UNIVERSIDAD DE SUCRE

Enterobacterias
Viviana Mercado 1, Adriana Peates
1

1. Estudiante de IV semestre de Medicina de la Universidad de Sucre. Microbiologa

Facultad de Medicina Universidad de Sucre Sincelejo, Sucre. Colombia

MARCO TERICO Enterobacteriaceae es una compleja familia compuesta por bacilos Gram negativos, catalasa positiva, oxidasa negativa, que fermentan la glucosa en su metabolismo. Diversos son los gneros que conforman esta familia, pero los principales patgenos o potencialmente patgenos para el hombre se circunscriben a 25 especies como las ms frecuentes. Son anaerobios facultativos, que crecen en medios simples, no forman esporas y son capaces de reducir los nitratos a nitritos. La mayora de las especies son oportunistas, pero algunas son alta y especficamente patgenas y causan enfermedad entrica, urinaria o sistmica. Las enterobacterias pueden vivir libres en la naturaleza y

habitualmente forman parte de la flora intestinal en el hombre en escaso porcentaje (cerca del 98% de la flora intestinal son anaerobios). Tambin pueden encontrarse transitoriamente en la piel (especialmente perianal), el tracto genital femenino y muy ocasionalmente el tracto respiratorio superior de los individuos sanos. Las Enterobacterias aparecen en una mayor proporcin en individuos hospitalizados, especialmente en aquellos que sufren enfermedades graves y debilitantes. Estructura antignica Los mecanismos con los que cuentan las Enterobacterias para producir enfermedad son variados, pudiendo estar presentes la invasin, la toxigenicidad por toxinas termoestables o

termolbiles, las citotoxinas, las endotoxinas, la adhesin y la diseminacin hemtica. Se distinguen tres tipos de antgenos: AgO antgeno somtico constituido por el lipopolisacrido (LPS) de la membrana externa, H antgeno flagelar y K antgeno capsular. Clasificacin Enterobacterias oportunistas: Se encuentran formando parte de la flora normal del intestino del hombre, aunque la mayor parte de la flora gastrointestinal est compuesta por bacterias anaerobias. Estas enterobacterias producen patologa cuando en el husped aparecen factores predisponentes locales (heridas, quemaduras, sondajes, catteres, etc), generales (disminucin de las defensas inespecficas o de la respuesta inmune) o enfermedades de base como la diabetes, hemopatas, etc. Pacientes hospitalizados o inmunocomprometidos, especialmente aquellos que reciben terapia antimicrobiana, pueden ser colonizados por Enterobacterias. La accin patgena que producen puede ser muy variada: la ms frecuente es la infeccin urinaria, seguida de infecciones de heridas quirrgicas y traumticas, infecciones respiratorias y sepsis. Dado que forman parte de la flora normal del intestino, tambin pueden participar

como agentes etiolgicos en peritonitis, abscesos abdominales o colangitis. Con menos frecuencia pueden producir otras infecciones como otitis, sinusitis o meningitis (sta ltima, especialmente en ancianos y neonatos). Los Gneros ms importantes son: Klebsiella: Las bacterias pertenecientes al gnero Klebsiella poseen una cpsula prominente que confiere el aspecto mucoide a las colonias aisladas y la mayor virulencia de los microorganismos in vivo. Se han detectado Klebsiella spp. en pacientes de hospitales, estando la transmisin asociada con la manipulacin frecuente de los pacientes (por ejemplo, en las unidades de cuidados intensivos). Quienes se exponen a un riesgo mayor son las personas con sistemas inmunitarios poco activos, como las personas ancianas o muy jvenes, los pacientes con quemaduras o heridas extensas, los que estn siendo sometidos a tratamientos inmunodepresores o los infectados por el VIH. La colonizacin puede dar lugar a infecciones invasivas. En raras ocasiones, Klebsiella spp. y, en particular, K. pneumoniae y K. oxytoca, pueden causar infecciones graves, como neumona destructiva.

