Contrle gntique de la comptence vectorielle

des moustiques du genre Aedes.

A.-B. Failloux, M. Vazeille-Falcoz, L. Mousson & F. Rodhain
Unit dcologie des systmes vectoriels, 25 rue du Dr. Roux,75724 Paris cedex 15, France. Tel : 33 (0)1 40 61 36 17,fax:33 (0)1 40 61 30 89,e-mail : afaillou@pasteur.fr Journe SPE du 13 octobre 1999 lInstitut Pasteur Paris :Gntique et maladies infectieuses dans lenvironnement tropical.

Summary: Genetic Control of Vectorial Competence in Aedes Mosquitoes. The transmission of pathogens by arthropods is dependent on the relationships that exist between the pathogen, the invertebrate host (the vector) and the vertebrate host, each of which is influenced by environmental variations. Particular attention is given to the knowledge of intrinsic factors and the mechanisms controling the ability of vectors to transmit pathogens (viruses or parasites). Polymor phism in the expression of susceptibility to oral infection has been shown to occur among geogra phical samples of mosquitoes. It has been proven that intraspecific variations in vector competence are controlled by one or more genes and expressed in variable proportions within a mosquito popu lation. Recent advances in molecular biology have facilitated accessibility of nucleic acid sequence data. These new techniques allow one to analyse the genotype distribution within and among popu lations. Population genetic studies are currently used to understand the evolution of species diffe rentiation and provide indications on genetic relationships among field vector populations. Estima tions of gene flow with respect to vector capacity have provided rich insight into vector species com plexes. Knowledge of intraspecies variation is important for the understanding of vector transmission, disease epidemiology and disease control. In this article, two examples are presented to illustrate the contribution of population genetic studies to the understanding of epidemiology of arthropod-borne diseases: Aedes polyneniensis, a vector of human lymphatic filariasis and Aedes aegypti, the vector of dengue viruses. Rsum : La comptence vectorielle reprsente une mesure du niveau de coadaptation entre un pathogne et un invertbr vecteur. Chaque composante de ce systme est soumise linfluence de diffrents fac teurs autant intrinsques quextrinsques. Parmi les facteurs intrinsques, on peut citer la rceptivit linfection du vecteur par le pathogne (virus ou parasite). Dimportantes variations de capacit vecto rielle ont t maintes fois observes dans les populations de vecteurs. Il a t clairement tabli que la comptence vectorielle est sous le contrle dun ou plusieurs gnes. Le dveloppement actuel doutils molculaires a permis de prciser lorganisation des populations. La gntique des populations a pour objectif de comprendre lvolution de la diffrenciation gntique et est mise profit pour apprhen der les fluctuations gntiques auxquelles sont soumises les populations de vecteurs. Les estimations de flux gniques ont contribu, de faon dcisive, lucider les diffrences au niveau infra-spcifique de la capacit vectorielle. Par la gntique des populations, des informations concernant la transmis sion vectorielle ainsi que limpact des traitements insecticides sur la structure gntique des popula tions constituent des complments indispensables la comprhension de lpidmiologie dune mala die vecteur. Deux exemples sont prsents pour illustrer cette contribution dans une problmatique relevant exclusivement de lentomologie mdicale. Il sagit de deux pathologies humaines transmis sion vectorielle : une parasitose, la filariose de Bancroft, et une arbovirose, la dengue.

Key-words: Vectorial competence Population genetics Filariasis Dengue Aedes polynesiensis Aedes aegypti

Mots-cls : Comptence vectorielle Gntique des populations Filariose Dengue Aedes polynesiensis Aedes aegypti

Introduction

es maladies transmission vectorielle figurent parmi les principales causes de morbidit et de mortalit pour lhomme et les animaux. Leurs consquences en sant publique humaine ainsi que leur impact conomique sur la production animale sont considrables. Le paludisme, la filariose, les leishmanioses, lonchocercose, les trypanosomoses, la dengue, la fivre jaune ou encore la maladie de Lyme affectent la sant de millions de personnes. Le contrle de ces pathologies passe ncessairement par la connaissance, la plus complte possible, des vecteurs qui les transmettent. Lun des exemples souvent

cits est la mise en vidence des diffrentes espces du complexe Anopheles maculipennis. Par des tests de croisement entre races gographiques et ltude des variations cytogntiques, il a t dmontr quil existait sept espces cryptiques, parmi lesquelles seules deux sont capables de transmettre les protozoaires du genre Plasmodium. Cest une des causes qui est avance pour expliquer lactuel anophlisme sans paludisme qui prvaut en Europe. Cet exemple illustre limportance de la connaissance des variations au sein de ce qui tait considr, lorigine, comme une mme espce vectrice. Ces variations sont requises pour apprhender lpidmiologie de la maladie et proposer ainsi une stratgie de contrle adapte.

