Universidad de Puerto Rico en Humacao

Facultad de Ciencias Naturales

Departamento de Biología

Simulación de la Prueba de Huella Digital de

DNA

Sharon M. Boschetti-Medina

801-01-0907

BIOL 3306 Sec. 00

Prof. Baerga
Introducción

El ácido desoxirribonucleico (DNA) es una substancia química encontrada en

todos los seres vivientes. Contiene el código para todos nuestros atributos físicos así
como las instrucciones para todas las funciones del cuerpo, incluyendo crecimiento,
desarrollo, y replicación. Gracias a esto cada persona es diferente tanto físicamente
como genéticamente. En términos generales se puede decir que el genoma es muy
parecido entre los individuos de la especie humana, esto es que 99.99% es común en
todos. Este genoma esta compuesto por tres mil millones de nucleótidos de los cuales
se han identificado alrededor de 1.4 millones en los cuales se han encontrado
diferencias de un individuo a otro. La técnica de la huella digital del DNA (DNA
fingerprinting) en términos generales permite detectar las diferencias en el DNA en
diferentes personas. Los métodos para utilizar esta técnica se basan en el análisis de
fragmentos dados por el corte de ciertas regiones variables con enzimas de restricción.
Esto envuelve cuatro pasos básicos: 1) aislar el DNA del individuo; 2) Corte del DNA
en secciones mas pequeñas y manejables; 3) Separación de los pedazos por tamaño e
identificar los que corresponden a las regiones variables y; 4) Analizar el perfil de
pedazos de cada individuo. Ese análisis es lo que generalmente se conoce como DNA
fingerprinting.

Este método es utilizado en una variedad de procesos tales como determinación

de paternidad, casos legales (asesinato, violaciones y otros delitos menores),
identificación de cadáveres, en las ciencias entre otros. A pesar de ser un método
técnicamente infalible, cabe la posibilidad de hallarse errores, como por ejemplo si la
muestra utilizada se contamina, si el método de cálculo para la determinación del
porcentaje varía entre otros. En lo antes dicho cabe mencionar el caso de O.J.
Simpson. Para este caso, la prueba se aplicó para determinar su culpabilidad o
inocencia en el asesinato de su ex esposa y un amigo de esta. Pero debido a que la
evidencia expuesta supuestamente se hallaba contaminada la prueba realizada fue
descartada. Este ejercicio de laboratorio tiene como objetivo familiarizarnos con la
técnica de DNA fingerprinting y de sus aplicaciones en el estudio de la biología.
También tiene como objetivos familiarizarnos con el análisis de perfiles de restricción
en diferentes individuos y como la prueba es aplicable a cada uno de estos casos.
Materiales y Métodos

Para la realización de esta simulación se utilizaron una serie de ejercicios en los

cuales se aplicaron los siguientes pasos: Aislamiento del DNA genómico, corte de DNA
genómico con enzimas de restricción, separación, y el análisis de los pedazos de DNA.
Para el primero se explicó que los métodos de rompimiento de tejidos, las envolturas
que rodean la célula y la membrana plasmática son los utilizados y que mayormente
para romper los mismos se utilizan detergentes. Una vez rota la pared celular y
separado el DNA genómico se procedió al siguiente paso. El corte del DNA genómico
con enzimas de restricción. Estas enzimas de restricción son endonucleasas de
reconocimiento de secuencias específicas dentro del DNA. Estas catalizan la ruptura
del enlace fosfodiester entre dos nucleótidos dentro de esa secuencia conocida como
RE palindromica (en dirección 5’a 3’ en cada cadena, la secuencia es la misma). Una
vez cortado el DNA, los pedazos son separados por tamaño en una gelatina de agarosa
por el método conocido como electroforesis. La electroforesis es una técnica para
la separación de moléculas (proteínas o ácidos nucleicos) sobre la base de su
tamaño molecular y carga eléctrica. Los ácidos nucleicos ya disponen de una
carga eléctrica negativa, que los dirigirá al polo positivo, mientras que las
proteínas se cargan con sustancias como el SDS (detergente) que incorpora
cargas negativas de una manera dependiente del peso molecular. Para la
separación se usa un gel de agarosa o poliacrilamida (fibras cruzadas, como
una malla). Al poner la mezcla de moléculas y aplicar un campo eléctrico, éstas
se moverán y deberán ir pasando por la membrana a través de los poros, por la
que las pequeñas se moverán mejor y más rápidamente. Así, las más
pequeñas avanzarán más y las más grandes quedarán cerca del lugar de
partida. Finalmente se inicia el análisis de los pedazos de DNA ya separados
y de ahí se determina lo que compone la huella genética del individuo.
Resultados e Interpretación

