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INTRODUCCION A LAS CIENCIAS BIOMEDICAS I

Modulo I: Organizacin Estructural de la Clula


Agosto 2008

chinosdemierda

Contenidos: Virus, clula procarionte y eucarionte Membranas: organizacin, propiedades, transporte y mecanismos Organelos celulares: Sistema de endomembranas, Sistema vacuolar , Mitocondrias Matriz citoplasmtica: citosol, citoesqueleto Matriz Extracelular

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Mdulo I: Clula

1. CELULA LA CELULA: Las clulas son las unidades con que se construyen los organismos vivos: La clula es la unidad estructural y funcional fundamental de los seres vivos. Si por algn motivo se destruye la organizacin celular, la funcin tambin se altera. CLASIFICACION DE LA CELULA Y ORGANISMOS: La clasificacin ms usada de los organismos es la divisin en los 5 reinos que se simplifica al clasificar las clulas en dos categoras reconocibles: procariotas y eucariotas. Desde el punto de vista evolutivo se considera que los procariotas son antecesores de los eucariotas. A continuacin se presentan las principales diferencias entre ambos tipos Procariotas Eucariotas Envoltura nuclear Ausente Presente ADN Desnudo Combinado con protenas Cromosomas nicos Mltiples Nuclolos Ausentes Presentes Divisin Fisin binaria Mitosis o meiosis Ribosomas 70s 80s Endomembranas Ausentes Presentes Mitocondrias Ausentes Presentes Cloroplastos Ausentes Presentes en vegetales Pared Celular No celulsica Celulsica en vegetales Exocitosis y Endocitosis Ausente Presente Citoesqueleto Ausente Presente

CLASIFICACION SEGN MECANISMO ENERGETICO: Existen organismos auttrofos que utilizan el proceso de fotosntesis para transformar CO2 y H2O en hidratos de carbono simples a partir de los cuales se pueden producir otras molculas ms complejas. Tambin hay otros organismos hetertrofos que obtienen la energa de los hidratos de carbono, grasas y protenas sintetizados por los organismos auttrofos. La energa contenida en estas molculas es liberada mediante un proceso de combustin denominada respiracin aerbica LAS PRIMERAS CELULAS Para llegar hasta la clulas eucariticas tuvo que ocurrir una serie de hechos que demoraron varios miles de millones de aos, desde el origen del planeta que se estima en 4500 millones de aos, pasaron 1000 millones de aos antes que aparecieran los primeros fsiles de las primeras formas de vida que corresponden a algunos tipos de vida parecidos a las actuales cianobacterias. Las primeras clulas son los protobiontes o progenote (forma de vida primitiva). Todos nosotros derivamos de un ancestro comn del cual no existen representantes actualmente.De este tronco comn habran surgido tres modelos de clulas procariotas: o urcariotas o arqueas o bacterias El desarrollo de las primeras manifestaciones vitales significaba que:

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Una habilitacin de la membrana evitara una composicin qumica diferente a la del medio. Una actividad metablica que permitiera el crecimiento y desarrollo. Transmisin de informacin de una generacin a otra para lograr una de las cualidades ms importantes de la vida que es la autoperpetuacin, persistir a travs del tiempo y el espacio.

De estas primeras formas de vida surgieron los Urcariotas, que ya no existen actualmente, s existen los Arqueas, que son relativamente nuevas, descubiertas hace poco tiempo que son las arqueobacterias, no se saba de ellas porque son organismos extremfilos, viven a altas temperaturas Quin puede imaginar que un organismo celular pueda vivir a ms de 100C?, por la desnaturalizacin de las protenas, etc. Hubo 2000 millones de aos en que existieron estas formas sencillas celulares, lo importante fue identificar los nutrientes o los materiales que los organismos requieren para subsistir y hacer la auto-perpetuacin, en este ambiente que era muy distinto al ambiente actual, la atmsfera era reductora, no haba O2 libre molecular, todo el O2 estaba combinado formando compuestos, por lo tanto en estas condiciones se desarrollaron las primeras formas de vida. Lo importante es que hallaron distintas formas para realizar el metabolismo y as tener nutrientes. HETEROTROFISMO Y REDISTRIBUCION: En un principio exista una diferencia muy clara entre: 1.) Consumidores de nutrientes (los seres vivos) 2.) Nutrientes: Sustancias Qumicas en disolucin, se form un caldo primitivo en que se mezclaban sustancias que interaccionaban y as llevaban a cabo reacciones y fueron formando compuestos ms complejos, es decir el desarrollo de biocatalizadores, molculas diseadas por los seres vivos para llevar a cabo estas reacciones. En el comienzo no haba formacin de nutrientes, si no que haba una redistribucin de ellos. Es decir, no haba un aporte nuevo, no se generaban nutrientes, esto se llama heterotrofismo, de los cuales existen 3 formas: A) Parasitismo: Captacin de los recursos necesarios desde un ser vivo con el que se vive, lo parasita. B) Saprofitismo: Utilizacin de los restos de un ser vivo, que est en proceso de descomposicin. C) Holotrofismo: (Holo=Todo); un organismo se come a otro entero, lo fagocita. Es un proceso de depredacin del organismo entero o una parte de l. Las flechas indican la direccin en que se desplazan los nutrientes En los 3 casos se adquieren sustratos de otro ser vivo: 1.- Cuya muerte ya se haba producido (Saprofitismo) 2.- La muerte se produjo en el mismo instante en que se produjo la ingestin (Holotrofismo) 3.- O bien la muerte se producir ms tarde, como resultado de la accin parasitaria. (Parasitismo) Entonces el desarrollo y conservacin de unas vidas se hace a expensas de la desaparicin de otras, por lo tanto hubo que desarrollar otras estrategias, o sea, la capacidad para inventar nutrientes ms complejos o molculas orgnicas a partir de sustancia simples, lo que se denomina AUTOTROFISMO AUTOTROFISMO: Nueva estrategia nutricional, capaz de sintetizar materia orgnica a partir de materia inorgnica (de fcil obtencin). Se desarrollaron 2 estrategias: A.- Quimiosntesis y B.- Fotosntesis o QUIMIOSNTESIS: Esto consiste en que algunos tipos de organismos obtienen sus nutrientes a travs de su accin sobre materia inorgnica por degradacin xido-reduccin. Extraen energa de compuestos de Azufre, Hierro y Nitrgeno. Hoy en da existen muchos organismos

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quimiosintetizadores, incluso industrias estn obteniendo purificacin de materiales usando bacterias, esto es biotecnologa, por ejemplo, se obtiene Cobre puro a travs de bacterias, proceso llamado biolixiviacin. Estos organismos liberan la energa de los enlaces rompindolos, y esta energa la utilizan para formar otros compuestos orgnicos a partir de CO2 y agua. Incluso en los fondos de los ocanos ocurre quimiosntesis, se liberan del centro de la tierra minerales y gases como Azufre. Existen gran cantidad de microorganismos (M.O.) como las arqueobacterias en las que se ha observado una activa quimiosntesis. Quimiosntesis en el fondo del mar 1) Los fluidos hidrotermales provenientes de las chimeneas contienen Sulfuro de Hidrgeno (H 2S) 2) Los microorganismos que viven en el entorno captan H2S, Oxgeno, CO2 desde el agua. 3) La energa la obtienen degradando al H2S. Esta energa y el oxgeno la utilizan para convertir el CO2 en azcares. 4) Los microorganismos liberan azufre al agua o FOTOSNTESIS: Materia prima: energa radiante proveniente del sol, prcticamente inagotable. La estrategia fue el desarrollo de una molcula capaz de captar esta energa y canalizarla hacia la sntesis de molculas orgnicas. Transforma la energa calrica en energa de enlace (qumica), esta molcula es la Clorofila. En distintas algas existen distintos tipos de clorofila A, B, C, D; estas constituyen los Fotosistemas, que liberan energa, la pasan a la cadena transportadora de electrones, luego a la sntesis de ATP (fosforilacin de ADP), esto es la Fosforilacin fosfosintetizadora, diferente a la Fosforilacin Oxidativa (donde se produce oxido-reduccin de las molculas). Energa Solar incorporacin H2O + CO2 como subproducto o desecho se forma el O2. Con la aparicin de la fotosntesis el O2 molecular comenz a aumentar en la atmsfera, se habla de la Revolucin de Oxigeno. El O2 es muy reactivo y al unirse con otras molculas comenz a almacenarse, primero en el agua y despus en la atmosfera. Con la aparicin de los M.O. fotosintetizadores la atmosfera pas de ser reductora a oxidante y en la actualidad es imposible que se produzca la abiognesis por la presencia del O2. Efecto de la aparicin de molculas de O2 libre en la tierra Despus de la aparicin del O2 muchos M.O. no fueron capaces de sobrevivir, como las bacterias anaerbicas, unas son anaerbicas obligadas, otros son microaerofilicos, que soportan pequeas cantidades de O2 y otros son anaerbicos facultativos, que cambian su metabolismo dependiendo si hay o no hay O2. La evolucin celular para llegar a las actuales clulas se produjo en estrecha relacin con la atmsfera, los ocanos y los procesos de nutricin. Las primeras clulas habran sido hetertrofas anaerbicas, luego algunas clulas aprendieron a fabricar molculas orgnicas a partir de fijacin y reduccin de CO2 (auttrofas), luego aparecieron las clulas que usaban el O2 (nutricin hetertrofa aerbica), todas estas formas celulares tienen organizacin procariticas y a partir de ellas se piensa que evolucionaron las clulas eucariticas. ORGANIZACIN DE CELULAS PROCARIOTICAS

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BACTERIAS: Una clula bacteriana como la Escherichia coli presenta ciertas caractersticas propias de una clula procariota. 1.) Estn rodeadas por 2 membranas muy bien definidas separadas por el espacio periplasmtico, una membrana externa o pared celular (proteccin mecnica) y otra interna llamada membrana plasmtica (barrera medio LIC y LEC). La pared celular cuenta con porinas que permite la difusin de solutos. 2.) En el protoplasma se encuentran partculas denominadas ribosomas compuestas por ARN y protenas que participan de la sntesis proteica. 3.) El cromosoma bacteriano es una molcula circular de ADN plegado dentro del nucleoide que se halla unido a la membrana plasmtica con el objetivo de contribuir a la separacin de los dos cromosomas hijos despus de la replicacin de ADN. 4.) Adems pueden contener un ADN pequeo aparte del cromosoma denominado plsmido que puede conferir resistencia a uno o varios antibiticos. MICOPLASMAS: Son pequeas bacterias que producen enfermedades infecciosas. Su importancia biolgica radica en que posee una masa mil veces menor que le tamao promedio de una bacteria y un milln de veces menor que una eucariota VIRUS: reconocidos por su capacidad de atravesar los poros de filtro de porcelana y provocar cambios patolgicos. Aunque no son considerados como clulas verdaderas, participan de algunas propiedades como la autorreproduccin, herencia, mutacin gnica. Dependen de clulas huspedes para ponerlas de manifiesto. De acuerdo con el cido nucleico que poseen existen dos tipos: 1.) los que poseen ARN (como virus del sida) 2.) los que poseen ADN (virus bacterifagos). Carecen de membrana y de maquinaria metablica

ORGANIZACIN DE CELULAS EUCARIOTICAS: Sus principales componentes son el ncleo, el citoplasma (citosol + organelos) y la membrana plasmtica. En el siguiente cuadro se ilustran los principales componentes especficos de las clulas eucariotas Principales Componentes Membrana celular Ncleo Citosol Citoesqueleto Estructuras microtubulares Organoides del sistema de endomembranas Otros organoides Subcomponentes Pared celular, cubierta celular, membrana plasmtica Cromosomas, nuclolo Enzimas soluble, ribosomas Filamentos intermedios, microtbulos y centrosoma, filamentos de actina Centriolos, cuerpos basales y cilios RE, Complejo Golgi, endosomas, lisosomas Mitocondrias, Cloroplastos, Peroxisomas Funcin principal Proteccin, Interacciones celulares, permeabilidad, endocitosis y exocitosis Informacin gentica y sntesis de ribosomas Gluclisis y Sntesis proteica Forma y movilidad de la clula Movilidad ciliar Sntesis y procesamiento de lpidos, e hidratos de carbono, digestin Sntesis de ATP, Fotosntesis, Detoxificacin

Las clulas de un organismo multicelular tienen formas y estructuras variables y se diferencian de acuerdo con sus funciones especficas en los distintos tejidos. El tamao de la clula oscila dentro de amplios lmites. El volumen de la clula es bastante constante en los distintos tipos celulares o o o MEMBRANA PLASMATICA: Tiene por funcin separar el contenido de la clula del medio externo. Se trata de una delgada pelcula de 6 a 10 nm de espesor compuesta por una bicapa lipdica continua y protenas intercaladas y adheridas a su superficie. Controla de manera selectiva el pasaje de solutos. En clulas animales suele poseer hidratos de carbono y en vegetales est cubierta por pared celular CITOSOL O MATRIZ CITOPLASMATICA: constituye el verdadero medio interno de la clula. Contiene filamentos de citoesqueleto, ribosomas, y molculas diversas CITOESQUELETO: compuesto por 3 tipos de filamentos que son responsables de la forma y motilidad de la clula. Los filamentos de actina con funcin de motilidad; los filamentos intermedios con un papel mecnico; y los microtbulos tienen a cargo el desplazamiento de organoides por el citoplasma. Los centriolos estn formados por microtbulos e intervienen en el proceso de mitosis

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SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS: Est formado por RER (funcin de sntesis proteica), REL (sntesis de otras molculas), envoltura nuclear (separa medio intranuclear del citoplasma), Golgi (procesamiento de molculas provenientes del RE), Endosomas (que reciben enzimas hidrolticas que al sumarse con material ingresado a la clula se convierten en lisosomas), Lisosomas (funcin digestiva) MITOCONDRIAS Y CLOROPLASTOS: Los primeros participan de la produccin de energa, y los segundos en el proceso fotosinttico. Ambos poseen ADN propio que les permite elaborar algunas protenas PEROXISOMAS: Funcin de degradacin del perxido de hidrgeno (agua oxigenada) NUCLEO: que pueden presentarse numrica o morfolgicamente distintas entre una clulas y otras. Tienen como funcin fundamental el proporcionar a la clula la informacin gentica almacenada en las molculas de ADN

TEORIA ENDOSIMBIOTICA SERIADA: Basndose en la teora de la fagocitosis: una clula ms grande engloba a otra clula ms pequea y en lugar de degradarla se establece entre ellas una relacin de simbiosis, lo que significa que el M.O. pequeo englobado tena algunas caractersticas que el M.O. ms grande no las tena y a su vez l le dio un ambiente ms seguro y con mas nutrientes. Esta es la base de la teora de la endosimbiosis seriada: una clula procaritica engloba a otra clula procaritica aerbica quedando con una doble membrana. Algunos fueron precursores de peroxisomas con capacidad para eliminar sustancias txicas; otras fueron precursoras de las mitocondrias, encargadas en un principio de proteger a la clula husped contra su propio O2; otras habran sido fotosintetizadoras, lo que habra dado origen a los actuales cloroplastos (organelos de las clulas vegetales). De hecho mitocondrias y cloroplastos son muy similares a las bacterias en muchas caractersticas, se reproducen por divisin, tienen su propio ADN, tienen ribosomas, poseen una maquinaria de fotosntesis sencilla pero efectiva. Hay varias protenas que estn codificadas en el ADN mitocondrial, una mitocondria hoy no puede vivir independiente porque la mayor parte de su informacin gentica fue traspasada al genoma nuclear. Entonces los M.O. habran adquirido propiedades metablicas que no posean, lo que produce una ventaja selectiva: 1.- La capacidad del mecanismo oxidativo con lo que la clula pudo convertirse de anaerbica a aerbica. 2.- La posibilidad de realizar la fotosntesis y por lo tanto ser un organismo auttrofo. As mismo, la clula primitiva le proporcionaba a los simbiontes un ambiente seguro y le aseguraba la supervivencia. La aparicin de los organelos se explic a travs de 2 teoras, que son: AUTOGENESIS Y XENOGENESIS. o AUTOGENESIS explica la aparicin de los compartimientos o sistemas membranosos internos a partir de la misma membrana de esta celula o XENOGENESIS supone la formacin de organelos con material externo (bacterias). Mitocondrias y cloroplastos poseen 2 membranas. Otros organelos con Mb son el REL, RER, Golgi, etc.

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2.

MEMBRANA CELULAR MEMBRANA: Las clulas estn rodeadas por membranas de un espesor variable, va de 6 a 10 nm (60 a 100 ). Las clulas eucariontes tienen organelos intracelulares que tambin estn compartimentalizados por membranas, las que son de menor espesor que las plasmticas. Esto muy importante ya que la presencia de membrana en las clulas sobre todo en las clulas eucariontes da la particularidad de la compartmentalizacin, existen compartimentos separados de otros territorios celulares donde pueden ocurrir fenmenos sin intervencin de situaciones que pudieran afectar esa funcin, adems por estar en un espacio restringido los fenmenos de difusin que deben ocurrir a nivel de la clula se hacen ms rpidos porque las distancias son ms cortas (como si la casa fuese la clula y la pieza el compartimento). COMPOSICION GENERAL: Las membranas biolgicas contienen protenas y lpidos, incluyendo glicoprotenas y glicolpidos. Es decir, las protenas se unen covalentemente a azucares y a lpidos, tambin se unen covalentemente a hidratos de carbono. En sntesis la composicin qumica son protenas lpidos e hidratos de carbono en algunos casos IMPORTANCIA DE LA MEMBRANA: Las funciones de las clulas dependen esencialmente de protenas y lpidos especficos de membranas. La funciones celulares dependen casi exclusivamente de protenas y hay casos de lpidos de membrana que tienen funciones especificas, no quiere decir que en trminos absolutos la funcin descanse sobre las protenas sino que principalmente s pero absolutamente no. Y aqu hay un punto importante, la alteracin de alguno de estos componentes o ms bien de componentes qumicos y principalmente protenas pueden dar pie a que surjan enfermedades. Todas las membranas ya sean plasmticas, nucleares, citoplasmticas, de plantas, animales o microorganismos presentan las misma ultraestructura (es decir, estructura observada al microscopio electrnico de transmisin). Al microscopio electrnico de transmisin (TEM), estas membranas presentan una apariencia trilaminar, como lneas de ferrocarril con 2 zonas electrodensas (indicadas por flechas), separada por una zona centra menos densa (clara) como muestra (micrografa) la estructura de la membrana plasmtica de un eritrocito. Robertis: Para estudiar la composicin molecular de la mb celular, el primer paso consiste en su aislamiento del resto del citoplasma en la forma ms pura que sea posible, los estudios fueron efectuados con lo eritrocitos, ya que este tipo celular, al carecer de organoides, brinda mb plasmticas con alto grado de pureza. FUNCIONES DE MEMBRANAS BIOLGICAS o Proteccin de la clula o del organelo. o Regulacin del transporte hacia fuera o hacia adentro de la clula o del organelo o Regular el volumen celular (control de entrada y de salida de agua). Es decir mantener el volumen normal y ante algn evento de movimiento de agua creado normalmente por fuerzas de tipo osmtica o hidrosttico en la clula corregir esa variacin de volumen rpidamente. o Mantener el PH intracelular (regulacin de H+). Por procesos metablicos puede variar y hay mecanismos en que participan sistemas de transporte que van a volver el PH a valores fisiolgicos. o Regular selectivamente la composicin inica (por Ej.: Na+, K+, Ca+2). Es muy selectiva de la composicin inica de los componentes en los compartimentos celulares, ustedes se deben recordar esencialmente el sodio que esta relegado al espacio extracelular o al LEC (liquido extra celular) y

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que el potasio esta relegado al espacio intracelular o LIC (Liquido Intracelular) eso esencialmente obedece a dos componentes, uno que son canales selectivos inicos que permiten el paso selectivo a favor de gradiente de ciertos iones y nuestra conocida bomba de sodio, el trabajo de ambos componentes de transporte que son protenas de membrana se regula esa composicin que es fundamental para la vida de la clula. Concentrar metabolitos energticos (Nutrientes, ATP, etc.). Es decir, en la clula cuando se necesitan metabolitos que dan origen por ejemplo a los componentes de membranas son capaces de transportar hacia el interior de la clula en contra de gradiente algn elemento necesario. Generar gradientes inicos para mantener excitabilidad de clulas nerviosas y musculares. Lo que sealaba de la afluencia sodio potasio puntualmente e incluso en algunos casos la del calcio. Por ejemplo en las clulas musculares existe una concentracin de 0.1 a 0.2 micro molar en cambio afuera es de 0.1 4 a 0.2 molar sea estamos hablando de una diferencia de 10 Es una gran diferencia en su gradiente de tal manera que el calcio tiene tendencia a ingresar y tiene que haber un mecanismo que rpidamente, una vez que el calcio haya ejercido su accin, sea expulsado de la clula hacia fuera o hacia el interior del citoplasma, al retculo endoplsmico. Remover compuestos txicos que ingresan a las clulas (detoxificacin, atrapamiento y/o bombeo hacia fuera) Compartimentacin Transduccin de seales. Control del flujo de informacin dentro de la clula, entre clulas y medio ambiente. Por ejemplo esta el caso de una protena de membrana de los discos de los bastoncitos retinianos, en la membrana esta la rodopsina, la cual recibe un estimulo luminoso y hace una transduccin es decir un cambio en la forma de energa fsica en este caso a una seal qumica hacia el interior del disco y que va a llevar la seal posteriormente despus de una serie de etapas a centros superiores para ser reflejados en este caso como una visin de penumbra. Transduccin de energa. Transduccin de energa lo que ocurre en la mitocondria, principalmente en la membrana interna mitocondrial donde esta ubicado por ejemplo la cadena transportadora de electrones o complejo quinto (Hay cinco complejos en la membrana mitocondrial que tienen que ver con la transportacin de electrones) Reconocimiento celular. Sobre todo lo que tiene que ver con la parte primera de embriogenesis cuando empiezan las clulas a recorrer territorios tiene que haber reconocimiento de los pares para constituir un tejido y hay diferentes componentes de membrana en este caso glicoprotenas. Suministrar puntos de anclaje para el citoesqueleto o para la matriz extracelular; mantencin de forma celular. Funcin de membrana que tiene que ver con citoesqueleto que en el fondo no solo hace una estructura como un verdadero andamiaje celular sino que tambin es la que, de alguna manera, fija la ubicacin de ciertas protenas de membrana a ciertos territorios particulares de ella o tambin con la matriz extracelular que est afuera de la clula Fusin con otras membranas. Un fenmeno muy importante, recordemos por ejemplo la situacin de la exocitosis de acetilcolina con la vescula que la contiene, por ejemplo en una neurona motora, para ser liberadas al espacio sinptico va a tener que fusionarse con la membrana plasmtica, ah participan tambin protenas. Posibilitar el paso de molculas a travs de vas de comunicacin celulares. Como se comunica una clula con una vecina, por ejemplo con una comunicacin elctrica Cmo lo hace? Importantsimo en el mecanismo del parto y en el msculo cardiaco. Motilidad de algunos tipos celulares. por ejemplo, cuando hay una zona de inflamacin para alguna herida hay un poco de fiebre en esa zona y se produce actividad de clulas blancas. La motilidad de este caso es de componentes particulares de membrana y del citoesqueleto para que puedan moverse.

