Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
Protein intrasel
Protein ekstrasel
Sitoplasma
Jumlah besar Bercampur dengan protein lain Agregat-badan
Periplasma
Jumlah sedikit Relatif murni Ikatan disulfida terbentuk
Ekstrasel
Volume besar bercampur dengan media pertumbuhan Perlu
inklusi (tidak
larut)
pemekatan
Pemecahan sel
Pemisahan Pemekatan protein Pemekatan protein Kromatografi kolom
Protein intrasel
Protein ekstrasel
Pemekatan protein
1. SALTING IN-SALTING OUT
Dalam air murni protein sukar larut
Gambar ultrafiltrasi
2. ULTRAFILTRASI
Kromatografi kolom
o Memisahkan protein berdasarkan ukuran (BM) o Kolom: menggunakan gel berpori dengan ukuran tertenu dan seragam o Molekul kecil akan memasuki pori dari gel o Elusi: molekul besar-molekul sedang-molekul kecil
Definisi:
Efektif dan efisien
Sampel protein sedikit Spesifik
Protein fusi
Contoh:
Poli-His Tag (kolom nikel) Chitin Tag (kolom kitin)
membawa poli-His
SDS PAGE
Sodium dodecyl sulfate polyacrilamide gel electroforesis Analisa protein kualitatif Mengetahui ukuran protein dan memonitor pemurnian protein Denaturasi protein:
SDS: protein menjadi bermuatan negatif dan linier
Beta merkaptoetanol: memutus ikatan disulfida Perebusan (5 menit, 100oC)
Berat molekul protein: marka protein (standar) yang sudah diketahui ukurannya
Informasi: muatan dan ukuran protein Analisa protein hasil ekspresi gen, deteksi marker penyakit,
Dimensi 1: protein dipisahkan berdasarkan muatan (titik isoelektrik)-Iso electric focusing (IEF)
Protein denaturasi: urea-memutus ikatan hidrogen tetapi tidak
mengubah muatan
Gel: gradien pH, medan listrik sehingga protein akan terpisah
berdasarkan muatan dan akan berhenti setelah muatan protein netral (titik isoelektrik)
Pemetaan peptida
Protein dipotong secara enzimatik atau kimiawi sehingga dihasilkan fragmen-fragmen peptida-dianalisa
Sekuensing protein
Reaksi antigen-antibodi
Protein yang akan diidentifikasi (antigen) direaksikan dengan antibodi spesifik (yang hanya mengenali protein target)
Latihan soal