La comptence vectorielle

e cycle de transmission dun pathogne par un insecte vecteur reste intimement dpendant des relations qui lient ce pathogne, son hte invertbr (le vecteur) et son hte vertbr. Chaque composante de ce systme vectoriel est modele par des facteurs environnementaux qui composent les facteurs extrinsques (4, 46), et par des facteurs intrinsques, parmi lesquels les mcanismes molculaires et gntiques contrlant par exemple la capacit des moustiques transmettre un pathogne. Les facteurs extrinsques influent sur les chances de contact entre le vecteur et lhte vertbr appropri. Ils comprennent, entre autres, la densit et la composition des populations de vecteurs et de lhte vertbr. Les facteurs intrinsques, sous dpendance dun contrle gntique, influent sur les prfrences trophiques du vecteur, sa capacit sinfecter aprs ingestion du repas de sang infect, puis assurer le dveloppement du pathogne, enfin le transmettre au vertbr lors dune piqre. De plus, les facteurs environnementaux, tels que la temprature, agissent sur les facteurs intrinsques en affectant la physiologie du vecteur et, par voie de consquence, le dveloppement et/ou la multiplication du pathogne et, probablement, lexpression des facteurs gntiques qui contrlent la comptence vectorielle (28).

Pendant longtemps, les seules mesures prconises pour lutter contre une maladie transmission vectorielle taient lradication des populations de vecteurs ou, plus raisonnablement, la rduction des densits sous un seuil tel que la transmission lhomme serait faible, voire interrompue. Cependant, les vecteurs dveloppent des rsistances vis--vis des produits utiliss (22, 47), et le dveloppement de nouvelles molcules reste limit en raison du cot financier quil implique. Ds lors, le contrle des moustiques au moyen dinsecticides devient de plus en plus problmatique. Force est de constater aujourdhui que les moyens de lutte faisant appel une combinaison dagents biologiques, dagents chimiques et gntiques seront considrs avec davantage dintrt (40). Le contrle gntique des vecteurs est donc une perspective qui sinscrit dans les moyens de lutte envisager. Lintroduction de vecteurs gntiquement modifis dans les populations naturelles peut, terme, rduire les potentialits vectorielles de celles-ci (2, 16). Il a t clairement tabli que la comptence vectorielle des insectes vis--vis de pathognes, quil sagisse de virus (1, 24) ou de parasites (34, 35, 36), est sous contrle gntique. Comprendre les mcanismes gntiques associs la comptence vectorielle est donc ncessaire afin dvaluer linfluence de diffrents facteurs extrieurs dans leur expression. Cette information reste primordiale pour le succs dune lutte antivectorielle.

chimiprophylactiques au moyen de mdicaments (dithylcarbamazine, ivermectine), la stratgie qui consiste contrler les populations de moustiques comptents au moyen dinsecticides reste le moyen le plus efficace pour freiner la transmission. Face aux problmes de rsistance aux insecticides, une stratgie alternative consisterait manipuler les gnes impliqus dans le contrle gntique de la comptence vectorielle chez les populations potentiellement vectrices du parasite (11, 15). Le moustique du genre Aedes le mieux caractris gntiquement est Aedes aegypti. La construction dune carte gntique a t entreprise au moyen de 75 marqueurs RFLP distants denviron 1.8 centi-morgan (49). Des marqueurs isoenzymatiques ont dj t parfaitement rpertoris chez cette espce (39). La rceptivit dAe. aegypti vis--vis du nmatode B. malayi est sous le contrle dun gne unique, rcessif, li au sexe. Il sagit du gne fm dont lexpression est module par dautres gnes (34, 35, 36, 59). SEVERSON et al. (50) ont identifi 2 QTL (Quantitative Trait Loci) affectant la rceptivit dAedes aegypti Brugia malayi. Le premier QTL, fsb [1, LF178], porte le gne fm qui domine le caractre rcessif de la rceptivit. Lexpression du phnotype rceptif dpend du gnotype au second QTL, fsb [2, LF 98], situ sur le chromosome 2. Bien que les effets biochimiques du gne fm soient encore inconnus, il a t suggr que son action intervient au niveau des tissus de lhte hbergeant le parasite durant son dveloppement (37). Ainsi, les facteurs polypeptidiques qui inhibent le dveloppement de B. malayi dans les souches rfractaires dAedes aegypti agissent dans le thorax (59). De mme, il serait intressant de comprendre le fonctionnement de systmes parasitaires in natura en analysant des systmes tels que celui form par Aedes polynesiensis et Wuchereria bancrofti, la filaire de Bancroft. Agir sur la comptence vectorielle de ces populations devrait permettre de contrler terme la transmission filarienne.