CMO LAS MEMBRANAS BIOLGICAS PUEDEN REALIZAR TAN NUMEROSAS Y DIVERSAS FUNCIONES?: Un enfoque experimental que se ha utilizado para responder a la anterior interrogante, ha sido determinar primero qu componentes qumicos son comunes y cules son nicos en las diferentes membranas biolgicas. Si encontramos un componente o una protena que est en solo cierto tipo de clula o que tiene cierta funcin particular podemos sospechar que esa funcin descansa en esa protena. Despus, se han estudiado las propiedades qumicas y fisicoqumicas de los distintos componentes de las membranas biolgicas y cmo estos componentes se asocian e interaccionan entre ellos para formar estructuras moleculares estables y dinmicas. Despus estudiar las propiedades qumicas y fisicoqumicas de estos componentes (ya sea de las protenas de los lpidos o de hidratos de carbono, los cuales no andan sueltos en la membrana estn unidos covalentemente a lpidos o bien a protenas) y con el conocimiento de esas caractersticas es posible ver el tipo de asociacin de interaccin qumica que existe entre los distintos componentes qumicos de membrana. Los enlaces son de tipo no covalente, si fueran covalentes, la membrana

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seria rgida, y no lo es. Estos enlaces permiten que cuando sean muchos, recuerden que la unin hace la fuerza, resulten estructuras estables pero a ala ves dinmicas. Finalmente, considerando los aspectos anteriores, se han elaborado modelos de membranas que permitan explicar entre otras cosas dicha diversidad funcional. Dichos modelos son muy importantes en el estudio y conocimiento de los organismos biolgicos. MODELO DE MOSAICO FLUIDO: El modelo ms famoso es el modelo de mosaico fluido, que permite estudiar la diversidad funcional, aunque es cierto que el modelo estuvo un poco en entredicho porque a medida que pasan los aos con la aparicin de nuevas tcnicas o con el mejoramiento de ciertas tcnicas de laboratorio es posible determinar y medir fenmenos que antes no era posible visualizar, por lo cual ha tenido algunas modificaciones pero en esencia es el modelo ms aceptado por la comunidad cientfica mundial. Si juntamos cierta composicin particular ya sea de componentes lipidicos, proteicos podramos inducir alguna funcin de esa membrana en particular o explicar esa funcin en base al tipo de componente incluso a veces un tipo de componentes en particular, es decir un supuesto de si son importantes las protenas, o son importantes los lpidos y dentro de las protenas esta en particular que le da la impronta a una determinada clula. Composicin (% en peso) de membranas plasmticas e intracelulares Membrana Protenas 18 Mielina (SNC humano) Eritrocito (humano) 49 Hgado (rata) 58 Mitocondria (cerdo) 76 Mb interna Mb externa 55 Microsomas (bovino) RE rugoso 55 RE liso 47 B. Subtilis 80

Lpidos 79 43 42 24 45 45 53 20

Carbohidratos 3 8 (5-10) (1-2)

Aqu tenemos una tabla del porcentaje en peso de membranas tanto plasmticas como intracelulares y estn destacados tres bsicas. Aqu esta la membrana de mielina o la vaina de mielina que est en el SNC y constituye a las clulas de Schwann, la composicin es de solo un 20% de protenas y casi un 80% de lpidos y de carbohidratos muy poco; en la mitocondria en la membrana interna se revierte prcticamente esta la relacin, la relacin en el primero es 1:4 y en la mb interna de la mitocondria 4:1. Qu podramos decir?, aparentemente cuando tenemos bastante protena eso estara relacionado con una actividad funcional importante, en cambio cuando tenemos una composicin prominentemente de lpidos en la membrana nos encontramos con una funcin de tipo estructural. O sea tomando simplemente este dato uno puede inferir que las funciones ms importantes, ms relevantes de cada membrana y cada clula descansan en las protenas, recuerden que la vaina de mielina tiene esencialmente 2 funciones, un es ser un soporte y la otra es ser un aislante elctrico. Si miramos una bacteria como el bacilos subtilis, tambin tenemos una relacin cuatro para protenas uno para lpidos, y ustedes saben que estas bacterias como la mayora de las bacterias estn sometidas a un medio muy cambiante (yo creo que las bacterias son el microorganismo mas esforzado, claro si estn cambiando las condiciones del medio ambiente por lo tanto tienen que tener una dinmica a nivel de membrana y de sus componentes para dar cuenta frente a ese cambio y sobrevivir porque si no responden al cambio sencillamente se mueren) y eso aqu lo estamos viendo que descansa nuevamente en el alto contenido de protenas que tiene la membrana de estas clulas, despus si miramos membrana plasmticas como en este caso o de glbulos rojos o de hgado o la misma membrana externa de la mitocondria o del retculo ya sea rugoso o liso vemos que alrededor del 50% de lpidos y ah se compensan y se combinan las funciones de protenas y lpidos y ya dijimos en algn momento que algunas presentan hidratos de carbono y otras no.

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PROTENAS DE MEMBRANA: Aunque la estructura bsica de las membranas biolgicas est determinada por la bicapa lipdica, las funciones ms importantes son realizadas por las protenas. La cantidad y tipos de protenas en las membranas son altamente variables. En la membrana de mielina, menos del 20% de la masa, corresponde a protenas. En la membrana interna de la mitocondria (involucrada en la transduccin de energa), el contenido de protenas corresponde al 75%. En las membranas plasmticas, el contenido de protena corresponde alrededor de 50% de la masa. Debido al pequeo tamao existen ms molculas de lpido que de protenas, hay alrededor de 50 molculas lpido por una de protena en una membrana con un contenido de 50% de protena respecto a la masa. LPIDOS DE MEMBRANA: Las membranas de animales tienen 3 clases de lpidos: o Fosfolpidos, (lpidos ms abundantes), derivados del glicerol 3-fosfato. Los componentes ms comunes de los fosfolpidos son cidos grasos saturados que estn unidos al C-1 y cidos grasos insaturados unidos al C-2 del glicerol. El fosfato esta unido como ster al C-3. o Esfingolpidos (esfingofosfolpidos y glicolpidos), contienen esfingosina, un amino alcohol de 18 tomos de C. Presenta un cido graso frecuentemente saturado (20 a 24 tomos de C) unido al grupo amino El grupo alcohol puede tener unido un azcar constituyendo as un glicolpido, o bien fosfocolina o fosfoetanolamina dando lugar a esfingofosfolpido (esfingomielina, SM) o Esteroides (colesterol) Ejemplo: Podemos ver el glicerol, un cido graso, otro acido graso podra ser palmitito (16 tomos de C). Si a la colina le agregamos un grupo acetato ser ACETILCOLINA pero en este caso la colina que est en la cabeza aqu tenemos fosfatidilcolina. En el grupo fosfato hay una carga con pH fisiolgico negativa, va a depender si este grupo tiene carga o no cual va a ser la carga neta que van a tener. Son de bajo peso molecular. Son antipticos o anfiflicos, molculas con extremo polar (hidroflico) y no polar (hidrofbico). Esto en trminos de interaccin pueden darse cuenta que es importante pues tiene dos sitios para interactuar. Las colas o tallos son cidos grasos que difieren en longitud (14-24 tomos de carbono). Pueden presentar dobles enlaces (no-saturados) o no (saturados). El doble enlace se puede apreciar como un quiebre en una de las colas. Las diferencias en longitud y saturacin de los cidos grasos influyen en las interacciones entre las molculas y en la fluidez de la membrana y, por lo tanto, en la permeabilidad. La forma y naturaleza antiptica de los lpidos, permite que, en solucin acuosa, formen espontneamente bicapas (extremo hidrofbico alejado del contacto con el aguay la cabeza polar expuesta al agua) Algunos forman micelas

Robertis: Los cidos grasos poseen un nmero par de tomos de carbono (16 a 22). La viscosidad de la bicapa ser mayor cuanto ms larga sean las cadenas hidrocarbonadas. Otro factor que afecta la fluidez es la existencia de dobles ligaduras en las cadenas, ya que los carbonos no saturados imparten una desviacin en la cadena que impide que las molculas se adosen estrechamente, y aumenten su viscosidad.

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Ejemplo: Por ejemplo, el etanolamina est cargado positivamente ms la carga negativa del grupo fosfato, tenemos carga neta cero Otro ejemplo es la Phosphadidylserina, en el cuadro se ve que tiene un grupo amino (carga +) y un in carboxilato (carga -) y tenemos la carga negativa del grupo fosfato, entonces tenemos 2 cargas negativas y una carga positiva, entonces la carga neta es -1. Entonces podemos concluir que en la bicapas podemos encontrar fosfolpidos que presentan carga elctrica neta.

ESFINGOGLICOLIPIDOS: Si el R es un tomo de hidrogeno se le llama ceramida. Pero a lo que nos interesa si en el grupo R hay una fosfocolina es la esfingomielina que es un esfingolpido muy importante en membranas de clulas nerviosas. Los esfingoglicolpidos son lpidos que tienen esfingosina y adems hidratos de carbono, tambin se les llama glicolpidos y tenemos que cuando tiene unido un monosacrido se llama cerebrsido, que son neutros, los globsidos cuando son dos o mas azucares. Uno importante es el ganglisido que puede tener dos tres o cuatro azucares, pero a lo menos tiene un acido silico. Importante, los glicolpidos son los esfingoglicolpidos por lo tanto tienen esfingosina, cidos grasos y azucares.

Tipo de esfingolpido Esfingosina Ceramida Esfingomielina

Grupo R H fosfocolina Esfingoglicolpidos o glicolpido

Cerebrsido monosacrido (galactosa, glucosa). Neutro Globsido Dos o ms azucares (galactosa; glucosa, N-acetilglucosamina; mucosa) Neutro Ganglisido Tres o ms azucares incluyendo a lo menos un cido silico. Inico

GLICOLIPIDOS DE MEMBRANA: tienen esfingosina, dos cidos grasos y azcares o Cerebrsidos, ganglisidos y globsidos: En tejido nervioso y cerebro, En el reconocimiento clula-clula, En grupos sanguneos

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Esto es la esfingosina, acido graso y otro acido graso unido a la galactosa, sea es un galactocerebrsido. Podemos ver un ganglisido, si no tuviera la NANA o acido silico seria un globsido, pero cuando tiene a lo menos un acido silico se trasforman en ganglisido y este particularmente es el conocido como GM1 si se fijan a PH fisiolgico. El cido silico tiene un grupo carboxilato y eso le confiere la carga negativa, y no olviden que la carga negativa permiten interacciones con contrapones en este caso cationes que estn en el tejido nervioso, cerebro, reconocimiento clula-clula. Los responsables de los distintos grupos sanguneos son glicolpidos, tambin hay glicoprotenas en las membranas de los eritrocitos que tiene que ver con los distintos grupos sanguneos

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PATOLOGIAS ASOCIADAS A LA DIFUNCION DE UN GLICOLIPIDO Fallas en la degradacin de ganglisido conducen a varias enfermedades de almacenamiento de tipo hereditario como sucede en la enfermedad de Tay-Sachs o gangliosidosis GM2 (hexosaminidasa A) La enzima puede ser detectada por amniocentesis

Las enfermedades de almacenamiento o deposito como la Tay-Sachs o la de bouche o polisacaridosis 1 y 2, son en las que los lisosomas son deficientes en alguna enzima que tienen que ver con la degradacin de ciertos compuestos, recordar que en los lisosomas hay una batera de enzimas hidroliticas, hay proteasas, hay lipasas, etc. Que degradan a sus elementos ms simples. En este caso lo que falla es una enzima que degrada ganglisido esta puede ser detectada de forma bastante precoz por la amniocentesis, ceramida se encuentran unida al tomo de hidrgeno y est unido a la ceramida aqu en este caso una glucosa, una galactosa, Nacetilgalactosa, y el cido silico; la enzima es la exoaminoaza aminoacido que cataliza la degradacin eliminndose nacetilgalactosa y quedando solamente este componente que es el gangliosido GM3, entonces lo que ocurre es que la enzima no est o es tan baja su cantidad que se va acumulando rpidamente en el tiempo el ganglisido GM2 en los lisosomas, esta enfermedad es autosmica recesiva, al empezar a acumularse se afecta el desarrollo motor, el desarrollo mental y a los tres aos ms o menos viene el deceso. Y les tenemos otro el ganglisido GM1 que por degradacin va a dar el ganglisido GM2, pero ste en las membranas es el sitio donde se unen las partculas del clera, es la puerta de entrada del clera.

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I COMPORTAMIENTO DE MOLECULAS ANFIPATICAS EN SOLUCION ACUOSA: Notamos las molculas de agua interaccionando a travs de uniones hidrogeno, si nos fijamos el agua se ordena alrededor de este grupo que es eminentemente hidrofbico, ese es el ordenamiento que habra para una cadena de tipo alqulico, si se aumenta la cantidad de lpido sigue ordenndose el agua alrededor pero no hay una interaccin estrecha entre el lpido y las molculas de agua, finalmente cuando la concentracin llegue a lo que se llama concentracin micedal se formar lo que se llama micela, pero esto va a depender del tipo de cido graso y de la geometra de ste. El agua ahora esta desordenada, ha ocurrido un ordenamiento de la estructura a expensas del desorden del agua o del entorno. De acuerdo con las leyes de la termodinmica todos los procesos ocurren con un aumento de entropa (es el grado de desorden que poseen las molculas que integran un cuerpo). La micela es una estructura estable.

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UNA BICAPA LIPDICA ES EL ELEMENTO ESTRUCTURAL BSICO DE LAS MEMBRANAS: La estructura favorecida para la mayor mayora de los a fosfolpidos y glicolpidos en un medio acuoso es una bicapa ms que una micela. La formacin de la bicapa se produce en un proceso de auto ensamblaje impulsado por interacciones no covalentes predominantemente hidrofbicas (fuerzas de van der Waals Waals). Existen tambin atracciones electrostticas y puentes de hidrgeno entre las cabezas polares de los fosfolpidos. Vemos un tipo de cido graso en que la geometra es un verdadero cono, un cono invertido es capaz de formar micelas, en cambio si un fosfolpido (cabeza y dos colas) lo que se forma es una bicapa, ahora se puede formar con este tipo de lpido lo que se conoce como liposoma que es una vescula que tiene una membrana constituida con una bicapa lipdica, esto se utiliza actualmente en cosmtica pero que en algn momento se pens que poda ser la solucin para incluir en el interior alguna droga anticancergena, el problema es que es muy difcil dirigir el liposoma donde se encuentra el tumor, muchas veces el liposoma era tomado por las defensas inmunitarias del paciente y sencillamente no prosperaba. Luego pusieron una cubierta con unos polimeros y as ha podido ser utilizada. Se han utilizado estos liposomas para llegar a las zonas afectadas con esta droga. EFECTO DE LA COMPOSICIN LIPDICA SOBRE EL ESPESOR Y LA CURVATURA DE LA BICAPA: La composicin lipdica de una bicapa influye en su espesor. As una bicapa compuesta de SM tiene un espesor mayor que una de PC. El colesterol disminuye la fluidez de una bicapa de PC, aumentando su espesor En una bicapa de SM, ms ordenada, el colesterol no afecta su espesor La composicin de lpidos en la membrana tiene que ver con el espesor y con la curvatura de la bicapa, brevemente lo que tenemos aqu es un fosfolpido, fosfatidilcolina que a temperatura ambiente tiene cierto grado de movimiento por eso que las colitas no se ven rgidas, aqu hay un esquema que muestra que cuando al fosfolpido se le agrega el colesterol aumenta el espesor, porque las colas se ponen ms rgidas ya que el movimiento est restringido en la interaccin con el colesterol y el espesor aumenta de 3,5 nm a 4,0 nm. O sea lo que est haciendo el colesterol de alguna manera es impidiendo el movimiento minimizando la bicapa, si esto estuviera constituido por fosfatidilcolina estara ms rgida que en ausencia de colesterol. Aqu tenemos esfingomielina, en este caso la esfingomielina en vez de tener entre 14 y 16 hasta 18 son de 16 a 20 o sea son ms largos en ausencia de colesterol tiene ese espesor entre 4.6 y 5.6 nm porque son ms largas las colas y si se le agrega colesterol, no se modifica. Esta asociacin de esfingomielina con colesterol y ciertos fosfolpidos en estas regiones de membrana van a constituir lo que se conoce como micro dominio lipdico o Raft que sirve de sitio de anclaje con ciertas protenas que tiene que ver con vas de sealizacin para la clula.

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Mdulo I: Clula Las bicapas compuestas de compuestas fosfolpidos de cabeza polar grande que tienen forma que cilndrica son relativamente planas PE y PS, cuyas cabezas polares son pequeas y tienen forma cnica forman bicapas curvadas (vesculas, microvellosidades) Y el otro efecto que es sobre la curvatura, tenemos fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina. Notemos que la diferencia est en el tamao de las cabezas y eso permite que en ciertas regiones se acomoden mejor fosfatidiletanolamina y le permita a la bicapa tener una curvatura, eso uno lo podra asociar con vesculas, con los glbulos rojos tambin que tiene forma bicncava, entonces probablemente exista una particularidad en la composicin de esa membrana que le permite flexibilidad y que adems le da resistencia para mantener esta flexibilidad, o sea tenemos que la composicin lipdica de alguna membrana de alguna manera regula el espesor de la membrana pero tambin la curvatura y en trminos funcionales es importante (esfingomielina de los Raft)

FLUIDEZ DE LA BICAPA LIPDICA: La fluidez es un reflejo de la viscosidad dentro de la membrana y depende de la o Longitud de cadena de los cidos grasos o Grado de saturacin de los cidos grasos o Presencia de colesterol Que la bicapa sea fluida depende del largo de la cadena de las colitas y depende del grado de saturacin de esas colitas. Imagnese una bicapa que est constituida por un solo tipo de fosfolpidos pero de cadena larga totalmente saturada, y la comparamos con otra que es tambin totalmente saturada pero de menor longitud las colitas, Cul es ms fluida a una temperatura dada de 27? Si se aumenta el nmero de tomos de carbono y el largo de la cadena, la temperatura que hay que entregar para que comiencen a moverse es cada vez mayor. Entonces la bicapa ms fluida, la ms corta pero porque? Porque de acuerdo a los puntos de fusin est correcto pero ahora de acuerdo a la interaccin, que tipo de interaccin se forma entre las colitas de un fosfolipido con las del vecino, una interaccin de corta distancia, no covalente tipo fuerzas de Van der Walls, entonces si el largo de la cadena es mayor entonces la interaccin es mayor , por lo tanto hay que entregar mayor energa calrico para que se rompa, si es ms corta hay menor interaccin por lo tanto hay que entregar menor energa calrico. Y si ahora vemos un doble enlace, entonces si estamos pensando en interacciones de fosfolpidos vecinos y hay dobles enlaces Cmo son las interacciones comparada con una que no tiene doble enlace? Menor, porque estn fsicamente separadas por lo tanto la interaccin es menos y por lo tanto la energa que hay que entregarle es menor. Y es lo que se muestra aqu que a medida que aumentan los dobles enlaces la temperatura que hay que entregar para provocar ese cambio de transicin de fase es menor. O sea lo que estamos diciendo que desde un estado gel en que est todo ordenado empaquetado los fosfolpidos si agregamos calor pasamos a un estado lquido cristal ms fluido y si enfriamos volvemos al estado de gel eso se llama transicin de fase. Lo que permite esta fluidez es que haya movimientos laterales en la bicapa, que los fosfolpidos tengan por ejemplo movimientos de flexin o rotacin que es muy rpido. Podemos imaginar que la membrana esta vibrando con la energa trmica que

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tiene el sistema, y aqu se seala un moviendo que sea de flip o flop lo que significa que el fosfolpido que est en la cara extracelular pase a la cara intracelular o viceversa, esto ocurre infrecuentemente a no ser que aparezca algo que lo provoque

Al aumentar la temperatura, se produce la transicin de fase de un estado gel (ms compacto) a uno lquido cristal (ms desordenado) Las cadenas de cidos grasos tienen un movimiento de rotacin (son flexibles y rotan rpidamente en torno a su eje mayor)

CONTENIDO DE COLESTEROL Y SUS EFECTOS EN LAS MEMBRANAS o Membrana plasmtica = 25 - 30% o Membrana nuclear = 10% o Golgi / R.E.R. = 6 - 7% o Mitocondria: mb. Externa = 4 - 5% / Mb. interna = 2 - 5% Las clulas bacterianas no tienen colesterol. En las clulas animales, el colesterol es un regulador (tampn) clave de la fluidez de las membranas. El colesterol hace a las bicapas lipdicas menos fluidas (reduce la fluidez), pero tambin previene que las cadenas alifticas de los fosfolpidos se acerquen lo suficiente para cristalizar. El colesterol es una mol molcula planar rgida y con un carcter anfiptico menor que el de otros fosfolpidos. El porcentaje de colesterol en la membrana es variable, siempre hay en la membrana plasmtica un mayor contenido quizs porque le va a dar la forma a la clula, va a servir de proteccin. Hay menor cantidad en la membrana nuclear, Golgi y retculo endoplasmtico rugoso, pero en la mitocondria y sobre todo en la mitocondria interna la cantidad de colesterol es muy baja. Eso ocurre porque la mitocondria es muy activa, hay actividad en la cadena transportadora de electrones, la fosforilacin asociativa, ocurren otra serie de eventos que hacen necesario que la membrana sea muy fluida y de hay entonces que el contenido de colesterol tenga que ser bajo. En el caso de las membranas animales el colesterol es un regulador de la fluidez, si bien es cierto tiene una funcin estructural de soporte que disminuye la permeabilidad de la membrana no cabe duda, si tiene que ver con el grado de fluidez de las membranas animales, este colesterol es una molcula plana, rgida y es anfiptico (ver origen). El colesterol se ubica entre los fosfolpidos, las cabezas polares interacta con la cabeza del grupo hidroxilo y los anillos con la zona hidrofbica de la cadena aromtica de los fosfolpidos, esa es la gracia que tiene ser anfiptico, interactuar muy profundamente una molcula con otra y debido a esta interaccin algunas regiones son mas rgidas en la bicapa y otras son mas fluidas. Hay un gradiente de fluidez en la membrana. Funciona como tampn porque si la temperatura aumenta la fluidez de la bicapa aumentara dentro del rango fisiolgico. Recuerden que la clula es esencialmente isotrmica, las variaciones de temperatura obedecen a procesos infecciosos o algn otro cuadro patolgico. Si aumenta la temperatura, entonces tambin aumenta la fluidez, por el contrario si baja la temperatura, la membrana es menos fluida; estos dos extremos no son buenos por lo que necesitamos una temperatura ptima. Si sube la temperatura los fosfolpidos tienden a aumentar su movimiento y su fluidez, y el colesterol entre ello no los deja que se mueran tanto. Si baja la temperatura se estructura ms, comienzan a interaccionar ms, a ponerse ms rgido y el colesterol que esta al medio, tampoco los deja. El colesterol contribuye con las propiedades de barrera de permeabilidad de la membrana, debido a su capacidad de restringir el movimiento de los cidos grasos de los fosfolpidos de la bicapa al interaccionar hidrofbicamente con sus cadenas antipticas. El anillo esferoidal rgido y plano del colesterol interacciona con las regiones de las cadenas de cidos grasos ms cercanas a la cabeza polar de los fosfolpidos, inmovilizando parcialmente a dichas regiones. Esta inmovilizacin hace a la membrana menos deformable en esas regiones

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I DIFUSIN LATERAL DE LPIDOS Y PROTENAS EN MEMBRANAS

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Micro dominio son ciertas regiones de las membranas en que aparece de mayor grosor. Tenemos fosfolpidos en azul, esfingolpidos en verde y colesterol entre medio y que permiten que ciertas protenas se anclen a travs de acido grasos o unos que se llaman GPI que son protenas por el lado extracelular o intracelular, entonces serian sitios de anclaje para protenas con funciones esencialmente de transmisin de seales especialmente a nivel celular y tambin hay protenas como la caveolina que van a dar origen a las caveolas. Un movimiento de tipo lateral es aproximadamente 10 elevado a menos seis segundos, es decir ocurren diez elevado a seis eventos por segundo. En el movimiento de flexin es 10 elevado a menos nueve segundos sea aprox. diez elevado nueve eventos de flexin por segundo, eso a sido medido por tcnicas adecuadas en bicapas, en cambio, el Flip Flop, el paso de un fosfolpido al otro lado, ocurre uno en diez elevado a cinco segundos o sea no ocurre, porque no ocurre un Flip Flop? Porque se necesita energa para pasar la cabeza polar por una zona hidrofobica.