Figura 1. Klebsiella pneumoniae Tomado de: http:// www. sciencephoto. com/media/ 12281/ view

Figura 2. Serratia marcescens Tomado de: http://www.sciencephoto.com/media/12281 /view

Serratia: anaerobio facultativo, La especie ms comn en el gnero, la Serratia marcescens, es normalmente el nico patgeno y usualmente causa infeccin nosocomial. Sin embargo, raramente cepas de Serratia plymuthica, Serratia liquefaciens, Serratia rubidaea, y Serratia odoriferae han causa enfermedad por medio de infeccin. Los miembros de este gnero producen un pigmento rojo caracterstico, la prodigiosina, y puede ser distinguidas de los otros miembros de la familia Enterobacteriaceae por su nica produccin de tres enzimas:DNasa, lipasa, y gelatinasa.

Proteus: Hay tres especies que causan infecciones oportunistas en el hombre: P. vulgaris, P. mirabilis, y P. penneri. Causan infecciones urinarias(ms del 10% de complicaciones del tracto urinario incluyendo clculos y lesiones celulares del epitelio renal), enteritis (especia lmente en nios), abscesos hepticos, meningitis, otitis media y neumona con o sin empiema, entre otros. Es un frecuente invasor secundario de quemaduras y heridas, as como infecciones nosocomiales.

Figura3. Proteus mirabilis. Tomado de: http://www.sciencephoto.com/media/12281 /view

Enterobacterias patgenas: Dentro de los gneros patgenos de Enterobacterias encontramos en primer lugar a la Escherichia, tambin encontramos la Salmonella, Shigella, Yersinia. Escherichia: Si bien el gnero Escherichia agrupa a cinco especies: E. blattae, E. fergusonnii, E. hermannii, E. vulneris y E. coli, esta ltima es la de mayor importancia para el humano, debido no slo a que forma parte de la flora habitual del intestino sino porque, adems, agrupa a diversas cepas que causan padecimientos extraintestinales y a otras que destacan entre los principales agentes etiolgicos del sndrome diarreico. E. coli es causa frecuente de infecciones oportunista sin embargo algunas cepas poseen capacidad patgena primaria, pudiendo causar infecciones en personas previamente sanas. La E. coli puede causar infecciones intestinales y extraintestinales, generalmente graves, tales como infecciones del aparato excretor, cistitis, meningitis, peritonitis, mastitis, septicemia y neumona gram negativa. Las Infecciones urinarias por E. coli con capacidad patgena primaria, estn causadas en su mayor parte por cepas de determinados serotipos llamados uropatgenos. Otras evidencias sugieren que slo se produce infeccin urinaria cuando existen factores predisponentes, aunque stos pasen desapercibidos. Las

manifestaciones clnicas de la cistitis son polaquiuria, disuria y febrcula. En la pielonefritis aparece fiebre alta, dolor lumbar y afectacin del estado general. Las infecciones intestinales causadas por este microorganismo pueden ser debidas a variedades distintas de esta bacteria, con mecanismos de accin diferentes: E. coli enterotoxignico: Producen toxinas secretoras y el inculo de microorganismos debe ser lo suficientemente alto como para resistir el pH cido del estmago. Clnicamente aparece diarrea lquida, sin moco ni sangre. No son autctonas en nuestro pas, pero es la causa principal de diarrea del viajero E. coli enteropatgeno: determinados serotipos, producen diarreas con heces lquidas con moco sin sangre en lactantes y nios pequeos. E. coli enteroinvasivo: acta invadiendo las clulas del epitelio intestinal. Causa diarrea aguda similar a la producida por el gnero Shigella, produciendo lesiones ulceradas en el colon. Tampoco son autctonas. E. coli enterohemorrgico: produce toxinas citotxicas (verotoxina). El cuadrose caracteriza por dolor abdominal intenso y diarrea con sangre. El serotipo ms habitual es O157:H7. Se han descrito brotes por consumo de hamburguesas poco cocinadas.

