PRACTICA # 10 DETERMINACIN DE TRIGLICRIDOS EN SANGRE

II. OBJETIVOS Determinar la concentracin de los triglicridos en el suero. II. INTRODUCCIN a) Triglicridos Los triglicridos, denominados tambin triacilgliceroles, tripalmitinas son lpidos que estn formados por tres molculas de cidos grasos y una molcula de alcohol: el glicerol. Estos lpidos en parte se obtienen de la dieta, sin embargo en muchos tejidos, especialmente enhga do y ente jido adi poso se produce la sntesis de triglicridos a partir de carbohidratos (se forman por reaccin de dos molculas de acil-CoA grasos con glicerol-3fosfato para producir cido fosfatdico, que se desfosforila a diacilglicerol, que es seguidamente acilado por una tercera molcula de acil-CoA, produciendo finalmente el triglicrido, mediante la enzima glicerofosfato aciltransferasa). El tejido adiposo est especialmente diseado para la sntesis, almacenamiento e hidrlisis de triglicridos. Siendo este el mecanismo principal que tiene el cuerpo para el almacenamiento de energa a largo plazo, tambin se produce almacenamiento en el msculo esqueltico y cardaco, slo para consumo local. La sntesis de triglicridos en el hgado se utiliza principalmente para la produccin de lipoprotenas sanguneas. b) Lipoprotenas sanguneas Son macromolculas compuestas por lpidos y protenas, encargadas del transporte de lpidos a travs del cuerpo humano. Su funcin es envolver los lquidos insolubles en el plasma provenientes de: los alimentos (exgenos) y los sintetizados por nuestro organismo (endgenos), que son transportados desde el intestino y el hgado a los tejidos perifricos y viceversa; devolviendo el colesterol al hgado para su eliminacin del organismo en forma de cidos biliares. Ms del 95% de todos los lpidos del plasma est en forma de lipoprotenas, que son pequeas partculas muchos ms pequeas que los quilomicrones pero de una composicin similar desde el punto de vista cualitativo. Los lpidos no pueden movilizarse en los fluidos corporales debido a su naturaleza hidrofbica. Por ello, para permitir su transporte en el organismo, son combinados con protenas llamadas betaglobulinas para formar lipoprotenas.

Una vez que los lpidos han sido absorbidos a travs del intestino, se combinan en el plasma sanguneo con cadenas de polipptidos para producir una familia de lipoprotenas distinta, las que son clasificadas en funcin de su densidad, determinada mediante centrifugacin. Como los lpidos son mucho menos densos que las protenas, se observa una relacin inversa entre el contenido de lpidos y su densidad; por ejemplo, un alto contenido de lpidos significa partculas de baja densidad. Clasificacin de las lipoprotenas segn su densidad HDL o lipoprotenas de alta densidad La HDL sirve para remover el colesterol de las paredes de las arterias y devolverlo al hgado. Niveles altos de HDL (superiores a 45 mg/dL) se considera que protegen las arterias del peligroso estrechamiento y, as, contribuyen a prevenir los ataques cardacos. En un estudio, los niveles de HDL por debajo de 35 mg/dl fueron estrechamente predictivos de muerte por enfermedad arterial coronaria. LDL o lipoprotenas de baja densidad Estas son las agresoras y son las que ms dao nos pueden producir porque contienen mayor cantidad de colesterol, estas cantidades de colesterol y steres asociadas a la LDL son habitualmente de unas dos terceras partes del colesterol plasmtico total. VLDL o lipoprotenas de muy baja densidad Esta partcula, compuesta sobre todo de triglicridos es secretada por los hepatocitos y contiene apolipoprotenas B-100. Concentraciones elevadas de VLDL dan como resultado hipertrigliceridemia. Los triglicridos de la partcula C-VLDL plasmtica circulante son eliminadas por lipasas titulares (deslipidacin) para almacenarse (lipasa lipoproteica adiposa) o utilizarse (lipasa lipoproteica esqueltica). La apolipoprotena C tiene una funcin muy importante en la modulacin de la actividad de las lipasas lipoproteicas. Quilomicrones Lipoprotenas de muy baja densidad menor a 0.95 y son precursoras de las lipoprotenas de baja densidad. Son relativamente bajas en protenas, fosfolpidos y colesterol, pero altas en triglicridos (55 a 95 %). En trminos ms amplios, estas partculas son denominadas lipoprotenas ricas en triglicridos. Derivaban de las grasas dietarias (exgenas) absorbidas en el intestino, y se forman en el epitelio intestinal. Estas partculas consisten sobre todo en triglicridos (98% de su peso) con colesterol y una sola apolipoprotena, la B-48.

