Seminario 3

Biopelculas microbianas

Mario Daz Muoz Rebecca Garca Trenchard Pablo Hernndez Ortego 14/12/2011 Grupo B1

ndice
1. Introduccin...3 2. Definicin....3 3. Etapas de formacin..4 4. Composicin y estructura.4-5 5. Quorum sensing.5-6
6. Interacciones microbianas en biopelculas mixtas...6 7. Control de biopelculas.7-8

7.1. Resistencia a antibiticos..7-8 7.2. Tratamientos de eliminacin de biopelculas.8-9

8. Importancia de las biopelculas....9-11

8.1. Importancia en la industria del agua....9 8.2. Importancia clnica....9-10 8.3. Importancia ecolgica....10-11
9. Conclusin...11 10. Bibliografa...12

1. Introduccin Durante gran parte de la historia de la microbiologa, los microorganismos se han caracterizado como planctnicos, es decir, organismos que viven libremente. Leeuwnhoek en 1684 describi el sarro de los dientes como bacterias que se adheran y crecan sobre superficies. A esta organizacin posteriormente se le denomin biopelcula microbiana. Tradicionalmente se ha pensado en las bacterias como organismos unicelulares, y pocas eran las excepciones como las mixobacterias, que mostraban formas de vida multicelulares. No obstante, investigaciones de las dos ltimas dcadas indican que las bacterias que viven como organismos multicelulares son la regla general, y no una excepcin. Se cree que el 99% de los microorganismos se encuentran formando biofilms, y tan solo un 1% se encuentran en estado planctnico. Sin embargo, los estudios cientficos se centran an, de forma mayoritaria en las formas planctnicas, lo cual podra ser un grave error debido a que los microorganismos se comportan de forma muy distinta en las biopelculas. El trmino de multicelularidad aplicado a las biopelculas es un tema muy controvertido, porque es adecuado segn lo que se considera como multicelularidad. Por esta razn, vamos a referirnos a las biopelculas como comunidades microbianas, y no como organismos multicelulares.

2. Definicin Las biopelculas son comunidades microbianas inmviles caracterizadas por clulas que estn ancladas irreversiblemente a un sustrato o a otras clulas. Adems estas clulas se encuentran embebidas en una matriz de sustancias polimricas extracelulares que han producido ellas mismas, y se comunican entre s por seales. Las clulas que forman una biopelcula manifiestan un fenotipo alterado respecto al ritmo de crecimiento normal y la transcripcin de sus genes. De esta manera, las biopelculas proporcionan enormes ventajas metablicas respecto a las clulas planctnicas. Las biopelculas son el modo de crecimiento por defecto de la mayora de los microorganismos, especialmente de los patgenos. Esta forma de crecimiento favorece la obtencin de nutrientes facilitando la colonizacin y otorga una proteccin frente a los agentes antimicrobianos o al sistema inmune del hospedador. Adems, tambin se ve favorecida la cooperacin entre las cepas al tratarse de un crecimiento en comunidad.

3. Etapas de formacin La formacin de biopelculas ocurre durante una serie de etapas o fases de desarrollo contnuas. Acondicionamiento: Esto no es un paso que realicen los propios microorganismos, sino que ellos lo que buscan son superficies ya acondicionadas para asentarse. Una superficie acondicionada es aquella en la que componentes orgnicos del medio ambiente o de los tejidos forman una cubierta que neutraliza la carga excesiva de la superficie, que generalmente previene la aproximacin de microorganismos. Esto significa, que las interacciones entre las clulas y el sustrato estn gobernadas parcialmente por interacciones electrostticas. Adhesin: Los microorganismos planctnicos interaccionan con la superficie. Si las condiciones no son ptimas para la formacin del biofilm, pueden liberarse porque esa primera adhesin es reversible. Si por el contrario, las condiciones son adecuadas, se produce la adhesin irreversible y los microorganismos en suspensin se agregan y dividen formando microcolonias. Este proceso es favorecido por varios componentes bacterianos como los pili y flagelos, y polmeros superficiales como el lipopolisacrido en bacterias gram negativas y el cido miclico en las gram positivas, que participan en este proceso venciendo las fuerzas de repulsin. Los flagelos, dependiendo de la especie microbiana, pueden ser o no imprescindibles para la formacin de las biopelculas. Sin embargo, las especies que poseen cilios o flagelos, durante el paso entre adhesin reversible a irreversible, pierden sus apndices de motilidad para volverse ssiles. Sntesis de la matriz extracelular: El proceso de quorum sensing trae como consecuencia la autoinduccin en la sntesis de la matriz extracelular o exopolisacrido y se logra as la maduracin de la biopelcula. Comienza la formacin tridimensional y se generan canales de agua que permiten la circulacin de nutrientes y otras sustancias. Dispersin: Esta fase consiste en la dispersin por clulas aisladas o en conglomerados que colonizan nuevas superficies y se inicia un nuevo ciclo de formacin de biopelculas. Las clulas que se desprenden son distintas de las que se encuentran ancladas irreversiblemente. Las adheridas tienen las caractersticas propias de las biopelculas, mientras que las clulas aisladas tienen el fenotipo planctnico.

