OBJETIVO

El objetivo de la prctica es la determinacin de plaguicidas en una muestra de agua mediante la extraccin lquido-lquido utilizando como disolvente diclorometano y su posterior determinacin por cromatografa de gases. Como objetivo secundario est el estudio de parmetros como la exactitud, precisn o LOD de la Cromatografa de Gases/Espectroscopa de Masas.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
-Datos de la muestra: Procedencia Fecha de extraccin Almacenamiento Oropesa 30/11/2008 Botella de plstico

-Preparacin de la muestra: Disponemos 4 embudos de decantacin, a los que aadimos: (1) Muestra: 250mL de agua destilada, NaCl (2) Muestra fortificada F1: 250mL de agua destilada, NaCl y 1mL de disolucin patrn 100ppb de plaguicidas. (3) Muestra fortificada F2: 250mL de agua destilada, NaCl y 1mL de disolucin patrn 100ppb de plaguicidas. (4) Blanco: 250mL de agua destilada y NaCl Nota: 100ppb=0,1ppm Se procede a la extraccin lquido-lquido, extrayendo -dos veces- con 25ml de diclorometano, agitando durante 2 minutos y dejando reposar 10 minutos aprox. La fase orgnica queda en la parte inferior. La recogemos en un Erlenmeyer, la secamos con sulfato de sodio anhidro, la filtramos y la recogemos en un matraz de fondo redondo. A continuacin la concentramos mediante evaporacin en el rotavapor. Se obtiene un residuo seco al cual aadimos 2,5mL de hexano. Acto seguido cogemos 1 mL del extracto concentrado y lo depositamos en un vial al cul le aadimos 0,1mL de patrn interno clorpirifos 10ppm en hexano-. En total se preparan 4 viales, cada uno correspondiente a cada embudo de decantacin. Finalmente, preparamos un quinto vial con 1mL de disolucin patrn ms 0,1mL de patrn interno, que corresponde a la muestra patrn. La determinacin cromatogrfica se realiza en los laboratorios de investigacin.

CLCULOS
Confirmacin de las muestras

Q q

Er

Rm R p Rp

100

( Er 25% confirmado )

TABLA 1: CONFIRMACIN DE LA MUESTRA.

Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina Qm 1659 10817 18813 3418 958 qm 1085 3275 1837 2438 607 Rm 1,5290 3,3029 10,2411 1,4020 1,5783 Qp 173150 258792 290707 371204 283113 qp 77270 63759 218768 126590 141212 Rp 2,24084 4,0589 1,3288 2,9323 2,0045 Er(%) -31,77 -18,63 670,69 -52,20 -21,28 Confirmado NO SI NO NO SI

TABLA 2: CONFIRMACIN FORTIFICADO 1.

Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina QF1 12060 189206 238949 285007 223720 qF1 7500 47108 165979 99213 117313 RF1 1,6080 4,0164 1,4396 2,8727 1,9070 Qp 173150 258792 290707 371204 283113 qp 77270 63759 218768 126590 141212 Rp 2,2408 4,0589 1,3288 2,9323 2,0049 Er -28,24 -1,05 8,34 -2,03 -4,88 Confirmado NO SI SI SI SI

TABLA 3: CONFIRMACIN FORTIFICADO 2.

Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina QF2 11657 160559 208094 259249 189841 qF2 5431 41876 142589 110376 92135 RF2 2,1464 3,8342 1,4594 2,3488 2,0605 Qp 173150 258792 290707 371204 283113 qp 77270 63759 218768 126590 141212 Rp 2,2408 4,0589 1,3288 2,9323 2,0049 Er -4,22 -5,54 9,83 -19,90 2,77 Confirmado SI SI SI SI SI

TABLA 4: CONFIRMACIN BLANCO.

Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina Qblanc 2130 1776 10746 17393 1630 qBlanc 2088 2030 2879 11210 469 Rblanc 1,0201 0,8749 3,7325 1,5516 3,4755 Qp 173150 258792 290707 371204 283113 qp 77270 63759 218768 126590 141212 Rp 2,2408 4,0589 1,3288 2,9323 2,0049 Er -54,48 -78,45 180,89 -47,09 73,35 Confirmado NO NO NO NO NO

TABLA 5: AREA DE PICOS

Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina Clorpirifos Patrn 173150 258792 290707 371204 283113 1287613 F1 12060 189206 238949 285007 223720 1171587 F2 11657 160559 208094 259249 189841 1301630 Blanco 2130 1776 10746 17393 1630 1107353 Muestra 1659 10817 18813 3418 958 1309044

Clculos sin patrn interno: NOTA:Los clculos los efectuamos slo para aquellos casos en que hemos confirmado el positivo en la muestra y/o en las fortificaciones.

