A ovognese em culturas provenientes de ovrios de adultos humanos

Oogenesis in cultures derived from adult human ovaries Antonin Bukovsky, Marta Svetlikova and Michael R Caudle Published: 05 May 2005 Reproductive Biology and Endocrinology 2005, 3:17 doi:10.1186/1477-7827-3-17 Alunos: Felipe Diego V. P. de Carvalho Fernando Svio de Almeida Melo

A origem dos ocitos em ovrios de fmeas adultas de mamferos esteve em questo por mais de cem anos. O dogma resultante foi que todos os ocitos em fmeas adultas de mamferos se originam no perodo fetal de vida. No entanto, do ponto de vista filogentico, parece contraditrio que as fmeas de mamferos, incluindo seres humanos, iriam desenvolver um nico mecanismo reprodutivo de preservao, exigindo uma preservao por longos perodos de tempo, que pode provocar alteraes nos ocitos, nos folculos primrios. Os relatrios fornecem evidncias diretas de que o epitlio da superfcie ovariana uma fonte de clulas germinativas, e novos folculos primrios so formados pela unio de ocitos com clulas da granulosa primitiva no crtex ovariano. O objetivo deste trabalho foi mostrar que componentes para os novos folculos primrios, clulas da granulosa primitivas, diferenciamse sequencialmente a partir de clulas progenitoras mesenquimais que residem no ovrio. Para o estudo foram utilizadas clulas cultivadas, as quais foram coletados a partir de ovrios associados histerectomia fresco (cinco mulheres, com idades entre 39-52 anos). A cirurgia foi realizada por indicao mdica, incluindo dor plvica crnica, miomas uterinos, e/ou hemorragias uterinas (dismenorria severa) no respondendo ao tratamento conservador. As clulas foram coletadas em placas de Petri estreis contendo meio de cultura de tecidos complementada com soro 20% de soro fetal bovino e antibiticos. As clulas passaram pelo processo de spun dowm e separadas em 3 ou 6 poos, a depender do tamanho das clulas, de uma placa de 24 poos, e cultivadas em uma atmosfera mida com 5% de CO2 a 37 C. As culturas de clulas foram monitoradas diariamente por microscopia de contraste de fase e as clulas vivas avaliadas por imuno-histoqumica aps 5-6 dias a partir do plantio inicial. A viabilidade das clulas foi analizada pela aparencia de seu movimento ativo, alteraes na forma e movimento de seus ncleos. A primeira cultura de clulas foi a da superfcie do ovrio de uma mulher de 47 anos de idade mantida por 6 dias em Dulbecco's Modified Eagle Medium/Ham's F12 phenol red free (DMEM/F12), e complementada com 20% de soro fetal bovino e antibiticos, a qual demonstrou atravs da microscopia de contraste de fase a diferenciao de clulas mesenquimais(fibroblastos) em direo um fentipo com acmulo perinuclear de organelas citoplasmticas. A imuno-histoqumica mostra expresso perinuclear da zona pelcida (ZP) associada com o espao dos ncleos das clulas do tipo mesenquimais. A cultura tambm mostrou aglomerados de clulas do fentipo epitelial, que exibiu nucleo e expresso da ZP perinuclear. Ocasionalmente, ZP + de clulas de fentipo neural com extenses para as clulas mesenquimais foram observados, incluindo culturas em crescimento e mostra clulas do tipo mesenquimais e agregados pequenos, clulas de fentipo de clulas da granulosa. As clulas progenitoras mesenquimais so as primeiras a contribuir para o desenvolvimento das clulas epiteliais semelhantes s clulas da granulosa. Durante este perodo, as clulas mesenquimais progenitoras se diferenciam em clulas epiteliais da superfcie do ovrio, carter embrionrio comum, forrando a superfcie do ovrio ou invaginando. Essas clulas so uma fonte de clulas germinativas. As concentraes hormonais podem influenciar esses processos. Os dados apresentados no estudo indicam que as clulas da granulosa tendem a se desenvolver durante um perodo de baixos estmulos estrognicos. A diferenciao das clulas germinativas e dos ocitos pode estar associada a concentraes elevadas de estrognio (perodo pr-ovulatrio). A unio de ocitos com clulas da granulosa (renovao folicular) pode ocorrer durante a fase ltea. A diferenciao das clulas primitivas da granulosa e clulas germinativas mesenquimais precursoras de clulas da tnica albugnea em ovrios humanos representa um sofisticado mecanismo criado durante a evoluo da reproduo. No conjunto, as observaes mostram, pela primeira vez que clulas da granulosa e ocitos podem desenvolver diretamente a partir de culturas de clulas derivadas do epitlio da superfcie ovariana a partir de ovrios humanos. Isso confirma as observaes in vivo, atravs do trabalho realizado, de que nos ovrios humanos, o epitlio da superfcie ovariana uma potente fonte de ocitos e de clulas da granulosa. Alm disso, os ocitos desenvolvidos in vitro, passam pela primeira diviso meiotica aps a qual eles se tornam adequados para a fecundao.