4. Composicin y estructura La composicin de las biopelculas microbianas es variable, aunque lo podemos describir de una forma general. El componente mayoritario es el agua, ya puede llegar a constituir el 97% del contenido total. Adems del agua y de las clulas, como ya

hemos mencionado, hay una matriz exopolisacrida formada por las propias bacterias. La composicin del exopolisacrido es diferente en cada microorganismo, por ejemplo, en Vibrio cholerae es rico en glucosa y galactosa, mientras que en Salmonella typhimurium, consta de celulosa. En menor cantidad se pueden encontrar macromolculas como protenas y DNA, adems de productos procedentes de la lisis bacteriana. Las biopelculas no son una estructura maciza, sino que su arquitectura presenta canales que permiten el flujo de aguas, nutrientes y oxgeno hasta las zonas ms profundas. Esto no significa que dentro de la biopelcula el ambiente ser homogneo, sino que se pueden encontrar zonas con ambientes distintos, con distintas concentraciones de nutrientes u oxgeno y distintos valores de pH. La forma externa de las biopelculas es tambin variable. En el caso de Pseudomonas spp. se han descrito formas de seta y formas de alfombra. La forma que toma una biopelcula es dependiente de numerosos factores como factores genticos, hidrodinmica del medio en que se forman, tipos de microorganismos que lo constituyen y los nutrientes disponibles.

5.

Quorum sensing

Numerosos anlisis genticos de la formacin de biopelculas microbianas han hecho llegar a la teora de que las seales extracelulares y los sistemas reguladores de qurum sensing son esenciales para la formacin de las biopelculas. Muchas especies bacterianas habitan en las biopelculas, en las cuales se comunican y responden a la densidad de poblacin mediante un proceso denominado qurum sensing. El sistema de quorum sensing es un mecanismo dependiente de la acumulacin en el medio ambiente de una molcula seal autoinductora que difunde libremente entre las clulas e incluso a travs de sus membranas, y que permite a la bacteria sentir la densidad de poblacin existente. Las bacterias que emplean este tipo de comunicacin interbacteriana producen y segregan esta sustancia qumica de sealizacin llamada inductor. A medida que el inductor difunde en el medio circundante, otras clulas se desplazan hacia la fuente y comienzan a producir inductor. La concentracin del inductor aumenta de forma directamente proporcional con la densidad de poblacin celular, y adems, atrae a ms clulas a la regin. De este modo, a travs de un mecanismo de retroalimentacin positivo autoinducido, una poblacin de clulas puede alterar la expresin gnica para inducir rpidamente los fenotipos apropiados que sean necesarios para responder a unas condiciones ambientales o para el proceso de diferenciacin de la poblacin. Las molculas principales empleadas en el qurum sensing son, en el caso de las bacterias Gram negativas las acil-homoserina-lactonas, mientras que en gran positivos se utilizan principalmente oligopptidos modificados. Recientemente se ha encontrado un autoinductor que funciona en ambos tipos de bacterias, y se le ha denominado como AI-2 (autoinductor 2).