Ejercicio 1: Enzimas de restricción

1. Localiza la secuencia que reconoce la enzima Hae III (5’GGCC 3’).

Corte cada pedazo de DNA (Hae III corta entre G y C).

José

a. Cromosoma materno:

5’ ATCTTGACCAATGTGAAAGGCCAATATAGCATTGGCCAAGCTCTC 3’

3’ TAGAACTGGTTACACTTTCCGGTTATATCGTAACCGGTTCGAGAG 5’

b. Cromosoma paterno:

5’ATCTTGGCCAATGTGAAGGCCAATATAGCATTGGTCAAGTTCTC 3’

3’TAGAACCGGTTACACTTCCCGGTTATATCGTAACCAGTTCAAGAG
5’

María

a. Cromosoma materno

5’ ATGTTGGCCAATGTGAGGACCAATATAGCATTGGCAAAGCTCTCG 3’

3’
TACAACCGGTTACACTCCTGGTTATATCGTAACCGTTTCGAGAGC 5’

b. Cromosoma paterno

5’ATCTTGGCCAATATCAAAGACCAATATAGCATTGGCCAAGCTCTC 3’

3’TAGAACCGGTTATAGTTTCTGGTTATATCGTAACCGGTTCGAGAG 5’
2. ¿Cuantos fragmentos se producen al cortar el cromosoma materno de
José y María; de qué tamaño son estos?

a. José: 3 fragmentos; sus tamaños son de 20, 15, y 10 bp.

b. María: 2 fragmentos; sus tamaños son de 7 y 38 bp.

3. ¿Cuántos fragmentos se producen al cortar el cromosoma paterno de

José y María y de que tamaños son estos?

a. José: 3 fragmentos; sus tamaños son de 7,13 y 25 bp.

b. María: 3 fragmentos; sus tamaños son 7, 28 y 10 bp.

4. ¿Cuántos fragmentos se producen de la muestra de DNA de José y María

y de que tamaño son estos?

a. José: 6 fragmentos; sus tamaños son 20, 15, 10, 7, 13 y 25 bp.

b. María: 5 fragmentos; sus tamaños son 7, 7, 28, 38 y 10 bp.

5. Separe por tamaño los fragmentos generados del DNA de José y María
en una gelatina de agarosa.
Marcador de Maria José
tamaño

40
39
38
37
36
35
34
33
32
31
 30
29
28
27
26
25
24
23
22
21
20
19
18
17
16
15
14
13
12
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1

6. ¿Identifica esta prueba diferencias genéticas entre José y María?

a. Si

7. Explique genéticamente a que se deben esas diferencias.

a. Estas diferencias genéticas se deben a que existen regiones

variables dentro del genoma. Las diferencias en el genoma se
pueden dar de dos maneras. Uno es el simple cambio de bases o
la repetición de secuencias pequeñas de nucleótidos, como en
este caso que las diferencias entre ambos genomas consistió en
un cambio de bases; en el cromosoma materno de José había ATC
 mientras que en el cromosoma materno de María comenzaba con
ATG.