Identificacin de Enterobacterias Las pruebas bioqumicas se basan en la determinacin de la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material gentico del cromosoma bacteriano. Estas enzimas (catalasas, coagulasas, decarboxilasas, deaminasas, ureasas, peroxidasas, etc) involucradas en el metabolismo bacteriano, pueden ser evidenciadas en medios de cultivo especiales que contienen los substratos (DNA, hidratos de carbono, aminocidos, etc) sobre los cuales ellas actan, junto con un sistema indicador que va a poner de manifiesto la degradacin del substrato o la presencia de un metabolito especfico (cido frmico, cido lctico, cido succnico, indol, etc). Las pruebas bioqumicas tambin evalan: la capacidad de reducir ciertos iones (ferroso a frrico), la presencia o ausencia de flagelos (prueba de movilidad), la produccin o no de hemolisinas, el requerimiento o no de algunos factores especiales (protenas sricas), la produccin o no de algunas toxinas con capacidad virulenta (toxina diftrica, toxina botulnica, etc) Entre las pruebas bioqumicas que se realizan encontramos: Prueba TSI: Medio diferencial complejo (de color rojo) compuesto por 3 azcares: 10% lactosa, 10% sucrosa y 1% dextrosa y un ligador que es en este caso el hierro. La siembra se

realiza tanto en la superficie del Agar (aerobiosis) como en la profundidad de ste (anaerobiosis). Medio K (alcalino) de color rojo. Medio A (cido) de color amarillo. K/A: Si la bacteria metaboliza slo la glucosa: en la superficie la utilizar por va respiratoria, y donde la tensin de oxgeno disminuya lo suficiente, emplear una pequea proporcin por va fermentativa. Esto generar una pequea cantidad de cidos que sern neutralizados por las aminas derivadas de la decarboxilacin oxidativa de las protenas. Como resultado, el medio mantendr su color rojo en la superficie, al no haber cambiado de pH. Por el contrario, las bacterias crecidas en la profundidad emplearn desde el primer momento la glucosa por va fermentativa, generando cidos que no sern neutralizados, provocndose un descenso del pH y el color del medio en el fondo del tubo cambiar a amarillo. A/A: Si la bacteria, adems fermenta lactosa: los cidos producidos modificarn tambin el pH de la superficie del medio. Las aminas no son capaces de neutralizar la cantidad de cidos producidos en esta fermentacin, ya que la lactosa se encuentra en el medio a mayor concentracin que la glucosa. El color del medio en la superficie cambiar a amarillo.

K/K: Si la bacteria es aerobia estricta (no fermentadora), el medio permanece de color rojo. Los azcares son respirados, degradndose completamente hasta CO2, que se elimina y no modifica el pH. A/A(g): Aparicin de burbujas, rotura o elevacin del agar del fondo del tubo. K/A(H2S): Aparicin de un precipitado de color negro en el fondo del tubo. Algunas bacterias respiradoras anoxobinticas son capaces de emplear el tiosulfato sdio como aceptor final de electrones en la cadena transportadora. Este compuesto se reduce a cido sulhdrico que reacciona con el hierro Fe2+ presente en el medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro.

Tabla1. Reacciones de Enterobacterias en TSI tomado de http://www.medicina.unal.edu.co

Figura 4. Prueba TSI, Tomado de: www. esacademic.com

Agar citrato de Simmons: se determina la capacidad de un microorganismo de emplear el citrato como nica fuente de carbono en ausencia de fermentacin de azcares o de produccin de cido lctico. Los resultados pueden ser Positivos cuando se da crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad o Negativo cuando el medio

permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

Figura 5. Prueba de citrato, tomado de http://www.telmeds.org

con frecuencia triptofanasa. Los resultados positivos se muestran por la presencia de un color rojo o rojo-violeta en la superficie de la capa de alcohol en el cultivo. Un resultado negativo se muestra amarillo. Un resultado variable puede ocurrir cuando se muestra un color anaranjado. Ello es debido a la presencia de escatol, tambin conocido como metil-indol o Indol metilado, otro posible producto de la degradacin del triptfano.

Agar SIM: se determina la capacidad e un microorganismo de moverse (presencia e flagelos), de producir INDOL y H2S.

