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Tema 1

TEMA 1.

EL LABORATORIO. ASPECTOS GENERALES

El laboratorio de anlisis y diagnstico clnico, como cualquier laboratorio, debe esta organizado de forma que el trabajo en l sea el ms cmodo,seguro y operativo posible. Para ello se dispondrn una serie de reas de trabajo, de limpieza y almacenes para materiales, aparatos y reactivos. Hay que tener en cuenta que en el laboratorio trabaja un equipo de personas que, en cualquier momento, debern poder disponer de un reactivo o localizar un aparato,etc, por lo que cada cosa debe tener una ubicacin determinada.; en el caso de tener que sacar un material fuera de l, porque se est reparando o por cualquier otro motivo, deber anotarse dnde se encuentra y quin es el responsable, con el fin de reclamarlo si fuera necesario. Para que el laboratorio sea seguro y evitar as cualquier tipo de accidente, adems de estar equipado correctamente ( extintores, duchas de seguridad, material de primeros auxilios, telfono de emergencia,etc..) es preciso observar las normas de seguridad e higiene. Se tienen que utilizar las reas destinadas para los distintos usos, como la campana de extraccin de gases, para trabajar con productos voltiles nocivos por inhalacin, y los materiales protectores, como los guantes para sustancias casticas, corrosivas o con riesgos biolgicos, adems de las gafas protectoras cuando haya riesgo de salpicaduras, advirtiendo cuando haya peligro con carteles, rtulos o smbolos. Existe una normativa de seguridad e higiene aplicable al trabajo en el laboratorio. Smbolos de peligrosidad ms comunes:

C Corrosivo

E Explosivo

O Comburente

F Inflamable

F+ Extremadamente inflamable

T Txico

T+ Muy txico

Xi Irritante

Xn Nocivo
N Peligroso para el medio ambiente

material radiactivo peligroso

Material biopeligroso.

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Las reas bsicas del laboratorio son el rea de trabajo, el rea de limpieza y el rea de almacenaje, que a su vez se divide en almacn de material, de reactivos y de aparatos. En el rea de limpieza se pueden distinguir zonas de desinfeccin, lavado y secado. EQUIPOS E INSTRUMENTOS EN EL LABORATORIO Los utensilios de uso cotidiano empleados en el laboratorio estn fabricados bsicamente en vidrio o plstico, aunque tambin en otros materiales como el acero el material de vidrio est muy indicado y es frecuentemente utilizado debido a las ventajas que proporciona (son transparentes, de fcil limpieza y uso, resistencia trmica y qumica, etc,). En general, el material de vidrio suele ser incoloro. Sin embargo, no todo el vidrio puede utilizarse en todos los casos, ya que algunos soportan mal las temperaturas elevadas y no pueden ser calentados. Hay objetos de vidrio de mucha diversidad, segn su finalidad, su forma y tamao. Cuando se utiliza material de vidrio nuevo o ha estado almacenado mucho tiempo, puede estar contaminado con esporas, por lo que es aconsejable su desinfeccin previa. Todo material de vidrio roto o dudoso debe ser desechado. Con respecto al material de plstico, debe tenerse en cuenta el tipo de plstico y el uso que se le va a dar; en funcin de su uso puede ser desechable o reutilizable. El material de plstico desechable, si ha estado en contacto con material biopeligroso debe ser esterilizado en autoclave antes de desecharlo. Este tipo de material plstico no soporta altas temperaturas y suele utilizarse para contener cultivos o efectuar seiembras, entre otras. El material de plstico reutilizable est disponible en probetas o vaso de precipitados, pero no es adecuado para medir capacidades con exactitud ya que se deforma, motivo por lo que es preferible medir siempre con material de vidrio. Hay otros utensilios fabricados en plstico reutilizable, como los frascos, lavapipetas o trompas de vaco. El material de acero inoxidable tiene la ventaja de su gran resistencia mecnica y trmica. Adems, es reutilizable y se esteriliza fcilmente por calor seco (estufa) o calor hmedo (autoclave). Aparte de clasificar el material de laboratorio en funcin de su composicin (vidrio, plstico, acero, etc..) tambin se puede catalogar basndose en otros criterios, por ejemplo, en funcin del uso que se le vaya a dar a los mismos. Se ha optado por agrupar el material y los aparatos formando equipos de trabajo que resulten tiles para una funcin determinada.