MOVILIDAD REAL DE LAS PROTENAS DE MEMBRANAS: Con FRAP se puede cuantificar el movimiento lateral de protenas y lpidos en la membrana plasmtica. De la cintica del proceso de recuperacin de fluorescencia, se puede y calcular el coeficiente de difusin, D, de la protena. Se tiene una bicapa o puede ser una clula en que se marca los lpidos con una sustancia fluorescente, entonces se le aplica un lser muy fino con lo cual se produce que la fluorescencia decaiga y esa zona queda blanqueada, por eso esto se llama foto blanqueo, y despus de un cierto tiempo aparece nuevamente fluorescencia, que quiere decir eso, que los fosfolpidos se movieron, y se puede determinar le coeficiente de difusin. Este es un experimento que muestra claramente que ocurre difusin de lquido en la membrana En el experimento se marcaron con fluorescencia tambin protenas de membrana de una clula de ratn con una clula humana, se produjo la fusin celular con un virus, se forma

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una sper clula o etereocareo, que tiene dos ncleos. Marcaron con fluocerina que tiene un color amarillento y rotamina, que es del color rojo entonces inicialmente aparecen un polo rojo y el otro polo verde al microscopio fluorescente, despus de encubar a 37 Celsius y a los 40 minutos se observo entre mezclas, entonces en el otro polo donde no haban mascaras de fluorescencia verde apareci fluorescencia verde y apareci fluorescencia en el otro polo, lo nico que podra explicar esto es que haba un virus. Cuando esto se haca a 4 Celsius no haba experimento, porque es un proceso de induccin que es muy sensible a la temperatura o sea con estos dos experimentos se demuestra claramente que en la membrana ocurre procesos de induccin lateral lquido. Ahora un resultado ms reciente dcada del noventa se llama recuperacin fluorescencia despus del foto blanqueo, bsicamente es lo mismo se marcan las protenas de membrana con reactivos fluorescentes y se hacen foto blanqueos con lser y despus de un cierto tiempo se observa que pasa. A simple vista uno dira que hay un 50% de protenas que son mviles y 50% que son inmviles, si uno lo ve en un grafico ve claramente aquella situacin de la florescencia aplica el lser se produce el blanqueo y se sigue en el tiempo hasta que se recupera solamente un 50% de la fluorescencia, lo cual dice que hay un 50% protenas mviles y un 50% de protenas inmviles, esto es bien variable pero lo que si muestra es que los primeros resultados de Singel no eran tan exactos por que prcticamente no podas pensar que todas las protenas eran mviles, la verdad es que no son todas mviles, y a la luz de resultados ms recientes todava incluso dicen que en la membrana hay regiones que son como verdaderos cercados, cercas, imagnense una cerca de un campo, las protenas se pueden mover en ese cercado solamente no pueden ir a otra zona o sea la cosa es ms compleja todava a nivel de lo que es una membrana, esta experiencia es de suma importancia, permite de endocitosis o exocitosis de solutos grandes, el burbujeo de la vescula, la fusin de un espermatozoide con el ovulo por ejemplo serian imposibles. IMPORTANCIA FISIOLGICA DE LA FLUIDEZ: Muchos procesos celulares bsicos dependen de la fluidez: o Ensamble de membranas o Formacin de unin intercelular o Asociacin e interaccin de protenas de membrana formando estructuras especializadas o Unin de ligandos a receptores y transmisin de informacin. o Transporte y transduccin de energa. o Distribucin de lpidos y protenas de membrana desde sus sitios de sntesis o Crecimiento y divisin celular o Fusin de endosomas y de lisosomas o Exocitosis y endocitosis o Infeccin viral PROTEINAS DE MEMBRANA o Integrales o intrnsecas o Perifricas o extrnsecas A o Ancladas por lpidos o Ancladas por GPI Las protenas integrales solo podan ser extradas y solubilizadas en la membrana con detergente por eso son integrales, atraviesa una o ms veces la bicapa, tambin se llaman monotpicas. Tenemos las perifricas, por ejemplo las que estn interactuando con una protena integral. Con las tcnicas de solubilizacion con detergente poda sacarse la protena integral que atraviesa todo el espesor de la membrana y el detergente quedaba unido y as poda luego sacarse el detergente y as estudiar la protena. En cambio hay otras que tienen una interaccin de tipo electrosttica

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variando las fuerzas inicas con la cual se lavaban las protenas era posible sacarlas, en este caso de una protena unida por un ancla de tipo lipdico aqu hay una enzima especifica que la pude cortar. o Protena integral: Generalmente es una alfa hlice que atraviesa, una o varias veces, la membrana con un dominio hidrofbico interno (20-30 aminocidos) y dominios hidroflicos que asoman hacia el medio extracelular y el citoplasmtico o Las porinas de membrana externa de bacterias Gram negativa y de membrana mitocondrial externa son barriles en el cual 8-22 hojas antiparalelas conforman una estructura cilndrica en forma de barril. Presentan poros centrales que permiten el transporte (nutrientes, productos de deshecho). No todos los barriles son protenas de transporte. Algunas de estas protenas de bacterias funcionan como receptores o enzimas. Las mismas fuerzas termodinmicas que favorecen la formacin de una -hlice en el interior apolar de una bicapa lipdica, estabilizan tambin los barriles de membrana. En estos barriles , cada hoja est unida rgidamente a sus vecinas por uniones hidrgeno, de manera que es improbable que ocurran cambios conformacionales como sucede en la -hlice de protenas de membrana o Protena perifrica: Localizada enteramente fuera de la bicapa lipdica, en el lado citoplasmtico o en el extracelular, asociada con la superficie de la membrana por medio de interacciones no covalentes. o Protenas ancladas a lpidos de membrana: Este tipo de protenas estn localizadas fuera de la bicapa lipdica, en la superficie extracelular o en la citoslica. Estn covalentemente unidas a una molcula lipdica que est insertada en la bicapa lipdica. Unidas a una de las superficies de la membrana por medio de un lpido que est embebido en la bicapa Ancladas a la cara citoslica por: miristato (14:0) unido a Gly en el N -terminal (Ras) palmitato (16:0) unido covalentemente a SH de Cys o a OH de Ser/Thr interno (v-Src) grupo prenilo : farnesil (Ras) o geranilgeranil unido covalentemente a una Cys del C terminal o Protenas ancladas por GPI, covalentemente unido al C terminal: Se encuentran en la superficie externa de la membrana (acetilcolinesterasa, fosfatasa alcalina). Liberadas en forma soluble por fosfolipasa C (especfica para PI) Otra protena que es muy importante, cara citoslica, es la protena RAS, tiene un palmitato y un miristato. El palmitato es una acido graso de 16 tomos de carbono y est unido a un residuo de cistena de esta protena y a travs de otro residuo de cistena que es del grupo sulfidrilo de la cistena esta unido a un grupo terpeno, y la gracia que tiene es el doble enlace alternado. La protena RAS es importante porque est involucrada en una va de comunicacin y cuando se desregula RAS, por ejemplo, no pueden ser colocadas en off, porque todas estas protenas de las vas de comunicacin son encendidas y apagadas. Si estas no se apagan, siguen actuando y tiene que ver con factores de crecimiento, tambin procesos tumorales, cncer. Tenemos sta que era por la GPI, que es glicosilfosfatidininositol y el fosfatidininositol es un fosfolpido, o sea aqu tenemos una protena que tiene una cadena de oligosacridos, una serie de manosas, unidos a travs de este glicosilfosfatidininositol, un ancla un poco distinta y que es propia de aquellas protenas que estn hacia el espacio extracelular. FUNCIONES DE LAS PROTEINAS DE MEMBRANA Pueden ser transportadoras, pueden ser un canal inico, pueden ser una bomba, pueden ser un Carrier, puede tener actividad enzimtica una protena, una enzima membrana, puede ser un receptor de una superficie celular y por ejemplo ser receptor de acetilcolina o ser receptor de un factor de transformacin, o ms bien no, no de transformacin podra ser un receptor de insulina por ejemplo. Vemos una glicoprotena que en este caso dice marcador de identidad, o sea podra ser un marcador

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correspondiente de los grupos sanguneos de algn eritrocito en particular, para la accin clula-clula, a travs de protenas que estn en las membranas de cada clula, que estn vecinas o a travs de esta protenas que estn en las membranas, atravesndolas hacia el anclaje con el citoesqueleto y que dijimos que tambin pueden hacer anclaje con la matriz extracelular, o sea, algunas funciones importantes de protenas de membrana. Si alguna protena de membrana tiene alguna falla, por ejemplo, no existe en una cantidad suficiente, no est en el lugar indicado o sencillamente no est presente, va a haber problemas con regulacin, con transporte e integracin del tipo celular de los tejidos, consecuencia principalmente de mutacin o tambin protenas daadas en el proceso de sntesis o que son susceptibles a toxinas. PROTENAS DE MEMBRANA Y PATOLOGAS HUMANAS Las protenas de membrana contribuyen a enfermedades humanas al provocar fallas en regulacin, transporte, o integracin celular de tejidos. Esto puede ser resultado de mutaciones (enfermedades hereditarias), protenas daadas, o susceptibilidad a toxinas. Hay cuatro modos distintos que pueden afectar el funcionamiento apropiado de protenas de membrana: o Sntesis defectuosa (transcripcin, traduccin) o Procesamiento defectuoso (plegamiento, ensamble, transporte intracelular) o Regulacin defectuosa (unin ligando, fosforilacin) Funcin defectuosa Enfermedades que implican a membranas son tambin el resultado de vas de sealizacin sin regulacin (receptor ADH) o de sistemas de transporte defectuosos (fibrosis qustica) Indicamos cuatro modalidades para afectar el funcionamiento adecuado de protenas de membrana: uno es que la sntesis est fallada y eso puede ocurrir a nivel de la transcripcin como de la traduccin. Que el procesamiento de la protena sea el defectuoso, puede haber una falla en el plegamiento, una falla en las contra chaperonas, en el ensamble si es que tiene que asociarse con otra protena o con otra macromolcula o en el transporte intracelular, puede ser transportada a un sitio donde no corresponde. Puede haber una regulacin inadecuada, es decir, por ejemplo un receptor que tenga una falla para vivir en ligando en forma eficiente o que haya una falla en la fosforilacin, que la regulacin est dada por la fosforilacin y el sitio de fosforilacin est anmalo. Puede haber una funcin defectuosa de la protena, o sea las posibilidades de que eso lleve a patologa son muy elevadas. Sealo adems de que hay enfermedades que estn relacionadas con membranas y que son resultado de vas de sealizacin sin regulacin, por ejemplo de receptor de ADH, que hay una falla a nivel de receptor de ADH, y eso puede conducir por ejemplo a una diabetes inspida nefrognica o los sistemas de transporte sean defectuosos como es el caso de un canal de cloruro que conduce al problema de la fibrosis qustica, o sea queda claro la relacin de protenas de membrana con enfermedades que nos toca padecer. o DOMINIOS EN LAS MEMBRANAS Y POLARIDAD CELULAR: El movimiento de de las protenas en las membranas plasmticas puede estar restringido por: o Unin al citoesqueleto o Unin extracelular o Unin a otras clulas o Barreras de difusin o Unin oclusiva

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Lo anterior, genera dominios en las membranas celulares. Los dominios son cruciales para las funciones de clulas polarizadas (epitelio intestinal, tbulos renales) o MICRODOMINIOS LIPIDICOS RAFTS: Los rafts son zonas de las membranas ms ordenadas, de mayor grosor y menos fluidas que regiones vecinas ricas en fosfolpidos. Raft: regin de la membrana que presenta colesterol y esfingolpidos y que segrega de los otros lpidos, y que puede a su vez concentrar ciertas protenas permitindoles funcionar en conjunto. Las protenas ancladas por GPI, estn asociadas a rafts. Los rafts participaran en polarizacin y trfico de membranas, transduccin de seales e infeccin viral.

Brevemente en todo aquello las membranas y polaridad celular, hemos visto de alguna manera que el movimiento de protenas en las membranas est restringido porque pueden estar unidas a citoesqueleto, pero puede ocurrir adems que estn unidas a la matriz extracelular y por lo tanto estar restringido a un movimiento o estar formando parte de interacciones con la membrana de otra clula vecina o puede ocurrir que est restringida a una clula en particular. En una clula epitelial, por ejemplo esta sera la membrana apical y que no puede pasar hasta esta otra zona, sera la vasolateral o estas protenas ac a la zona apical porque hay una restriccin dada tambin por protenas de membrana en ese caso particular por uniones apretadas donde hay ganglios que impiden la difusin, aqu no estn ancladas pero no pueden por esta restriccin entrar a anclarse y esto genera por lo tanto la polaridad. Este polo es distinto a este otro y tienen funciones distintas, podemos llamarlos tambin dominios y eso se visualiza principalmente en intestinos y en riones. o CARBOHIDRATOS DE MEMBRANAS: Estn unidos covalentemente a lpidos o protenas en la superficie de la membrana de clulas eucariticas. Todos los carbohidratos estn orientados hacia el espacio extracelular de la membrana plasmtica o hacia el interior en los organelos. Los carbohidratos de la superficie externa de la membrana plasmtica constituyen el glicocaliz Muchas de las protenas de membranas plasmticas tienen azcares unidos a ellos: oligosacridos unidos covalentemente a residuos de Ser, Thr o Asn glicoprotenas, y polisacridos- Proteoglicanos. Las glicoprotenas tienen una importante participacin en: reacciones antgeno-anticuerpo, funcin hormonal, catlisis enzimtica e interacciones clula clula, proteccin/ lubricante. Los carbohidratos, estn covalentemente unidos a lpidos y a protenas, ahora en las membranas plasmticas ellos se ubican siempre hacia la cara no citoslica, hacia el espacio extracelular y en el caso de organelos, estn hacia el interior. En el caso de la superficie externa esos carbohidratos estn unidos a lpidos y a protenas constituyen el glicocaliz, que es de espesor variable dependiendo del tipo de clula y que esencialmente tiene una funcin de proteccin y tambin de reconocimiento. Ahora, estos

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oligosacridos pueden estar unidos a residuos de Serina, Treonina o Esparragina, de protenas obviamente, constituyendo las glicoprotenas o bien son polisacridos los que estn unidos a protenas que se llaman en este caso proteoglicanos. Importantes estos componentes, pues participan en reacciones antgeno-anticuerpo, funcin hormonal, catlisis enzimtica, en interaccin clula-clula, por lo tanto reconocimiento celular, proteccin y lubricantes, sobretodo en el caso de los proteoglicanos, hay algunos glicoaminoglicanos que estn en la zona de la rodilla, constituyendo parte del lquido sinovial y tienen que ver justamente con lubricacin de la articulacin. o FUNCIONES DE CARBOHIDRATOS DE MEMBRANA

El glicocaliz protege a la superficie celular del dao mecnico y qumico. En la imagen vemos microvellosidades a nivel de epitelio intestinal, se ve que el glicocaliz tiene un espesor ms o menos significativo, son los oligosacridos unidos a las protenas de la membrana plasmtica de estas clulas. En el caso de los ganglisidos, estn en la membrana y esos podran ser perfectamente sitios de interaccin y aqu vemos GM1para la bacteria del clera, podra ser perfectamente que una bacteria pudiera unirse y entrar o un virus interaccionar tambin y entrar, hay otras funciones que permiten por ejemplo de que ocurra el fenmeno que estn circulando los linfocitos, y de repente se produce una herida y ah se produce una liberacin de estas citoquinas, que son seales qumicas y hacen que se enlentezca el movimiento de estos linfocitos que tienen glicolpidos, o sea tienen hidratos de carbono en la membrana y esos reconocen a otros hidratos de carbono que estn en la membrana del endotelio y se van enganchando hasta que se detienen y ah ocurre el movimiento e ingresan a la zona de inflamacin, ah tenemos una funcin que es positiva, las otras son todas negativas. Pero no piensen ustedes que los carbohidratos son malos, tienen que ver (sobre todo en el aspecto de la interaccin clula-clula) con la coordinacin y regulacin de la adhesin, crecimiento, diferenciacin y tamao de las clulas, o sea toda a nivel de embriognesis. Si se altera alguno de estos procesos se puede perder, por ejemplo, el control de la adhesin celular y del crecimiento y eso podra gatillar, o conduce finalmente, o podra conducir a un cncer. Hay evidencia que dice que modificaciones de la estructura de estas glicoprotenas y de los glicoconjugados que estn en las membranas de clulas cancerosas tendran que ver con el fenmeno de metstasis. En el problema de rechazo de trasplantes de tejidos, tambin tiene que ver con estos glicoconjugados de membranas, porque si no reconocen a la contraparte, el organismo rechaza con su mecanismo inmunolgico esos tejidos y no prenden. En la interaccin clula-clula, el rol de los hidratos de carbono es la coordinacin y la regulacin de la adhesin, crecimiento, diferenciacin, y tamao de las clulas. La alteracin de estos procesos pueden conducir a la prdida del control de la divisin celular y del crecimiento (cncer). Se cree que alteraciones en la estructura de glicoprotenas y otros glicoconjugados presentes en la superficie de clulas cancerosas son importantes en el fenmeno de metstasis. Tambin los azcares participan en el rechazo de tejidos transplantados ESTRUCTURAS ASIMTRICAS = FUNCIONES ASIMTRICAS: Hay 3 niveles de asimetra en las membranas: o Asimetra de lpidos: Los lpidos de membrana plasmtica estn distribuidos asimtricamente entre las dos monocapas. En la membrana de eritrocito, PC y SM (colina) predominan en la superficie externa y PS y PE (amino) en la superficie interna. La presencia de PS en la superficie externa, indica que una

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I clula est muerta o muriendo, y es una se seal para su destruccin. Los lpidos de la membrana plasmtica estn distribuidos asimtricamente entre las dos monocapas lipdicas. El flipping de PS y PE es mediado por una ATPasa tipo P, Flipasa o translocasa de lpidos. El flopping de fosfolpidos es catalizado por transportadores ABC. Escramblasas randomizan y colapsan la asimetra de los lpidos.

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Si uno analiza la composicin en la capa externa o interna de la bicapa se encuentra que hay fosfatidilcolina y esfingomielina preferentemente en la superficie externa y fosfatidiletanolamina y fosfatidilselenina en las caras citoslica. Hay una asimetra lipdica, estos principalmente son los resultados de membranas de glbulos rojos. Cmo se genera esto? El ingreso (Flip), o la salida (Flop), no es espontnea, para eso existe una enzima que es del tipo ATPasa, de tipo P, que permite el ingreso del fosfolpido (Flipasa) y que de la misma manera deje un fosfolpidos que estaba en la cara citoslica, en la cara externa (Flopasa). Tambin hay unas enzimas que se llaman scramblasas y que mueven indistintamente a los fosfolpidos. Es importante aqu, la fosfatidilserina est ubicada esencialmente en la cara citoslica y que en ciertos eventos, como por ejemplo la coagulacin o clulas en apoptosis, en las que la fosfatidilserina aparece en la cara externa, algo va a provocar el movimiento y eso va a ser seal para que la clula sea eliminada del organismo por muerte celular. o Asimetra de Protenas

Las protenas transmembrnicas tales como receptores, transportadores, canales, etc. atraviesan la bicapa lipdica con orientaciones especficas cruciales para su funcin. En particular, la (s) misma (s) parte (s) de una protena determinada siempre asoma hacia el citosol, mientras las, otras partes de la protena asoman hacia el espacio exoplsmico. o

Asimetra de Carbohidratos

Las glicoprotenas transmembrnicas estn siempre orientadas de modo que las cadenas de hidratos de carbono estn en el dominio exoplsmico. Los glicolpidos, en los cuales una cadena de carbohidratos estn unidas a esfingosina, estn siempre localizadas en la cara exoplsmica con la cadena oligosacrida emergiendo de la superficie de la membrana plasmtica

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I MOSAICO FLUIDO (MODELO DE MEMBRANA, (SINGER Y NICHOLSON, 1972): Lpidos anfipticos que son estabilizados por interacciones hidrofbicas que forman la bicapa lipdica. Es una estructura fluida, con una fluidez regulada por el nmero de dobles enlaces en los cidos grasos (aumento de la instauracin incrementa la fluidez) y el contenido de colesterol (incremento de colesterol disminuye la fluidez). Asimetra. Los componentes de las membranas estn asimtricamente orientados: las dos caras son diferentes. Movimiento lateral. Los componentes son libres de moverse lateralmente, el flip-flop no es permitido termodinmicamente (se necesita una Flipasa o un transportador) o

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RESUMEN o Las membranas son estructuras como lminas, slo de 2 molculas de espesor, que forman lmites cerrados entre diferentes compartimientos. El espesor de la mayor mayora de las membranas est entre 6 nm y 10 nm. o Compuestas principalmente de lpidos y protenas. La razn de sus masas va de 1:4 a 4:1. Tambin contienen carbohidratos que estn unidos covalentemente a lpidos y protenas. o Los lpidos de membrana son molculas relativamente pequeas que poseen regiones hidroflicas e hidrofbicas (anfipticas). Forman espontneamente capas bimoleculares cerradas en medio acuoso. o Estas bicapas lipdicas son barreras al flujo de molculas polares (sin o con carga el elctrica) a travs de las membranas. o Las membranas pueden ser consideradas como soluciones bidimensionales de protenas y lpidos orientados. o Protenas especficas median las distintas funciones de las membranas. Como bombas, canales, receptores, transductores de energa y enzimas. Las protenas estn embebidas en bicapas lipdicas, las cuales generan un medio ambiente adecuado para su accionar. o Son ensamblajes no covalentes. Las protenas y lpidos constituyentes, se mantienen unidos por numerosas interacciones no covalentes, las cuales son cooperativas. o Son asimtricas. Las dos caras de las membranas biolgicas siempre difieren una de otra. o Son estructuras fluidas. Los lpidos difunden en el plano de la membrana, al igual que las protenas siempre que estas ltimas no estn ancladas por interacciones especficas. En contraste, los lpidos y las protenas no experimentan flip-flop. o La mayora de las membranas celulares estn polarizadas elctricamente (interior es negativo). El potencial de membrana juega un rol protagnico en el transporte, conversin de energa y excitabilidad.

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I 3. TRANSPORTE EN MEMBRANA CARACTERSTICAS DE LA MEMBRANA La membrana plasmtica es selectivamente permeable permitiendo slo el paso de determinados solutos a su travs. Este flujo de material ocurre gracias a procesos fisiolgicos conocidos como Transporte Biolgico. Esta caracterstica es importante para mantener la simetra inica. La permeabilidad selectiva de la membrana celular posibilita a las clulas mantener un medio interno constante Los compartimientos celulares estn en un estado de equilibrio dinmico. Qu quiere decir equilibrio dinmico?: Que no es esttico sino que mantiene un balance continuo entre flujos de entrada y salida de energa e informacin a travs de las membranas. Sin embargo, no siempre la concentracin de los elementos es igual en ambos compartimientos habiendo mecanismos que se encargan de mantener esta diferencia. En estos procesos de transporte participan primordialmente protenas Sin embargo, en el transporte de molculas relativamente grandes ocurre por medio de procesos especializados, exocitosis y endocitosis La bicapa lipdica es impermeable a iones y molculas polares sin importar el tamao. Porque el trabajo que ay que realizar para mover un ion de un compartimiento a otro a travs de la membrana es muy grande. Algunos textos dicen que la membrana es permeable a gases como CO2, O2 y N2, que etanol pasa a una velocidad importante y que el agua pasara entre la membrana.