Figura 6. Prueba Indol, http://users.stlcc.edu

Tomado

de

Figura 6. Lectura de medio agar SIM, tomado de: http://www.medicina.unal.edu.co

Indol: es una prueba bioqumica realizada en especies bacterianas para determinar la habilidad del organismo de romper el Indol del aminocido triptfano. Esta divisin molecular es lograda por una serie de enzimas intracelulares diferentes, un sistema que en conjunto se le llama

Agar urea: se determina la capacidad de un microorganismo de producir UREASA y desdoblar la urea, formando 2 molculas de amoniaco. La lectura se efecta despus de 18 a 24 horas de incubacin a 37C. El sustrato urea es una diamina del cido carbnico, denominada carbamida. Todas las amidas (RCO- NH2) son rpidamente hidrolizadas. La hidrlisis de la urea es catalizada por una enzima especfica que es la ureasa es una enzima microbiana importante, relacionada con la descomposicin de los

compuestos orgnicos. Las enzimas bacterianas se clasifican en adaptativas o constitutivas. Una enzima adaptativa o inducida es aquella que es producida por una bacteria solamente cuando se encuentra presente su sustrato especfico. La ureasa es una enzima constitutiva ya que la sintetizan ciertas bacterias sin tener en cuenta si hay o no el sustrato urea. El indicador de PH es rojo de fenol, el cual en alcalinidad vira a un color violeta indicando una prueba POSITIVA. Si el color es amarillo indica una prueba NEGATIVA.

Determinar la produccin de la enzima ureasa por algunos gneros bacterianos Determinar la produccin de sulfuro de hidrogeno, Indol y otras sustancias en medios diferenciales Determinar la motilidad de algunos grmenes en medios semislidos preparados para este fin Conocer la forma de utilizar las tablas de clasificacin de las bacterias de acuerdo a sus reacciones bioqumicas MATERIALES Cajas de petri con cultivo puro de bacilos gram negativos de diferentes generos y especies Cajas con medios selectivos como Agar EMB, Agar macConkey y Agar sangre Tubos de Agar TSI, Agar citrato de Simmons, Agar urea y medio de SIM Reactivo de Kovacs Asa bacteriolgica Mechero

Figura 7. Lectura en agar urea, tomado de http://users.stlcc.edu

PROPOSITOS Determinar las propiedades fermentativas de las Enterobacterias en medios diferenciales que contienen diferentes azucares, con la ayuda de un indicador de pH Determinar la habilidad o inhabilidad de una especie para hidrolizar una fuente de carbono agregada al medio de cultivo, como el citrato

ESQUEMAS DE PROCEDIMIENTO A partir de un cultivo puro se toma una muestra para realizar las respectivas siembras en las cajas de petri con los tres medios de cultivo (Agar sangre; A. EMB y A. MacConkey). Se utiliza tcnica de siembra por agotamiento

Una vez realizadas las siembras en medios de cultivos, se procede tomar otra colonia con el asa recta y realizar una siembra en profundidad y superficie en TSI, Citrato de Simmons, Agar Urea y medio SIM

Se marcan todas las cajas y los tubos y se incuban a 37 C durante 18-24 horas, en nuestro caso hasta la prctica siguiente Luego de la incubacin se observan el crecimiento de colonias en las cajas de petri con los respectivos medios diferenciales. Se observan las reacciones y los cambios presentados en los tubos y sus acuerdo a lamedios (SIM; TSI, De respectivos batera de pruebas Citrato de Simmons y agar Urea) bioqumicas realizadas, se intenta determinar el tipo de bacteria que se obtuvo en la prctica. RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS De un cultivo puro bacteriano se tomaron unas pequeas muestras para sembrar en los diferentes medios de cultivo en caja de petri (Agar sangre, Mc Conkey, EMB); y tambin para sembrar en los medios Agar citrato de Simmons, TSI y caldo urea, y SIM utiles para la dentificacin de bateras por pruebas bioqumicas Medios de cultivo 1) En el cultivo bacteriano #1 Agar Mc Conkey observamos lo siguiente:

Figura 8. Cultivo de Enterobacterias en Agar mac Conkey. Se observa la mucosidad y el color borgoa de las colonias.