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Material para procesos de purificacin Muchos lquidos reactivos o muestras no son apropiados para usarlos en el laboratorio, debido a que contienen sustancias disueltas y materias en suspensin que pueden interferir en el desarrollo de los anlisis. Para conseguir productos tiles en el laboratorio se pueden someter los reactivos o muestras a un proceso de purificacin. El desionizador. Es un dispositivo que emplea cartuchos o columnas con resina de intercambio inico; el lquido atraviesa el lecho de esta resina obtenindose un lquido de mayor calidad. Material de volumetras Las probetas: son recipientes graduados de vidrio y cilndricos y con una base opeana amplia. ( Mediremos el lquido por donde marque el menisco, con los ojos a la altura del mismo). Los matraces aforados: son recipientes de vidrio con forma de pera y cuello largo, que pueden llevar tapn o no tenerlo. Estn calibrados y marcan el volumen sealado con una lnea de envase. Se usan para preparar soluciones de concentracin conocida. Las pipetas: son de vidrio alargadas y acabadas en punta. Se usan para suministrar volmenes o capacidades pequeas con mucha exactitud. Las micropipetas o pipetas de pistn: tambin llamadas pipetas automticas. Se caracterizan porque la punta de plstico es desechable,as se evitan contaminaciones y agiliza el trabajo. Se utilizan para dispensar pequeos volmenes y son muy exactas y precisas. La prepipeta: es un dispositivo de plstico con mbolo y acople para pipetas graduadas de vidrio, mediante el que se puede aspirar o dispensar lquidos. Se usa para evitar el contacto directo de la boca con la pipeta. Es importante que el acoplamiento sea hermtico para poder enrasar correctamente. Peras de goma: son para la aspiracin y tienen la misma funcin que las prepipetas. Los embudos: son de vidrio liso con un ngulo de 60 y un pico en bizel para facilitar el vertido de lquidos. Material de pesadas La balanza: para usos generales pueden ser vlidas las balanzas mecnicas o electrnicas, con una sensibilidad de 0'01g. Sin embargo, para pesar cantidades menores de 2g se recomienda emplear balanzas analticas electrnicas con una sensibilidad de 0'001g. No se debe colocar la sustancia a pesar directamente sobre el platillo de la balanza.