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MODALIDADES DE TRANSPORTE BIOLOGICO MEMBRANA Las principales modalidades de transporte son: Transporte Pasivo Transporte Activo: Primario y Secundario

TRAVS

DE

LA

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SISTEMAS DE TRANSPORTE MEDIADO Y SU VELOCIDAD DE TRANSLOCACIN

Ac se sealan las distintas velocidades de transporte 1. Bomba, protena de membrana, que transporta en contra de gradiente. Necesita energa para movilizar en contra de gradiente 2. Canal inico que permite el paso de iones a favor del gradiente A. Es Uniportador pues permite el traspaso de una molcula a favor de gradiente mediante una protena de membrana B. Es Simportador pues permite el traspaso de 2 molculas, una a favor y otra en contra de su gradiente en una misma direccin. Lo realiza aprovechando la energa del que va a favor de gradiente C. Es Antiportador pues permite el traspaso de 2 molculas una a favor y otra en contra de su gradiente pero en distintas direcciones

DIFUSION LIBRE Es un proceso de transporte pasivo por el cual solutos fluyen a favor de un gradiente de potencial electroqumico a travs de una membrana que separa compartimientos acuosos. Este proceso ocurre en medio lquido o gaseoso que son fluidos. (A diferencia de difusin simple que es mediante una membrana) o Ocurre debido al movimiento trmico aleatorio de las molculas de solvente y del soluto en solucin o El flujo neto de soluto cesa cuando las concentraciones de soluto alcanzan un equilibrio dinmico El flujo a travs de una membrana puede ser impulsado por una o Diferencia de concentracin (iones y solutos no cargados) o Diferencia de potencial elctrico (iones) o Diferencia de presin hidrosttica Las molculas que se transportan mediante estos mecanismo son molculas hidrofbicas O2, NO2, CO2, cidos grasos, esteroides, vitaminas liposolubles (A, D, E, K). Tambin a molculas polares pequeas como agua y urea

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Actualmente, resultados experimentales demostraran que el CO2 se mueve a travs de un canal particular, una acuaporina que mueve aprox. 3x10 molculas de agua/seg. Esta difusin es importante en procesos de intercambio de nutrientes, desechos y gases La difusin simple de un soluto liposoluble a travs de una membrana est regido por la siguiente reaccin

Js es flujo / A es rea / D es coeficiente de difusin La velocidad de difusin a travs de la bicapa es directamente proporcional a: o La T o La liposolubilidad del soluto () o Al gradiente de potencial electroqumico o Al rea de difusin E inversamente proporcional a o Espesor de membrana (x) o Y al r del soluto Entonces si aumenta (ms liposoluble) o r disminuye, o C aumenta, o bien T aumenta, entonces la velocidad de paso a travs de la membrana incrementa El coeficiente de permeabilidad (Ps), da un ndice de la facilidad con que un soluto difunde a travs de una membrana dada. Los Ps de eritrocitos para diferentes -12 -2 solutos varan de 10 a 10 (cm/seg) COEFICIENTE DE PERMEABILIDAD (Ps) DE IONES Y SOLUTOS ORGANICOS EN BICAPA Un investigador encontr que la velocidad de difusin de un soluto depende de un coeficiente de permeabilidad que fueron calculados en plantas Ps depende del soluto y la membrana a travs de la cual sucede la difusin de soluto Ps es un ndice de la facilidad con que un soluto difunde a travs de una membrana determinada Factores que favorecen la difusin: mayor gradiente, menor tamao, mayor temperatura, mayor coeficiente de particin lpido / agua, mayor liposolubilidad. Observar que el coeficiente de permeabilidad de iones es muy baja DIFUSION SIMPLE Un ejemplo de difusin simple es el intercambio gaseoso en los pulmones ocurre por difusin simple Como especificidad se considera que es un tipo de difusin libre que se produce en una membrana La concentracin de CO2 es baja en el aire alveolar y alta en la sangre, por tanto el CO2 difundir hacia el aire en los alvolos La concentracin de O2 es alta en los alvolos y baja en la sangre, as el O2 difundir hacia la sangre Ambos eventos difusivos suceden simultneamente

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OSMOSIS Flujo pasivo de agua a travs de una membrana selectivamente permeable a favor de gradiente de actividad qumica del agua. De un compartimiento con mayor actividad qumica a uno de menor. La tendencia de una solucin a captar agua cuando est separada por una membrana semipermeable de agua pura o de una solucin de menor concentracin se debe a su presin osmtica () La es una propiedad coligativa, es decir depende de la cantidad de partculas. La de agua pura es 0, y la de una solucin es proporcional a su osmolaridad. = RTiC, en que = coeficiente osmtico, i = nmero de partculas en la solucin y = coeficiente de reflexin (de 0 a 1) que toma en cuenta el hecho que el soluto puede no atravesar la membrana sino rebotar. Si atraviesa, su valor es 0. Respecto a i, si tenemos NaCl en solucin 1mM, en trminos de concentraciones osmticas, como son 2 partculas que se disocian sera 2mOsM. No as la glucosa que, por ejemplo, no se disocia es una medida de las permeabilidades de la membrana al soluto y al solvente y puede calcularse a partir de la relacin = 1 (P soluto / P agua) Las protenas presentes en el interior celular generan la presin osmtica, importante en los procesos de filtracin y absorcin a nivel de los capilares sanguneos. Cuanto ms permeable es una membrana a un soluto dado, menor es el flujo osmtico que puede producir o Solutos impermeantes ( = 1). En una primera aproximacin, las clulas se comportan como un osmmetro ideal en soluciones con solutos impermeantes o Solutos permeantes (0 1) Eventualmente este tipo de soluto se va a equilibrar a travs de la membrana, as que ejercen slo un efecto transitorio sobre el volumen celular Cuanto mayor es la permeabilidad de la membrana al soluto permeante, ms rpidos son los cambios transitorios de volumen

TONICIDAD La capacidad de una partcula de producir un cambio en el volumen celular estado estacionario se conoce como tonicidad Diferencias de pueden causar slo un cambio en el volumen celular de estadio estacionario si las partculas que crean la son impermeantes Una solucin extracelular que causa una salida de agua se designa como hipertnica Una solucin que no produce cambios en el volumen intracelular se denomina isotnica COMPORTAMIENTO OSMOTICO CELULAR EN SOLUCION DE SOLUTOS PERMEANTES Qu sucede si se colocan eritrocitos en una solucin de NaCl 300 mOsm + glicerol 100 mOsm? Y qu sucede si se colocan eritrocitos en una solucin de NaCl 250 mOsm + glicerol 100 mOsm? Una solucin hiperosmtica puede ser: hipotnica, isotnica o hipertnica Una solucin hipoosmtica es hipotnica

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COMPOSICIONES QUIMICAS LEC y LIC En los capilares casi todas las partculas disueltas en el plasma excepto las protenas atraviesan sus membranas y no provocan flujo de agua entre ellos y el LIS Las protenas plasmticas tienen una concentracin aprox. 1,2 mOsm/L generando una (presin onctica) de aprox. 23 mmHg que mueve agua desde el LIS hacia los capilares Tal presin es contrabalanceada por la presin hidrosttica generada por el corazn

Es necesario tener conocimiento de las distintas soluciones y el tipo de tonicidad y osmolaridad en uso clnico de soluciones varias. ALGUNOS ASPECTOS DE IMPORTANCIA CLINICA Na+ es el principal constituyente activo del compartimiento extracelular, LEC. Por lo tanto, cambios en la concentracin plasmtica de Na+ van a provocar un flujo osmtico de agua entre el LEC y el compartimiento intracelular LIC El aumento de concentracin extracelular de urea causado por falla renal no provoca un flujo de salida (eflujo) de agua. (El LEC es hiperosmtico y no hipertnico) Por qu? Por otro lado, el aumento de la concentracin de glucosa producida por diabetes mellitus produce una salida de agua desde las clulas (deshidratacin) debido a la falta de insulina que disminuye la permeabilidad de la membrana a glucosa (el LEC es hiperosmtico e hipertnico) LAS ACUAPORINAS Aumentan la permeabilidad del agua Son canales especficos para agua y pareciera que tienen que ver con glicerol y CO2 Muy importantes en regulacin del contenido acuoso celular 9 Transportan a una tasa de aprox. 10 molculas de agua/seg. Son impermeables a especies cargadas, como los H+ Hay una relacin con patologas como Cataratas y diabetes inspida nefrognica, han sido relacionadas con acuaporinas defectuosas

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Este es un experimento realizado en ovocitos. Lo que ocurre es que a uno se le inyectan mensajeros que codifican acuaporinas para producir considerando que en ovocitos no se expresan. Luego al estimular su produccin se deposita en un medio hipotnico, as se produce la entrada masiva de agua provocando la lisis del ovocito

MODELOS DE ACUAPORINAS

NPA= permite romper los enlaces puentes de hidrgeno y facilitar el paso de la molcula de agua

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I FAMILIAS DE LAS ACUAPORINAS: De importancia AQP 0, 2, 4 DISTRIBUCION DE ACUAPORINAS

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REGULACION DE ACUAPORINA 2 POR VASOPRESINA Tenemos un receptor V2 que une laADH. Luego se desencadena a travs de una protena G-adeninciclasa que sintetiza a partir de ATP a AMPc que activa una enzima kinasa que va a fosforilar un sustrato provocando que vesculas se unan con la membrana y aumente el nmero de acuaporinas. La fosforilacin de AQP2, ubicadas en la membrana de vesculas intracelulares, por accin de una va de sealizacin intracelular, gatillada por la unin de ADH a su receptor en el lado basolateral de las clulas de los tubos colectores, produce la insercin de AQP2 en la membrana apical Entonces el agua pasar la membrana apical va AQP2 y luego dejar las clulas por el lado basolateral va AQP3 y AQP4 compensando as una hipovolemia o una hipernatermia Mutaciones en el gen que codifica la AQP-2 pueden provocar diabetes inspida nefrognica en humano por falla parcial o completa de respuesta renal a la ADH. En el caso de AQP2 hay una mutacin en cambio de Arg por una Cys Cuando falla la secrecin de ADH, se trata de diabetes inspida central (neurognica)

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ACUAPORINAS RENALES

COMO ATRAVIESAN LA BICAPA LIPIDICA DE LAS MEMBRANAS LOS SOLUTOS POLARES Y LOS IONES? Para el pasaje de solutos polares con carga o sin carga elctrica, las membranas biolgicas tienen protenas integrales, bombas, transportadores y canales Estas protenas al interaccionar en forma especfica con los solutos disminuyen las barreras de energa para atravesar las membranas, posibilitando el transporte Un transportador puede reducir el cambio de energa libre al interaccionar en forma no covalente con el soluto deshidratado, reemplazando las capas de solvatacin y proporcionado una va transmembrnica hidroflica

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I EL transporte mediado utiliza una protena de membrana denominada transportador, portador o carrier (a veces de les llama permeasas) La translocacin del soluto es ms rpida que en la difusin simple El transporte mediado est caracterizado por una cintica de saturacin Los carriers presentan tambin especificidad qumica y estereoqumica para las molculas, por ejemplo, el transportador de glucosa transloca D-glucosa pero no L-glucosa Este transporte mediado presenta adems el fenmeno de inhibicin especfica

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TRANSPORTE MEDIADO PASIVO O DIFUSION FACILITADA Mediado por una protena transportadora o carrier o Es saturable (cintica de saturacin): cuando la concenteacin de un soluto es alta, y el nmero de transportadores es finito, alcanza un transporte mximo o Es estereoespecfico: transporta a un ismero D y no a L por ejemplo o Presenta inhibicin especfica: si hay un soluto estructuralmente pasivo, hay pelea por el sitio de unin del carrier disminuyendo el flujo Posee una Kt= constante de transporte. Es la concentracin de un soluto para alcanzar la mitad de la velocidad mxima o GLUT1 tiene K1 diferentes o Kt D-glucosa = 1,5 mM, Kt D-manosa = 20mM, Kt D-galactosa= 30mM, Kt L-glucosa > 3000mM o D-fructosa no es transportada Se cree que el transportador GLUT funciona por un mecanismo de conformacin alternante Ocurriran una seria de cambios conformacionales del transportador a estados alternantes que presentan sitios de unin para el (los) soluto(s) y miran hacia el lado extracelular (conformacin exofacial) o hacia el lado citoplasmtico (conformacin endofacial) Los GLUT presentan una conformacin proteica similar: son glicoprotenas de 45 a 55 kDa con doce dominios trasmembranales en estructura alfa hlice. Los extremos N y C terminales, al igual que una gran asa central, se localizan en el citoplasma. Adems presentan un sitio de glicosilacin en la regin externa de la membrana Cada una de las diferentes isoformas de los GLUT tiene una ubicacin y caractersticas cinticas propias, adaptadas a las necesidades metablicas del organismo Para que se efecte el ingreso de la glucosa, se deben formar previamente uniones dbiles tipo puentes de hidrgeno entre los grupos hidroxilo y carbamino del GLUT y los grupos hidroxilo de la glucosa Este transporte puede ocurrir en cualquier direccin, lo cual va a depender directamente de la direccin del gradiente de concentracin TRANSPORTE MEDIADO PASIVO DE GLUCOSA La D-glucosa se unira en forma especfica en una regin del GLUT expuesta en la superficie celular externa, lo cual provocara un cambio conformacional del GLUT de forma que se abrira un canal en la protena disminuyendo la afinidad del GLUT por la hexosa (disociacin) y permitiendo el paso del azcar a su travs para finalmente liberarla en el interior de

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I la clula. Segn este modelo, el transportador al liberal al soluto recuperara su conformacin inicial quedando listo para unirse nuevamente a otra molcula de hexosa Importante destacar GLUT2 que se ubica en las clulas B del pncreas e intestino delgado por su funcin de sensor de glucosa en el pncreas y transporta glucosa en la membrana basolateral o serosal. Tambin destacar que GLUT4 es estimulado por insulina La diferencia entre un GLUT y un SGLT es que el primero es por difusin facilitada y el SGLT es transporte activo. El transporte masivo o difusin facilitada de azcares involucra a una familia de transportadores de hexosas conocidos como GLUTs, estructuralmente relacionados pero codificados por diferentes genes y expresados de una forma tejido-especfica Cada uno de los GLUTs tiene diferentes afinidades (Kt) para la glucosa y las otras hexosas, lo cual determina sus funciones SECRECION DE INSULINA ESTIMULADA POR GLUCOSA En una clula beta del pncreas hay GLUT2. Si hay una ingesta elevada de carbohidrato, hay una elevacin de la glicemia. La glucosa viaja y llega a este territorio y este GLUT2 transporta la glucosa para ser metabolizada que finalmente conduce a la produccin de ATP con disminucin del MgADP. Y este ATP es capaz de interaccionar con un canal de K+ que se abre o cierra en respuesta a un ligando que en este caso por accin de ATP se cierra evitando el eflujo de K+ quedando cargas positivas y generando un campo elctrico p r o v o c a n d o u n a d

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epolarizacin de la membrana que abrir un canal de Ca+2 e ingresa favoreciendo la secrecin de insulina Cuando sube el nivel de glucosa plasmtica, sta es transportada a la clula beta del pncreas vas GLUT2 (funciona como un sensor) provocando un aumento del metabolismo de glucosa y de ATP El incremente de ATP produce el cierre del canal de K+ y la depolarizacin de la membrana que va a activar canales de Ca+2 El aumento temporal de Ca+2 interior lleva a la exocitosis de insulina

INSULINA ESTIMULA CAPTACION DE GLUCOSA EN MUSCULO ESQUELETICO Y ADIPOCITOS: INSERTA CARRIERS DE GLUCOSA

Despus de una comida, cuando la glucosa sangunea aumenta sobre su valor normal de 5mM, las clulas beta del pncreas responden secretando insulina a la sangre La insulina circula en la sangre y se una a los receptores de membrana de miocitos y adipocitos El receptor de insulina puede transducir seales a travs de una va que activa a protena quinasa B la cual por un mecanismo no conocido gatilla el movimiento desde un pool citoplasmtico de vesculas conteniendo la mayora de los GLUT4 y a la posterior fusin de dichas vesculas intracelulares con la membrana plasmtica Con el aumento del nmero de GLUT4 en la superficie celular se incrementa el influjo de glucosa bajando as la glicemia

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Al removerse posteriormente la insulina, los GLUT4 son internalizados por Endocitosis, disminuyendo la cantidad de transportadores en la superficie y por ende el influjo de glucosa a la clula INSULINA ESTIMULA CAPTACION DE GLUCOSA EN HEPATOCITOS: SE SINTETIZA POLIMERO (GLICOGENO)

TRANSPORTE MEDIADO ACTIVO Los solutos son translocados a travs de las membranas mediante protenas transportadoras o carriers en contra de una diferencia de potencial electroqumico Presenta cintica de saturacin, estereoespecificidad e inhibicin especfica al igual que la difusin facilitada Este tipo de transporte requiere energa Existen 2 tipos de transporte activo o Transporte activo primario, necesita un aporte directo de energa metablica (ATPasas) o Transporte activo secundario, la fuerza impulsora es el gradiente de concentracin de un in. Usa indirectamente energa metablica (Transporte de glucosa en epitelio intestinal y renal)

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I Quines realizan el transporte activo? Las ATPasas que son de distintas clases BASES MOLECULARES DEL TRANSPORTE ACTIVO PRIMARIO IMPULSADO POR ATP 1. ATPasa Na+-K+`dependiente (BOMBA DE SODIO)

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Est presente en la membrana plasmtica de todas las clulas animales. Es un tetrmero 22 Es una bomba clase-P, su subunidad (cataltica) es fosforilada por ATP en un residuo aspartil especfico Estequiometria: Mueve 3 Na+ por 2 K+ (bomba electrognica) por 1 ATP Inhibidor especfico: La ouabana (glicsido cardaco) es un potente inhibidor especfico En la mayora de las clulas se emplea en estas bombas aprox. El 30% de la energa total (en neuronas el 70%) o Mantiene los gradientes de Na+ y K+ o Regula el volumen celular

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I o o o Contribuye al potencial de membrana Impulsa el transporte activo secundario de azcares y aminocidos La bomba de sodio es un sensor del Na+ intracelular

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EL TRANSPORTE DE Na+ y K+ OCURRE EN UN CICLO DE CAMBIOS CONFORMACIONALES DE LA BOMBA DE SODIO La bomba de sodio presenta ciclo de cambios conformacionales Como ocurre con todas las bombas tipo-P, la subunidad de las ATPasas Na+-K+, es fosforilada covalentemente (en un residuo aspartil) reversiblemente con ATP provocando un cambio conformacional (E1 E2) esencial para el transporte de Na+ a travs de la membrana Los cambios conformacionales son necesarios para cambiar la afinidad de la protena transportadora por los dos cationes que transloca La conformacin E1 presenta alta afinidad por el Na+ y una baja afinidad por el K+ por el lado citoslico. La conformacin E2 a su vez, presenta baja afinidad por el Na+ y una alta afinidad por K+ por el lado no citoslico La reversin de E2 a E1 es provocada por la desfosforilacin del residuo aspartil al unirse el K+ al confrmero E2

ACCION TERAPEUTICA DE ESTEROIDES CARDIOTONICOS TALES COMO OUABAINA Y DIGITOXIGENINA La ouabana acta por el lado externo de la membrana plasmtica e impide la desfosforilacin de la bomba. La inhibicin especfica por ouabana de la ATPasa Na+-K+ disminuye el gradiente Na+ en las clulas y por tanto la actividad del intercambiador Na+/Ca+2 presente en ellas La ouabana fortalece la contraccin del msculo cardaco sin aumentar la frecuencia cardaca y as mejora por lo tanto la eficiencia del corazn No se desfosforila la bomba, luego no permite la entrada al potasio

2. ATPasa Ca+2 DE MEMBRANA PLASMTICA BOMBEA AL Ca+2 DESDE LAS CLULAS HACIA EL EXTERIOR Principales funciones: neurosecrecin, contraccin muscular, metabolismo celular, control de canales inicos, expresin gnica, necrosis y apoptosis

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Aqu tenemos la zona de una regin muscular. Puede venir un impulso nervioso que abrir un canal de Ca+2 de esta clula. Ingresa Ca+2 provocando la salida de ms Ca+2 de R.S. actuando sobre el receptor de rianodina que luego provocar la contraccin muscular. Adems de una subunidad cataltica cataltica, presente en otras bombas tipo P, las bombas de calcio plasmamembranales posee un sitio regulatorio de unin para el complejo calmodulina-calcio Un aumento de Ca+2 citoslico induce su unin a calmodulina protena ligadora del calcio El complejo calcio-calmodulina resultante gatilla la activacin alostrica de la bomba de calcio Como resultado de lo anterior el eflujo (flujo de salida) del ion calcio se acelera y luego se restaura rpidamente la baja concentracin citoslica de Ca+2 libre (aprox 0,1M)

REGULACION DE ATPasa Ca+2 DEL RETCULO SARCOPLSMICO POR FOSFOLAMBAM Adems de la ATPasa-Ca+2 de la membrana plasmtica, las clulas musculares poseen una segunda bomba en la membrana del retculo sarcoplsmico (R.S) que mueve el ion desde el citosol al lumen del organelo y que es crtica en la contraccin y relajacin muscular. Estas bombas transportan 2 Ca+2 por mol de ATP Las membranas del R.S. del msculo cardaco, esqueltico lento y liso poseen una protena reguladora de las bombas de calcio, llamada fosfolambam Esta ltima protena es fosforilada por protenas kinasas como respuesta a una seal (neurotransmisor). El fosfolambam fosforilado produce la activacin de la bomba de calcio y el ion es transportado al lumen del R.S. donde se une a calsecuestrina, protena ligadora de Ca+2

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3. ATPasa H+-K+ Media la secrecin cida (Ach, gastrina, histamina). Est ubicada en la membrana apical de las clulas parietales y oxnticas del estmago exportando H+ en intercambio por K+ extracelular. Tiene que ver con la secrecin gstrica K+ es removido por un canal de K+. En la membrana basolateral hay un antiportador que intercambia HCO3- y Cl+ HCl es el producto final de este transporte en el lmen del estmago Estructuralmente es muy similar a las ATPasa Na+-K+ y a la ATPasa Ca+2 Es una bomba no electrognica, bombea H+ hacia afuera y un K+ hacia dentro La ATPasa H+-K+ es un importante blanco farmacolgico (omeprazol, iansoprazol) La cimetidina inhibe la activacin de la ATPasa H+-K+ por accin de histamina (receptor H2) Cmo acta?: Gastrina, Ach, histamina a travs de segundos mensajeros como Ca+2 y AMPc pueden activar una protenkinasa que va a fosforilar una bomba que mover protones en intercambio con iones K+ Permite regular la acidez de la clula CONTROL DE LA SECRECION ACIDA EN EL ESTOMAGO Aqu por ejemplo llega el alimento y esto gatilla la produccin de ATPasa en vesculas que produce una variacin de la morfologa de la membrana. As se produce HCl que se puede neutralizar con agentes de tipo bsico como (OH-) o bloqueadores de la bomba como omeprazol. El aumento de esta secrecin puede ser causante de alteracin nerviosa o presencia de bacteria como la Helycobacter pylori.