Les bases gntiques de la comptence vectorielle pour les arbovirus

Les bases gntiques de la comptence vectorielle des moustiques pour les filaires

es nmatodes parasites du systme lymphatique humain, tels Brugia malayi, Brugia timori ou Wuchereria ban crofti, sont responsables denviron 120 millions de cas de filarioses lymphatiques dans le monde, et on estime environ 1 milliard le nombre de personnes exposes (41). Les efforts pour dvelopper un vaccin contre ces nmatodes sont rests jusqu prsent sans succs (42) et, hormis des traitements

es premiers auteurs suggrer que la transmission des arbovirus par les moustiques serait dtermine gntiquement ont t CRAIG et HICKEY (14) en 1967. Les variations dans lexpression de la rceptivit par voie orale ont t maintes fois dcrites au sein des populations naturelles de moustiques vecteurs. En exemple, on peut citer le cas du virus Chikungunya chez Aedesalbopictus (55), celui des virus de la dengue chez Ae. aegypti (24) et du virus de la fivre jaune chez cette mme espce (1). Les bases gntiques de la comptence vectorielle ont t, par la suite, mises en vidence grce des expriences de slection gntique par croisement. HARDY et al. (27) ont slectionn deux souches de Culex tarsalis, lune sensible et lautre rfractaire au virus WEE (encphalite quine de lOuest). Il semble que dautres gnes, hormis celui qui gouverne directement la rceptivit linfection, interviendraient en modulant le niveau de rplication virale dans le moustique. De plus, lexpression de ces gnes semble dpendre de la dose de virus ingre et de la temprature durant la priode dincubation extrinsque. Les mmes expriences effectues avec des moustiques du genre Aedes ont donn des rsultats moins concluants. Il sagit, par exemple, des travaux de GUBLER et ROSEN (23), en 1976, pour le virus de la dengue 2 chez Ae. albopictus.

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La gntique des populations

es progrs rcents en biologie molculaire ont permis de disposer dinformations gntiques au niveau des squences dADN et ont apport un regard nouveau sur les processus dmographiques et volutifs auxquels sont soumises les populations naturelles. La structure gographique reprsente ltude de la rpartition spatiale et de la frquence des gnotypes au sein des populations et entre populations dune espce donne. Cette dfinition englobe deux composantes : la structure dmographique et la structure gntique (48). La structure dmographique relate les processus (par exemple, la naissance, la longvit, limmigration ou lmigration) qui influent sur le nombre et la rpartition des phnotypes, tels les groupes dge ou de sexe. La structure gntique, quant elle, se dcrit comme la rpartition de la variation gntique rsultant dvnements de migration, de processus de slection, de mutation et de drive gntique. Parce que la dmographie sexplique par des processus gntiques, les structures dmographique et gntiques sont intimement lies. De ce fait, la structure gntique rend compte galement des processus dmographiques auxquels sont soumises les populations. Les variations gntiques sont values partir dune gamme de plus en plus toffe doutils molculaires. Le choix de la technique est tributaire du problme pos. Deux types de variations gntiques peuvent tre tudis : au niveau chromosomique ou nuclaire dune part, et au niveau extra-chromosomique (mitochondrial ou chloroplastique) dautre part. Les marqueurs nuclaires fournissent un nombre quasi illimit de loci analyser. Pendant plus de trente ans, les allozymes ont t trs sollicits pour analyser la structure gntique des insectes (32). Cette technique, rapide et peu coteuse, a cependant linconvnient de rvler des marqueurs peu polymorphes. Les techniques actuelles mises profit pour estimer les variations gntiques se fondent sur le principe de lamplification gnique par PCR. Parmi elles, quatre techniques sont amplement utilises dans ltude de la structure gntique : les microsatellites, les RAPD (Random Amplified Polymorphism DNA), les RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) et les rgions ITS (Internal Transcribed Spacer). Les microsatellites sont des squences rptes en tandem dans les gnomes dorganismes eucaryotes. Le gnotypage des individus se ralise par amplification du microsatellite partir damorces situes dans les rgions conserves encadrant le loci. Les RAPD utilisent des amorces de 8-10 bases qui gnrent de faon alatoire des fragments par PCR. Leur absence de codominance limite leur utilisation (18). Les RFLP correspondent des fragments dADN gnomique coups de faon spcifique par des enzymes de restriction (5). Les ITS sont des squences non codantes, moins soumises aux contraintes slectives et donc sujettes dimportantes variations (43). Quant lADN mitochondrial, il volue rapidement sans recombinaison. Dhrdit monoparentale (maternelle), la frquence dun haplotype fluctue plus rapidement que celle des gnes nuclaires (3). LADN mitochondrial est de ce fait plus sensible aux effets fondateurs (7, 18).

