HDLc -D Directo.

Enzimtico colorimtrico
Determinacin cuantitativa de colesterol HDL IVD
Conservar a 2-8C
Determinacin directa del HDLc (colesterol de lipoprotenas de alta densidad) sin necesidad de pre-tratamiento o centrifugado de la muestra. El mtodo se basa en las propiedades de un detergente que solubiliza slo la fraccin HDL, de forma que el HDLc se libera reaccionando con la colesterol esterasa, la colesterol oxidasa y los cromgenos. Las lipoprotenas LDL, VLDL y quilomicrones son inhibidas debido a la adsorcin del detergente en sus superficies haciendolas resistentes a la enzima. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de HDLc presente en la muestra ensayada. Las partculas de HDL son lipoprotenas que transportan el colesterol a las clulas. El colesterol transportado por las lipoprotenas de alta densidad a menudo se denomina colesterol bueno, ya que niveles elevados estn relacionados con un menor riesgo cardiovascular. Un nivel bajo de colesterol HDL es considerado uno de los principales factores de riesgo cardiovascular y enfermedades de las arterias coronarias1,5,6. El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clnicos y de laboratorio. R 1 (L) Calibrador (L) Muestra (L)

Colesterol HDL
Muestra
300 -3

Blanco
300 ---

Calibrador
300 3 --

PRINCIPIO DEL MTODO

4. 5. 6.

Mezclar e incubar 5 min a 37C Leer la absorbancia (A1) del calibrador y la muestra. Aadir: Blanco Calibrador Muestra 100 100 100 R 2 (L) Mezclar e incubar 5 minutos a 37C. Leer la absorbancia (A2) frente al Blanco de reactivo. Calcular: A= A2 A1 .

7. 8. 9.

SIGNIFICADO CLNICO

CLCULOS ( A ) Muestra ( A ) Calibrador

x Conc. Calibrador = mg/dL de HDL colesterol en la muestra

Factor de conversin: mg/dL x 0,0259 = mmol/L. Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.

CONTROL DE CALIDAD

REACTIVOS
R1

R2 HDLc/ LDLc CAL

GOOD pH 7,0 Colesterol oxidasa Peroxidasa DSBmT GOOD pH 7,0 Colesterol esterasa 4 Aminoantipirina Detergente Ascrbico oxidasa Calibrador. Suero humano liofilizado.

< 1000 U/L <1300 U/L < 1 mM < 1500 U/L < 1 mM < 2% < 3000 U/L

VALORES DE REFERENCIA2
Riesgo menor Riesgo normal Riesgo elevado

Hombres > 50 mg/dL 35 50 mg/dL < 35 mg/dL

Mujeres > 60 mg/dL 45 60 mg/dL < 45 mg/dL

Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. Rango de medida: Desde el lmite de deteccin de 2,5 mg/dL hasta el lmite de linealidad de 200 mg/dL. Si la concentracin de la muestra es superior al lmite de linealidad, diluir 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2. Precisin: Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20) Media (mg/dL) 32,9 50,6 101,4 32,8 50,0 100,1 SD 0,3 0,2 0,7 0,4 0,7 1,1 CV (%) 0,8 0,5 0,7 1,3 1,5 1,1 Sensibilidad analtica: 1 mg / dL = 0.0016 A. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x). Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes: Coeficiente de correlacin (r): 0,996. Ecuacin de la recta de regresin: y= 0,98 + 3,42 mg/dL. Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado. No se han observado interferencias con Bilirrubina T. y D. hasta 60 mg/dL, hemoglobina hasta 1000 mg/dL o lipemia hasta 1800 mg/dL. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinacin del Colesterol HDL3,4.

PRECAUCIONES HDLc/ LDLc CAL Los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el antgeno HBs, HCV y para el anti-HIV (1/2). Sin embargo, deben tratarse con precaucin como potencialmente infecciosos. - R 1 y R 2: Listos para su uso. - HDLc/ LDLc CAL: Reconstituir el contenido de un vial con 1 mL de agua destilada. Tapar el vial y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita la contaminacin. No congelar lor reactivos. - R 1 y R 2: Una vez abiertos son estables 8 semanas a 2-8C. - HDLc/ LDLc CAL: Una vez reconstituido es estable 1 semana a 2-8C o 5 semanas a 20C. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partculas y turbidez.
- Espectrofotmetro o analizador con cubeta para lecturas a 600 nm. - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. - Equipamiento habitual de laboratorio.

CARACTERSTICAS DEL MTODO

PREPARACIN

CONSERVACIN Y ESTABILIDAD

INTERFERENCIAS

MATERIAL ADICIONAL

NOTAS

SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de este reactivo en distintos analizadores. Naito H K HDL Cholesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1207-1213 and 437. US National Cholesterol Education Program of the National Institutesof Health. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

Suero o plasma:1 No usar anticoagulantes con citrato. No utilizar muestras hemolizadas. Separar el suero de los hematies lo antes posible. Estabilidad de la muestra: 7 das a 2-8C.

MUESTRAS

BIBLIOGRAFA
1. 2. 3. 4. 5. 6.

PROCEDIMIENTO
1.

2. 3.

Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 600-700 nm Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .37C Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada. Pipetear en una cubeta:

PRESENTACIN
Ref:1001096 Ref:1001097
Cont.

100/125 det

200/250 det

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