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Mdulo I: Clula La cimetidina por otra parte bloquea el receptor de histamina con el mismo objetivo de disminuir la secrecin gstrica 4. LA SUPERFAMILIA ABC (ATP BINDING CASSETTE) Los transportadores ABC de eucariontes, translocan diversos lpidos (esteroles, cidos grasos), sales biliares y numerosos compuestos hidrofbicos (drogad lipoflicas) Algunos funcionan como canales dependientes de ATP Hay uno en particular que es la MDR1 multi drug resistence (glicoprotena- P) expulsa desde las clulas a metabolitos y drogas. Normalmente es expresado en una amplia variedad de clulas, incluyendo las del hgado, rin y tracto gastrointestinal Este transportador tiene un rol importante y es clnicamente importante en pacientes con cncer. Por ejemplo, en hepatomas, los hepatocitos sobreexpresan MDR1 el cual bombea fuera de ellos drogas (adrimicina, vinblastina, doxorrubicina, taxol, colchicina, etc) tornando dichas clulas resistentes a la quimioterapia Mutaciones en genes que codifican algunas protenas ABC provocan patologa como fibrosis qustica, enfermedad de Tangier (relacionada con metabolismo de colesterol)

FIBROSIS QUISITICA

Fibrosis qustica resulta de un canal de K+ defectuoso CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) protenas transmembrnica relacionada estructuralmente a los transportadores multidroga La protena CFTR normal proporciona un canal especfico para ClDelecin de Phe508 (70% de los casos) causa su plegamiento errneo y previene la insercin a la membrana Otras mutaciones producen una protena insertada correctamente pero que no puede activarse por fosforilacin El mucus viscoso resultante y el cloruro elevado favorecen la colonizacin por las bacterias patgenas. S.aureurs y P.aeruginosa en los pulmones Pacientes de CF mueren jvenes, el 5% de caucsicos son portadores y asintomticos

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I BASES MOLECULARES DEL TRANSPORTE ACTIVO SECUNDARIO IMPULSADO POR GRADIENTE QUIMICO

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Existen dos mecanismo: o a)simporte: transporte activo secundario de un soluto o de uno o ms iones, generalmente impulsado por el gradiente de Na+, por ejemplo el simportador Na+/glucosa o b) antiporte o de intercambio El transportador tiene sitios de unin para el Na+ y el soluto, accesibles ambos desde el mismo lado de la membrana, y que slo pueden cambiar la conformacin cuando los dos sitios estn ocupados o cuando estn vacos Las clulas epiteliales intestinales usan el gradiente de Na+ para el ingreso activo de glucosa al enterocito (simportador Na+-glucosa). Un mecanismo similar es usado para el transporte de aminocidos en epitelio intestinal Tambin hay simportadores dependientes de Na+ para el transporte de neurotransmisores, colina y sales biliares

1. SIMPORTE ABSORCION DE GLUCOSA

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En las microvellosidades habra un transportador activo secundario que es el SGLT que en este caso es tipo 1 y se ubica en la membrana apical del epitelio intestinal. Mueve simultneamente glucosa y sodio. Su estequiometria es 2Na+ y una glucosa. La fructosa pasa por mecanismo de GLUT5 en el intestino y es recibido por GLUT2 en las clulas B del pncreas Tanto la glucosa, galactosa y fructosa se transportan por GLUT2 para el paso por la membrana basolateral hacia la sangre De importancia observar lo siguiente: el SGLT1 tiene un Km menor que le SGLT2, por lo que el 1 es ms afn que le segundo. Esto quiere decir que el SGLT1 con 0,3 mM funciona a la mitad de su velocidad, no as el segundo que necesita 1,6 mM para funcionar a la mitad de su velocidad. Sin embargo el que es menos afn tiene una capacidad de transporte mayor. Notar adems que SGLT1 est en el intestino delgado y rin. El SGLT2 tambin est en el rin (nefronaproximal) Por qu tenemos 2 transportadores que mueven glucosa? COTRANSPORTE DE GLUCOSA El transporte de glucosa es posible gracias a la existencia del gradiente de concentracin del Na+ desde el lumen intestinal hacia el interior celular Se produce as, un transporte simultneo y obligado (cotrasnporte) del azcar y el Na+ mediante un transportador SGLT1 ubicado en la membrana apical del epitelio intestinal La unin del Na+ permite la entrada de la glucosa y su unin al transportador lo que provocara un cambio conformacional en aquel que permitira al a translocacin simultnea del ion y el azcar a travs de la membrana apical y la liberacin posterior de ambas molculas en el interior del eritrocito La glucosa es luego transportada fuera de la clula intestinal a travs de la membrana serosa o basal hacia el torrente sanguneo por difusin facilitada mediante el GLUT2. La estequiometria del cotransportador Na+/glucosa es 2Na+ y una glucosa por ciclo de transporte

TRANSPORTE DE GLUCOSA EN EL RION

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2. ANTIPORTE Transporte de uno o ms solutos a favor de gradiente en una direccin y a uno o ms solutos en contra de gradiente en la direccin opuesta. Ya no es el ATP el que produce el cambio conformacional Hay antiportadores dependientes de Na+ (Na+/Ca+2, Na+/H+) e independientes de Na+ (H+/K+, HCO3-/Cl-) El antiportador Na+/Ca+2 es abundante en tejidos excitables (sistema nervioso y msculo cardaco (pero parece estar presente en todas las clulas del organismo excepto en eritrocitos) o Este antiportador intercambia 3 Na+/1Ca+2 (electrognico) o Junto con la bomba de Ca+2 (membrana plasmtica) ayuda a mantener la diferencia de potencial electroqumico para Ca+2 que existe normalmente a travs de las membranas plasmticas de todas las clulas Otro importante intecambiador es el de Na+/H+ principal mecanismo para la secrecin de H+ en la primera mitad del tbulo proximal y en la rama gruesa ascendente del asa de Henle. ANTIPORTADOR Na+/Ca+2 La ATPasa Na+/K+ dependiente en la membrana plasmtica de los cardiocitos general el gradiente de Na+ necesario para expulsar Ca+2 por medio de este antiportador La inhibicin de dicha bomba por ouabana aumenta la concentracin citoslica de Na+ y disminuye el gradiente electroqumico de Na+ a travs de la membrana con lo cual el eflujo de Ca+2 por el antiportador se reduce y el Ca+2 citoslico aumenta incrementando la fuerza contrctil del corazn. Aqu se muestra ouabana que inhibe a la bomba, luego aumenta el Na+ en LIC. Arriba se ve otra bomba que permite la entrada de Na+ por salida de Ca+2. Consecuencia de lo anterior el Na+ se acumula dentro, y por disminucin de su gradiente deja de efluir Ca+2 provocando una mayor contractibilidad del tejido muscular. TRANSPORTE EPITELIAL Ocurre por 2 vas: o 1. Va paracelular: reabsorcin de Ca+2, Mg+2, K+ y tambin agua a travs del tbulo proximal renal ocurre por esta va o 2. Va transcelular: reabsorcin de Na+ por el tbulo proximal. El Na+ se mueve pasivamente debido a un gradiente electroqumico favorable va canales apicales y por bombeo fuera de la clula tubular

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BASES MOLECULARES DEL TRANSPORTE IONICO CANALES IONICOS Son protenas integrales de membrana plegadas formando un poro a travs del que se transportan iones El tamao del poro y la densidad de cargas en su interior determinan su selectividad a los diferentes iones Pueden estar en un estado conformacional no conductor (cerrado) o conducto (abierto) La apertura o cierre est regulada por factores fsicos (voltaje, tensin mecnica) o qumicos (iones, neurotransmisores, hormonas, fosforilacin, etc.) Pueden estar constituidos por una o varias cadenas polipeptdicas 6 8 En el estado abierto transportan de 10 a 10 iones/seg Intervienen en o La generacin y propagacin de impulsos elctricos en clulas excitables o La liberacin de hormonas y neurotransmisores o La transduccin sensorial o La contraccin muscular o El transporte transepitelial entre otros procesos La funcin anmala de canales inicos puede provocar miotonia, parlisis peridica, arritmia cardaca, ciertas formas de epilepsia, y otras patologas Los canales inicos en general no se comportan como simples conductos o poros estticos, abiertos permanentemente Hay factores que regulan la apertura o cierre (gating) de un canal o Voltaje: Ejemplo canales de Na+, K-, Ca+2, Clo Qumico: ligando. Ejemplo receptor de ACh, de GABA, de glicina, canal de Na+, activado por GMPc (retina) o canales de K+ activados por Ca+2 o por ATP

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o Fsico (presin o estiramiento) Ejemplo canal de K+ (estereocilios de clulas ciliadas del rgano de Corti, odo interno) Existen canales que pueden ser regulador en su gating por reacciones de fosforilacin y de desfosforilacin Adems de los canales regulados, hay canales no regulados que estn normalmente abiertos en la clula de reposo. Estos canales contribuyen significativamente al potencial de membrana

Canales voltaje sensibles Juegan un papel crucial en neurotransmisin y contraccin muscular Altamente selectivos para el ion transportado, a diferencia de los canales operados por ligando ( por ej., el receptor de Ach es igualmente permeable a Na+ y K +, mientras el canal de es 100 veces ms permeable al K+ que al Na+) Muchos canales tienen diferente farmacologa y representan blancos para diversas toxinas (tetrodotoxina, saxitoxina, etc.) Permanecen abiertos por un muy corto tiempo, luego pasan a una forma inactiva NUMEROSAS TOXINAS MARINAS SON BLOQUEADORES DE CANALES DE SODIO Tetrodotoxina de pez globo (pufferfish): en hgado y gnadas. Saxitoxina de algas, bioacumulada desde algas a bivalvos (ostra, mejillones). Las mareas rojas pueden ser peligrosas. Tetrodotoxina y saxitoxina son bloqueadores especficos de canales de sodio. Cuando estas toxinas, se acumulan en los bivalvos y son consumidas por el hombre, pueden provocar parlisis por intoxicacin con mariscos. . Dichos bloqueadores pueden causar sofocacin cuando se bloquea el sistema nervioso que controla la respiracin. A bajas dosis, se observan efectos paralticos en pacientes intoxicados. ARQUITECTURA MOLECULAR DE CANALES DEPENDIENTES DE VOLTAJE El canal de K+ voltaje dependiente es un tetrmero de subunidades idnticas y seis hlices transmembrnicas. El extremo N-terminal de cada subunidad localizado en el citosol forma un dominio globular esencial para la inactivacin del canal abierto El canal de Na+ y el de Ca+2 en cambio tienen cada uno 4 dominios repetitivos

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PREDICCION ESTRUCTURA SECUNDARIA DE CANALES DE Na+ La subunidad alfa tiene alrededor de 1800 residuos de aminocidos presenta 4 dominios muy similares (I-IV) conectador por cadenas de residuos de aminocidos intracelulares (linkers) Cada dominio tiene 6 hlices transmembrnicas (S1-S6) conectadas a su vez por interlinkers extra e intracelulares Los interlinkers entre los S5 y S6 de los 4 dominios constituirn la regin del poro del canal donde estara adems el filtro de la selectividad del canal (regin ms estrecha del poro del canal) El linker intracelular entre los dominios III y IV mediara la inactivacin o cierra del canal de sodio En cada dominio, S4 tiene un alto contenido de residuos de R y K. Estas hlices S4 actuaran como sensores de voltaje y estaran relacionadas con la activacin o apertura del canal ESTRUCTURA TRIDEMENSIONAL DEL CANAL DE K+ DE BACTERIA Streptomyces lividians (canal KcsA) Determinada por cristalografa de rayos- X a una resolucin de 3,2 (MacKinnon, 1998) Es un tetrmero. Los torretas (link entre hlices cortas y externas) constituyen el sitio de unin para tetraetil amonio, TEA bloqueador especfico de canales de ion potasio y toxinas Las 4 subunidades conforman la estructura del poro que tiene forma de cono En cada subunidad el link entre el extremo central de la hlice corta y la hlice interna contribuye a la estructura del poro Los 4 links conforman el filtro de selectividad

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VIA DE CONDUCCION Y SELECTIVDAD PARA LOS IONES K+ Desde el interior celular, el poro del canal de K+ de Streptomyces lividians tiene un dimetro aprox. de 10 y luego disminuye a una cavidad menor de 8 Aproximadamente a 2/3 del canal el poro aparece ms constreido (dimetro de aprox 3 ) filtro de selectividad El dimetro del K+ deshidratado es de 2,7 El filtro del selectividad rechaza a iones con un dimetro > 3,0 Qu ocurre entonces con Na+ que tiene un radio de 0,95 ?: El Na+ hidratado tiene mayor dimetro que el K+ hidratado pues el radio inico del Na+ es mayor que el de K+ CMO OPERA LA SELECTIVDAD DEL CANAL KcsA? Para poder pasar el filtro de selectividad el K+ debe deshidratarse. El canal paga el costo de deshidratar al in proporcionando interacciones compensatorias con los tomos de oxgeno de grupos carbonilos de los residuos Thr-Val-Gly-TyrGly que se alinean en el filtro de selectividad En el caso del Na+, los tomos de oxgeno no interaccionan muy favorablemente con l, debido a que es demasiado pequeo. Los Na+ permanecen hidratados y por tanto con un tamao que los excluye del paso a travs del este canal

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Mdulo I: Clula PATOLOGIAS DEL TRANSPORTE Protenas de transporte tales como transportadores y canales tienen roles importantes en la homeostasis intracelular. En aos recientes, se han clonado genes para protenas de transporte y se han identificado mutaciones en la patognesis de un nmero de enfermedades hereditarias Ellas incluyen por ejemplo, Sndrome de Liddle, Sndrome de QT largo, parlisis peridica hipercalmica, fibrosis qustica, miotonia congnita, diabetes inspida nefrognica, malabsorcin de glucosa / galactosa, cistinuria, enfermedad de Wislon Mutaciones en genes de varios receptores incluyendo al receptor de vasopresina V2 receptor de DHP y receptor sensor de Ca+2, tambin producen alteraciones del transporte de solutos de membranas que conducen patologas PATOLOGIA DE LOS CANALES IONICOS Durante los ltimos aos se ha podido correlacionar de manera directa la etiologa de un nmero creciente de enfermedades humanas con el funcionamiento anmalo o con la ausencia de canales inicos especficos Una correlacin es la de un canal de Cl- (CFTR) y la fibrosis qustica, enfermedad hereditaria congnita autosmica recesiva Existen varias patologa del canal de Na+ 8parlisis peridica

hiperkalmica, paramiotona congnita, sndrome del QT prolongado, tipo 3, etc) Tambin existen patologas de canales de K+ (sndrome del QT prolongado, tipo 1 2 y 5) y de Ca+2 (hipertermia maligna) Actualmente se conocen ms de 20 desrdenes nerviosos y musculares asociados a mutaciones genticas causantes de canales disfuncionales En la parlisis peridica hiperkalmica, los pacientes presentan canales de sodio de msculo esqueltico con fallas en la inactivacin (cierre) y los episodios de debilidad muscular son gatillados por la ingesta de alimentos ricos en potasio. En la paramiotona congnita (rigidez muscular provocada por el fro y el ejercicio intenso). Ellos son sndromes clnicos de tipo autosmico dominante (mutaciones en la subunidad alfa de los canales de sodio) En el sndrome de QT prolongado tipo 3, un canal de sodio del msculo cardaco es fallado provocando alteracin en la repolarizacin de aqul, lo que puede generar arritmia y fibrilacin ventricular Se han descrito otros sndromes de QT prolongado entre ellos los tipo 1, 2 y 5 que afectan a canales de potasio Tambin se conocen patologas que afectan a canales de Ca+2. Se pueden citar la hipertermina maligna (el canal de calcio afectado es el receptor de rianodina) que se desencadena por anestesia, ejercicios extremos (particularmente en condiciones de calor), fiebre o por el uso de drogas estimulantes CANALES IONICOS OPERADOS POR LIGANDO Median la rpida accin de los NT en la sinapsis cambiando el potencial de membrana en respuesta a la unin del NT a su receptor Son activados por ligandos especficos Discriminan entre iones cargados (-) y (+) pero aparte de eso no son frecuentemente selectivos o Canales conductores de cationes (excitatorios, tienen que ver con canales de Na+) receptores de acetilcolina, serotonina y glutamato o Canales conductores de aniones (inhibitorios, tiene que ver con canales de Cl-) receptores de glicina y cido gamma aminobutrico (GABA)

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I RECEPTOR DE Ach

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El receptor de acetilcolina de msculo esqueltico es una protena pentamrica con una composicin de 22. Cada subunidad tiene 4 hlices transmembrnicas (M1,M2,M3,M4) Cada subunidad posee un sitio de unin de acetilcolina El canal se abre unos pocos segundos, cuando el receptor une cooperativamente dos molculas de Ach El canal ligando dependiente admite Na+ y K+ (aprox. 0,65 0,8 nm) Aunque la estructura del poro no se conoce a nivel molecular hay evidencia que indica que lo conforman 5 hlices M2 una de cada subunidad del receptor En ambos extremos de las hlices M2 hay residuos de aminocidos con cargas negativas formando un anillo que atrae cationes y excluye aniones del canal A la altura del centro de la bicapa hay un anillo de R de residuos de Leu ubicados juntos impidiendo el paso de iones a travs del poro Al unirse Ach se produce un cambio conformacional de las hlices de M2 que desplazan las Leu del centro del canal abrindose para el paso de iones

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RELACION DE VARIOS SISTEMAS DE TRANSPORTE EN LA UNION NEUROMUSCULAR El arribo de un potencial de accin (PA) al extremo de una motoneurona presinptica induce la apertura de canales de Ca+2 voltaje sensible de la membrana y la posterior liberacin de Ach hacia el espacio presinptico La Ach va a unirse al receptor de Ach ubicado en la membrana pos sinptica lo que a continuacin va a gatillar la apertura de los canales de Na+ de dichos receptores El Na+ ingresar al miocito impulsado por su gradiente electroqumico El influjo de Na+ resultante produce una depolarizacin localizada de la membrana plasmtica del msculo lo que provoca la apertura de canales de Na+ voltaje sensible generando un PA que se propaga alcanzando los tbulo en T y abriendo all canales de Ca+2 voltaje sensible Ingresa Ca+2 al citosol del miocito lo que abre a su vez canales de Ca+2 de la membrana del RS liberndose Ca+2 desde su interior al citosol. Este aumento de Ca+2 citoslico va a provocar finalmente contraccin muscular.

4. SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS El sistema endomembranoso est formado por: - Retculo Endoplsmico Liso - Retculo Endoplsmico Granuloso (o rugoso) - Aparato de Golgi - Envoltura Nuclear RETCULO ENDOPLSMICO LISO (REL) Comentario: Todas las reacciones metablicas que ocurren dentro de ste sistema son de tipo enzimtico, es decir, son catalizadas por enzimas. stas se ubican como componentes de ste sistema endomembranoso, formando parte de la membrana como protenas integrales. Si hay una clula que est muy desarrollada para una determinada funcin, tendr que tener una gran superficie para que se disponga de una cantidad luminar importante de stas enzimas, de sta manera se hace ms eficiente el proceso de produccin de un determinado sustrato. *En ciertas clulas especializadas el REL es abundante y tiene funciones adicionales. Por desarrollado en clulas especializadas en el metabolismo lipdico. ejemplo es muy

Por ejemplo, las enzimas para sintetizar hormonas esteroidales (por ejemplo el colesterol) se encuentran en los tbulos del sistema membranoso del REL.

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I Estas micrografas electrnicas muestran reas de REL de clulas de la corteza suprarrenal (secretan corticoides) y de clulas de Leydig que estn en los testculos (secretan hormonas sexuales, especficamente testosterona). All se metabolizan esteroides y se forman hormonas esferoidales. Adems tienen muy desarrollado el REL Comentario: ste es el aspecto que presentan los tbulos bajo el microscopio electrnico de transmisin. Un tbulo, cuando est cortado en forma transversal se le forma una esfera, pero si est cortado longitudinalmente se ve alargado.

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El hepatocito, participa en todas las funciones del hgado. La zona ms grande de la foto es REL (a la izquierda). Y pequeo, abajo y a la derecha se ven cisternas de REG. Aqu residen protenas que estn relacionadas con el metabolismo del Glicgeno, que es la molcula de reserva energtica en animales, porque en vegetales es el almidn. Este glicgeno se almacena en forma de grnulos y se almacena hasta que la clula lo necesite. En ese momento se rompe y queda en sus unidades constituyentes, es decir, en forma de Glucosa (monosacrido). Es sta la que pasa al torrente sanguneo, va a todo el organismo para ser utilizado por las clulas (inicialmente) en un proceso llamado Gliclisis para formar cido pirvico y en general en procesos metablicos. Entonces, estas clulas el REL contiene, entre otras, enzimas relacionadas con el metabolismo del glicgeno Ej. glucosa-6-fosfatasa que extrae el fosfato de la glucosa, y la convierte en glucosa libre. Esta Glucosa-6-Fosfato proviene de la degradacin del glicgeno depositado en el citosol del Glicgeno Glucosa 1-Fosfato Glucosa 6- Fosfato hepatocito

(1)

(2)

Glucosa 6-Fosfato + H2O Glucosa (circulante) + Pi (3)

(1) Glicgeno fosforilasa (2) Fosfoglucomutasa (3) Glucosa 6-fosfatasa *G1-F y G2F son ismeros (1), (2) y (3) son enzimas.

Cuando hay un aumento de la glucosa circulante, hay un proceso de glicogenognesis, proceso controlado hormonalmente (con la insulina hipoglicemiante-), que hacen que las clulas incorporen glucosa hacia el citoplasma, sobretodo a nivel de los hepatocitos. Esta glucosa es polimerizada, formando el Glicgeno. Lo contrario, cuando alguna parte del organismo ( la misma clula) necesita, hay otro control hormonal, que hace que ste glicgeno se degrade, para mantener la glicemia. En las membranas del REL del hepatocito tambin se encuentran localizadas las enzimas que sintetizan los componentes lipdicos de las liprotenas. Comentario: Muchas veces las protenas no estn solas, si no es que se asocian. (Por ejemplo: Glico o Lipo proteinas) Tambin pueden andar en el citosol o pueden formar parte de las membranas.

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Estas partculas lipoproteicas son transportadas va sangunea a otras partes del cuerpo, donde se necesiten. Adems, otra funcin importante que cumple el REL, es que en sus membranas se encuentran enzimas que catalizan una serie de reacciones de detoxificacin de drogas liposolubles y otros compuesto dainos de origen exgeno (desde el exterior, como Barbitricos, Antibiticos, Narcticos, Esteroides, Anticoagulantes) o Endgenos (producidos por el metabolismo, que se acumulan al interior de la clula) Sustrato-OH + H2O + NADP Monooxidasas

Sustrato-H + 02 + NADPH2

El sustrato H (insoluble), ms oxgeno, ms NAD-fosfato (un dinucletido). Luego de la reaccin se hace soluble, por lo tanto se hace mucho ms fcil de eliminar. Como la reaccin ocurre en presencia de oxgeno, la enzima catalizadora es la monooxidasa. Otra funcin importante del REL es servir de depsito de iones calcio (Ca++) en el citosol, adems de regular la concentracin de los mismos. Comentario: El rol del Calcio dentro de la clula es servir de Segundos mensajeros (molculas pequeas que llevan mensajes desde la superficie de la clula). Por ejemplo, hay algunos estmulos que no pueden entrar a la clula, pero pueden tener un receptor en la membrana, que activa a un segundo mensajero dentro de la clula, para as producir el efecto deseado. (trasduccin de seales) El Ca++ entra a la clula a travs de los canales para stos (a favor de gradiente) y cuando se necesita que salga Calcio, se usan las bombas (en contra de gradiente). Se almacena en el lumen del REL facilitado por una alta concentracin en ese lugar de Ca2+ -binding proteins En la mayora de las clulas existen regiones del REL especializadas en el almacenamiento de Ca2+. Normalmente la concentracin de este ion es menor en el citosol que en el REL y en el exterior. Para mantener esto se cuenta con bombas de Ca++ en la membrana del REL y en la membrana plasmtica. El regreso se realiza en forma pasiva por canales inicos. En las clulas musculares estriadas el REL est tan especializado, que se denomina retculo sarcoplsmico. ste contiene el sistema T (lo verde del dibujo), que es una red que rodean la miofibrillas, que estn formadas por los miofibrillas. Gracias al Calcio se produce la unin entre la Actina y la Miocina. El REL es una red de canales que incorpora iones calcio desde el citosol mediante una (bomba) Ca2+ ATPasa. Durante contraccin muscular se libera, y cuando se relaja, el Calcio vuelve al REL en forma pasiva. Si el Ca++ no retorna, se produce una contraccin constante (Rigor), es decir, una unin contante entre Miocina y Actina.. * Su funcionamiento depende de los cambios en el potencial de membrana. * Comentario: Todo lo sarco est relacionado con la fibra muscular (Sarcmero, sarcosomas- mitocondrias- , sarcolema membrana plasmtica-)

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I RETCULO ENDOPLSMICO GRANULOSO (REG) Descubierto en el ao 1964-65, por Camilo Golgi. Es rugoso por la presencia de ribosomas en su superficie. Los ribosomas son organelos citoplasmaticos que se encuentran tanto en clulas procariticas como eucariticas. Son complejos agregados moleculares de protenas y ARNr (Ac.Ribonucleico ribosomal) que se ensamblan en el nuclolo. Estn formados por dos subunidades una mayor y otra menor. En procariontes son de 70 S con dos subunidades de 50 S y 30 S. (S = Unidades Svedverg, Coeficiente de sedimentacin) En eucariontes son de 80 S. Subunidades de 60 S y 40S. *Estas subunidades son sintetizadas en el nucleolo *

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Su principal funcin es servir de sitio de traduccin de los ARNm (sntesis de protenas). Las dos subunidades son unidas por el ARNm y all se produce la incorporacin de los aminocidos para formar una cadena polipeptdica. Estas subunidades, mientras no participen en la sntesis de protenas estn separadas. Se unen en el momento que se produce la lectura de un mensajero. *el mensajero es la copia de una secuencia nucleoflica que tiene el ADN y se traducir en una secuencia polipeptdica que posteriormente ser una protena. La traduccin es la lectura, y participa el ARNt o de transferencia, cuya funcin es ubicar en el punto preciso el aminocido que corresponde, es decir, el determinado por la secuencia de nucleotidos (codn). El ADNt tiene el anticodn. Una vez completada la traduccin de la cadena polipeptdica, sta es liberada por un codn de trmino (secuencia non-sense) que no hubica a ningn aminocido, y eso indica que es el final. Luego esa cadena formada se convierte en la protena. Cuando se termina la lectura, las unidades ribosomales se separan. Existen dos tipos de ribosomas, segn el sitio donde cumplen su funcin (y de su ubicacin tambin depende la funcin de la clula): (1) Libres: - Se encuentran en el citosol. - Solos o bien formando agrupaciones denominadas Polirribosomas o polisomas. - Abundantes en clulas que retienen en el citoplasma la mayor parte de las protenas sintetizadas. *En el fondo, todos los ribosomas en un comienzo son libres. Se sintetizan en el nucleolo, desde donde salen a travs de los poros de la envoltura nuclear hacia el citoplasma. Es all donde llegan los mensajeros y ocurre todo el proceso antes mencionado. ** ADNpolimerasa se usa en la replicacin. ***ARNpolimerasa se usa en la trascripcin **** Ac se usan enzimas que ayuden ala unin de aminocidos para formar la cadena polipeptdica.