La mthode directe utilise les observations des mouvements actuels des individus, alors que la mthode indirecte utilise les donnes gntiques pour estimer les dplacements des individus dans un pass rcent (51). La mthode directe a lavantage dtudier les flux de gnes partir des observations relles et actuelles mais prsente de nombreux inconvnients qui limitent son utilisation. Le succs reproducteur des migrants est, dans la plupart des cas, infrieur celui des individus rsidents. Les mesures directes par la technique de marquagerecapture sont ncessairement limites dans le temps et lespace. La seconde approche, indirecte, permet de dduire la structure gntique partir de donnes obtenues grce lun des outils dcrits prcdemment (51, 52). Le paramtre dvelopp par WRIGHT (60) en 1931 pour valuer la structure gntique est le Fst qui est destin mesurer le niveau de subdivision des populations. Fst = (HT HS) / HT, o HT reprsente lhtrozygotie attendue dun individu dans une population totale en panmixie, et o HS correspond lhtrozygotie attendue dun individu dans une sous-population quivalente en panmixie. Fst varie de 0 (absence de diffrenciation) 1 (diffrenciation maximale). Dans le cas des gnes neutres (non soumis la slection), Fst est utilis pour estimer les flux gniques partir de lquation Fst = 1/ (4Nem + 1), Nem correspondant au nombre de migrants par gnration arrivant dans une population (Ne: taille efficace de la population ; m. : taux moyen de migration). Cette relation suppose plusieurs hypothses : (1) lexistence dun quilibre entre la drive gntique et la migration, cest--dire que la perte dallles par drive doit tre compense par le gain dallles par migration, (2) lexistence dun modle en le o chaque population a une probabilit quivalente dchanger des migrants avec les autres populations et (3) la neutralit des marqueurs utiliss.

Les insectes comme modle dtude en gntique des populations

Contrairement la taxinomie molculaire qui utilise les variations gntiques pour distinguer les espces, la gntique des populations recherche les variations gntiques lintrieur dune population et entre populations dune mme espce. Deux mthodes ont t largement dcrites pour tudier la structure gntique : la mthode directe et la mthode indirecte.

es variations gntiques et les flux gniques entre populations refltent les discontinuits rencontres dans les habitats naturels des populations dinsectes. Pour les arthropodes, ces discontinuits sont la fois spatiales et temporelles. La subdivision spatiale peut tre lie, par exemple, au fractionnement dun milieu insulaire (57), aux particularits de certains biotopes tels les caves, les mares (9), ou encore une stricte infodation certains htes (33). Les variations temporelles de la disponibilit des ressources de lhabitat peuvent galement affecter la structure des populations qui, par voie de consquence, subissent des fluctuations saisonnires deffectifs (61). Ainsi, grce la gntique des populations, il a t possible de retracer lhistoire de la dissmination du bourdon Bombus terrestris dans le pourtour mditerranen (19) ou encore celle de lexpansion du moustique Ae. albopictus (29, 30). Les flux de gnes renseignent sur les capacits de dispersion du vecteur (distance, direction et taux) qui sont un lment cl considrer dans une campagne de lutte antivectorielle. Agissant comme force slective, les insecticides confrent un avantage aux individus qui portent des gnes de rsistance, modelant ainsi la dynamique de dispersion de ces gnes (10). De mme, lexamen des flux de gnes entre populations caractrises par des capacits vectorielles diffrentes a permis de mettre en vidence un polymorphisme au sein despces. Lestimation des flux de gnes partir de lanalyse des gnes neutres, utiliss pr-

Contrle gntique de la comptence vectorielle des moustiques du genre Aedes.

Tableau I. Comptence vectorielle de six souches d Aedespolynesiensis infectes exprimentalement par voie orale par Wuchereria bancrofti (souche de Tahiti). Vector competence of six strains of Aedes polynesiensis following the ingestion of Wuchereria bancrofti-infected blood using artificial feeding. souche essai femelles infectes % Tahiti 1 2 1+2 Raiatea 1 2 1+2 Rangiroa 1 2 1+2 Rurutu 1 2 1+2 Nuku-Hiva 1 2 1+2 Mangareva 1 95 94 100 100 100 100 100 100 100 100 100 nb 20 17 22 19 20 22 18 12 19 22 17 J0 nb moyen de microfilaires par femelle infecte 8,1 (19)a 7,2 (16) 7,3+5 9,6 (22) 8,9 (19) 9,3+4,4 10,0 (20) 8,2 (22) 9,0+5,8 10,9 (18) 10,7 (12) 10,8+5,6 8,4 (19) 8,4 (22) 8,4+4,4 9,2+7,1 (17) femelles infectes % 78 90 100 71 58 87 43 82 65 92 46 nb 9 19 9 21 12 12 21 11 20 22 46 J15 nb moyen de larves infestantes par femelle infestante

caractris par une transmission de faible intensit, contrairement aux les hautes, dorigine volcanique, hbergeant des gtes pigs (creux darbre) en fond de valle, qui connaissent une transmission de forte intensit.

a) nombre de moustiques examins

frentiellement en gntique des populations, est trs sollicite pour affiner la taxinomie un niveau infra-spcifique et la dynamique des populations, et ainsi, mettre jour des problmes lis aux variations de capacit vectorielle, de rsistance aux insecticides ou encore de suivi dinsectes transgniques.