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La esptula: es metlica y se usa en la pesada para arrastrar slidos. Debe estar escrupolsamente limpia y seca antes de ser utilizada. Vidrio de reloj: es un platillo de vidrio cncavo; los hay de varios dimetros. Se utiliza para colocar el material a pesar sobre el plato de la blanza. Material para efectuar la limpieza El material de vidrio, una vez limpio, se lavar con agua desionizada en su interior. Cuando el material est muy sucio, contiene restos de colorante o restos orgnicos, hay que someterlo a un bao con alcohol clordrico u otro producto. Escobilln: se usa para la limpieza de los tubos de ensayo, matraces y probetas, junto con agua y jabn lquido. Los hay de diversos tamaos. La trompa de vaco : es un dispositivo metlico o de material plstico en forma T que se conecta a un grifo de agua. Se usa para aspirar lquidos y limpiar el interior de pipetas con agua jabonosa o agua desionizada. Lavador automtico de pipetas: es un dispositivo cilndrico de material plstico, usado para el lavado y enjuagado de pipetas. Se maneja conectado al grifo del agua corriente y al desage. Los escurridores: sirven para secar el material de vidrio limpio, como tubos o matraces, a temperatura ambiente y en posicin invertida. La estufa de secado (horno Pasteur): se puede utilizar a temperatura moderada para secar el material. El material de vidrio se coloca en su interior en posicin invertida y se somete a una temperatura de 180C durante treinta minutos. Lavadora: se trata de una mquina similar a un lavavajillas domstico, pero con todos los accesorios para lavar todos los materiales de vidrio del laboratorio. Material para llevar a cabo la esterilizacin Mechero Bunsen:debe estar conectado a una red de distribucin de gas, cuyo depsito estar situado en el exterior del edificio. Son utilizados con asiduidad al favorecer una zona estril a su alrededor. Se utiliza para esterilizar el asa de siembra por flameado, entre otras cosas. Los hay independientes, conectados a una pequea bombona de gas o a un cartucho. En su defecto, pueden utilizarse mecheros de alcohol, o tambin, mecheros elctricos, donde una resistencia incandescente se calienta. Concluyendo, hay muchos tipos de mechero. Horno Pasteur o estufa Poupinel: se trata de un armario aislado trmicamente del exterior, provisto de una resistencia elctrica y un termostato, en el que se consiguen elevadas temperaturas elevadas temperaturas interiores. Se utilizan para la esterilizacin por aire caliente y emplea calor seco a 170C-180C. Protocolo de esterilizacin mediante calor seco: 1. Preparar el material en paquetes cerrados. 2. Rotular, especificando el contenido y fecha de la esterilizacin.

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Colocar un trozo de cinta testigo. Situar el material en el interior. Abrir la ventanilla lateral. Cerrar la puerta, colocar el mando a la temperatura deseada y conectar Cuando empieza a realizar ciclos de encendido y apagado, cerrar la ventanilla lateral y mantenerlo funcionando durante una hora. 8. Pasado el tiempo, apagar y esperar a que se enfre para sacar el material. No se debe abrir la puerta estando caliente el aparato, ya que el cambio brusco de temperatura podra romper el material de vidrio. Autoclave: Consiste en un recipiente con cierre hermtico, en cuyo interior se consigue una atmfera hmeda, alta temperatura y presin elevada con la intencin de destruir todos los microrganismos presentes. Su interior est dividido por una rejilla que separa la parte reservada al agua destilada de la cmara de vapor; posee una resistencia elctrica para calentar el agua. Est dotado de manmetro, termmetro y vlvulas de seguridad; con el se puede esterilizar agua, medios de cultivo, instrumental, objetos de goma, tela, etc. Normas de esterilizacin por calor hmedo (autoclave): Nos basaremos en un autoclave que realiza la purga automtica de vapor mediante el ciclo de autoclavado con un reloj temporizador, de forma que realiza todo el ciclo de esterilizacin de modo automtico. 1. Asegurarse de que el agua esterilizada es transparente, cubre la resistencia elctrica y mantiene el nivel que indica el fabricante. 2. Introducir el material a esterilizar en la cesta metlica. 3. Depositar la cesta metlica en el autoclave. 4. Cerrar la tapa. 5. Cerrar las llaves de drenaje y vapor. 6. Ajustar el tiempo de esterilizacin. 7. Conectar a la red elctrica y accionar el interruptor de encendido. 8. Esperar a que se complete el ciclo de esterilizacin. 9. Comprobar que la presin ha bajado a 0 atmsferas. 10.Abrir la tapa con precaucin. 11.Sacar la cesta con el material y atemperarlo. 12.Utilizar o guardar el material segn convenga. Bolsas de autoclave : Se utilizan para contener el material. Una vez autoclavadas, pueden desecharse o incinerarse si el producto es peligroso. Los pipeteros: Son recipientes metlicos cilndricos o rectangulares, que se utilizan para contener las pipetas y proceder a su esterilizacin. Material para la preparacin de medios de cultivo.