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En resumen: los libres NO estn asociados a membrana, por lo tanto, tanto ellos, como la cadena que se form van a permanecer en el citoplasma de la clula. (2) Asociados o Unidos: -Se encuentran unidos a la superficie citoslica del RE, formando el REG. -Son muy abundantes en clulas que secretan las protenas sintetizadas. -Son responsables de la sntesis de protenas de membrana (trasmembrana) o las que son empaquetadas en vesculas para ser almacenadas en el citoplasma o exportadas al exterior.

*En la foto se ven muchas cisternas, lo que quiere decir que produce muchas proteinas, que van a ser exportadas (fagocitadas al exterior). Por ejemplo podra ser una clula de una glndula, ya que lo que se produzca sta, se usa fuera de la clula. Estos dos tipos de ribosomas, constituyen un pool comn, que son utilizados tanto para la sntesis de protenas que permanecern en el citoplasma como las que sern transportadas hacia el RE.

Mitad de arriba del dibujo Se unen las subunidades y comienzan a leer un mensaje cuyo producto permanecer en el citosol. Mitad de abajo del dibujo Nuevamente se une un mensajero, pero el producto de la sntesis, va a ser una protena que va a tener diferentes destinos, puede permanecer en la membrana o tambin ser translocada al lumen del retculo. *Diferencias: El puntito rojo, que es una seal que indica que esa protena va a ir al retculo endoplsmico. El REG est muy desarrollado en clulas que realizan una activa sntesis de protenas. En su organizacin predominan los sacos aplanados (cisternas) que se encuentran separadas por un angosto espacio de citosol lleno de ribosomas Los ribosomas se encuentran adheridos a la cara citoslica de las membranas del REG (en Azul). Por lo general forman complejos llamados politrribosomas o polisomas que son grupo de ribosomas unidos por una molcula de ARN mensajero. De rojo, se pueden observar protenas.

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Comentario: Todo el lumen del REL y el REG es un espacio continuo. Pncreas de murcilago. Clula Plasmtica Sintetiza inmunoglobulinas, tambin se llaman clulas de memoria. Cuando entra un antgeno que ya ha estado ah, rpidamente comienza a producir anticuerpos. En esto se basan las vacunas. * En el ncleo: - Cromatina: muy densa (negra) Se muestra el proceso de Secuestro, donde la membrana del retculo rodea a un organelo y forma una vacuola autofgicas.

APARATO DE GOLGI -Descubierto por Camilo Golgi, en 1898. -Desarroll una tcnica basada en el empleo de sales de plata que le permita visualizar las clulas nerviosas en forma individual. El Aparato de Golgi est formado por una o varias unidades funcionales denominadas dictiosomas. Un dictiosoma es un conjunto de cisternas aplanadas (4 6) dispuestas una sobre otra dando el aspecto de una pila de platos. *A diferencia del retculo, stos no estn comunicados entre s, adems la superficie es lisa, no tienen ribosomas. Las vesculas saltan de una cisterna a otra. Cada compartimiento es distinto al otro, por lo que ocurren procesos distintos. - Se encuentra en la regin perinuclear, y se caracteriza por la gran cantidad de vesculas en los bordes del Golgi. - Las vesculas pueden salir o llegar al Golgi

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- El Golgi es compartimentalizado, es decir, tiene zonas donde ocurren hechos diferentes. - Existe una polaridad. Hay una regin que va hacia el interior de la clula (cara cis) y otra est dirigida al exterior de la clula (cara trans). Esto se dice pensando en clulas que forman tejidos (epitelio por ejemplo), estn dispuestas una al lado de la otra con el ncleo ubicado en una zona basal. En general se habla de una zona basolateral que est en contacto con las clulas de los lados, las de adelante y atrs; Y por la zona apical es por donde se secretan o se incorporan sustancias. La zona completa (como se ve en el dibujo) forma una red, la Red Golgi que son vesculas que vienen de la regin del RE que traen un material dentro, stas se fusionan y forman la red. Luego, todas estas formas contribuyen a formar las cisternas (una cis, otra media y por ultimo una trans) y para que Golgi sea funcional, tiene que tener mnimo tres cisternas. -Entonces, en la zona cis van a ir entrando vesculas y en la zona trans van a ir saliendo, formando un burbujeo constante de vesculas, que tendrn distintos destinos. En algunos casos el nmero de cisternas en un dictiosoma puede ser mucho mayor que el promedio. Comentario: -A la cara cis, tambin se le llama zona cis, red cis o cara de formacin, ya que llegan vesculas que se fusionan unas con otras, formando cisternas. -A la cara trans tambin se le dice cara de maduracin, porque de all salen vesculas cuyo material ya ha completado sus procesos y se dirigen a su destino. - Existe un equilibrio de vesculas, ya que las vesculas que salen, son repuestas por otras que entran. Eso ayuda a mantener las tres cisternas necesarias para que el Golgi sea funcional.

Se ve una vescula fusionada con la membrana, y vaciando su contenido al exterior. Del RE salen las vesculas que se dirigen al Golgi. Generalmente son aproximadamente 6 cisternas las que forman un Golgi.

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I ENVOLTURA NUCLEAR - Es el ltimo componente del sistema endomembranoso. - Es mal llamada membrana nuclear, ya que est formada por dos membranas. - Estas delimitan un saco aplanado que se encuentra perforado por los poros nucleares. En el fondo es una cisterna que est interrumpida por la presencia de poros. - Tiene ribosomas, es decir, existe sntesis de protenas. - La membrana interna ( nucleoplsmica) se asocia con heterocromatina, que obviamente no est presente en los poros (si estuviera los tapara). La membrana ms externa (citoslica) es continua con las membranas del REG y tambin presenta ribosomas adheridos.

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Comentario: - En la foto se aprecia claramente sta continuidad. - Durante la mitosis, hay una etapa al final de la profase (pro-metafase), se desplazan los centriolos, se inicia la formacin del huso mittico y la desaparicin de la envoltura nuclear. Luego viene la metafase, anafase y en la telofase ocurre la regeneracin o formacin de la envoltura. Y, de dnde viene sta? De membranas del RE que rodea al material gentico que est duplicado y forma los dos nuevos ncleos. Hay regiones proteicas de la membrana del RE que reconocen la cromatina y la rodean. Entonces se concluye una estrecha relacin entre estos dos componentes del sistema endomembranoso. - De hecho, el espacio entre las dos membranas (espacio perinuclear) tambin se contina con las cisternas ( lumen) del REG. - El dibujo nos muestra que los poros no son simples aberturas, si no que ms bien son estructuras. - Desde dentro del ncleo salen las sub-unidades ribosomales por estos poros, al igual que el ARN mensajero tambin. - Del citosol al nucleoplasma pasan protenas (histonas) que forman parte del la cromatina (ADN+histonas), enzimas que tienen que ver con la replicacin y transcripcin, las protenas que forman los ribosomas. Por todo lo anterior, el poro no puede ser un simple canal como los que tiene la membrana plasmtica. El material que pasa por ste poro es de mayor tamao y peso molecular. Eso s, es un paso regulado. En la foto se aprecian claramente los poros.

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Se ve una estructura proteica (en color verde) de tipo fibrilar que contiene que constituye el nucleoesqueleto. (Analoga con el citoesqueleto, que le permite mantener la forma a la clula) Son filamentos intermedios que forman una red que hace que el ncleo tenga una forma ms o menos constante, que no se deforme ni se aplaste. A pesar de esto, para distintas clulas, el ncleo es de distinta forma. Por Ejemplo: El ncleo de una clula de un epitelio plano, el ncleo es alargado. El de las fibras musculares es muy aplastado, porque las miofibrillas los aplastan hacia los bordes. Los neutrfilos (clulas sanguneas) tienen un ncleo multi globulado. Pero en general, cualquiera sea la forma, sta es mantenida por esta laminilla proteica, llamada lmina nuclear.

Se ven ocho estructuras proteicas que forman un complejo de poro

Todos los poros tienen una serie de estructuras, con protenas filamentosas que tambin contribuyen a mantener al ncleo en posicin. Presentan un componente central que presenta cambios conformacionales, lo que permite que se abra o se cierre la estructura.

Se ve el canastillo nuclear.

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FUNCIONES DEL RETCULO ENDOPLSMICO (RE) o o o Sntesis de triacilglicridos (triglicridos): se sintetizan dentro del RE, pero pueden estar en el citoplasma como gotas de lpido como reserva energtica. Las clulas especializadas en esto son los Adipositos, que forman los tejidos adiposos. Biognesis de membranas celulares (componentes lipdicos y proteicos). La membrana plasmtica se forma en la membrana del RE. Sntesis de Protenas (con diferentes destinos) En el RE se realizan las principales reacciones de la sntesis de los triacilglicridos (triglicridos) que estn formados por tres cido grasos unidos glicerol. La sntesis comienza en el citosol: el glicerol se fosforila por la accin de una glicerol quinasa. Si ste no est presente se forma a partir del fosfato de dihidroxiacetona (DHAP). El cido fosfatdico formado, se inserta en la monocapa citoslica del RE donde se completa la sntesis. Luego se liberan al citosol. Comentario: El cido fosfatdico est formado por glicerina, 2 cidos grasos y un grupo fosfato. Al grupo fosfato se le puede asociar una molcula pequea (generalmente un alcohol) que lo transforma en fosfolpido y le da una identidad. Por ejemplo, si se une un inocitol, la molcula formada ser un fosfatidilinocitol; si es colina, fosfatidilcolina, etc. ste cido fosfatdico, puede tener dos destinos: 1. servir a la sntesis de fosfolpidos. 2. si se agrega otro cido graso, y se forma un triglicrido. La clula est constantemente formando nuevas membranas: por necesidades funcionales, cuando crece, antes de la mitosis, etc. Si una clula, en un determinado momento necesita sintetizar, le manda un pedido. Con eso se aumenta la cantidad de membrana del RE y ms ribosomas. Efectividad del proceso. Tampoco es llegar y armar membrana, porque existe todo un proceso de ensamblaje, siguiendo una estructura bsica en la cual se van insertando nuevos componentes. Entonces, desde el RE salen vesculas membranosas, que se van hacia la superficie, donde se fusionan con la membrana plasmtica. Este proceso ocurre por ejemplo cuando una clula se divide y se forma dos hijas, que tienen la mitad del tamao de la madre. Ellas tienen que crecer, agrandar su volumen y por consiguiente su membrana. La biognesis de las membranas comprende: sntesis de lpidos, protenas e hidratos de carbono. Estos tres tipos de molculas no se sintetizan independientemente y luego se unen para formar membranas, sino que se incorporan en las ya existentes del RE. Enseguida forman vesculas que son transferidas hacia los dems componentes del sistema endomembranoso o hacia la Membrana Plasmtica. **El RE tambin proporciona fosfolpidos para las membranas de las mitocondrias y los peroxisomas.

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Algunos ejemplos de fosfolpidos de membrana: - Fosfatidiletanolamina - Fosfatidilserina - Fosfatidilcolina - Esfingomielina (un grupo ms complejo) En resumen: - Las membranas del RE producen prcticamente todos los lpidos que se necesitan para la formacin de nuevas membranas celulares, incluyendo los fosfolpidos y el colesterol. - El fosfolpido predominante producido es la Fosfatidil Colina (lecitina). - Los otros dos fosfolpidos importantes, Fosfatidil Etanolamina y Fosfatidil Serina como tambin el Fosfatidil inositol son todos sintetizados mediante un mecanismo similar. - La sntesis de los fosfolpidos, por ejemplo la fosfatidilcolina, se hace en tres pasos a partir de: colina, dos cidos grasos y glicerolfosfato, cada paso es catalizado por enzimas ubicadas en el retculo, las cuales tienen sus sitios activos orientados hacia el citosol donde se encuentran los metabolitos sealados. Por lo tanto la sntesis de los fosfolpidos ocurre exclusivamente en la monocapa citoslica de la membrana del retculo.

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Hay dos cidos grasos (esquina superior izquierda) y al lado est el glicerol fosfato (glicerina ms un grupo fosfato). Este grupo se inserta en la membrana que ya est formada., pero si a ste grupo fosfatdico se une otro cido graso, se forma un triglicrido, que se va a liberar y quedar en el citosol. Como la sntesis de fosfolpidos tiene lugar en la cara citoslica del RE, por lo que se necesita un mecanismo par transferir algunas de las molculas recin formadas a la monocapa interna (luminal). Para ello al cabo de unos pocos minutos los fosfolpidos se equilibran realizando un flip-flop (o traslocacin) gracias a una enzima (flipasa), a una velocidad 100.000 veces mayor que si esto ocurriera en forma espontnea. Comentario: la flipasa del RE es muy especializada, por lo que recibe el nombre de escramblasa ** Este rpido movimiento transbicapa es mediado por un translocador de fosfolpidos denominado escramblasa, que equilibra los fosfolpidos entre las dos monocapas. De esta manera se considera que los diferentes tipos de fosfolpidos se encuentran igualmente distribuidos en las dos monocapas de la membrana del RE. Se igualan en nmero y en tipo (igual cantidad de rojos y de amarillos). Por otra parte la membrana plasmtica adems tiene diferentes tipos de translocadores de fosfolpidos. Estas flipasas (con apellido) mueven desde la capa externa hasta la capa citoslica especficamente fosfolpidos que contienen grupos amino libres: fosfatidilserina y fosfatidiletanolamina. Por esto se mantiene la asimetra. Est exagerado, pero en este caso, la cara exterior es amarilla y la citoslica es roja. Si se agregan fosfolpidos en desorden, las flipasas son las encargadas de poner todo a su lugar y mantenerla asimtrica.

La membrana del RE tambin incorpora molculas de Colesterol, ya sea ingresadas por endocitosis y tambin las sintetiza. La membrana del RE lo transfiere a las dems membranas especialmente a la M. Plasmtica mediante vesculas.

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Comentario: recuerden que hay colesterol circulante, que va unido a otras protenas (LDL) y que se incorpora mediante endocitosis a la membrana plasmtica. SINTESIS DE PROTENAS Todas las protenas, excepto algunas de las mitocondrias se sintetizan en ribosomas del citosol. An cuando todos los ribosomas son iguales algunos permanecen libres en el citosol y otros se adosan a las membranas del RE formando el REG. Las primeras etapas de la sntesis de una protena se producen el ribosoma se encuentra libre en el citosol. La unin del Ribosoma a la membrana slo ocurre si la cadena polipeptdica naciente tiene una marca. Esta es una secuencia de aminocidos denominada Pptido de Seal (Secuencia de alrededor de 30 aminocidos). Apenas emerge el pptido de seal es reconocido por un complejo ribonucleoproteico llamado SRP (PRS = partcula de reconocimiento de seal) el cual conduce la cadena y al ribosoma hasta el REG donde existe un receptor especfico para la PRS (que es una protena transmembrana). Esta unin requiere de energa que es aportada por GTP. Adems de conducir el ribosoma al REG la PRS unida al peptido de seal interrumpe el crecimiento de la cadena. Luego que la PRS se une a la membrana del REG (por el receptor especfico), el ribosoma tambin se une a la membrana a travs de la Riboforina. El extremo amino de la cadena cruza por un poro proteico vecino a la Riboforina. Estos constituyen un Translocon. Comentario: translocacin es el proceso de paso de la cadena polipeptdica que comenz a sintetizarse en el citosol, y pasa a hacerlo en el lumen del RE. La translocacin ocurre a medida que se hace la traduccin, y se habla de una translocacin post traduccional.

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5. VESICULAS Sntesis de Protenas Todas las protenas, excepto algunas de las mitocondrias, se sintetizan en ribosomas del citosol. An cuando todos los ribosomas son iguales, algunos permanecen libres en el citosol y otros se adosan a las membranas del RE formando el REG Las primeras etapas de la sntesis de una protena se producen en el ribosoma cuando este se encuentra libre en el citosol. La unin del Ribosoma a la membrana slo ocurre si la cadena polipeptdica naciente tiene una marca. Esta es una secuencia de aminocidos denominada Pptido de Seal (Secuencia de alrededor de 30 aminocidos). El polipptido contina su sntesis sobre la membrana del RE. Qu ocurre con aquellas protenas que van a tener un destino de exportacin o van a ser protenas de membrana o van a ir a lisosomas? Estas protenas se sintetizan sobre la superficie del RE de tal manera que tiene que ser transportada. Apenas emerge el pptido de seal es reconocido por un complejo ribonucleoproteico llamado SRP (PRS = partcula de reconocimiento de seal) el cual conduce la cadena y al ribosoma hasta el REG donde existe un receptor especfico para la PRS. Esta unin requiere de energa que es aportada por GTP (pero tambin hay otros nucletidos que aportan energa como el ATP; El GTP tambin est presente , por ejemplo, en el ciclo de Krebs). Adems de conducir el ribosoma al REG la PRS unida al pptido de seal interrumpe el crecimiento de la cadena. Luego que la PRS se une a la membrana del REG, el ribosoma tambin se une a la membrana a travs de la Riboforina. El extremo amino de la cadena cruza por un poro proteico vecino a la riboforina. Estos constituyen un Translocon o unidad de translocacin (pptido de seal + Riboforina +

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I Receptor de la PRS) - Primero se forma el pptido de seal (juntando aminonocidos) y luego lo dems del pptido. - A travs del poro proteico pasa la cadena polipeptidica en crecimiento, desde la superficie hacia el lumen. En la cadena el primer extremo que pasa al lumen es el NH 2. El pptido de seal queda retenido en el poro proteico (porque hay interacciones hidrofbicas dentro de l) y es separado de la cadena por la accin de una peptidasa de seal (Enzima que rompe el enlace peptdico, separando a la seal que ya no sirve). La cadena sigue creciendo hasta su fin y penetra totalmente al lumen. Las unidades ribosmicas se separan y el ARNm queda libre. La lectura de ARN mensajero termina cuando hay un codn de trmino

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Es una protena cuando adquiere una conformacin tridimensional

Las protenas as sintetizadas podrn permanecer en el lumen del RE o se dirigirn, mediante vesculas hasta el complejo de Golgi donde residirn permanentemente o bien sern a su vez transferidas otra vez mediante vesculas, hacia la membrana plasmtica, un endosoma o liberadas de la clula como producto de secrecin

Normalmente el grupo COO- queda afuera y el grupo amino queda en el lumen

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A veces las protenas pueden poseer mas de una seal. En ese caso quedan insertas en la membrana del REG (no las transloca totalmente). Si presenta una sola seal adicional (que esta en medio de la cadena polipeptdica) queda anclada en la membrana, por ello se llama seal de anclaje ( esta es reconocida por una zona del poro, esta seal es una secuencia de aminocidos que interacta hidrofobicamente con las cadenas hidroifobicas de los fosfolipidos de las membranas para mantenerse ancladas a la membrana; as se fijan las protenas integrales). Como consecuencia de esto se forma una protena transmembrana monopaso (un solo paso a travs de la membrana) con el extremo NH2 dirigido hacia el lumen y el grupo carboxilo hacia el citosol Algunas protenas transmembranas estn orientadas al revs, con el extremo NH2 dirigido hacia el citosol y el carboxilo hacia el lumen. En este caso slo poseen el pptido de seal que no est ubicado en un extremo sino en medio de la cadena. En este caso el pptido de sea (que tambien es una seal de anclaje) no es escindido por la peptidasa, es decir, no se va a cortar, porque para eso, tendra que estar en el extremo libre

Si hay aminocido con grupos sulfidrilo (azufre), se forman puentes y ah se unen los oligosacriddos (nota: despus dice En cambio, cuando hay grupo sulfidrilo, no hay puente de hidrgeno en el ambioente, en la region citosolica

Pptido de seal que no es cortado, y sirve como seal de anclaje

La formacin de una protena bipaso necesita de un pptido de seal ubicado cerca del extremo amino y de una seal adicional. Por su posicin interna el pptido de seal no es atacado por la peptidasa y se comporta como una seal de anclaje retenido en la bicapa. Hay una seal adicional (seal de anclaje), entonces cuando pasa por dentro del poro quedan estas dos seales retenidas por la membrana (Se desplaza, es decir, hay un cambio conformacional del canal)

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Algunas protenas tienen ms de dos pasos a travs de la membrana. Se denominan multipaso ( Por ejemplo: Bombas, Aquaporinas) Estas, adems del pptido de seal necesitan de un nmero variable de seales adicionales tantas (- 1) como sea las veces que la protena atraviesa la membrana. Estas seales de anclaje actan como pptidos de seal y son llevados por sucesivas PRS a la membrana del RG y utilizan el mismo translocon. A medida que las nueva seales ingresan en translocon los precedentes salen de l por espacios laterales y se ubican entre los fosfolpidos de la bicapa. De acuerdo con la naturaleza de la protena sta permanecer en la membrana del RE o pasar a la membrana de otro componente del sistema endomembranoso o a la membrana plasmtica.

Ejemplos de algunas protenas uni y multipaso

Protenas residentes

Translocada totalmente: Permanece en el RE Totalmente translocada a travs de vesculas: Pueden pasar al golgi y ser residentes ah

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Las cadenas polipeptdicas translocadas son plegadas ( Para que la cadena proteica adquiera su configuracin definitiva) y ensambladas (cuando se asocia con otra proteina para formar una proteina ms compleja, como las de estructura cuaternaria, por ejemplo: la hemoglobina, que esta formada por 4 unidades) en el lumen del REG. La mayora de las protenas del lumen del REG estn de paso en ruta a otros destinos. Sin embargo algunas permanecen all y se denominan protenas residentes ( Significa que van a cumplir una funcion dentro del lumen del RE). Para ello cuentan con una seal de retencin que las mantiene en ese sitio. Las proteinas pueden ser semitranslocadas y se transforman en ese caso en proteinas transmembrana uni, bi o multipaso del retculo, o a traves de vesculas y van a ser proteinas transmembrana de la cisterna cis, media o trans del golgi, o finalmente de la membrana plasmtica. Algunas de ellas funcionan como catalizadoras que ayudan a las protenas a translocarse, plegarse y armarse correctamente. Ej la protena (BiP = Binding Protein) la cual esta emparentada con las hsp70 que son protenas chaperonas Controlan el correcto plegamiento de las protenas Tambin evita que se formen agregados y les ayuda a mantenerse en el RE, evitando que sean llevadas al Golgi y posteriormente exportadas. Otra de las funciones importantes que tiene lugar en el RE es la adicin de azcares (oligosacridos) a las protenas. A diferencia de las protenas citoslicas la mayora de las protenas de membrana y solubles que son sintetizadas en el RE, son Glicoprotenas. Este proceso se denomina glicosilacin y consiste en la adicin de un oligosacrido pre-sintetizado formado glucosamina, Manosa y Glucosa con un total de 14 monmeros. El oligosacrido se agrega al grupo amino de un aminocido (asparragina) por: NAcetil

Este oligosacrido es transferido en bloque hasta el grupo NH2 de la cadena lateral del aminocido Asparragina de la protena. Antes de ser tranferido el Oligosacrido se encuentra unido a un lpido complejo de membrana llamado Dolicol-Fosfato (Est en la monocapa interna y es de naturaleza lipidica; tiene unido el oligosacrido y lo entrega a la cadena polipeptidica) Esta reaccin es catalizada por una enzima de la membrana que tiene su sitio activo en el lumen llamada Oligosacaril transferasa.