Calculamos la concentracin de extracto para cada analito. Para este clculo necesitamos los datos del area de los picos de la tabla 5 y la concentracin de patrn, que es 0,1 ppm.

extracto

rea muestra xPatrn rea patrn

F1(ppm) F2(ppm) 0,0067 0,0620 0,0716 0,0698 0,0671 Blanco(ppm) 0,0012 0,0007 0,0037 0,0047 0,0006 Muestra(ppm)

TABLA 6: CONCENTRACIN DEL EXTRACTO (PPM)

Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina

0,0731 0,0822 0,0768 0,0790

0,0042

0,0003

Para calcular la concentracin de la muestra tendremos en cuenta que: V(extracto)= 2,5mL V(muestra)= 250mL

muestra Vextracto xextracto 0,01xextracto

Vmuestra
TABLA 7: CONCENTRACIN DE LA MUESTRA
Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina F1 F2 6,7323E-05 6,20417E-04 7,1582E-04 6,9840E-04 6,7055E-04 Blanco 1,2302E-05 6,8626E-06 3,6965E-05 4,6856E-05 5,7574E-06 Muestra

7,3111E-04 8,2196E-04 7,6779E-04 7,9021E-04

4,1798E-05

3,3838E-06 (<blanco)

Factor de recuperacin: Para la muestra calculada hemos restado el blanco a cada fortificado y hemos calculado el factor de recuperacin.

R(%) SD

muestracalculada x100 muestraterica

( x X ) 2 N 1 SD RSD x100 X

Donde: [muestra](terica)=0,001ppm N=2 TABLA 8: FACTORES DE RECUPERACIN

Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina R(F1) R(F2) 5,5022 61,3555 67,8855 65,1545 66,4791 Rm NO CALC 66,8902 73,1924 68,6240 72,4624 SD NO CALC 7,8273 7,5051 4,9066 8,4617 RSD NO CALC 11,7017 10,2539 7,1500 11,6774

72,4250 78,4993 72,0935 78,4457

Clculos con patrn interno: NOTA:Los clculos los efectuamos slo para aquellos casos en que hemos confirmado el positivo en la muestra y/o en las fortificaciones.

Calculamos la concentracin de extracto para cada analito. Para este clculo necesitamos los datos del area de los picos de la tabla 5 y la concentracin de patrn, que es 0,1 ppm.

rea (relativa )

rea analito rea clorpirifos

Patrn 0,1345 0,2010 0,2256 0,2883 0,2199 F1 0,0103 0,1615 0,2040 0,2433 0,1910 F2 0,0090 0,1234 0,1599 0,1992 0,1458 Blanco 0,0019 0,0016 0,0097 0,0157 0,0015 Muestra 0,0013 0,0083 0,0144 0,0026 0,0007

TABLA 9: REAS RELATIVAS

Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina

Para calcular la concentracin del extracto tendremos en cuenta que:

EXTRACTO

REA MUESTRA x PATRN REA PATRN

F1(ppm)

Blanco(ppm) 1,4304E-3 0,7980E-3 4,2982E-3 5,4483E-3 0,6695E-3 Muestra(ppm)

TABLA 10: CONCENTRACIN DEL EXTRACTO

Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina F2(ppm) 6,6598E-3 61,3736E-3 70,8112E-3 69,0879E-3 66,3327E-3

7,6548E-3 80,3517E-3 90,3359E-3 84,3828E-3

4,1114E-3

3,3284E-3(<blanco)

Para calcular la concentracin de la muestra tendremos en cuenta que: V(extracto)= 2,5mL V(muestra)= 250mL

muestra Vextracto xextracto 0,01xextracto

Vmuestra
TABLA 11: CONCENTRACIN DE LA MUESTRA
Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina F1(ppm) F2(ppm) 6,6598E-05 6,1374E-4 7,0811E-4 6,9088E-4 6,6333E-4 Blanco(ppm) 1,4304E-05 7,9798E-06 4,2982E-05 5,4483E-05 6,6946E-06 Muestra(ppm)

7,6548E-05 8,0352E-4 9,0336E-4 8,4382E-4

4,1114E-05

3,3284E-06(<BLANCO)

Factor de recuperacin: Para la muestra calculada hemos restado el blanco a cada fortificado y hemos calculado el factor de recuperacin.

