Plsmido

Plsmido
Los plsmidos, vectores o tambin llamados plasmidios, son molculas de ADN extracromosmico circular o lineal que se replican y transcriben independientes del ADN cromosmico. Estn presentes normalmente en bacterias, y en algunas ocasiones en organismos eucariotas como las levaduras. Su tamao vara desde 1 a 250 kb. El nmero de plsmidos puede Dibujo esquemtico de un plsmido en una bacteria: en rojo, el ADN del cromosoma; en variar, dependiendo de su tipo, desde azul, los plsmidos. una sola copia hasta algunos cientos por clula. El trmino plsmido fue presentado por primera vez por el bilogo molecular norteamericano Joshua Lederberg en 1952.[1] Las molculas de ADN plsmidico, adoptan una conformacin tipo doble hlice al igual que el ADN de los cromosomas, aunque, por definicin, se encuentran fuera de los mismos. Se han encontrado plsmidos en casi todas las bacterias. A diferencia del ADN cromosomal, los plsmidos no tienen protenas asociadas. En la mayora de los casos se considera gentico dispensable. Sin embargo, posee informacin gentica importante para las bacterias. Por ejemplo, los genes que codifican para las protenas que las hace resistentes a los antibiticos estn, frecuentemente, en los plsmidos. Hay algunos plsmidos integrativos, es decir, que tienen la capacidad de insertarse en el cromosoma bacteriano. Estos rompen momentneamente el cromosoma y se sitan en su interior, con lo cual, automticamente la maquinaria celular tambin reproduce el plsmido. Cuando ese plsmido se ha insertado se les da el nombre de episoma. Los plsmidos se utilizan en ingeniera gentica por su capacidad de reproducirse de manera independiente del ADN cromosomal como as tambin por que es relativamente fcil manipularlos e insertar nuevas secuencias genticas. Los plsmidos usados en Ingeniera Gentica suelen contener uno o dos genes que les confieren resistencia a antibiticos y permiten seleccionar clones recombinantes. Hay otros mtodos de seleccin adems de la resistencia a antibiticos, como los basados en fluorescencia o en protenas que destruyen las clulas sin uso de antibiticos. Estos nuevos mtodos de seleccin de plsmidos son de uso frecuente en agrobiotecnologa, debido a la fuerte crtica de grupos ecologistas contra la posibilidad de presencia de antibiticos en los organismos modificados genticamente.

Resistencia a los antibiticos

Los plsmidos a menudo contienen genes o paquetes de genes que le confieren una ventaja selectiva lo cual les da la habilidad de hacer a la bacteria, resistente a los antibiticos. Cada plsmido contiene al menos una secuencia de ADN que sirve como un origen de replicacin u ORI (un punto inicial para la replicacin del ADN), lo cual habilita al ADN para ser duplicado independientemente del ADN cromosomal. Los plsmidos de la mayora de las bacterias son circulares, pero tambin se conocen algunos lineales, los cuales reensamblan superficialmente los cromosomas de la mayora de eucariotes.

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Epsomas
Un epsoma es un plsmido que puede integrarse por s mismo al ADN cromosomal del organismo husped. Por esta razn, puede mantenerse en contacto por un largo tiempo, ser duplicado en cada divisin celular del husped y volverse parte bsica de su mapa gentico. Este trmino no se usa ms en plsmidos, debido a que ahora est claro que una regin homologa con el cromosoma elabora un plsmido dentro de un epsoma. Los plsmidos usados en ingeniera gentica son llamados vectores. Estos son usados para transferir genes desde un organismo a otro y tpicamente contienen un marcador gentico confiriendo un fenotipo el cual puede ser seleccionado a favor o en contra. La mayora tambin contienen un polivinculador o sitio de clonado mltiple (MCS), el cual es una pequea regin que contiene los sitios de restriccin ms comnmente usados, permitiendo una fcil insercin de fragmentos de ADN en ese lugar.