Queda en condiciones de unirse a otro oligosacarido

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I Concepto de Soluble: Protenas que estn libres en el lumen o en el citoplasma TRAFICO VESICULAR EN LAS VAS SECRETORA Y ENDOCTICA En las clulas eucariticas el Sistema Endomembranoso esta relacionado con un intenso trfico de vesculas con un contenido y destino muy diverso. Esta vesculas emergen desde componentes membranosos o bien se fusionan con ellos. Ello determina la existencia de vas de desplazamiento de estas vesculas:

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Cmo cada compartimiento conserva su carcter especializado? Todas las vesculas quedan con una especie de identidad, que la adquieren durante su formacin, esto mediante las proteinas de cubierta (el tipo de cubierta va a depender de cual sea el destino de la vescula)

Vesculas que vienen del golgi tienen enzimas digestivas o hidrolticas (protolisosoma), que al unirse con un endosoma (estructura que tiene un contenido que lo adquiere de distintas formas) se forma un lisosoma (ocurre la digestin intracelular)

El endosoma temprano corresponde a muchas vesculas pequeitas que entran por endocitosis, este endosoma temprano luego se desplaza hacia el interior de la clula y se transforma en un endosoma tardo y este recibe la accin de los lisosomas.

Va por defecto: del retculo a la superficie de la clula (no requiere de una seal) 69

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Mdulo I: Clula

MECANISMOS MOLECULARES DEL TRANSPORTE DE MEMBRANAS Estos procesos de transporte, median un continuo intercambio de componentes entre los diez o ms compartimentos limitados por membranas y diferentes, que en conjunto constituyen las vas sintetizadora-secretoras y endoctica. En presencia de este masivo intercambio, cmo cada compartimento puede mantener su carcter especializado? Para responder a esta interrogante, en primer lugar se debe considerar que define el carcter de un compartimento. Analizaremos los procesos de seleccin en que se basa la segregacin de protenas en dominios membranosos diferentes. Estos procesos dependen del ensamblaje de una cubierta proteica especial sobre la cara citoslica de la membrana donante. La mayora de las vesculas transportadoras se forman a partir de zonas cubiertas especializadas de las membranas. Ellas emergen como vesculas cubiertas que tienen una envoltura diferenciada en forma de jaula, de protenas que cubren su superficie citoslica. Existen tres tipos de vesculas cubiertas bien caracterizadas: Cubiertas con Clatrina, con COP I y con COP II qumicamente

Las vesculas cubiertas con clatrina estn formadas por subunidades proteicas
Cada tipo de estas vesculas es utilizado para diferentes pasos en los procesos de transporte intracelular. Las vesculas transportadoras que se rodean de Clatrina son: Las producidas durante la endocitosis Las que nacen en la cara Trans del Golgi y van destinadas a los endosomas.(que van a formar parte de los lisosomas) Las que nacen en la cara trans del Golgi y van destinadas a la membrana plasmtica. Slo en la secrecin regulada

Da identificacin, su origen y destino Vesculas Cubiertas de clatrina Generalmente, todo lo selectivo y que tiene un destino bien preciso tienen clatrina

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Mdulo I: Clula

En cambio las vesculas con Coatmero comnmente median el transporte desde el Retculo endoplsmico y las cisternas del Golgi: Las que nacen en el RE y van destinadas a la cara Cis del Golgi. Las que conectan las cisternas del Golgi entre s. Las que nacen en la cara trans del Golgi y van destinadas a la membrana plasmtica. Slo en la secrecin constitutiva Las recicladoras (Reciclan componentes de membrana) Las vesculas con coatomero son aquellas que usan la va por defecto Las vesculas cubiertas con coatmero median el transporte vesicular no selectivo (la va por defecto), que incluye transporte desde el RE hasta el Golgi, entre las cisternas del Golgi, las de retorno y desde el trans Golgi hasta la membrana plasmtica en la secrecin constitutiva. En cambio el transporte selectivo es mediado por vesculas cubiertas por clatrina

2 Tipos de secrecin

Constitutiva: El producto se hace constantemente Regulada o Facultativa: El producto de secrecin se acumula dentro de la clula y el vaciamiento o secrecin se produce por un estmulo externo. (Ej: Las clulas pacreticas que se estimula su vaciamiento al llegar alimento)

Para asegurar que el trfico de membrana hacia y desde un organelo sea balanceada, las protenas de cubierta deben ensamblarse solo cuando y donde se necesiten.

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I ESQUEMA DEL PROCESO DE FORMACIN DE UNA VESCULA CUBIERTA CON COP II

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Cada protena es reconocida por un receptor especfico (que es una protena transmembrana), hay una seleccin de las protenas solubles que entraron a la membrana y se van despus, a un lugar especfico Cuando una vescula transportadora emerge de la membrana de un compartimento donante del sistema endomembranoso debe encontrar el sitio correcto donde ensamblar su membrana con la de otro compartimento receptor. Esto se logra con la participacin de receptores complementarios uno de la membrana donante y otro de la receptora. Se denominan v-SNARE (vesicle-SNAP receptor, sale del donante) y t-SNARE (target-SNAP receptor, Reconoce al v-snare) SNAP = Soluble NSF Attachment Protein NSF = N-ethylmaleimide Sensitive Fusion Estas se denominan Protenas Fusgenas porque participan en la fusin de vesculas. Interactan siempre 3 SNAP y 1 NSF Para cada pareja de compartimentos donante/receptor existe una pareja particular de v-SNARE/tSNARE que son complementarios. Por esto durante su traslado una vescula v-SNARE debe ir tocando distintos t-SNARE hasta encontrar su complementario

Una vez que la vescula se forma, la cubierta de clatrina o Cop se sale

Anclaje: Cuando se reconoce vSNARE con t-SNARE. Fusin: Cuando se fusiona la membrana y luego se libera la molcula cargo o ligando (lo que se desplaza), rompiendo su unin entre receptor y molcula cargo

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I En las clulas eucariticas el Sistema Endomembranoso est relacionado con un intenso trfico de vesculas con un contenido y destino muy diverso. Estas vesculas emergen desde componentes membranosos o bien se fusionan con con ellos. Ello determina la existencia de vas de desplazamiento de estas vesculas: Compartimentos intracelulares de una clula Eucaritica comprometidos en las vas Biosintetizadora-Secretora y Endoctica

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Las vesculas de secrecin se van concentrando y quedan como material de reserva hasta que llega una seal y se libera (secrecin facultativa)

TRANSPORTE DESDE EL RE HACIA EL GOLGI Las protenas sintetizadas en el RE son transportadas hasta el aparato de Golgi y desde ste a la superficie o a otro lugar por medio de vesculas transportadoras, las cuales transfieren protenas de membrana a membrana o de lumen a lumen (o al espacio extracelular) Esta va del RE al Golgi es denominada va por defecto porque las protena no requieren de seales especiales para seguirla. Toda protena que entra al RE, que es plegada y ensamblada correctamente ser transportada automticamente a travs del Golgi hasta la superficie celular. Esto siempre que no tenga una seal que la retenga en algn compartimento o la derive a travs del Golgi hacia los lisosomas o las vesculas de secrecin Volvamos al Aparato de Golgi. Este es el principal sitio de sntesis de hidratos de carbono As como una estacin de clasificacin y despacho de los productos del RE.

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Muchos de los polisacridos de las clulas se fabrican en el Golgi, incluyendo la pectina y la hemicelulosa de la pared celular de vegetales Tambin la mayora de los glicosaminoglicanos (GAGs) de la matriz extracelular en animales. Ciertos oligosacridos sirven como marcas o rtulos para destinar ciertas protenas especficas hacia vesculas que las transportaran hasta los lisosomas. Otras protenas y lpidos una vez que adquieren sus oligosacridos son despachados en vesculas de transporte hacia otros destinos Adems el Golgi queda en la ruta de salida proveniente del RE y una cantidad importante de los H. de Carbono que sintetizan son agregados como cadenas de oligosacridos a protenas y lpidos provenientes del RE Protenas y lpidos entran en la red cis del Golgi en vesculas de transporte provenientes del RE y salen de l por la red trans en vesculas transportadoras destinadas a la superficie celular o a otro compartimento Ambas redes son importantes para el destino de las protenas: Aquellas protenas que entran en la red cis pueden, ya sea, continuar avanzando por las cisternas del Golgi o retornar al RE. En cambio las que salen de la red trans son clasificadas de acuerdo a si irn a los lisosomas a vesculas de secrecin o a la superficie En su recorrido por las cisternas del Golgi las molculas transportadas llevan acabo una serie ordenada de modificaciones covalentes Estas vesculas no son selectivas. Transportan cualquier protena desde el RE al Golgi, an cuando habra seales que aceleran el proceso. Las vesculas destinadas al Golgi emergen de zonas especializadas del RE llamadas elementos de transicin, cuyas membranas carecen de ribosomas y a menudo est localizadas entre el REG y el Golgi Existe un solo requisito que las protenas que salen del RE estn correctamente plegadas y ensambladas. Tiene que haber un control de calidad: Si estn malas, se eliminan y no continan por ninguna de las vas porque van a funcionar mal Si bien las protenas correctamente plegadas no necesitan de una seal para ser transportadas desde el RE, aquellas que son residentes en el lumen del RE como las BiP (Binding proteins) necesitan de tales seales para ser retenidas all (La seal de retencin es = KDEL (Lys-Asp-Glu-Leu). Si se elimina experimentalmente la seal de retencin, la BiP puede ser secretada

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La de arriba es una protena secretada que est marcada (la con esas cosas verdes), salen vesculas con cubierta que despus pierden y llegan al golgi que tiene KDEL para que las que estn marcadas no puedan seguir la va y vuelvan porque son residentes ( tienen el receptor de KDEL), no importa que tan lejos lleguen, siempre deben ser devueltas. Las protenas sin marcar siguen la va por defecto y son secretadas Cada protena residente, dependiendo del lugar, tiene una marca para que se quede siendo residente de ese lugar

Las cadenas de oligosacridos agregadas a las protenas son modificadas en el RE y a su paso por el Golgi. Dando lugar a dos tipos de oligosacridos unidos a Asparragina en las glicoprotenas maduras.

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I

Mdulo I: Clula

PROCESAMIENTO DE LOS OLIGOSACRIDOS EN EL GOLGI

En el Golgi las cisternas estn organizadas como una serie de compartimentos donde ocurren procesos secuenciales Las protenas que llegan desde el RE entran al primer compartimento : La red cis del Golgi. En seguida se mueven mediante vesculas hasta el compartimento medial constitudo por las cisternas medias. Finalmente pasan al tercer compartimento : la red trans donde se completa la glicosilacin. Desde all las protenas son segregadas y despachadas a sus destinos finales, los lisosomas, la membrana plasmtica o vesculas de secrecin Las diferencias funcionales entre las regiones cis, media y trans del Golgi estn determinadas por la presencia de enzimas relacionadas con ls modificaciones de la glicosilacin que experimentan las protenas

COMPARTAMENTALIZACIN FUNCIONAL DEL APARATO DE GOLGI Qu hace que sean distintas las cisternas cis, media y trans?: Las enzimas que all estn presentes

Tinciones histoqumicas para demostrar la compartamentalizacin del Golgi A) Gogi sin teir. B) Teido con Osmio,el cual es reducido en las cisternas cis. C) y D) Teido para mostrar la localizacin de enzimas especficas

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I TRANSPORTE DESDE LA RED TRANS DEL GOLGI A LA SUPERFICIE CELULAR: EXOCITOSIS

Mdulo I: Clula

Secrecin Constitutiva

Secrecin Facultativa

El transporte de vesculas desde la red trans del Golgi es una corriente continua. Las protenas de membrana y los lpidos de estas vesculas proporcionan nuevos componentes para la M. Plasmtica, mientras que las protenas solubles contenidas en el lumen de las vesculas son secretadas al espacio extracelular. La fusin de estas vesculas conla M.Plasmtica se denomina Exocitosis Utilizando este mecanismo las clulas producen y secretan, por ej. la mayora de los proteoglicanos y glicoprotenas de la matriz extracelular. Todas las clulas necesitan esta va denominada va secretora constitutiva (va por defecto). Sin embargo las clulas especializadas en secrecin tienen una segunda va en la cual las protenas solubles y otras sustancias son inicialmente almacenadas en vesculas secretoras para ser liberadas mas tarde. Esta es la va secretora regulada (Facultativa), la cual se encuentra principalmente en clulas especializadas en secretar sustancias como hormonas, neurotransmisores o enzimas digestivas de rpida demanda

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I

Mdulo I: Clula

TRANSPORTE DESDE LA RED TRANS DEL GOLGI HASTA LOS LISOSOMAS

LISOSOMAS Los lisosomas son sacos membranosos llenos de enzimas hidrolticas utilizadas para llevar a cabo una digestin intracelular controlada de macromolculas Contienen alrededor de 40 tipos de enzimas hidrolticas que incluye: proteasas, nucleasas glicosidasas, lipasas fosfolipasas,fosfatasas y sulfatasas. Todas son hidrolasas cidas, para su funcionamiento ptimo necesitan un ambiente cido. El interior del lisosoma tiene un pH de aproximadamente 5.0. De esta manera el citosol esta doblemente protegido de una autodigestin: La membrana del lisosoma lo separa del citosol y an cuando se rompiera poco dao sufrira pues el pH citoslico es alrededor de 7.2

Al igual que otros organelos, estn rodeados por una sola membrana donde existen protenas transportadoras que permiten que los productos de la digestin de macromolculas aminocidos, monosacridos y nucletidos, pasen al citosol. Una bomba de protones (H ) ATP dependiente bombea H para mntener el pH cido en el interior. La mayora de las protenas de la membrana de los lisosomas estn extraordinariamente glcosiladas, lo cual las protegera de las proteasas luminales Los lisosomas son muy variados en forma y tamao,pero pueden ser identificados histoquimicamente como un solo grupo de organelos, utilizando el precipitado producido por la accin de una hidrolasa cida sobre un sustrato determinado. As se ha comprobado que existen todas las clulas eucariticas En general los lisosomas son puntos de encuentro al cual convergen diferentes corrientes del trfico intracelular. Las enzimas digestivas las reciben por una ruta que viene desde el RE pasando por el Golgi. A su vez las sustancias que sern digeridas siguen al menos tres vas de acuerdo a su origen: a) materiales de origen externo incorporados por Endocitosis (Pinocitosis). Son entregados primeramente a un endososoma temprano y luego a un endosoma tardo el cual se une con las vesculas que traen enzimas lisosomales desde el Golgi.
+ +

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I b) Materiales como partculas de mayor tamao o microorganismos son incorporados desde el exterior por fagocitosis c) materiales de origen interno, organelos, macromolculas, incluso algunas protenas son reciclados por un proceso denominado autofagia. Una vacuola de secuestro derivada de una membrana del RE que rodea a un organelo formando un autofagosoma

Mdulo I: Clula

Las enzimas hidrolticas son llevadas a los lisosomas por medio de vesculas transportadoras especializadas. En primer lugar las hidrolasas son marcadas, en las cisternas del Golgi, al agregrseles una azcar manosa que lleva un grupo fosfato = Manosa-6-Fosfato (M-6P).

Este grupo es reconocido por protenas receptoras de M-6-P, que son protenas transmembrana de la red cis del Golgi. El receptor se une a las hidrolasas y las ayuda a empaquetarse en vesculas de transporte especficas que salen del Golgi. Estas vesculas se fusionan con endosomas tardos entregando su contenido al lumen de este organelo En el interior del endosoma tardo las hidrolasas se liberan del receptor de M-6-P al bajar el pH (6.0) y pueden comenzar su proceso de digestin.

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I

Mdulo I: Clula

Esto lo transforma en un lisosoma primario A su vez los receptores de M-6-P son recuperados y transportados en vesculas que emergen desde el endosomas hasta la red trans del Golgi para ser reutilizados (reciclaje)

TRANSPORTE DE HIDROLASAS LISOSOMALES RECIN SINTETIZADAS HACIA LOS LISOSOMAS Algunos de los materiales llevados hacia los lisosomas no completan la digestin y permanecen en los lisosomas constituyendo los cuerpos residuales. A veces algunas de estas sustancias no digeridas son eliminadas de la clula por un proceso similar a la exocitosis. Si ello no ocurre se transforman en pigmentos de desgaste (grnulos de lipofucsina) PEROXISOMAS

Los peroxisomas se encuentran en todas las clulas. Estn limitados por una sola membrana . Dimetro 600 nm . N 70-100 por clula. En hepatocitos N mayor. Cumplen varias funciones metablicas. Contienen enzimas oxidativas. Pueden formar y descomponer perxido de hidrgeno. Varan en los distintos tipos de clulas segn el tipo de nmero de enzimas (+/- 40 en total). Las ms destacadas : catalasa, D-aminocido oxidasa, Urato oxidasa (forma core cristalino) y las responsables de la -oxidacin de cidos grasos. Estas (excepto la catalasa) oxidan sustratos como cidos grasos, aminocidos, purinas, uratos cido rico ,etc. Las enzimas oxidativas utilizan oxgeno molecular (O2) para remover H2 de molculas especficas, lo que lleva a la formacin de H2O2 (perxido de Hidrgeno) RH2 + O2 R + H2O2

Este perxido es muy txico para la clula y debe ser degradado, por accin de la catalasa. Que puede funcionar de un modo cataltico 2 H2O2 2H2O + O2 catalasa

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Mdulo I: Clula

O bien utilizando la reaccin peroxidativa en la cual el perxido de Hidrgeno es oxidado a H2O utilizando electrones proveniente de un donante orgnico : H2O2 + TH2 2H2O + T Catalasa T= (Sustancia toxica oxidada) En clulas hepticas y renales se utiliza este mecanismo para oxidar y neutralizar sustancias txicas como: metanol, fenoles, formaldehido, cido frmico, nitritos y etanol. Parte del etanol ingerido con la bebidas alchlicas, es neutralizado por la catalasa que lo oxida a acetaldehdo La catalasa tambin degrada H2O2 producido fuera de los peroxisomas (mitocondrias, REG y citosol). All se forman aniones superxido (O ), conocidos como radicales libres. Estos son muy reactivos Una enzima la superxido dismutasa se encarga de eliminarlos de acuerdo con la siguiente reaccin: -2 + 2 O + 2H H2O2 + 02 superxido dismutasa TRANSPORTE DESDE LA MEMBRANA PLASMTICA A TRAVS DE ENDOSOMAS: ENDOCITOSIS La ruta que conduce desde la superficie celular hasta los lisosomas comienza con la Endocitosis, mediante la cual la clula incorpora macromolculas, material particulado e incluso, en algunos tipos celulares, clulas enteras. El material ingerido es encerrado progresivamente en una pequea porcin de membrana plasmtica la cual se invagina y luego se estrecha para formar una vescula intracelular que contiene la sustancia o partcula ingerida Existen dos formas de endocitosis:
-2

1. Fagocitosis: implica la incorporacin de grandes partculas tales como microorganismos y restos celulares con formacin de grandes vesculas generalmente 250 m de dimetro, llamados fagosomas An cuando la mayora de las clulas estn realizando pinocitosis continuamente la ingestin de grandes partculas slo la realizan algunas clulas fagocticas especializadas Algunos protistas (ej. amebas) utilizan la fagocitosis para alimentarse En cambio en las clulas animales la fagocitosis se utiliza para propsitos diferentes a la nutricin y es realizada por clulas fagocticas especializadas En mamferos hay dos tipos celulares que son fagocitadores profesionales Macrfagos y Neutrfilos: Defienden al organismo contra infecciones ingiriendo microorganismos invasores. Los macrfagos tambin se encargan de ingerir clulas senescentes, daadas o restos celulares 2. Pinocitosis: ( del griego pinein = beber) Consiste en la ingestin de fludos y pequeos solutos con formacin de pequeas vesculas ( 150 m de dimetro)

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I Prcticamente todas las clulas eucariticas ingieren contantemente pequeas porciones que ms tarde vuelven a la superficie.

Mdulo I: Clula de su M. Plasmtica en forma de pequeas vesculas pinocticas (endocticas)

La tasa de ingestin vara con el tipo celular pero, generalmente, es bastante grande. Ej un macrfago ingiere 25% de su volumen de fluido cada hora. Puesto que la superficie y el volumen de una clula permanecen constantes es lgico pensar que la membranas que se gastan por endocitosis deben ser repuestas por un proceso de exocitosis. Esto determina la existencia de un Ciclo Endoctico-Exoctico Existen dos formas de pinocitosis: 2.1 Inespecfica: Las sustancia ingresan en forma automtica. Esto ocurre en todas las clulas. 2.2 Regulada: Las sustancias ingeridas deben interactuar con receptores especficos de la M. Plasmtica y ello desencadena la formacin de vesculas pinocticas. La participacin de receptores permite seleccionar el tipo de sustancias que penetran a la clula. Las vesculas transportadoras se rodean de una cubierta proteica durante su formacin. Ya vimos que existen dos tipos de cubiertas las de clatrina las de coatmero. Ambas se relacionan con el proceso de formacin de vesculas y al parecer proveen la fuerza mecnica que succiona la membrana hacia el citosol. Al comienzo se forma una fosita cubierta que luego se convierte en vescula y se desprende de la membrana TRANSPORTE DESDE MEMBRANA A TRAVS DE ENDOSOMAS: ENDOCITOSIS Los ENDOSOMAS se ubican funcionalmente entre el Complejo de Golgi y la Membrana Plasmtica. Las vesculas transportadoras se rodean de una cubierta proteica de dos tipos durante su formacin, de Clatrina o Cotamores (COP I y COP II), estas permiten seleccionar el tipo de sustancias que penetran a la clula y proveen la fuerza mecnica que succiona la membrana hacia el Citosol. En la mayora de las clulas animales las vesculas cubiertas con Clatrina proporcionan un mecanismo para incorporar macromolculas especficas por un proceso llamado: Endocitosis Mediada por Receptor (Transporte Selectivo). Este proceso forma parte de la Pinocitosis Adsortiva (especfica o mediada). La clatrina es una jaula proteica que recubre las vesculas. La cubierta est formada por unidades llamadas triskelion que se ensamblan

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I

Mdulo I: Clula

Adems de formar Vesculas endocticas, las vesculas cubiertas por Clatrina van de la cara TRANS de Golgi al Sistema Endosomal o a la Membrana Plasmtica (correspondientes a secrecin regulada). Las vesculas cubiertas con Coatmero median el transporte vesicular no selectivo (la va por defecto), que incluye Transporte Anterogrado (entre RER y cara CIS de Golgi) y el Movimiento Retrogrado (protenas que tienen seales de remanencia en el RER, por lo que vuelven a el. Conectan las cisternas de Golgi y las destinadas a la membrana plasmtica pero de secrecin constitutiva.. Las Membranas de los Endosomas poseen Bombas Protnicas, entonces + cuando las vesculas cubiertas pierden las Clatrinas y se transforman en Endosomas, se activan estas bombas que introducen H desde el citosol al interior del organoide. A las Vesculas con cubierta que se forman de la endocitosis se les atribuyen diferentes funciones: - Incorporar el Vtelo desde el flujo sanguneo al ovocito. - Transferencia de Ig G materna al feto. - Incorporacin de macromolculas y sustancias unidas a protenas, como colesterol, hierro, Vit. B12, toxinas. - Reciclado de membrana a partir de grnulos secretorios y vesculas sinpticas. - Incorporacin de LDL: El LDL es reconocido por receptores especficos en la membrana, ubicados en la cara externa de esta, estos al unirse comienzan la invaginacin y forman una fosita recubierta por Clatrina, que por accin de la Dinamina, se estrangula y se forma una vescula. Una ves formada la vescula se + liberan las Clatrinas que regresan a la membrana, ahora la vescula corresponde a un Endosoma Temprano. Mas tarde, bombas protonicas, ingresan H , baja el pH y se liberan los receptores de los LDL, dejando un Endosoma Tardo, con LDL. Los receptores son reciclados y regresan a la membrana. El Endosoma Tardo se una a un lisosoma y se degradan los LDL, formando colesterol que luego formara parte de la Membrana Citoplasmtica.