Lexemple dAedes polynesiensis, le vecteur de la filaire de Bancroft

La diversit des cotopes explors par Ae. polynesiensis et la distinction des profils pidmiologiques de la filariose selon un dcou6,6 (7)a 5,2 (17) page : le haute volcanique forte transmission 5,6+4,0 filarienne et le basse corallienne faible trans9,2 (9) 6,3 (15) mission filarienne, sont lorigine de nos 7,6+3,9 tudes sur la place de la variabilit gntique 3,6 (7) 4,7 (20) du vecteur dans la transmission filarienne. Une 4,4+2,1 tude des variations de comptence vectorielle 3,3 (9) 4,2 (9) de souches dAe. polynesiensis de diffrentes 3,6+2,0 origines gographiques, infectes par une 4,5 (13) 4,3 (20) mme souche de W. bancrofti provenant de 4,4+2,9 filariens de lle de Tahiti, fut entreprise en uti3,6+3,7 (21) lisant la technique du repas artificiel des femelles au travers dune membrane de Parafilm soutenant le sang parasit. Deux paramtres ont t estims : (1) le nombre de microfilaires ingres par femelle de moustique et (2) le nombre de larves infestantes parvenues maturit dans le moustique, 15 jours plus tard. Les rsultats (tableau I) ont permis de dmontrer un meilleur rendement parasitaire, et donc une meilleure efficacit vectorielle, de la souche de moustique infecte par la souche sympatrique de filaire (20). Pour tenter dexpliquer les rsultats obtenus et, en particulier, les fortes valeurs de rendement parasitaire des souches de Tahiti et de Raiatea (archipel de la Socit), une tude de la structure gntique des populations dAe. polynesiensis a t associe, en vue de comprendre la dispersion des populations et, en particulier, de celles qui sont plus rceptives linfection filarienne. Cette tude a fait appel au polymorphisme des marqueurs isoenzymatiques valus sur une trentaine dchantillons de moustiques rcolts sur 13 les de Polynsie franaise. Les rsultats de notre tude ont rvl que les flux gniques entre les ont tendance diminuer lorsque la distance sparant ces les augmente (tableau II). Cependant, dans les les de la Socit, qui correspondent larchipel le plus peupl et le plus dvelopp conomiquement, limportance des changes gntiques nest plus corrle la distance gographique mais lintensit des changes lis la frquence du trafic commercial (figure 1) (21).

edespolynesiensis est un moustique endmique un grand nombre dles polynsiennes du Pacifique sud. Cette espce peut tre considre comme un tmoin des migrations humaines lors du peuplement de locan Pacifique. Les origines des Polynsiens semblent se situer aux Philippines ou en Indonsie orientale, entre 1500 et 1000 avant J.-C. Leurs migrations travers la Mlansie, retraces grce la dcouverte des poteries Lapita, remontent 1500-500 avant J.-C. Leurs avances graduelles vers le Pacifique Est stalrent sur plus de 2000 ans; ont t successivement colonises : les les Tonga vers 1300 avant J.-C., les les Samoa vers 1000 avant J.-C., les les Marquises, les les de la Socit, les les Hawaii au nord et lle de Pques lest entre 300 et 700 aprs J.-C. et, enfin, les les Cook, les les Australes et la Nouvelle Zlande entre 700 et 1100 ans aprs J.-C. (6). Originaire dAsie du Sud-Est, la filaire de Bancroft, Wuchereria bancrofti, a t transporte par les Polynsiens qui ont conquis les les douest en est dans le Pacifique (31). Une troite adaptation sest Tableau II. alors opre entre le ver parasite et les moustiques endmiques des les. Cest ainsi que sest individualise la forme apriodique de la filaire de Bancroft, ou varit pacifica, endmique des les de comparaison Polynsie et de certains archipels mlansiens. Ae. polynesiensis appartient un groupe despces proches : le groupe scutellaris. Exclusivement exophile et exophage, il se dveloppe dans toute une srie de petites collections deau temporaires. Cette espce colonise notamment des gtes caractristiques des milieux insulaires: les terriers de crabe qui reprsentent le gte larvaire le plus important sur les les dorigine corallienne. A cet environnement, o prdominent ces gtes endogs, est associ un facis pidmiologique de la filariose