Algunas bacterias usan el qurum sensing para regular la secrecin del polmero formador de la biopelcula al medio extracelular. Curiosamente, algunas especies patgenas de bacterias activan la produccin del polmero en condiciones de alta densidad celular, mientras que otras especies la inactivan. La razn de que esto ocurra as reside en la naturaleza de las infecciones causadas por estas bacterias. La activacin de la produccin del polmero a altas densidades celulares permite a una de las cepas asfixiar a la otra cepa e impulsar a su propio linaje a las zonas ricas en nutrientes, cuando la competicin es muy intensa, como ocurre en infecciones crnicas. Por otro lado, la inactivacin de la secrecin del polmero puede beneficiar a la cepa haciendo que los recursos se centren en el crecimiento rpido, aunque esto solamente ocurre durante un tiempo limitado, como es el caso de las infecciones agudas. Este modelo sugiere que la variacin observada en el comportamiento ante el qurum sensing puede estar ligado a las distintas necesidades que pueden tener las bacterias en enfermedades crnicas y las bacterias en enfermedades agudas. Esto se observa claramente en el caso de Vibrio cholerae, que compite en las biopelculas con la secrecin del polmero, a continuacin cesa de secretar polmero cuando se encuentra a altas densidades celulares e induce una enfermedad aguda. La conclusin es que el qurum sensing tiene la capacidad de influir en la estructura de las biopelculas estimulando el crecimiento de microorganismos que son beneficiosas para ellas, o inhibiendo el crecimiento de microorganismos que son perjudiciales y son competidoras de las beneficiosas.

6. Interacciones microbianas en biopelculas mixtas

Las biopelculas microbianas pueden estar formadas por varios tipos de microorganismos diferentes. Al igual que en las biopelculas de un solo tipo de microorganismo, en las biopelculas mixtas los microorganismos se encuentran posicionados muy cerca unos de otros. Esto implica que muchas de las interacciones entre clulas o poblaciones celulares requieren contacto fsico. Las distancias entre distintas subpoblaciones microbianas pueden interpretarse como indicadores de comensalismo y competitividad. Por ejemplo, si dos poblaciones se encuentran muy cerca, puede ser que una o ambas poblaciones se vea beneficiado por algn tipo de interaccin de comensalismo. Sin embargo, si dos poblaciones estn separadas en la biopelcula, es probable que haya antagonismo o competitividad por algn nutriente esencial. En general, el patrn de distribucin de distintas poblaciones en biopelculas microbianas, en muchos casos proporciona pistas para entender las interacciones especficas entre ellos.

7. Control de las biopelculas 7.1. Resistencia a antibiticos

Las biopelculas microbianas presentan un fenmeno de reduccin de la susceptibilidad a los agentes antimicrobianos. Los microorganismos que se unen en biopelculas, estn protegidos contra los desinfectantes y los antibiticos. No obstante, no todas las biopelculas presentan esta caracterstica de la misma manera. Factores de resistencia Existen distintos factores que determinan el grado de resistencia de una biopelcula, como son el grosor, edad, densidad celular, dosis de agente microbiano, composicin de la biopelcula o el genotipo. Edad: Las biopelculas ms viejas y densas, son generalmente menos susceptibles que las jvenes y delgadas. Algunos estudios indican la posibilidad de que la resistencia a estos agentes se desarrolle solo en una fase determinada de la maduracin de las biopelculas, y que por lo tanto, las biopelculas ms jvenes no estn protegidas ante los agentes antimicrobianos. Densidad celular: Algunos estudios han demostrado que una biopelcula puede tener ms resistencia a una densidad celular media, que si la densidad poblacional es muy baja o extremadamente alta. Esto se puede deber a que hay dos tipos distintos de mecanismos de proteccin, uno para las clulas recin adheridas a la biopelcula, y otro para biopelculas muy densas. Eficacia del agente antimicrobiano: La dependencia de la eficacia antimicrobiana de la concentracin del agente antimicrobiano es muy compleja. Se sabe que es ms fcil controlar a las biopelculas mediante un uso corto pero a alta concentracin de un agente antimicrobiano, que mediante un uso prolongado a dosis bajas. Composicin de la biopelcula: En general, las biopelculas formadas por mezcla de especies microbianas son ms resistentes que las formadas por una nica especie. Gentica: La gentica afecta en cuanto a que hay biopelculas formadas por bacterias que presentan mutaciones que las hacen ms o menos resistentes a los agentes.

