintetizarse activas produciran daos a la clula. Se activan una vez fuera de la clula que las produce (caso de las enzimas proteolticas digestivas o las que desencadenan la cascada para la coagulacin de la sangre) o cuando deben llevar a la muerte celular (caso de las caspasas en apoptosis).
Rosario A. Muoz-Clares
FORMACIN DE QUIMOTRIPSINA
Reductores
(DTT, 2-mercaptoetanol, glutatin, tiorredoxina, etc)
Cistenas vecinas
Disulfuro
Rosario A. Muoz-Clares
ISOENZIMAS
Protenas que en un organismo catalizan la misma reaccin pero estn codificadas por genes diferentes. Difieren en sus propiedades cinticas. Se expresan diferencialmente en diferentes tejidos, organelos o estados fisiolgicos o patolgicos.
Rosario A. Muoz-Clares
k P
v = k [S] = k [X] Keq = [X] / [S] [X] = Keq [S] G = -RT ln Keq Keq = e- G /RT v = k Keq [S] = k e- G /RT [S]
k = k e- G /RT
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LnVmax
3.2 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0 1.8 3.15 3.20 3.25 3.30 3.35 3.40
m = -Ea / R
3.45
3.50
3.55
1/T (K-1)
Rosario A. Muoz-Clares
Determinar en cunto tiene una enzima que disminuir la energa de activacin de la reaccin no catalizada para incrementar esta velocidad 106 veces sin modificar ni la concentracin de sustratos ni la temperatura, 25 oC, a la que se lleva a cabo la reaccin. Discuta sus resultados. vc/vnc = 106 vc/vnc = kc / knc kc = k e- Gc /RT knc = k e- Gnc /RT vc/vnc = e (-Gc + Gnc)/ RT Ln106 = (Gnc - Gc) / RT Gnc - Gc = Ln106 RT Gnc - Gc = 13.8 x 1.987 cal K -1 mol-1 x 298.15 K = 8.175 cal mol-1 LA ENERGIA DE~ DOS PUENTES DE H!!!
Rosario A. Muoz-Clares
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EFECTOS DE INMOVILACIN
Rosario A. Muoz-Clares
ANTICUERPOS CATALTICOS
Los anticuerpos obtenidos frente a un compuesto anlogo del estado de transicin de una reaccin catalizan esta reaccin al unirse al estado de transicin ms que al sustrato de la reaccin.
Rosario A. Muoz-Clares
CATLISIS CIDO-BSICA CATLISIS ELECTROSTTICA CATLISIS COVALENTE CATLISIS POR IONES METLICOS
Rosario A. Muoz-Clares
Catlisis cido-bsica
La catlisis cida general consiste en la transferencia de un protn desde un residuo de la enzima, que se comporta como un cido de Bronsted, al sustrato o intermediarios de la reaccin, disminuyndose as la energa libre del estado de transicin. La catlisis bsica general consiste en la transferencia de un protn desde el sustrato o intermediarios de la reaccin a un residuo de la enzima, que se comporta como una base de Bronsted, disminuyndose as la energa libre del estado de transicin. Si se dan ambos tipos de catlisis se tiene una catlisis cidobsica concertada.
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Catlisis electrosttica
La enzima estabiliza intermediarios o estados de transicin de la reaccin por neutralizacin de cargas gracias a la disposicin espacial en el sitio activo de residuos con carga opuesta. En otros casos la distribucin de cargas en el sitio activo sirve para guiar a sustratos cargados o polares a sus sitios de unin.
Rosario A. Muoz-Clares
Catlisis covalente
La enzima forma transitoriamente un enlace covalente con el sustrato. La catlisis covalente consiste en tres pasos sucesivos:
Ataque nucleoflico de la enzima sobre el sustrato (formacin del enlace covalente). Toma de electrones por el catalizador u otro sustrato (formacin del producto). Separacin del producto de la enzima (ruptura del enlace covalente, generalmente por hidrlisis).
Rosario A. Muoz-Clares
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6. Ataque nucleoflico del in hidroxilo sobre el carbono del carbonilo formndose de nuevo un intermediario tetradrico. 7. Ruptura del enlace que este carbono formaba con la serina cataltica: El carbono pasa de nuevo a planar (doble enlace con el oxgeno). La histidina cataltica cede un protn a la serina facilitando la liberacin del otro fragmento de la cadena polipeptdicacon su grupo carboxilo terminal libre. La enzima regresa a su estado inicial.
Rosario A. Muoz-Clares
Rosario A. Muoz-Clares
Rosario A. Muoz-Clares
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