Diffrenciation gntique dAedes polynesiensis en Polynsie franaise (chantillons rcolts entre octobre 1992 et fvrier 1993). Population structure of Aedes polynesiensis in French Polynesia. Got2 0,029 0,048 0,023 0,076 0,072 -0,005 -0,004 0,045 0,071 0,069 0,018 Fst Pgm 0,059 0,020 0,001 0,025 0,041 0,043 0,002 0,017 0,406 0,019 0,028 total 0,046 0,033 0,005 0,047 0,053 0,016 0,005 0,028 0,290 0,028 0,024 Nem 5,2 7,4 51 5,1 4,5 15 47 8,7 0,6 8,7 10,2

probabilit dhomognit N Got2 Pgm total entre chantillons dune mme le Tahiti 8 0,004 <10-4 <10-5 Moorea 3 0,03 0,16 0,03 Huahine 3 0,23 0,27 0,23 Raiatea 4 0,004 0,08 0,003 Bora-Bora 2 0,08 0,06 0,03 Rangiroa 3 0,45 0,03 0,07 Manihi 2 0,60 0,68 0,77 entre les dun mme archipel Socit 5 <10-4 Tuamotu 5 <10-4 Australes 2 0,06 entre archipels 4 0,0004 N : nombre dchantillons analyss <10-4 <10 -4 0,18 <10-4 <10-5 <10-5 0,06 <10-4

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Figure 1. Flux gniques dAedes polynesiensis en relation avec les trafics commerciaux en Polynsie franaise. Genetic exchanges of Aedes polynesiensis in relation with global traffic.

diffrenciation gntique semble tre associe sa faible dispersion active, phnomne largement admis dans un environnement urbain o gtes de ponte artificiels lis aux modalits de stockage de leau et surtout aux dchets de consommation, et nourriture (repas sanguin sur homme) sont disponibles en abondance dans un primtre limit.

Hyperendmicit de la dengue dans le Sud-est asiatique

Cest dans le Sud-est asiatique (Manille, Philippines) que fut dcrite pour la premire fois, en 1954, la forme grave de la maladie, la dengue hmorragique (26). Elle a t, par la suite, signale dans le sud du Vietnam et Singapour en 1960, Penang en 1962 et en Inde en 1963 (25). La dengue hmorragique survient maintenant dans le sud du Vietnam de faon rgulire et lincidence de la maladie sintensifie graduellement. Dans la ville de Ho Chi Minh, les habitants accumulent consciemment (jarres de stockage deau) ou non intentionnellement (dtritus de la consommation) des gtes larvaires potentiels qui sont lorigine des fortes densits du vecteur, particulirement la saison des pluies. Nous avons tudi la variabilit de la comptence vectorielle des populations de la rgion de Ho Chi Minh ville par lestimation des taux dinfection tablis au 14me jour aprs infection orale exprimentale des moustiques avec le virus de la dengue 2. Vingt chantillons de moustiques ont t analyss : 9 prlevs au centre de la ville de Ho Chi Minh et 11 dans la banlieue proche. Les rsultats rvlent que deux zones se dessinent distinctement : une zone correspondant lensemble des chantillons rcolts dans le centre ville dont la rceptivit
Figure 2. Taux dinfection par le virus de la dengue 2 des chantillons dAe. aegypti de Ho Chi Minh ville (Vietnam).La zone ombre correspond une zone o les taux dinfection sont homognes. Infection rates of Aedes aegypti from Ho Chi Minh City (Vietnam). Samples which display similar oral susceptibility with dengue type 2 virus are grouped within a shaded area.