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Los matraces Erlenmeyer: Son recipientes con forma de cono invertido, fondo plano y cuello corto. Placa calefactora con agitador. Trpode metlico y rejilla cermica:Se utilizan cuando no se dispone en el laboratorio de placas calefactoras. Sirven para soportar recipientes que son calentados con un mechero Bunsen y evitar, en el caso de la rejilla cermica, que la llama incida directamente sobre el recipiente, logrando adems, que el calor se reparta de manera homognea. Para homogeneizar el contenido del recipiente se usan varillas de vidrio. Placas de Petri:Son recipientes de forma cilndrica, compuestos por caja y tapa, se utilizan para cultivar microrganismos sobre un medio de cultivo slido y apropiado. Existen de diferentes dimetros y de vidrio o pltico, pero hoy da se utilizan ms stas ltimas, que son desechables y se comercializan pre-esterilizadas. Tubos de ensayo:Son tubos cildricos de fondo esfrico con distintas capacidades y dimensiones, que se usan para contener soluciones, cultivos microbiolgicos o provocar reacciones qumicas. Se colocan en gradillas de alambre de acero inoxidable. Pinzas aislantes y guantes aislantes: Las pinzas de madera o metlicas se utilizan para sujetar tubos de ensayo, matraces, portaobjetos, etc. Gradillas: Soportan los tubos de ensayo en posicin vertical, las hay con diversos dimetros para tubos de distintos calibres. Tambin existen gradillas para pipetas de vidrio y pipetas de pistn. Estn fabricadas en aluminio, hierro galvanizado, hierro recubierto de plstico y en material plstico. Tapones: Se utilizan para tapar matraces de Erlenmeyer, tubos de ensayo y matraces aforados. -Tipos de tapn: algodn graso, metlicos y plsticos. Material de incubacin Baos de incubacin: Se componen de un recipiente o cubeta que contiene agua destilada y un sistema de calefaccin con termostato y agitador. Se pueden regular a diferentes temperaturas. Estufa de cultivo o incubadora: Es un armario aislado termcamente del exterior, en el que podemos conseguir una temperatura interna constante, gracias a un sistema de calentamiento elctrico y un termostato. Se accede al interior, a travs de una puerta metlica, pudiendo observar el contenido, a travs de una puerta de cristal. Termmetro de vidrio: De escala adecuada se emplean para el control de la temperatura en baos, estufas y frigorficos. Su diferencia de gradacin debe ser, al meos, de 1C. Material de seguridad Los guantes aislantes: se utilizan para sujetar los objetos calientes. Las gafas protectoras: se usan para protegerse los ojos de salpicaduras. Las mascarillas constituyen una barrera de proteccin de las posibles inhalaciones de

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aerosoles en el ambiente de trabajo y suelen ser de un solo uso. Guantes de ltex: actan como barrera cuando se manipula material biopeligroso. La bata Los contenedores con smbolo de biopeligrosidad: son recipientes amarilos de plstico, con cierre de seguridad que lleva expuesto el icono de biopeligrosidad. Los hay de diversos tamaos. Material diverso Frigorfico-congelador: generalmente es suficiente con un frigorfico domstico provisto de congelador, que mantenga en el espacio refrigerante una temperatura interior uniforme entre 2C y 5C, y en el congelador una temperatura de -24C; aunque los armarior congeladores pueden alcanzar temperaturas inferiores a -70C. Los frigorficos antiescarcha no son recomendables porque pueden producir una desecacin excesiva de los medios de cultivo. Nevera porttily contenedores de fro: se utilizan en el transporte de lquidos, muestras, reactivo, etc. Termmetro: Vaso de precipitados: es un recipiente de vidrio graduado con capacidad aproximada; se utiliza para contener y calentar soluciones o preparar medios de cultivo. Nunca se utiliza para determinar capacidades exactas. Rotulador y lpiz graso: son especiales para marcar vidrio. Las marcas deben soportar la manipulacin sin borrarse, aunque el lavado y el fregado deben permitir su eliminacin. Todo el material debe ir rotulado adecuadamente para poder identificarlo. Papel de filtro Material para tinciones y observacin al microscopio Los portaobjetos: son lminas de vidrio planas rectangulares, con los cantos biselados o sin biselar que se emplean para depositar sobre ellos las preparaciones que han de ser observadas al microscopio. Sus dimensiones en milmetros son de 50x25x2. Pinzas para sujetar el portaobjetos: se pueden utilizar pinzas de madera o pinzas especiales para portaobjetos. Los cubreobjetos: son lminas de vidrio muy finos cuadrados o rectangulares que se colocan sobre la preparacin situada en el portaobjetos. El cristalizador: es un recipiente de vidrio de forma cilndrica y paredes gruesas con poca altura que se utiliza en las tinciones para soportar las barras paralelas. No se debe calentar. En su defecto, se pueden usar cubetas para recoger el sobrante de los colorantes que se depositan sobre los portaobjetos.