Ejercicio 2: Se mezclan tres bebes en un hospital

Resumen:

Tres familias tuvieron hijos a la misma hora y el mismo día en el mismo

hospital. Una alarma de incendios fue activada y los infantes fueron
desalojados inmediatamente. Una vez pasado el peligro el personal del
hospital se percató que ninguno de los infantes había sido identificado. Por ello
se realizo una prueba de DNA Fingerprinting para determinar que bebe le
pertenecía a cada familia.

a. ¿Cual es tu interpretación de esos datos? Presenta tus argumentos

i. El bebé número 1 pertenece al Sr. y la Sra. Stevenson. Esto es así ya

que tanto el patrón como el tamaño de las bandas del bebé
concuerdan con la de ambos padres. Por las mismas razones el bebé
número 2 pertenece al Sr. y la Sra. Jones y el bebé número 3
pertenece al Sr. y la Sra. Smith.

Ejercicio 3: Un caso de paternidad

Resumen:

El Sr. Megabucks muere recientemente. Repentinamente aparecen tres

mujeres alegando tener un hijo de este hombre. El Sr. Megabucks
anticipándose a los eventos antes de morir dejó una muestra de su sangre
congelada para que se pudiese realizar una prueba de DNA y así determinar
cual de estos es su hijo.
 a. ¿Cual es tu interpretación de esos datos? Presenta tus argumentos

i. El hijo del Sr. Megabucks es el numero 2. Esto es así ya que tanto el

tamaño y la posición en donde se hallan las bandas concuerdan con el
marcador obtenido del Sr. Megabucks. A pesar de que los hijos 1 y 3
también tenían bandas compatibles, loa gran mayoría de las bandas
las obtuvo el hijo numero 2 porque tenia igual proporción de bandas de
la madre que del padre

Ejercicio 4: El caso del cuchillo ensangrentado

Resumen:

Heinrich Millhouse, un ladrón internacional de joyas es asesinado

durante un robo al Museo de Arte Nacional. En la escena del crimen se halló
debajo del cuerpo de la victima un cuchillo ensangrentado. Al día siguiente la
policía arresto a su compañero de crimen ocasional, Englewood Smink, el cual
durante el interrogatorio admitió que había tenido un accidente en la cocina
esa mañana debido al cuestionamiento con respecto a una cortadura en al
mano. Ante esto el inspector ordeno se realizaran pruebas de DNA a la
victima, la sangre en la ropa de la victima, la sangre en el cuchillo encontrado
bajo la victima y de Smink.

a. ¿Cual es tu interpretación de esos datos? Presenta tus argumentos

i. Pudo haber resultado como una emboscada de parte de Millhouse

hacia Smink, donde Millhouse ataco a Smink haciéndole una
cortadura en la mano. Como respuesta Smink le dispara a Millhouse,
matándolo y huyendo con las joyas. Es por esto que considero de
acuerdo a los resultados obtenidos en la prueba de DNA que el señor
Smink es Culpable. Las pruebas nos demuestran que la sangre
encontrada en el cuchillo era de ambos. Mientras que la sangre en la
ropa era solo de Millhouse.
b. ¿Debe ser liberado Smink? ¿Por qué?

Smink no deberá ser liberado. Hasta que se pruebe quien mato a

Millhouse y/o tenga una cuartada con la cual justifique su declaración de
los hechos por la cortada de su brazo. Esto también lo ayudara en no ser
acusado por la muerte de Millhouse.

c. ¿Deben llevarse a cabo otras pruebas?

Se pueden y se deberían realizar más pruebas con las cuales se

resuelvan los casos de la muerte de Millhouse y el robo de las joyas.
Referencias:

• Manual de Laboratorio Genética 2006. Baerga-Santini,

Carmen; Cintrón Isabel; Dávila, Iván. pp. 226-235.

• Conceptos de Genética 5ta Edición 1999. Klug, William. ;

Cummings, Michael. pp. 498-500.

• http://www.pruebadepaternidad.info/

• http://www.query.nytimes.com/gst/fullpage.html?res=990CE4DE16
3CF935A15755C0A962958260