Mecanismos de resistencia Cada tipo de biopelcula puede tener mecanismos de resistencia especficos, sin embargo, tienen otros muchos mecanismos en comn. Estos son los que tratamos a continuacin:

El papel de la matriz extracelular. Se ha propuesto la posibilidad de que una matriz gruesa puede contribuir a la resistencia antimicrobiana previniendo la penetracin y difusin de algunos antibiticos o al menos retrasando su entrada. Esto puede ocurrir por ejemplo porque los exopolisacridos suelen ser aninicos, y as reaccionan con los antibiticos catinicos como los aminoglucsidos, restringiendo la permeabilidad de stos. Neutralizacin de antibiticos: Es posible que ocurran reacciones de neutralizacin que inactiven los antibiticos. Estas reacciones tendran lugar entre el agente antimicrobiano y algunos componentes de la biopelcula. Un ejemplo sera la destruccin del antibitico por enzimas como la -lactamasa en Pseudomonas aeruginosa. Crecimiento lento: Las biopelculas contienen clulas que crecen lentamente o que no crecen. Se sabe que los microorganismos que no crecen o han entrado en una fase estacionaria son menos susceptibles a algunos agentes antimicrobianos. Por ejemplo, la penicilina no ataca clulas que no estn en crecimiento y otros como las cefalosporinas atacan clulas en fase estacionaria pero son menos activas que cuando actan sobre clulas en divisin. Generacin de clulas persistentes: La persistencia es un estado en el cual los microorganismos estn protegidos de cualquier tipo de agente antimicrobiano. Este estado lo adquiere un 1% o menos de la poblacin microbiana de una biopelcula, pero es un porcentaje superior al que se encuentra en poblaciones que no se organizan en una biopelcula. Una forma de adquirir este estado es tras una exposicin prolongada a agentes antimicrobianos.

7.2.

Tratamientos de eliminacin de biopelculas

En los ltimos aos se ha avanzado en el estudio de los tratamientos de eliminacin de biopelculas. Estos procesos se han basado en evitar la viabilidad de la biopelcula de distintas formas. Algunos consisten en impedir algn paso de la formacin de la biopelcula y otros consisten en su eliminacin despus de haberse formado. Para evitar la formacin de biopelculas en dispositivos mdicos como los catteres, se pueden incorporar antibiticos que disminuyen la probabilidad de que las bacterias que penetren sean capaces de establecerse en una comunidad y proliferar. El descubrimiento de la comunicacin entre los microorganismos de una biopelcula a travs de qurum sensing ha proporcionado nuevas posibilidades para la eliminacin de las biopelculas. Se han desarrollado mltiples formas para llevar a cabo el qurum quenching o inhibicin de la comunicacin celular. Una de las formas ms utilizadas para eliminar las biopelculas es la de eliminar la matriz a travs del uso de enzimas. Este proceso se descubri al observar como los microorganismos sintetizaban enzimas para degradar su propia matriz y as poder dispersarse para comenzar un nuevo ciclo de formacin de una biopelcula. El sistema

para utilizar esta caracterstica para eliminar la biopelcula requiere muchas enzimas de degradacin del exopolisacrido como proteasas, celulasas etc. La forma ms novedosa para el tratamiento de las biopelculas consiste en aplicar la actividad de los bacterifagos. No obstante, aunque el uso de bacterifagos normales tena cierta efectividad, se ha diseado un bacterifago sinttico que secreta una enzima que ataca directamente a la matriz de la biopelcula, a la vez que infecta y provoca la lisis de las bacterias. La efectividad de este fago diseado por los investigadores es muy superior a la de cualquier otro. La enzima que secreta el fago, DspB, es una enzima que produce Actinobacillus actinomycetemcomitans. Esta hidroliza una protena imprescindible para la formacin de biopelculas de Staphylococcus y Escherichia coli. 8. Importancia de las biopelculas 8.1. Importancia en la industria del agua