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Las barras paralelas de vidrio: son dos varillas de vidrio macizo unidas en sus extremos por dos tubos de goma hueca. Se usan colocndolas sobre el cristalizador como soporte de los portaobjetos. Los frascos de colorantes: de plstico o vidrio transparente o coloreado. Se usan para contener colorolantes. Las paredes coloreadas impiden el paso de la luz que puede degradar el contenido de los frascos. El frasco lavador: es un embase cilndrico de plstico deformable con tapn de rosca y un tubo de plstico curvado y hueco que atraviesa el tapn hasta el fondo del frasco. Se usa para dispensar agua en el lavado de las tinciones. Microscopio ptico y aceite de inmersin: El aceite se utiliza para obsevar preparaciones en el microscopio a gran aumento; usaremos el objetivo 100x. Material propio de hematologa Pipeta de dilucin para eritrocitos (pipeta de Thoma): es una pipeta de vidrio que tiene un bulbo en la parte superior y dentro de ella una perlta roja mezcladora. Permite una dilucin de sangre 1:200. La parte ms larga (parte inferior del bulbo) est dividida en 10 partes, una a la mitad del tubo de 0'5 y otra al final del tallo, cerca del bulbo, representada por el 1. Posterior al bulbo hay una marca de 101 que indica la dilucin total de los eritrocitos. Pipeta de dilucin de leucocitos: es una pipeta similar a la de los eritrocitos, con la diferencia de que la perlita es blanca, el bulbo es ms pequeo y la marca superior es de 11; da una dilucin de 1:20. Contmetro: para eritrocitos: es un pequeo instrumento manual con una o dos llaves (identificadores de clulas). para leucocitos: el contmetro para el recuento diferncial de leucocitos tiene una llave para cada tipo de clula: -neutrfilos (abastonados y segmentados) -eosinfilos (lentes de Quevedo) -basfilos -linfocitos -monocitos (son los ms grandes) Centrfuga para microhematocrito: la centrfuga que se utiliza en hematologa es la de hematocrito, es decir, para la determinacin de hematocrito sanguneos en tubo capilares. Tubos capilares: son pequeos tubos desechables que se utilizan para la determinacin de hematocrito; pueden ser heparinizados o no heparinizados. Cmara de Neubauer(hemocitmetro o cmara de cuenta): consta de una lmina rectangular de vidrio grueso en medio de la cual se elevan dos plataformas; en cada una de stas hay un rea rayada; a uno y a otro lado de la plataforma, dos crestas de vidrio sostienen un cubreobjetos grueso sobre las reas rayadas.

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Sueros de hematologa: Albmina bovina al 30% Suero anti-A Suero anti-B Suero anti-AB Suero anti-D (Rh) Suero anti-E Suero anti-C Suero anti-e Suero anti-c Suero antiglobulina de Cooms. Colorantes de hematologa Azul de metileno Colorante Giemsa Colorante de Wright Lquido de Trk Colorantes para tincin de panptico rpido; son tres y estn enumerados Lquido de Hayem.

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