R(%) SD

muestracalculada x100 muestraterica

( x X ) 2 N 1 SD RSD x100 X

Donde: [muestra](terica)=0,001ppm N=2 TABLA 12: FACTORES DE RECUPERACIN

Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina R(F1) R(F2) 5,2294 60,5756 66,5129 63,6396 65,6633 Rm NO CALC 33,7162 71,2832 74,2636 74,6883 SD NO CALC 37,9849 6,7461 15,0246 12,7633 RSD NO CALC 112,6606 9,4638 20,2314 17,0888

6,8569 76,0534 84,8876 83,7133

Clculos de los lmites de deteccin: Teniendo en cuenta los datos obtenidos de los factores de recuperacin, los positivos confirmados, y los distintos cromatogramas obtenidos, consideramos que el ms vlido para calcular el LOD es el Fortificado 2. El clculo del LOD se efecta usando la frmula: LOD concentracin es 1ppb (=0,001ppm) TABLA 13: LOD Plaguicida Simazina Atrazina Terbumetona Terbutilazina Terbutrina

3N xconcentrac in , donde la H Pico

N(mm) 1 1 2 2 1

HPico(mm) 22 23 23 22 23

3N(mm) 3 3 6 6 3

LOD(ppm) 0,136E-3 0,130E-3 0,261E-3 0,273E-3 0,130E-3

Conclusiones
Teniendo en cuenta que la concentracin de los plaguicidas en el extracto es mayor que el LOD, esta se puede cuantificar la concentracin de los plaguicidas. Respecto a la precisin SD- , se observa en nuestro caso que, con la excepcin de la Terbumetona, se obtienen resultados ms precisos sin patrn interno que con patrn interno. Sobre la RSD se observa tambin que es mayor, de nuevo con la excepcin de la Terbumetona, con patrn interno que sin patrn interno. En ambos casos, consideramos que puede ser debido a que no preparamos adecuadamente el patrn interno, dado que este se introduce para eliminar la deriva instrumental y de este modo mejorar la precisin del mtodo, con lo que deberiamos haber obtenido mejores resultados en el Fortificado 2 que en el Fortificado 1, y no al revs como nos ha sucedido. Respecto al blanco lo ideal seria que diera cero porque no se le ha aadido ningn tipo de plaguicida, aunque las concentraciones obtenidas son muy bajas, esto puede ser debido a que el material de vidrio estuviera contaminado o simplemente es ruido de fondo. Debido a estos valores obtenidos en el blanco los clculos de recuperacin los hemos efectuado restando el valor obtenido en el blanco al valor obtenido en el fortificado correspondiente. Respecto a los clculos, estos los hemos realizado en base al Fortificado 2 dado que en este caso obteniamos confirmacin de positivo en todos los casos de plaguicidas estudiados, sin embargo, teniendo en cuenta los valores de recuperacin de ambos fortificados (una recuperacin aceptable estara en el intervalo 70%-110%) creemos que quizs hayamos obtenido un falso positivo en el caso de la Simazina y que deberiamos haber efectuado los clculos con el Fortificado uno. En nuestra muestra, hemos tenido confirmacin de la Atrazina y la Terbutrina, aunque observando los cromatogramas de la muestra no podriamos afirmar que estos plaguicidas estn detectados porque tenemos mucho ruido de fondo, el cual puede ser debido a una mala realizacin de la prctica. Por tanto, como los resultados no son buenos, deberiamos repetir la prctica e incluso plantearnos otras condiciones en la realizacin de la prctica ( en los patrones, en la preparacin de los fortificados, etc). En nuestro caso, el positivo de Terbutrina en la muestra nos da un valor de concentracin inferior al del blanco, con lo que consideramos que es un falso positivo que bien pudiera estar confundido con el ruido de fondo. De este modo, en nuestra muestra solamente hemos detectado y confirmado la presencia de Atrazina.

Sobre la Atrazina, comentar que es un herbicida selectivo que se utiliza para prevenir la aparicin de malezas. Se le encuentra en aguas subterraneas y superficiales debido a su movilidad en el suelo. Es relativamente estable tanto en agua como en suelo, con una vida media de meses, si bien se degrada en el suelo por fotlisis y accin microbiana. No es genotxica y la informacin sobre carcinogenidad es insuficiente a fecha de hoy. -Informacin obtenida de La contaminacin ambiental en Mxico Escrito por Blanca Elena Jimnez, Blanca Elena Jimnez Cisnero

NDICE Objetivo Procedimiento experimental Clculos Conclusiones pg.3 pg.3 pg.4 pg.9

PRCTICA 6

Determinacin de residuos de plaguicidas en muestras de agua mediante extraccin lquidolquido y cromatografa de gases.

IA32 LABORATORIO AVANZADO EN QUMICA III QUMICA ANALTICA 1/12/2008

Laboratorio 1 Iris Traver Salvador Rubn Ayza Campos