Estos ensayos son a menudo indicados cuando se piensa que el organismo causante pertenece a una especie capaz de mostrar

resistencia a los agentes antimicrobianos ms comnmente usados.

Los mecanismos de resistencia incluyen la produccin de enzimas inactivantes de la droga, que alteran el objetivo, o alteran la accin.

Mezclas de diferentes microorganismos no deberan probarse en una misma placa de ensayo de susceptibilidad.

Este mtodo, que es el ms frecuentemente usado, es tambin llamado difusin por disco o Kirby-Bauer, En este caso, el microorganismo es inoculado en la superficie de una placa de agar, sobre el cual se colocan discos impregnados con una concentracin conocida del antibitico.

Las placas se incuban por 16-18 horas a 35 C. durante la incubacin, el antibitico difunde radialmente desde el disco a travs del agar, por lo que su concentracin va disminuyendo a medida que se aleja del disco. En un punto determinado, la concentracin del antibitico en el medio es incapaz de inhibir al germen en estudio. El dimetro del rea de inhibicin alrededor del disco puede ser convertido a las categoras de susceptible, intermedio o resistente

En este caso, tubos (macrodilucin) o microplacas (microdiluci) contienen concentraciones crecientes de un determinado antibitico. El organismo en estudio es inoculado en los diferentes tubos o pocillos de la microplaca y la CIM es determinada despus de la incubacin, de la misma forma descrita anteriormente para el mtodo de la dilucin en agar.

Este mtodo es combinacin de los mtodos descritos anteriormente. El E-test es ms simple que otros mtodos para obtener una CIM. Utiliza una tira de plstico que contiene concentraciones crecientes de un determinado antibitico que van desde 0,016 ug/ml hasta 256 ug/ml/ Esta tira se pone sobre una placa de agar que ha sido inoculada con el organismo en estudio

Despus de incubar la placa por 16 a 18 horas, se forma un rea de inhibicin de forma elptica, en la cual la concetracin inhibitoria mnima puede ser leda directamente (ver Figura 1). Este es el mtodo de eleccin para hacer estudios de susceptibilidad en grmenes problemticos o con requerimientos especiales, como por ejemplo Streptococcus pnemoniae, Streptococcus pyogenes, Haemophilus influenzae y grmenes anaerbicos.

Figura 1 Representacin esquemtica del mtodo del E-test. La flecha indica la zona donde se lee la Concentracin Inhibitoria Mnima

Los antibiticos -Lactmicos comparten un anillo central de 4 -Lactam y su principal modo de accin es la inhibicin de sntesis de la pared celular. Anillos adicionales a la estructura o grupos agregados al anillo -Lactam determina si el agente es penicilina, cefem, carbapenem, o monobactam.

Estos agentes antimicrobianos incluyen una penicilina y un segundo agente que tiene una mnima actividad antibacteriana pero funciona como un agente inhibidor de algunas Lactamasas.
Actualmente, tres inhibidores de -Lactamasas estn en uso: clavulanato (cido clavulnico), sulbactam, y tazobactam.

Este grupo de drogas incluye las clsicas cefalosporinas y antibiticos de otras subclases como las cefamicinas, oxacefemes y carbacefemes.
Las distintas cefalosporinas , basado en la extensin de su actividad contra la mayora de bacterias gram negativas ms resistentes a antibiticos. No todos los representantes de un grupo especfico o generacin necesariamente tienen el mismo espectro de actividad.

Carbapenems difieren ligeramente en estructura de las penicilinas y son mucho ms resistentes a la hidrlisis por -Lactamasa, lo que da a ellos un amplio espectro de actividad contra muchas bacterias grampositivas y gramnegativas.

Para estandarizar la densidad del inculo para una prueba de susceptibilidad, se utiliza estndar de turbidez de BaSO4, equivalente a un estndar 0.5 McFarland o su equivalente ptico. Un estndar de 0.5 McFarland de BaSO4 se prepara como sigue: 0,5 ml de 0,048 m/L de BaCl2 se agrega a 99,5 ml de H2SO4 de 0,18 mol/L ( agitacin constante para mantener la suspensin.

Se inocula la superficie de una placa de agar Mueller -Hinton por rayado con la trula sobre toda la superficie. Este procedimiento es repetido rayando dos o ms veces, rotando la placa aproximadamente 60 C cada vez para asegurar

Los dimetros de la zona de inhibicin completa (a ojo desnudo son medidos en mm. pasando por el centro del disco. Las zonas de inhibicin resultantes deben ser uniformemente circulares en una capa homognea de crecimiento.

Si aparecen colonias individuales, el inculo estaba muy diludo y la prueba debe ser repetida.

La categora "sensible" implica que una infeccin debido a una cepa puede ser apropiadamente tratada con la dosis de agente antimicrobiano recomendado para ese tipo de infeccin y especie infectante.

La categora "Intermedio" incluye aislamientos con agentes antimicrobianos con un CIM que se aproximan usualmente a nivel de tejido y sangre disponible y para los cuales su velocidad de respuesta puede ser ms lenta que la de los aislamientos susceptibles. La categora "Intermedia" implica eficacia clnica en sitios del cuerpo donde la droga es fisiolgicamente concentrada (por ej. quinolonas y -lactmicos en orina)

Las cepas resistentes no son inhibidas por la concentracin sistmica usualmente alcanzable de un agente cuando los esquemas de dosificacin normal son usados. Pueden tener CIM que caen dentro del rango donde estn disponibles mecanismos de resistencia especficos (por ej. -lactmicos) y la eficacia clnica no ha sido confiable en tratamientos estudiados.

El margen de las zonas debe ser tomado como el rea donde no se observa crecimiento visible. Los tamaos de las zonas de inhibicin son interpretados en las Tablas CLSI para ser informado como susceptible, intermedio, o resistente a los antimicrobianos que se han probado. Estas tablas peridicamente. deben ser actualizadas