*.OBTENCIN DE TRIGLICRIDOS Va exgena Obtencin de triglicridos a travs de la dieta y absorcin de monoacilgliceroles a nivel del intestino. Va endgena Obtencin por biosntesis tanto en el hgado (sntesis de VLDL) como en el tejido adiposo (sntesis y degradacin). Para la determinacin de triglicridos en suero se utilizan reactivos comerciales (Kit comercial de LinearChemicals) que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificacin por espectrofotometra visible. Las reacciones que tienen lugar son:

Triglicridos + H2O

Glicerol + Ac. Grasos

GK

Lipasa

Glicerol + ATP Glicerol-3-P + ADP

GPOD

Glicerol-3-P + O2

Dihidroxiacetona + H2O2
POD

H2O2 + p-clorofenol + 4-AP Quinona (COLOR)+ H2O

1. Una lipasa hidroliza los triglicridos dando glicerol mas cidos grasos libre.

2. El glicerol formado es sustrato de una glicerol quinasa que en presencia de ATP lo fosforila a glicerol 3P. 3. El glicerol 3P es oxidado a dihidroxiacetona por una glicerol fosfato oxidasa dando tambin perxido de hidrgeno. 4. El perxido de hidrgeno junto con los cromgenos p-clorofenol y 4-AP son sustrato de una peroxidasa para formar una quinona roja cuantificable a 505 nm. La quinona formada es proporcional a la concentracin de triglicridos presente en la muestra. IV-MATERIAL Y METODO EQUIPOS. REACTIVOS: Agua destilada Buffer fosfato Clorofenol Liprotein lipasa peroxida

pH7 2.7nM/L 2000U/L 500U/L

Glicerol 3 fosfato oxidasa 4000U/L Glicerol Kinasa 500U/L V- PROCEDIMIENTO Lo mismo que el anterior

REACTIVO Suero Estandar Reactivo de trabajo (mL)

B -----1ml

S --10 ul 1ml

MP 10ul -1ml

Colocamos a centrifugar durante 5 minutos. -Leer con el espectrofotmetro la observancia de 500 nm(), poniendo a cero con el tubo blanco VI-CALCULOS Y RESULTADOS El Colesterol se expresa en mg/dl o mmol/litros. FACTOR=200/Absorvancia Estndar=200/0.982=202,63 TRIGLICERIDO(mg/dl)=FACTOR x Abs.Muestra=202,63 x 0.713=144,47mg/dl VALORES ESPERADOS -Normal -Limite Alto -Alto -Muy Alto. menor 150mg /dl 150-200 mg/dl 200-500mg/dl Mayor a 500 mg/dl

Estos valores son sugeridos .Se recomienda que cada laboratorio establezca el rango para el rea en que est localizado VII.CONCLUSIONES IMPORTANCIA CLNICA

La evaluacin de triglicridos en sangre es importante para el diagnstico y seguimiento de las hipertrigliceridemias, ya sean de origen gentico o secundarias entre otras enfermedades. Valores elevados aumentan el riego de arteriosclerosis y de enfermedad coronaria. -Hipertrigliceridemia - Pancreatitis - Agrandamiento del hgado - Agrandamiento del bazo - Depsitos grasos en la piel conocidos como xantomas. - Fuera de esto, los triglicridos pueden no provocar otros sntomas hasta que se presentan enfermedades cardiacas o de los vasos sanguneos. - Factor importante de riesgo de arterosclerosis. - Arteriopata coronaria VII BIBLIOGRAFIA -DOcon Navaza C, Garca-Saavedra MJ, Vicente Garca JC (1999): Fundamentos y Tcnicas de Anlisis Bioqumico, Anlisis de Muestras Biolgicas. Editorial Paraninfo, Madrid. -Gonzlez de Buitrago JM, Arilla Ferreiro E, Rodrguez-Sedade M, Snchez Pozo A (1998): Bioqumica Clnica . Editorial McGraw-Hill.-Interamericana, Madrid. -Informacin detallada a cerca de los productos analticos de Linear Chemical SL lo encontrar en htp:// www.linear.es