Descripcin y anlisis de la colonia y medio de cultivo El agar McConkey es un medio que se utiliza para el aislamiento de bacilos gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no lactosa. Todas las familias Enterobacteriaceae se desarrollan en el. El agar MacConkey contiene cristal violeta y sales biliares como inhibidores de organismos Gram positivos y nos permite identificar si la bacteria utiliza o no lactosa, en caso de que asi sea, las colonias toman un color rojo- rosado y pueden estar o no rodeadas de una zona de precipitado de sales biliares el cual es debido a una cada en el pH por la fermentacin de la lactosa. Las colonias que no fermentan la lactosa (como las de S. typhi, S. paratyphi y S. disentery) permanecen incoloras y las que

poseen capsula muestran colonias mucoides, que es el caso nuestro, la colonia se observa de aspecto mucoide.
2) En el cultivo bacteriano #2

en Agar EMB

colonias mucosas, rosa prpura, confluentes; Proteus mirabilis forma colonias incoloras al igual que la Shigella y la Salmonella. Nuestra colonia es mucosa y no hay brillo metlico, podemos descartar por lo menos en este medio la presencia de E. coli. 3) Cultivo #3 en agar sangre

Figura 9. A) Caja de petri con cultivo de enterobacterias en agar EMB

Descripcin y anlisis de la colonia y medio de cultivo Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. La diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo y est dada por los indicadores eosina y azul de metileno. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp presentan un caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras; por ejemplo la Klebsiella pneumoniae forma

Figura 10. A) Caja de petri con cultivo de enterobacterias en agar sangre

Descripcin y anlisis de la colonia y medio de cultivo El Agar sangre es un medio de cultivo para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos. Con la adicin de sangre al cultivo, el medio es til tanto para microorganismos aerobios como anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observacin de reacciones de hemolisis. En la imagen se ven las colonias las cuales son de color grisceo, puntiformes y elevadas.

Medios de cultivo para anlisis bioqumico Agar TSI

En el medio de cultivo el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano y la glucosa, la lactosa y sacarosa son los carbohidratos fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico; el sulfato de hierro y amonio, son la fuente de Fe3+, los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. En este tubo el medio viro a color amarillo, esto se debe a la fermentacin de azcares que producen cidos, los cuales se detectan por medio indicador rojo de fenol, el cual cambia de color tornndose amarillo en medio cido; no se observo precipitado de color negro en el fondo. De acuerdo con lo anterior se obtuvieron los siguientes resultados: Fondo A Superior o H2S tendido A negativo

Figura 11. A) Tubos con agar TSI A) Medio TSI preparado sin inoculo bacteriano B) Medio TSI con inoculo bacteriano despus de una previa incubacin se logra apreciar el cambio de color por el uso de nutrimentos de la bacteria (A/A).

Descripcin y anlisis del medio de cultivo El agar TSI es universalmente utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, con base en la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y con la produccin de cido sulfhdrico. Este medio de cultivo est compuesto por: Extracto de carne 3.0 grs/Lt, Pluripeptona 20.0 grs/Lt, Cloruro de sodio 5.0 grs/Lt, Lactosa 10.0 grs/Lt, Sacarosa 10.0 grs/Lt, Glucosa 1.0 grs/Lt, Sulfato de hierro 0.2 grs/Lt, Tiosulfato de sodio 0.2 grs/Lt, Rojo de fenol 0.025 grs/Lt, agar 13.0 grs/Lt.

Agar citrato de Simmons

el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que cambia al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial con base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.
Figura 12. A) Tubo con agar citrato de Simmons. Se observa el mismo color verde caracterstico del medio aun despus de la inoculacin de la enterobacteria y su incubacin, esto nos indica una prueba de citrato negativa.

Descripcin y anlisis del medio de cultivo Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, con base en la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa. Este medio diferencial est compuesto por: Citrato de sodio 2.0 gr/Lt, Cloruro de sodio 5.0 gr/Lt, Fosfato dipotsico 1.0 gr/Lt, Fosfato monoamnico 1.0 gr/Lt, Sulfato de magnesio 0.2 gr/Lt, Azul de bromotimol 0.08 gr/Lt, Agar 15.0 gr/Lt. En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para

El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos, por ende, el medio entonces cambia al color azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa. Con base en lo anterior podemos deducir que la enterobacteria inoculada en el medio de agar citrato no utiliza este como fuente de energa, por lo cual no hay desarrollo bacteriano en el medio y No vira el color verde; en pocas palabras la bacteria es citrato negativo.

Medio SIM

negativa la prueba de Indol porque no se mostr la presencia de color rojo o rojo-violeta en la superficie de la capa de alcohol en el cultivo, sino de color amarillo. En resumen, Movilidad negativa Indol negativo H2S negativo

Figura 13. Tubo con Medio SIM y Prueba de Indol (Flecha). Se observa que NO hubo movilidad y el resultado de la prueba de Indol Negativa (se observa color amarillo en flecha).

