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Cmo se realiza el cultivo? Sembrar es colocar una muestra de inculo, en un medio de cultivo para obtener el crecimiento de los microorganismos.

Para ello se extiende la muestra sobre caja de Petri, que contiene un gel (Agar) al que se han aadido las substancias que necesitan los microorganismos para crecer. A esto lo llamamos medio de cultivo. A veces se aaden otras clases de sustancias; por ejemplo, para impedir el crecimiento de otras bacterias que podran contaminar el cultivo. La siembra se puede hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos de vidrio con gel, frascos con lquidos nutritivos para los microorganismos. A continuacin se procede a la "incubacin" del medio ya sembrado. En cada caso se hace en condiciones particulares de presin de oxgeno, temperatura, agitacin, duracin, etc. Muchas de las bacterias patgenas crecen bien a temperaturas cercanas a los 37C habituales de nuestro organismo. Si el cultivo bacteriano tiene xito, crecern "colonias" de bacterias en el medio de cultivo. Estas colonias tienen caractersticas de color, forma, tamao etc. propias de cada bacteria y esto nos ayuda a identificarlas. Tambin se puede someter a las bacterias de las colonias a pruebas bioqumicas o de otro tipo para lograr su identificacin. Algunas bacterias son muy difciles de cultivar, otras tardan mucho tiempo en crecer y algunas, finalmente, no se han conseguido cultivar.

Sistemas de Siembra Antes de iniciar la siembra se deben cumplir determinadas condiciones: Esterilizacin de los instrumentos de trabajo y de los medios de cultivo. Los medios de cultivo se esterilizan con calor hmedo en la autoclave y los materiales de vidrio se esterilizan con calor seco en el horno Pasteur. En el caso de objetos metlicos, como el asa de siembra, que se esterilizan en el momento de su utilizacin, se mantienen en la llama hasta que se pongan al rojo, teniendo la precaucin de enfriarlos antes de su uso. Que el inculo no se contamine, modifique o destruya para lo cual se utiliza calor directo, flameando las bocas de los tubos de ensayo, matraces, la pipeta y dems elementos antes y despus de su utilizacin.

Esterilizacin del rea de trabajo para evitar contaminaciones durante el manejo del instrumental y de los medios de cultivo. Se utilizan la cmara de flujo laminar. Si no se dispone de ella, se utiliza un mechero Bunsen que, debido a que fuerza la circulacin del aire en sentido vertical y hacia arriba, es capaz de crear un ambiente semisteril en la zona inmediata alrededor y debajo de la llama, de forma que los riesgos de contaminacin disminuyen considerablemente.

Siembra de medio slido a medio lquido Marque correctamente los tubos con el nmero del grupo, sistema de siembra utilizado y la fecha. Para crear un ambiente de esterilidad encienda el mechero y trabaje siempre al lado de el. Esterilice un asa recta a la llama de un mechero y djela enfriar Tome el tubo que contiene la muestra a sembrar, retire la tapa del tubo, flamee la boca del tubo. Introduzca el asa en tubo sin tocar las paredes y tome un poco de colonia del cultivo, flamee nuevamente la boca del tubo, tpelo y djelo en una gradilla. Tome el tubo de caldo nutritivo estril en el cual va a colocar la muestra, destpelo, flameando la boca el tubo con el mechero e introduzca el asa con la muestra obtenida. Realice movimientos de rotacin con el asa para emulsionar con el caldo las paredes del tubo. Retire el asa, flamee la boca del tubo y tape. Esterilice el asa en el mechero despus de usarla. Incube los tubos a 37C por 24 horas. Observar el crecimiento obtenido. Si no hay crecimiento el caldo queda transparente.