Tipos
Una forma de agrupar plsmidos es por su habilidad de transferirse a otra bacteria. Los plsmidos conjugativos contienen tra-genes, los cuales ejecutan complejos procesos de conjugacin, como la transferencia sexual de plsmidos a otra bacteria. Los plsmidos no-conjugativos, son incapaces de iniciar una conjugacin, de all que ellos pueden transferirse nicamente con la asistencia de los plsmidos conjugativos y lo hacen por accidente. Una clase intermedia de plsmidos son los movilizables los cuales llevan solo un subtipo de genes requeridos para la transferencia. Ellos pueden parasitar un plsmido conjugativo, transfirindose a una alta frecuencia solo en su presencia. Es posible para plsmidos de diferentes tipos el coexistir en una celular simple. Siete tipos diferentes de plsmidos han sido encontrados en la E.Coli. Pero normalmente plsmidos relacionados son incompatibles, en el sentido de que solo uno de ellos sobrevive en la lnea celular, debido a la regulacin de las funciones vitales de los plsmidos. Por lo tanto, los plsmidos pueden ser diferenciados de acuerdo a grupos de compatibilidad. Otra forma de clasificar plsmidos es por funcin. Hay 5 clases principales: Plsmidos de fertilidad: los cuales contienen tra-genes, son capaces de conjugarse. Plsmidos de resistencia: los cuales contienen genes que pueden constituir resistencia contra antibiticos o venenos. Histricamente conocidos como Factores R, antes de que se entendiera la naturaleza de los plsmidos. Col-plsmidos: los cuales contienen genes que codifican (determinan la produccin de) colinas y protenas que pueden matar a otra bacteria. Plsmidos degradativos: los cuales habilitan la digestin de sustancias inusuales como tolueno o cido saliclico. Plsmidos virulentos: los cuales convierten la bacteria en un patgeno. Los plsmidos pueden pertenecer a ms de uno de estos grupos funcionales. Los plsmidos solo pueden coexistir como una o ms copias en cada bacteria, debido a la divisin celular pueden perderse en una de las bacterias segregadas. Algunos plsmidos incluyen un sistema de adicin o Sistema de Muerte Postsegregacional (PSK: Postsegregational Killing System). Ellos producen en conjunto un veneno de larga vida y un antdoto de vida corta. Las clulas hija que retienen una copia del plsmido sobreviven, mientras que una clula hija que falla al integrar el plsmido muere o sufre una reducida tasa de crecimiento debido al veneno que obtuvo de la clula padre. Este es un ejemplo de plsmidos como el ADN replicante.

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Aplicaciones
Los plsmidos sirven como una importante herramienta en laboratorios de gentica e ingeniera bioqumica, donde son comnmente usados para multiplicar (hacer muchas copias de) o como genes particulares expresos. Muchos plsmidos estn disponibles comercialmente para dichos usos. El gen a ser replicado se inserta en copias de un plsmido el cual contiene genes que hacen clulas resistentes a un antibitico en particular. En el paso siguiente el plsmido es insertado en la bacteria por medio de un proceso llamado transformacin. Luego, la bacteria es expuesta a un antibitico particular. Solo la bacteria que toma copias del plsmido sobrevive al antibitico debido a que el plsmido lo hace resistente. En particular, los genes protectores son expresados (usados para hacer protena) y la protena expresada evita la accin del antibitico. De esta forma, los antibiticos actan como un filtro que seleccionan nicamente la bacteria modificada. Ahora, estas bacterias pueden ser cultivadas en largas cantidades, cosechadas y el plsmido de inters puede ser aislado. Otro uso importante de los plsmidos es fabricar grandes cantidades de protenas.. En este se deja crecer la bacteria que contiene el plsmido que encierra al gen de inters. Solo como la bacteria produce la protena que le confiere si resistencia a los antibiticos, este tambin puede ser usado para producir protenas en grandes cantidades desde el gen insertado. Esta es una forma barata y fcil de producir genes o protenas que este codifica de forma masiva, como por ejemplo insulina, o inclusive antibiticos.