Lexemple dAedes aegypti, vecteur des virus de la dengue

agent causal de la dengue est un virus ARN de la famille des Flaviviridae. Quatre srotypes sont connus : DEN1, DEN-2, DEN-3 et DEN-4. Aux 18me et 19me sicle, et mme durant la premire moiti du 20me sicle, la dengue svissait en Asie en respectant des priodes inter pidmiques de quelques dcennies. Les transports, effectus par bateaux qui vhiculaient moustiques vecteurs et hommes rceptifs, ont t lorigine de quelques pidmies de faible incidence. Ce profil a chang brutalement au lendemain de la seconde guerre mondiale. Lavnement des moyens de transports rapides ont suffi dissminer rapidement les virus de la dengue et leurs vecteurs et lexplosion dmographique et lurbanisation incontrle ont contribu sa prennisation dans la plus grande partie de la ceinture tropicale du globe. Les villes surpeuples dAsie, aux conditions sanitaires prcaires, hbergent aujourdhui dabondantes populations dAe. aegypti, moustique particulirement bien adapt ce type denvironnement fortement anthropis. Lensemble de ces facteurs a conduit ltablissement dune transmission selon un mode hyperendmique o les quatre srotypes circulent en mme temps. Cest partir de ce rservoir de virus que des vagues pidmiques atteignent les autres pays du monde tropical. On estime quelque 100 millions le nombre des cas de dengue survenant chaque anne (38). A ce jour, aucun traitement tiologique ni vaccin nest disponible. Seule la lutte contre le vecteur est capable de rduire les risques de transmission. Aedes aegypti est un moustique originaire des forts africaines se nourrissant principalement sur animaux sauvages. Cette forme primitive a volu et se prsente actuellement sous trois formes, en fonction de critres morphologiques et co-thologiques : Ae. aegypti formosus, sauvage (la forme primitive de coloration sombre), Ae. aegypti queenslandensis (coloration trs ple) et Ae. aegypti aegypti (coloration intermdiaire). Cette dernire est la forme qui existe dans presque tout le monde tropical et tempr chaud quelle a su conqurir grce aux transports humains. Parce quil est un vecteur majeur darbovirus, et en particulier des virus de la dengue, il a fait lobjet de nombreuses tudes en vue de comprendre lpidmiologie de cette dernire maladie. Sa variabilit gntique a t explore par la technique des isoenzymes (45, 53). Sa forte

Contrle gntique de la comptence vectorielle des moustiques du genre Aedes.

Tableau III. Diffrenciation gntique dAedes aegypti dans la ville de Ho Chi Minh (Vietnam) (chantillons rcolts entre fvrier et mai 1998). Population differentiation of Aedes aegypti in Ho Chi Minh City (Vietnam). Fst comparaison N Hk2 +0,127 +0,05 +0,186 +0,045 +0,329 +0,152 +0,040 Mdh +0,021 +0,036 +0,009 -0,007 -0,003 -0,006 -0,209 Pgi +0,033 +0,001 +0,044 +0,085 +0,001 +0,016 -0,077 Pgm +0,168 +0,122 +0,203 +0,057 +0,03 +0,280 +0,099 total +0,099 +0,071 +0,125 +0,033 +0,104 +0,167 +0,051 2,3 3,3 1,7 7,3 2,1 1,2 4,7 chantillons 20 centre ville 9 banlieue 11 Cu Chi 2 Hoc Mon 2 Binh Chanh 5 Nha Be 2 Nem

Tableau IV. Diffrenciation gntique dAedes aegypti dans lle de Tahiti (Polynsie franaise).Influence de la densit de la population humaine. Les chantillons ont t rcolts en avril 1997. Population differentiation of Aedes aegypti from Tahiti and Moorea in French Polynesia according to human population density. comparaison N Hk2 +0,283 +0,289 +0,021 -0,004 Mdh +0,062 +0,058 -0,014 +0,123 Fst Mpi +0,130 +0,135 +0,024 +0,024 Nem Pgi +0,174 +0,240 +0,216 +0,001 Pgm +0,134 +0,166 +0,095 -0,002 total +0,118 +0,134 +0,049 +0,076 1,9 1,6 4,8 3,0

N : nombre dchantillons analyss

Tahiti 20 Zone 1 Papeete 11 Zone 2 > 400 habitants/km 2 4 Zone 3 < 400 habitants/km 2 5

linfection virale apparat variable dun site lautre, et une deuxime zone, reprsente par les moustiques issus de la banlieue, avec des taux dinfection parfaitement comparables entre eux (figure 2). Ces rsultats sont en partie conforts par une deuxime approche qui consiste en une analyse des flux de gnes tablis partir des estimations de frquences allliques au niveau de plusieurs loci isoenzymatiques. La diffrenciation est en effet importante entre les moustiques issus du centre ville alors que ceux de la banlieue sont plus homognes (tableau III). On peut penser que les traitements insecticides, dirigs contre les adultes, effectus lors des priodes pidmiques (saison des pluies) rduisent les densits de moustiques ainsi que leur dispersion et, par voie de consquence, amplifient la diffrenciation gntique (56).