Siembra de medio lquido a slido Se procede en la misma forma que en la siembra anterior pero con el asa de argolla. Si la siembra es en tubo recuerde hacer puncin y estra. Si es en caja de Petri puede utilizar diferentes sistemas como estra, agotamiento, rejilla con el fin de lograr un cultivo puro. Siembra de medio slido a slido Se realiza de la misma forma que en la siembra anterior pero utilizando el asa recta.Los medios slidos contienen agar en proporcin de 1.5 a 2.0% y se emplean para obtener colonias

aisladas. Las placas de agar se pueden inocular mediante varios mtodos: como estras, agotamiento y rejilla con el fin de lograr un cultivo puro. Siembra en rejilla Realice una estra que atraviese el centro del agar. Luego realice estras en ngulo recto con respecto a la estra inicial. Voltee el agar en ngulo de 90 grados y realice estra hasta cubrir todo el agar. Siembra por agotamiento Tome una placa de agar, marque la base de la caja de petri con los nmeros 1, 2 y 3. Coloque la muestra a sembrar en el numero 1, realice estras hasta la mitad de la caja. Esterilice el asa y gire la caja hasta el numero 2, tome las dos ultimas estras y siga estriando hasta el numero 3. Gire la caja y termine de estriar, tenga cuidado de no tocar las estras ya hechas.

Siembra por estras

http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/cap30 9.htm

Marque la caja en 6 puntos. Coloque la muestra en el punto numero uno, realice estras hasta el numero 2. Esterilice el asa, tome las dos ultimas estras y extindalas hasta el numero 3, tome las dos ultimas estras y extindalas hasta el numero 4 y as sucesivamente hasta llegar al numero 6.

Siembra masiva

Tome un hisopo estril e introdzcalo en el tubo que contiene la muestra a sembrar, luego frote toda la superficie del agar. Le evaluacin del crecimiento en las placas de agar se hace a travs de la observacin de colonias en la superficie. Siembra en agar inclinado Esta se realiza por puncin y por estra. Por puncin: Introduzca el inoculo con el asa recta hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado de hacer el mismo trayecto de entrada que de salida. Por estra: Extienda el inoculo sobre el agar inclinado deslizando suavemente el asa por la superficie en forma de zigzag. No olvide flamear la boca del tubo antes y despus de la siembra. Evalu la presencia de crecimiento en el agar por la formacin de una pelcula o por el crecimiento de colonias en la superficie.

Siembra en profundidad Marque la caja de petri estril con el nmero de grupo, la fecha y siembra en profundidad. Abra ligeramente la caja de Petri cerca del mechero. Abra un tubo con cultivo de bacterias y con ayuda de una pipeta de Pasteur plstica, transfiera 1 ml de ste cultivo a la base de la caja de petri estril. Descarte la pipeta en el frasco de boca ancha con clorox. Vierta un poco de agar nutritivo en la caja de Petri, tape la caja y luego realice movimientos suaves sobre el mesn, en el sentido de las agujas del reloj, luego al contrario, en forma de L y L invertida, y por ltimo en forma de 8. Esto garantiza una distribucin homognea de las bacterias en todo el agar para facilitar su posterior recuento. Envuelva las cajas de Petri y los tubos con cinta de enmascarar, mrquelos con el nmero de grupo, la fecha. Luego incube 37 c por 48 horas. Entregue al coordinador del laboratorio los cultivos bacterianos usados

Tcnica del microcultivo

Esta tcnica se utiliza en micologa para el estudio de estructuras de los hongos (conidias, ascas, hifas, conidioforos, entre otras) que son muy frgiles y se deterioran fcilmente, al ser obtenidas para su observaci a partir de un macrocultivo comn y corriente.

La tcnica consiste en colocar en el interior de una caja d Petri estril unas varillas de vidrio estriles y sobre ellas u lmina portaobjetos. Las varillas evitan que la lmina portaobjetos haga contacto con el fondo de la caja de Petri. Luego sobre el portaobjetos se coloca el medio de cultivo slido. Con un asa previamente flameada se siembra el hongo a analizar en el medio de cultivo, despus se cubre con la laminilla cubreobjetos, y se adiciona en el fondo de la caja de Petri agua destilada estril para mantener una atmsfera hmeda. Despus se procede a la incubacin a la temperatura requerida y por el tiempo necesario. Luego de incubado se retira con cuidado la laminilla cubreobjetos teniendo en cuenta que en ella se encuentra adherido el hongo. Se monta la laminilla con el hongo a estudiar sobre un portaobjeto y se procede a su observacin en fresco, o se prepara un frotis con una preparacin permanente.