Laboratorio de Microbiologa Ingeniera Ambiental y Sanitaria

LABORATORIO N 3 TINCIN DE HONGOS INTRODUCCIN Los hongos son organismos eucariticos, no fototrfos, de paredes celulares rgidas carecen de clorofila y no pueden fotosintetizar. Su tamao es mayor que el de las bacterias y su nutricin es hetertrofa. Los hongos pueden ser unicelulares como las levaduras o multicelulares como los hongos filamentosos, sin embargo en la naturaleza se pueden encontrar hongos dimorficos que dependiendo de las condiciones ambientales pueden alternar entre una forma y otra. Las levaduras son hongos unicelulares que se caracterizan por su forma esfrica. Presentan un crecimiento y desarrollo ms rpido que el de hongos filamentosos y su crecimiento macroscpico es similar al de las bacterias. Su pared celular puede estar conformada principalmente por manano. Las levaduras se reproducen asexualmente por el proceso de gemacin, proceso donde se origina una protuberancia o yema de la clula madre que posteriormente se separa como clula individual. Los hongos filamentosos tambin conocidos como mohos estn compuestos tpicamente por masas de filamentos llamadas hifas, que en conjunto forman el micelio. Las hifas pueden presentar diferentes caractersticas en funcin de su forma y funcin. Se pueden presentar hifas ramificadas, septadas o cenocticas (sin septos). Los hongos forman esporas asexuales que se pueden formar en los esporangios, y sexuales que se inicia por la fusin de hifas de diferentes cepas de apareamiento, aunque no todos los hongos forman los dos tipos de esporas. OBJETIVO Identificar las estructuras macroscopicas y microscpicas de los hongos filamentosos y las levaduras. MATERIALES Medios de cultivos de PDA Inoculados con Penicillum sp, Trichoderma sp, Aspergillus sp, Mucor sp, Rhizopus sp Medio de cultivo inoculado con Saccharomyces, Candida u otra Levadura. Azul de lactofenol 50 mL. Cristal violeta Laminas Laminillas Agujas de diseccin (para hongos) Asa redonda Cinta pegante transparente Tijeras Mechero Microscopio

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METODOLOGA Observacin de levaduras A partir del cultivo de levaduras prepare un frotis y fjelo con calor. Posteriormente realice un tincin simple con azul de metileno o cristal violeta Observar al microscopio con el objetivo de 40 X y 100X Describa las caractersticas macroscpicas y microscpicas del cultivo. Finalizada la observacin deposite la lmina en el recipiente para descarte de lminas.

Observacin de Hongos filamentosos Tome una lmina limpia y adicione una azul de lactofenol Al lado del mechero abra la caja y con ayuda del asa tome una muestra del micelio del hongo. Con ayuda de otra asa extienda el micelio sobre la lmina con azul de lactofenol. Realiza este proceso suavemente para evitar el rompimiento de las hifas. Coloque la cubreobjeto o laminilla encima del frotis. Evite la formacin de burbujas en la preparacin. Observe en el microscopio empleando el aumento de 4 X, 10X y 40X Describa macroscpica y microscpicamente el cultivo. Finalizada la observacin deposite la lmina en el recipiente para descarte de lminas.

Tcnica de impronta para hongos filamentosos En una lmina coloque una gota de azul de lactofenol Posteriormente corte un fragmento de cinta de 4 a 5 cm de largo. Tome la cinta por los extremos y evite tocar la parte interior de la cinta. Abra la caja de petri al lado del mechero y coloque la cinta sobre una colonia del hongo a observar. Haga presin suavemente sobre el micelio del hongo para tomar la muestra. Transfiera el fragmento de cinta hasta la lmina con azul de lactofenol. Suavemente adhiera la cinta a la lmina y presione para eliminar burbujas que hayan quedado al interior. Retire los excedentes de azul de lactofenol de la lmina observe al microscopio con el objetivo de 4 X, 10X y 40X Describa macroscpica y microscpicamente el cultivo. Finalizada la observacin deposite la lmina en el recipiente para descarte de lminas.

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Figura. Estructuras microscpicas de los hongos. Tomado de Aquahiatl y Perez, 2004.Manual de prcticas. Laboratorio de Microbiologa General.

RESULTADOS Y DISCUSIN 1. Dibuje y describa lo observado en el laboratorio tanto macro como microscpicamente con sus estructuras.

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Hongo 1 Descripcin macroscpica Medio de cultivo: Color Anverso: Color Reverso: Tamao (dimetro): Aspecto: Descripcin microscpica

Hongo 2

Hongo 3

Tcnica de tincin Hifas con o sin septos: Hifas hialinas o dematiaceas: Estructuras de reproduccin: Posible hongo:

CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. Mencione una diferencia entre las esporas de los hongos y las de las bacterias. Qu es la quitina? y Cul es su funcin? De un ejemplo de un hongo filamentoso y una levadura, mencione su utilidad. Mencione cuales son los principios para la clasificacin de los hongos.