N : nombre dchantillons analyss

mrations. La cte est, quant elle, est une cte trs accidente, trs vente, avec une plaine ctire peu favorable un regroupement des habitations. Ce dcoupage dans la rpartition de la population humaine, li des particularits cologiques du milieu, se retrouve dans les pressions insecticides, plus fortement menes dans les agglomrations denses qui hbergent les plus importantes densits dAe. aegypti. Les frquents vnements dextinction ainsi entrans tendent accentuer la diffrenciation gntique. Ceci expliquerait que les moustiques de la cte ouest prsentent des taux dinfection htrognes, la diffrence de ceux de la cte est, plus homognes dans leur rceptivit au virus (58). Les diffrences de comptence vectorielle peuvent sexpliquer par des variations gntiques des populations qui ragissent diffremment linfection par les virus de la dengue. A ce travail, a t associe une tude de gntique des populations. Vingt chantillons de moustiques ont t analyss sur lle de Tahiti. En comparant les frquences allliques obtenues pour diffrents loci isoenzymatiques, une image de la diffrenciation a pu tre labore. Trois zones sont ainsi dceles (tableau IV) : (1) une zone correspondant lagglomration urbaine de Tahiti comprenant le chef-lieu, Papeete, et les six districts lenvironnant (75 % des habitants de lle y rsident). Les moustiques y sont gntiquement structurs. Labondance des gtes potentiels, la forte densit humaine qui y rgne, ainsi que les traitements insecticides rptition qui y sont mens ont eu pour consquence une accentuation de la diffrenciation ; (2) une zone correspondant aux moustiques rcolts sur la cte est de lle de Tahiti, o la densit humaine
Figure 3. Taux dinfection des chantillons dAe. aegypti rcolts Tahiti et Moorea (Polynsie franaise).La zone ombre correspond une zone o les taux dinfection vis vis du virus de la dengue 2 sont homognes. Infection rates of Aedes aegypti from Tahiti and Moorea (French Polynesia). Samples which display similar oral susceptibility with dengue type 2 virus are grouped within a shaded area.

Dengue pidmique
A partir des pays du Sud-est asiatique, les vagues pidmiques peuvent atteindre, de proche en proche, toutes les les du Pacifique o la dengue survient aux saisons de fortes densits de moustiques, cest--dire la saison des pluies. La Polynsie franaise, aprs avoir connu des pidmies sporadiques jusquen 1961, date douverture de laroport international Tahiti, connat depuis lors un raccourcissement des intervalles inter-pidmiques. Tahiti est considr comme la porte dentre de nouvelles souches virales qui stablissent de proche en proche dans lensemble des les possdant une liaison arienne avec laroport international. Le dveloppement des moyens modernes de transport ainsi que le dveloppement urbain et la croissance dmographique ont contribu au maintien de la dengue dans cette rgion du monde. Les quatre srotypes des virus de dengue ont ainsi merg sous un mode pidmique : la dengue 1 en 1944 et 1975-76, la dengue 2 en 1971, la dengue 3 en 1964 et 1969, et la dengue 4 en 1979. De 1979 1988, le srotype 4 sest maintenu de faon endmique Tahiti (13). La dernire pidmie, en 1996-97, tait due au type 2 (12). La variabilit de la comptence vectorielle dAe. aegypti vis-vis du virus de la dengue 2 a suscit de nombreux travaux (8, 24, 54). Dans notre tude, 16 chantillons dAe. aegypti de lle la plus dveloppe de Polynsie franaise, Tahiti, ont t infects exprimentalement par voie orale par le srotype 2 du virus de la dengue. Quatorze jours aprs le repas infectant, la prsence du virus est dtecte par immunofluorescence indirecte au niveau du tissu nerveux des moustiques. Les pourcentages de moustiques infects sont tablis pour chaque chantillon, puis compars selon leur localisation gographique. Cest ainsi que les moustiques de la cte ouest de Tahiti, la plus peuple, sont htrognes quant leur rceptivit, alors que ceux de la cte est, moins habite, demeurent homognes (figure 3). Ces rsultats peuvent sexpliquer par les particularits cologiques des deux ctes. La cte ouest, est moins vente et plus propice linstallation de petites agglo-

A.-B. Failloux,M. Vazeille-Falcoz,L. Mousson & F . Rodhain

est plus faible et o les conditions cologiques sont diffrentes, privilgiant les espaces arbors : les flux de gnes y sont plus intenses, et (3) une zone intermdiaire, prsentant un cotope similaire celui de la cte ouest de Tahiti mais une densit humaine faible. La diffrenciation des moustiques y est intermdiaire. Cette situation illustre bien la complexit des phnomnes mis en jeu o interagissent la densit humaine, lurbanisation, les cotopes et les mesures de lutte, et cela des degrs variables (44).

Conclusions

e nombreuses tudes de gntique des populations de moustiques vecteurs ont maintes fois permis dlucider le statut vectoriel des populations naturelles (53). Le dveloppement actuel des techniques danalyse des gnomes permettra daffiner la caractrisation des individus un niveau infra-spcifique. La connaissance des mouvements des gnes slectionns, tels les gnes de rsistance aux insecticides, ou les gnes de rceptivit un pathogne, ou encore des gnes introduits par transgnse, demeure une indication primordiale pour prdire le devenir gntique dune population dans son environnement. Ce profil suit une dynamique dicte par des variations spatiales (diffrents types dcotopes) et temporelles (fluctuations saisonnires) quil est important dvaluer avant dagir in natura.

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