Extraccin del ADN plasmdico

Como se comentaba anteriormente, los plsmidos son usados a menudo para purificar una secuencia especfica, debido a que ellos pueden ser fcilmente purificados del resto del genoma. Para su uso como vectores y como clonadores moleculares, a menudo los plsmidos necesitan ser aislados. Hay muchos mtodos de aislar ADN plasmdico de una bacteria, los arquetipos de los cuales son el miniprep y el maxiprep. El miniprep se suele usar desde una perspectiva analtica. El resultado es una cantidad de ADN plasmdico (10-30g), el cual es suficiente para anlisis usando digestin restrictiva, para secuenciacin o para algunas tcnicas de ingeniera gentica. En el maxiprep, se cultivan volmenes mucho ms grandes de bacterias en suspensin. Esencialmente este es un escalado de la preparacin mini-prep, el cual es seguido por una purificacin adicional. Esto resulta en una cantidad relativamente grande (0,5 -1 mg) de ADN plsmido muy puro. En los ltimos tiempos muchos kits comerciales han sido creados para realizar la extraccin plasmdica a varias escalas, pureza y niveles de automatizacin.

Conformaciones
El ADN plsmido puede aparecer en uno de cinco conformaciones, las cuales (para un tamao dado) corren a diferentes velocidades en un gel durante electroforesis. Las conformaciones se muestran abajo en orden de movilidad electrofortica (velocidad para un voltaje dado), del ms lento al ms rpido: Mellado abierto circular: el ADN tiene un solo corte filamentario. Lineal: ADN tiene terminales libres, ya sea porque los filamentos fueron cortados o porque el ADN era linear in vivo. Usted puede modelar este como un cordn que no se ha conectado as mismo. circular relajado: ADN que interacta completamente con ambos filamentos sin cortar, pero que ha sido enzimticamente relajado. Usted puede modelar este dejando un cordn relajado y luego conectndolo a s mismo. superespiral desnaturalizado: ADN como el ADN superespiral o superenrollado (ver ms abajo), pero que tiene regiones sin unir que lo hacen ligeramente menos compacto; esto resulta de una excesiva alcalinidad durante la preparacin del plsmido.

Plsmido ADN superespiral: Es un ADN totalmente intacto con los filamentos sin cortar, y con forma de remolino, resultando en una forma compacta. La tasa de migracin de pequeos fragmentos lineales es directamente proporcional al voltaje aplicado (en el caso de voltajes bajos). En el caso de altos voltajes, grandes fragmentos migran continuamente a diferentes tasas. Por lo tanto, la resolucin del gel decrece con el incremento del voltaje. A un bajo voltaje determinado, la migracin de un pequeo fragmento lineal de ADN est en funcin de su longitud. Fragmentos lineales largos (de 20kb) migran a cierta tasa sin importar la longitud. Esto es debido a que las molculas reptan desde el centro de la molcula siguiendo el sentido de la matriz de gel. La digestin restrictiva se usa frecuentemente para analizar fragmentos purificados de plsmidos. Estas enzimas rompen especficamente el ADN en ciertas secuencias cortas.

Referencias
Klein, Donald W.; Prescott, Lansing M.; Harley, John (1999). Microbiology. Boston: WCB/McGraw-Hill.
[1] LEDERBERG J (1952). Cell genetics and hereditary symbiosis. Physiol. Rev. 32 (4): pp.403-30.

Vase tambin
Bacteria Prin Virus Provirus Viroide Nanobio

Fuentes y contribuyentes del artculo

Fuentes y contribuyentes del artculo

Plsmido Fuente: http://es.wikipedia.org/w/index.php?oldid=45020483 Contribuyentes: .Marfil., Alexcalamaro, Axxgreazz, Beto29, Bucephala, DevilGhost, Dodo, EKhan, Fibonacci, Franciscosp2, Gothmog, Gustavocarra, Humberto, Interwiki, Jmurquiza, Jorge c2010, Joseaperez, Killermo, Kmmilo, LeonardoRob0t, MC-chileno, Macarrones, Matdrodes, Moriel, Natrix, Opinador, Ortisa, Quesada, Retama, Sbassi, Sgiraldoa, SlashBlack, Super braulio, Taichi, The nemesis, TheNava00, Vitamine, Xvazquez, Zetxek, Zurdoredrejo, 66 ediciones annimas

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