Las biopelculas microbianas tienen un papel muy activo en la industria del agua, no obstante, este papel puede ser beneficioso o pueden tener un papel perjudicial. Para aprovechar el potencial de estas estructuras o evitar que sean un problema, es necesario conocer las caractersticas fundamentales de las biopelculas y su medio ambiente. La caracterstica ms importante de un sistema de biopelculas en la industria del agua es que los microorganismos de estas estructuras obtienen la energa para su crecimiento y mantenimiento mediante el consumo de sustancias que contaminan el agua. Una superficie (hierro, madera, plstico, roca etc.), cuanto ms especfica sea para la adhesin de un tipo de microorganismo, mejor servir para que las reacciones en la biopelcula afecten a las concentraciones de sustratos en el agua. Gracias a estar caractersticas, es sencillo ver cmo afectan las biopelculas en la industria del agua. Son capaces de eliminar contaminantes del agua metabolizndolos y utilizndolos como sustratos para su nutricin. Sin embargo, su presencia en caeras y tuberas puede contaminar estos sistemas de distribucin del agua provocando un problema de salud pblica. El principal problema del crecimiento de biopelculas en las tuberas se produce cuando se separan de la superficie quedando bacterias en suspensin que llegan hasta los grifos de los consumidores y provocando posteriormente infecciones. Algunas bacterias patgenas que consiguen sobrevivir en los sistemas hidrulicos son por ejemplo, Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa o Campylobacter jejuni. Otro problema derivado de la formacin de biopeliculas es la corrosin de dichas tuberas de acero. Casos severos y prolongados de corrosin pueden derivar en roturas que comprometen la distribucin del agua, y suponen un problema econmico. Por esta razn, las industrias han elaborado un sistema de agentes antimicrobianos para evitar su crecimiento en el procesamiento del agua y otros productos.

8.2.

Importancia clnica

La resistencia a los antibiticos por los microorganismos, el incremento de infecciones recurrentes e intrahospitalarias por contaminacin de dispositivos mdicos, as como la dificultad para la cicatrizacin de heridas son algunos de los problemas cotidianos que provocan las biopelculas en la prctica mdica. Los microorganismos asociados como biopelculas pueden desarrollarse en dispositivos mdicos: lentes de contacto, catteres venosos, catteres urinarios, dispositivos intrauterinos, prtesis etctera. Este hecho puede causar infecciones y enfermedades generando un elevado costo para la salud pblica. Entre las bacterias gram positivas que crecen con ms frecuencia en estos materiales, destacan Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus y Sreptococcus viridans. Entre las gram negativas destacan Pseudomonas aeruginosa, Escherichia Coli y Proteus mirabilis. Estos microorganismos provienen de la piel de los pacientes, de los responsables de su cuidado, del agua o del ambiente. Otro caso en que las biopelculas tienen una importancia clnica, es la formacin de la placa dental. Las biopelculas microbianas bucales son comunidades bacterianas conectadas a una superficie slida como el esmalte de los dientes, la superficie de la raz o los implantes dentales. La periodontitis y la caries son las enfermedades infecciosas bucales en la que los biopelculas orales juegan un papel causal. Al tratarse de un problema tan comn en el ser humano, las biopelculas bacterianas que lo provocan son muy accesibles por lo que son ampliamente estudiados como sistemas modelo para la adhesin bacteriana, el desarrollo de la biopelcula, y la resistencia a los antibiticos, debido a su amplia presencia y accesibilidad. Destacan las bacterias del gnero Streptococcus en las fisuras dentales y las del gnero Actinomyces en el surco gingival.

8.3.