Caldo Urea

Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrogeno en el mismo tubo. Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. Este medio est compuesto por : Triptena 20.0 grs/Lt, Peptona 6.1 grs/Lt, sulfato de hierro y amonio 0.2 grs/Lt, Tiosulfato de sodio 0.2 grs/Lt, agar 3.5 grs/Lt.. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de la siembra. Los resultados no mostraron turbidez alrededor de la siembra, por tanto la movilidad fue negativa; no se produjo precipitado de color negro en el tubo por tanto podemos decir que la produccin de sulfuros es negativa, al igual que es

Figura 14. Tubo con caldo urea. Se observa que no hubo variacin de color, Prueba negativa.

Descripcin y anlisis del medio de cultivo Medio utilizado para la identificacin de microorganismos, con base en la actividad uresica. Est compuesto por: Urea 20.0 grs/Lt, Fosfato monopotsico 9.1 grs/Lt, Fosfato disdico 9.5 grs/Lt, Extracto de levadura 0.1 grs/Lt, Rojo fenol 0.01 grs/Lt.

Este medio presenta bajo contenido de nutrientes y alta capacidad de buffer. El extracto de levadura es la nica fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas o cofactores, y aporta los nutrientes esenciales para el crecimiento bacteriano. Las sales de fosfato constituyen el sistema buffer, el rojo de fenol es el indicador pH y la urea es el sustrato de la enzima ureasa. Aquellas bacterias que poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el nitrgeno proveniente de la urea, la hidrolizan, liberando amoniaco y dixido de carbono. Estos productos metablicos alcalizan el medio, haciendo que el rojo de fenol cambie del color amarillo al rojo. Finalmente, se resumen resultados obtenidos en siguiente tabla: TSI Gl + lac + C.D.S U SIM M I H2S los la

plantean los posibles microorganismos que se pueden ubicar de acuerdo a los cultivos y la batera de pruebas bioqumicas realizadas y son Principalmente Klebsiella y/o Enterobacter, y llegamos a dicha conclusin por varias razones: El medio Agar MacConkey, nos muestra colonias mucoides, lo cual es caracterstico de bacterias que poseen capsula; de las Enterobacterias, las especies que poseen capsula son precisamente Klebsiella y Enterobacter. Tanto Klebsiella como Enterobacter son glucosa y lactosa positivos, por ello se vio en TSI el resultado A/A. As mismo, ambas bacterias son H2S negativo, que fueron los resultados que se obtuvieron Klebsiella es Indol negativo y no tiene movilidad, tal cual como se vio en nuestros resultados. El Enterobacter puede ser indol (-) en la mayora de los casos o indol (+) en el caso de la E. agglomeras. Sin embargo, hubieron pruebas que no concordaron, por ejemplo Klebsiella pneumoniae y Enterobacter, dan positivo en Citrato de Simmons porque ambas utilizan citrato y dan positividad retardada en caldo urea pero esto no se vio reflejado en los resultados (ver causas de error). As mismo el Enterobacter tiene movilidad positiva y no se vio en la prueba realizada.

Gl: glucosa Lac: lactosa C.D.S= citrato de Simmons M: movilidad I: Indol A pesar de no tener un microorganismo que concuerde con todas las pruebas realizadas, se

CAUSAS DE ERROR El tiempo ideal para poder obtener los resultados confiables por lo general es una incubacin de 24 horas, en nuestro caso fueron ms de 48 horas, lo cual pudo alterar los resultados. No usar el mismo tipo de cultivo puro para hacer las pruebas. No realizar el procedimiento de siembra adecuadamente, romper los medios o medios en mal estado.

REFENCIAS BIBLIOGRAFCAS
Micromadrid.

CONCLUSIN Con frecuencia la identidad de una especie bacteriana requiere que se conozca de manera detallada su actividad bioqumica para poder ser identificada, porque otras caractersticas diferenciales no son lo suficientemente distintivas para lograr dicho objetivo. Para ello se utilizan los medios TSI, SIM, Citrato de Simmons entre otros, los cuales permiten clasificar e identificar las bacterias de acuerdo a su actividad metablica.

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