Importancia ecolgica

Las biopelculas tienen una gran importancia ecolgica porque los microorganismos de las biopelculas pueden desempear funciones complejas de forma beneficiosa, perjudicial o en ocasiones cooperativa. En primer lugar, como ya se ha explicado, las biopelculas tienen un papel activo en la descontaminacin del agua, metabolizando las sustancias contaminantes y eliminndolas de esta forma del medio. Adems pueden mantener relaciones simbiticas, interaccionando directamente con organismos superiores como es el caso de los rumiantes. El aparato digestivo de los rumiantes necesita por lo menos cinco tipos de especies microbianas para descomponer la celulosa de la que se alimentan. Los microbios del aparato digestivo de estos animales estn agrupados en biopelculas. Algunas de estas bacterias son Bacteroides rumincola y Streptococcus bovis.

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La rizosfera de las plantas puede estar colonizada por gran cantidad de microorganismos patgenos, saprfitos o beneficiosos, organizados en biopelculas. Pseudomonas aeruginosa es una de las bacterias patgenas ms abundantes, no solo en seres humanos sino en plantas tambin. Las rizobacterias formadoras de biopelculas se adhieren a la superficie de la raz, sobreviven en la rizosfera, aprovechan los nutrientes excretados por la raz de la planta y proliferan formando ms microcolonias hasta colonizar completamente la raz. Adems, en ocasiones se pueden producir procesos de interaccin entre la planta y la bacteria. Por ejemplo, la bacteria Rhizobiaceae reconoce flavonoides producidos por la leguminosa, y responde con la produccin de molculas seal de lipo-oligosacridos que pueden inducir el proceso de nodulacin.

9. Conclusin Las bacterias han crecido en biopelculas desde hace billones de aos, como parte de su estrategia para colonizar gran parte de nuestro planeta. El reconocimiento de estas estructuras como la forma de vida predominante de los microorganismos ha abierto nuevos caminos de investigacin para la microbiologa. La investigacin actual de biopelculas se centra en la evaluacin de las estrategias de control, ya que nos puede aportar muchos beneficios especialmente en el mbito clnico y en el industrial. En definitiva, es posible que la clave del xito en la investigacin de los microorganismos se encuentre en una comprensin ms profunda de que son y cmo actan las biopelculas.

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10. Bibliografa

1. Donlan, R.M. 2002. Biofilms: Microbial Life on Surfaces. Emerg Infect Dis. 8 : 881-890 2. Hall-Stoodley, L. ; Costerton, J.W ; Stoodley, P. 2004. Bacterial biofilms: From the natural environment to infectious diseases. Nature, 2: 95-108 3. Kaplan, J.B. 2010. Biofilms Dispersal: Mechanisms, Clinical Implications and Potential Therapeutic Uses. J Dent Res. 89 (3): 205-218 4. Nadell, C.D. ; Xavier, J.B. ; Foster, K.R. 2009. The sociobiology of biofilms. FEMS Microbiology Reviews. 33: 206-224 5. Stephens, C. 2002. Microbiology: Breaking Down Biofilms. Current Biology. 12: R132-R134 6. Donlan, R.M. ; Costerton, J.W. 2002. Biofilms: Survival Mechanisms of Clinically Relevant Microorganisms. Clin Microbiol Rev. 15(2): 167-193 7. Lu T.K.; Collins, J.J. 2007. Dispersing biofilms with engineered enzymatic bacteriophage. PNAS. 104(27): 11197-11202 8. Parsek, R.P.; Greenberg, E.P. 2005. Sociomicrobiology: the connections between quorum sensing and biofilms. Trends in micr. 13(1): 27-33 9. Stewart, P.S.; Costerton, J.W. 2001. Antibiotic resistance of bacteria in biofilms. Lancet. 358: 135-138 10. Lasa, I.; Del Pozo, J.L.; Penads, J.R.; Leiva, J. 2005. Biofilms bacterianos e infeccin. An. Sist. Sanit. Navar. 28(2): 163-175 11. Ghanaroum, M.A.; OToole, G.A. 2004. Microbial Biofilms. ASM Press. Washington. 12. Madigan, M.T.; Martinko, J.M.; Dunlap, P.V.; Clark, D.P. 2009. Brock. Biologa de los microorganismos. 12 Edicin. Pearson-Addison Wesley. Madrid

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