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Una mutacin causa bloqueo de los movimientos de las protenas receptoras de LDL, desde el RE al Golgi y desde las Membrana Plasmtica a Vesculas Cubiertas, en otro tipo de mutacin el receptor esta mutado, le falta el dominio citoslico, que reconoce a la Adaptina, entonces no se une a la Clatrina y no se incorpora la LDL. Como resultado no pasa el LDL al lisosoma y no se forma colesterol para la membrana, adems aumento la concentracin de grasas en la sangre provocando Hipercolesterolemia y una posible Trombosis.

a)

Normal

b)

Mutado

TRANCITOSIS En algunos epitelios se produce un proceso llamado Trancitosis, mediante el cual materiales ingresados por endocitosis por una cara de la clula atraviesan el citoplasma y salen por exocitosis por la cara opuesta. El cruce a travs del citoplasma lo realizan dentro de la misma vescula transportadora formada en la endocitosis o utilizan un edosoma como estacin de relevo. Ejemplos: Clulas endoteliales de los capilares sanguneos, son atravesados por macromolculas que pasan de la sangre a los tejidos. Ejemplos: Celulas Secretorios de las glandulas lagrimales, y en las mucosos de algunos organos del tracto digestivo, donde Ig A, pasa del tejido conectivo a la luz de los organos citados.

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I 6. CITOSOL O MATRIZ PLASMATICA La clula eucaritica se distingue: - Ncleo - Citoplasma:

Mdulo I: Clula

Organelos Citosol El citosol es considerado como el verdadero medio intracelular, llena el espacio no ocupado por el sistema endomembranoso, los organelos. Representa un 50% del volumen del citoplasma y su pH es de 7.2 En el citosol existe componentes muy variados, que mediante tcnicas de Fraccionamiento Celular se obtiene las fracciones: nuclear, mitocondrial y microsmica y una fraccin fluida (fraccin soluble) que contiene los componentes citoslicos All se detectan: Inclusiones Elementos del citoesqueleto Gran nmero de enzimas y complejos enzimticos (Ej.: Metabolismo Oxidativo, Glicolisis) Molculas que conducen seales dentro de la clula. Componentes de la sntesis de protenas: Ribosomas, ARNms, ARNt. Protenas Chaperonas Proteasomas Las Inclusiones, son macromolculas o agregados macromoleculares, carecen de membrana y son vistos por el microscopio. Estas se forman cuando grandes cantidades, de ciertas macromoleculas se acumulan. Ej.: - Grnulos de Glicgeno o Glicosomas: Molculas de glicgeno mas enzimas que participan en su metabolismo. - Gotitas de grasa (En Adipocitos, clulas hepticas y de musculatura estriada). - Pigmentos como los Grnulos de lipofucsina (restos de material no digerido, estos aumentoan con la edad y se les conoce como pigmento de desgaste) - Componentes del vtelo. Algunas clulas se especializan en acumular grandes cantidades de inclusiones, por ejemplo en la celulas musculares se acumulan grandes cantidades de Glicosoma, que son fuentes de energa, esto se aprecia con la contraccin muscular, pues los Glicosomas desaparecen debido a la glucogenlisis, para proveer glucosa.

Las Proteinas Chaperonas asisten a las protenas para su oportuno y adecuado plegamiento. Aun cuando los aminocidos, en un polipptido, tienen la informacin que determina la estructura tridimensional de la protena, esta deber plegarse en el momento oportuno y en la forma adecuada. Ello se logra mediante las Chaperonas, estas acompaan la protena y previenen su plegamiento prematuro e incorrecto Existen tres familias, hsp60, hsp70 y hsp90. La sigla significa heat shock protein, por el hecho de que estas aumentan su nmero en clulas sometidas a golpes de calor y otros factores que afecten la desnaturalizacin de las protenas. Un aumento de Chaperonas ayuda a la renaturalizacin de estas.

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El nmero corresponde al peso molecular de la primera chaperona descubierta en cada grupo Por ejemplo, a media que una cadena de proteica exenta de pptidos de seal sale del ribosoma, se la asocian hsp70, para prevenir el plegamiento prematura, y que no se convine con protenas inapropiadas. Una ves sintetizada la proteina la hsp70 se desprende y acta la hsp60 (integradas por polipptidos llamados chaperoninas, formando una especie de tubo) la protena se aloja dentro de la hsp60, as se asla y asegurndose su plegamiento espontneo correcto. Finalmente esta se libera y se hace residente en el citosol. Las protenas destinadas a las mitocondrias y a los peroxisomas se desplazan acompaadas de chaperonas hsp70. Ambas chaperona utilizan energa de la hidrlisis de ATP, y las chaperonas al liberarse en el citosol, pueden volver a usarse.

Las protenas que se sintetizan en el citosol y que estn destinadas a la Mitocondria conforme salen de los ribosomas se asocian a Chaperonas hsp70. Estas mantienen las protenas desplegadas hasta alcanzar la Mitocondria y atravesar sus membranas. adopta el estado de glbulo fundido Las protenas direccionadas a las mitocondrias tienen presecuencia Los plegamiento posteriores ocurren mas amino terminal (similar a un pptido de seal) que contiene aminocidos lenta mente y por varias vas, algunas cargados positivamente, y dada la informacin de estos son conducidas a la de las cuales alcanzan el final sin la Mitocondria. ayuda de chaperonas. Las protenas son mantenidas en un estado parcialmente plegado por su asociacin con una hsp70 citoslica y son reconocidas por un receptor de la Otras nunca se pliegan superficie de la mitocondria. Las cadenas polipeptdicas no plegadas son entonces translocadas a travs de un complejo de la membrana externa: Tom (Translocador de la M. externa), luego correctamente. Estas son reconocidas y son transferidas al complejo Tim de la membrana interna, los cuales conforman tneles proteicos o Translocones degradadas por enzimas proteolticas Una protena sintetizada rpidamente recin

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La presecuencia es clivada por una proteasa de la matriz y se les une una hsp70 mitocodrial a medida que cruzan por la membrana interna, terminando la translocacin. Entonces Hsp60, dentro de la matriz, facilita el plegado final del polipptido importado

Insercin de las protenas en la membrana de las mitocondrias. Las protenas direccionadas hacia las membranas mitocondriales poseen secuencias stop transfer que detienen su translocacin a travs de los complejos Tom o Tim y las incorporan ya sea en la membrana externa o la interna

Protenas del espacio intermembranoso. Las protenas pueden ser direccionadas al espacio intermembranoso por varios mecanismos. Algunas (I) son translocadas a travs del complejo Tom y liberadas al espacio intermembranoso. Otras protenas (II) son transferidas del complejo Tom al complejo Tim, pero ellas contienen secuenncias de stop transfer que detienen la translocacin a travs del complejo Tim. Estas seales son entonces clivadas para liberar las protenas al espacio intermembranoso. Finalmente otras protenas (III) son translocadas totalmente hasta la matriz, all se remueve la presecuencia exponiendo una secuencia de seal hidrofbica que direcciona la protena de vuelta a travs de la membrana interna por un canal proteico hasta el espacio intermembranoso.

PROTEOSOMAS El citosol existen dispositivos que cumplen el rol opuesto a los ribosomas. As protenas citoslicas, mal plegadas, daadas o que ha concluido su funcin son degradadas por un complejo enzimtico, el Proteosoma. Este tiene un conducto central entorno al cual hay diversas Proteasas, su entrada es precedida por varias unidades proteicas, estas componen la Antecmara de la Proteasa.

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Las Protenas a ser degradadas, para ingresar al Proteosoma han de ser marcadas por la Ubiquinina, estas forman un complejo reconocido por la antecmara, que lo desenrolla y los introduce al conducto donde es degradada. Por el otro extremo salen oligopeptidos. Este proceso utiliza energa cedida por ATP. Los proteosomas, por su capacidad de degradar protenas, intervienen en aspectos claves del metabolismo celular, entre ellos: la remocin de protenas anmalas el control del ciclo celular la diferenciacin celular la apoptsis el procesamiento de los antgenos Por otra parte se encuentran relacionados a numerosos procesos patolgicos, entre ellos: enfermedades autoinmunes (cuando el sistema inmune no reconoce las propias celulas) Parkinson Alzheimer infeccin por VIH opacificacin del cristalino

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I 7. CITOESQUELETO

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La estructura de los Microfilamentos y Microtubulos es siempre la misma, contituida por monmeros proteicos globulares (la alfa y beta Tubulina) y por monmeros de G-Actina, los cuales se unen formando las cadenas de F-Actina, respectivamente. Si se cuentan los protofilamentos en la cara superior del microtubulo deberan contarse 13. En cambio en los Filamentos Intermedio hay varios tipos de monmeros, formados por distintas protenas

Tubos huecos. Pared formada por 13

protofilamentos

Los microtubulos emergen del centro de la clula hacia la periferia Los filamentos interemedios tienen una disposicin irregular, Los microfilamentos de Actina estn por los bordes de la clula y forman el esqueleto de prolongaciones como las microvellosidades. Los organelos se asocian a los Microtubulos ayudan a mantener la forma, la disposicin y desplazamiento de los organelos

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Microfilamentos (esto se vera en contraccin muscular) que adems se unen a complejos de Troponina y filamentos de Trompomiosina El Citoesqueleto adems estar integrado por 3 tipos de filamentos, tiene un conjunto de protenas accesorios, clasificadas como reguladoras, ligadoras y motoras. Las Protenas Reguladoras controlan los procesos de alargamiento y acortamiento de los filamentos principales. Las Protenas Motoras, sirven para trasladar macromolculas y organoides de un punto a otro del citoplasma. Tambin hacen que dos filamentos contiguos y paralelos entre s se deslicen en direcciones opuestas, constituyendo la base de la contraccin, motilidad y cambios de forma celular. Formando el sistema muscular de la clula, Citomuscular. Las Protenas Ligadoras conectan a los filamentos entre s o con otros componentes de la clula.

En los FILAMENTOS INTERMEDIOS en vez de estar conformados por protenas globulares, estn constituidas por protenas alfa-hlice fibrosas. Las proteinas fibrosas estn integradas por una sucesin de secuencias idnticas de siete aminocidos, lo que les permite combinarse entre s lado con lado y componer dmeros lineales.

Estos dmeros vuelven a combinarse entre si, en forma desfasada y antiparalela, formando Tetrmeros, que se combinan en sus extremos formando los Protofilamentos. 8 Protofilamentos se adosan por sus flancos hasta componer un tubo de 10nm (Filamentos Intermedio). Los distintos tipos de protenas en que forman los filamentos intermedios: Keratina: Se encuentran en clulas epidrmicas, uas, cabellos, glndulas. Componen una trama filamentosa que confiere resistencia mecnica. Las Keratinas estn hechas de distintos monmeros, citoqueratinas, especificas en casa zona y ya que estas no se modifican con las transformacin cancerosa, se emplean para identificar el origen de las metstasis (Tonofilamentos, Clulas epidrmicas). Desmina: Se encuentran en las clulas musculares (Discos Z en msculo estriado). Vicentina: Comunes en clulas embrionarias originadas del mesodermo, (En fibroblastos de tejidos conectivos). Neurofilamentos = Elementos estructurales de axones, dendritas y cuerpos de clulas nerviosas). Filamentos Gliales = (Tejido de sostn en sistema nervioso). Lamino filamentos: Apoyada sobre la superficie interna de la envoltura nuclear, formando la Lmina Nuclear, estos son los nicos filamentos intermedios que no se ubican en el citosol. Y su ensamblaje genera una malla aplanada, responsable de la forma y resistencia mecnica de la envoltura nuclear.

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I Los filamentos intermedios tambin dan continuidad estructural a los tejidos, uniendo clulas adyacentes

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Los MICROTUBULOS se hallan en casi toda las clulas eucariotas, se caracterizan por ser notablemente rectilneas y uniformes. Contribuyen a establecer la forma celular, a mantener al RE y al Complejo de Golgi en posiciones correctos, lo que determina la polaridad de la clula, adems forman parte de los axones neuronales, de los cuales, su crecimiento, esta establecido por la polimerizacin de esta estructura citoesqueltica. Segn su localizacin se clasifican en 1) Citoplasmticas: en clulas en interfase 2) Mitticas: fibras del huso 3) Filiares: en el eje de los cilios 4) Centriolares: cuerpos basales y centrolos Las protenas accesorias de los Microtbulos reciben el nombre de MAP. Nacen de los centrosomas, estructura contigua al ncleo, y se extienden hasta la membrana plasmticas, por ellos parecen rayos que van del centro celular a la periferia. Los Microtbulos estn compuestos por protenas globulares llamadas, Tubilinas, Heterodmeros formados por dos subunidades, alpha-tubulina y beta-tubilina. Estas subunidades son muy afinas, pudiendia unirse por sus flancos libres, lo que lleva a una formacin tubular.

Los Heterodmeros pueden agregarse (polimerizarse), alargando el microtbulo, o recitarse (despolimerizarse) acostardose. El crecimiento utiliza energa del GTP El crecimiento de la Microtbulos ocurre solo por su extremo positivo, mientras que en el negativo, localizado en el centrosoma, se bloquea el crecimiento y acortamiento por la accin de una gammatubulina. Cuando las tubulinas se desprenden del extremo, contienen GDP, en la subunidad beta, que luego de fosforilizan. Las tubulinas con GTP se atradas al extremo positivo generando polimerizacin y crecimiento de la microtubulina. La polimerizacin provoca la hidrlisis de GTP a GDP y fosfato, sin embargo esto no es inmediato, por lo que se forman un capuchn de tubilinas-GTP, que luego de hidrolizan y se despolimerizan nuevamente.

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I

Mdulo I: Clula

Las vesculas y organelos se asocian a los Microtbulos o filamentos de Actina a travs de una protena motora, permitiendo el transporte de los organoides y macromolculas. El transporte es permitido por dos pritenas motoras, la Dineina y la Quinesina. La energa para el transporte es aportada por la ATP

La Dineina mueve del extremo positivo al negativo, como las vesculas que van del RE al Golgi. La Quinesina mueve del extremo negativo al positivo, alguna vesculas de retorno son las que van de Golgi al RE. La interaccin entre le microtubulo, y la protena motor permite el desplazamiento, 8nm por ATP en la Quinesina. Los Microtbulos mitticos movilizan a los cromosomas durante la mitosis y la meiosis. En esta estapa celular, a diferencia de la interfase, poseen dos centrosoma, de lo que nacen el las Fibra del Huso Mittico. Estas se pueden polimerizarse y despolimerizarse en sus dos extremos. Los cromosomas se acercan por el acortamiento de estas fibras.

CILIOS Y FLAGELOS Los Cilios, son delgados apndices, que surgen de la superficie celular, los Flagelos, son de mayor longitud. Cada uno de ests compuesto por un eje citoslico, envuelto por una prolongacin de la membrana plasmtica, que cubre, un armazn filamentoso llamado Axonema, formador por Microtbulos paralelos entre s, asociados a protenas accesorias. Estos nacen de un cuerpo basal o cinetosoma, similares a los centrolos.

Esquema de un corte transversal del axonema que muestra la configuracin 9+2 caracterstica de los Microtbulos del cilio. Debe resaltarse la disposicin de los Microtbulos perifricos, los cuales se hallan asociados entre s de a pares, llamados dobletes. Obsrvese las distintas clases de protenas ligadoras, t cmo las protenas motoras de dineina forman brazos orientados en la direccin de las agujas del reloj 92

Introduccin a las Ciencias Biomdicas I 8. MITOCONDRIAS

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Las mitocondrias son organelos que se encuentran en todas las clulas eucariticas ocupando una parte importante del volumen celular. Estos organelos proporcionan el andamiaje sobre el cual se ubican la gran variedad de molculas que participan en las reacciones de transferencia de energa desde las molculas de nutrientes hasta el ATP Presentan formas granulares o filamentosas, pero en general tienen forma cilndrica. Su tamao es tambin variable, con un promedio de 3.5 um de largo por 0.5 um de ancho. Su nmero vara segn el tipo celular. En hepatocitos hay entre 1.000 y 2.000 mitocondrias. En clulas musculares el nmero es mucho mayor. Aunque su distribucin dentro de la clula es generalmente uniforme, existen numerosas excepciones. Pueden desplazarse de una regin otra a otra del citoplasma donde se necesite energa. Los microtbulos y protenas motoras del citoesqueleto participan en esos movimientos Poseen dos membranas una externa y una interna lo que origina dos compartimentos, el espacio intermebranoso y la matriz mitocondrial La membrana externa es lisa y rodea a la membrana interna desarrolla pliegues hacia la matriz, las crestas mitocondriales, lo que da lugar a un aumento de la superficie membranosa. El nmero y forma de estas crestas vara segn el tipo celular. CARACTERSTICAS Y COMPOSICIN DE LOS COMPARTIMIENTOS MITOCONDRIALES Membrana externa Es permeable a todos los solutos del citosol, pero no a las macromolculas. Posee numerosas protenas transmembrana multipaso llamadas porinas, las cuales forman canales acuosos por los que pasan libremente iones y molculas de un tamao hasta 5 kDa. La porcin proteica que atraviesa la bicapa tine una estructura plegada Espacio Intermembranoso: Debido a la pesencia de las porinas su composicin es muy similar a la del citosol. Slo que generalemente + presenta una elevada concentracin de protones (H )

Membrana Interna Se pliega formando las crestas mitocondriales y es muy asimtrica. All se localizan. o La Coenzima FAD y una de las enzimas del Ciclo de Krebs (Succinato deshidrogenasa) o Las molculas de la cadena transportadora de electrones (o cadena respiratoria). Existen numerosas copias de ellas

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I o o Adems alli se ubican: La ATP sintasa .Complejo proteico que presenta dos sectores Uno transmembrna (F0) que tiene un canal protnico y otro orientado hacia la 1 matriz (F ) , este ltimo cataliza la formacin de ATP a partir de ADP y Fosfato (Fosforilacin Oxidativa) La Cardiolipina un fosfolpido doble que impide el paso de cualquier soluto a travs de la bicapa , excepto O2, CO2, H2O y NH3 Diversos canales inicos y permeasas que permiten el pasaje selectivo de iones y molculas desde el espacio intermembranoso a la matriz y viceversa

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o o

Matriz Mitocondrial All se encuentran numerosas molculas entre ellas: o Varias copias de ADN circular (13) o Trece(13) tipos de ARNm sintetizados a partir de otros tantos genes de ese ADN. o Dos tipos de ARNr (ribosmico), los cuales unidos a protenas forman ribosomas mas pequeos (55 S) que los citoslicos (80S) o Veintidos (22) tipos de ARNt (de transferencia)para los veinte aminocidos. o ADEMS 2+ o Grnulos de distintos tamaos compuestos principalmente por Ca o El complejo enzimtico piruvato deshidrogenasa o Las enzimas de la -oxidacin de los cidos grasos. o Las enzimas del Ciclo de Krebs, excepto la succinato deshidrogenasa. + o La Coenzima Acetilante , (Acetil CoA), la coenzima NAD , ADP Fosfato y O2 Las mitocondrias se dividen para reemplazar a las que desaparecen o son degradadas cuando ya han envejecido. Tambin su nmero se duplica antes de cada divisin celular. La reproduccin no se produce por un ensamblaje espontneo de sus componentes, sino que por la divisin de mitocondrias preexistentes. Este proceso al igual que la divisin de las bacterias se denomina fisin binaria. Este proceso ocurre durante todo el ciclo celular tanto durante la mitosis como la interfase. No todas ellas se dividen, de tal manera que algunas deben dividirse varias veces para compensar este hecho. Previo a toda duplicacin debe duplicarse el ADN mitocondrial

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PARTICIPACIN DE LAS CHAPERONAS DURANTE EL TRANSPORTE DE PROTENAS. Un polipptido parcialmente plegado es transportado del citosol a una mitocondria. Las chaperonas citoslicas estabilizan la configuracin desplegada. Las chaperonas mitocondriales facilitan el transporte y el plegamiento posterior de la cadena polipptidica dentro del organelo TRANSPORTE PROTENAS HACIA MITOCONDRIA. Las protenas son direccionadas a las mitocondrias por una presecuencia amino terminal que contiene aminocidos cargados positivamente. Las protenas son mantenidas en un estado parcialmente plegado por su asociacin con una Hsp70 citoslica y son reconocidas por un receptor de la superficie de la mitocondria. Las cadenas polipeptdicas no plegadas son entonces translocadas a travs de un complejo de la membrana externa: Tom (Translocador de la M. externa), luego son transferidas al complejo Tim de la membrana interna. La presecuencia es clivada por una proteasa de la matriz y se les une una Hsp70 mitocodrial a medida que cruzan por la membrana interna, terminando la translocacin. Entonces Hsp60, dentro de la matriz, facilita el plegado final del polipptido importado INSERCIN DE LAS PROTENAS EN LA MEMBRANA DE LAS MITOCONDRIAS. Las protenas direccionadas hacia las membranas mitocondriales poseen secuencias stop transfer que detienen su translocacin a travs de los complejos Tom o Tim y las incorporan ya sea en la membrana externa o la interna PROTENAS DEL ESPACIO INTERMEMBRANOSO. Las protenas pueden ser direccionadas al espacio intermembranoso por varios mecanismos. Algunas (I) son translocadas a travs del complejo Tom y liberadas al espacio intermembranoso. Otras protenas (II) son transferidas del complejo Tom al complejo Tim, pero ellas contienen secuenncias de stop transfer que detienen la translocacin a travs del

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complejo Tim. Estas seales son entonces clivadas para liberar las protenas al espacio intermembranoso. Finalmente otras protenas (III) son translocadas totalmente hasta la matriz, all se remueve la presecuencia exponiendouna secuencia de seal hidrofbica que direcciona la protena de vuelta a travs de la membrana interna hasta el espacio intermembranoso CATABOLISMO DE LA GLUCOSA Gluclisis Formacin de Acetil CoA Ciclo de Krebs Transporte de electrones Fosforilacin 9. MATRIZ EXTRACELULAR MATRIZ EXTRACELULAR Los organismos pluricelulares adems de clulas, estn constituidos por elementos intercelulares, que en general constituyen la matriz extracelular Los tejidos y tambin los rganos y sistemas de rganos resultan de de las asociaciones de diferentes tipos de clulas y matrices extracelulares. En los tejidos conectivos (conjuntivos) las clulas se encuentran dispersas en una abundante matriz, en cambio en los epitelios las clulas se adosan muy cercanamente y presentan escasa matriz intercelular En los epitelios de revestimiento existe una delgada matriz extracelular llamada lmina basal interpuesta entre las clulas y el tejido conectivo subyacente Las funciones ms importantes de la matriz extracelular son. Rellenar los espacios no ocupados por clulas Conferir a los tejidos resistencia a la compresin y al estiramiento. Constituir el medio por donde llegan los nutrientes y se eliminan los desechos Proveer a diversos tipos celulares de puntos fijos donde aferrarse Constituir el espacio por donde migran las clulas cuando se desplazan de un punto a otro del organismo. Ser el medio por el que arriban a las clulas las sustancias inductoras (seales) provenientes de otras clulas La Matriz contiene elementos fludos y fibrosos Fludos: Principalmente: Glicosaminoglicanos y Proteoglicanos Fibrosos: a) Protenas estructurales (Ej. Colgeno) b) Protenas adhesivas (Ej. Fibronectina, Laminina)

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Introduccin a las Ciencias Biomdicas I 1. Glicosaminoglicanos: Son hidratos de carbono formados por una sucesin de unidades disacardicas repetidas y alternadas: Un monosacrido tiene un grupo amino (N-acetilglucosamina o una N-a cetilgalactosamina . El segundo es : Ac glucurnico, Ac. Idurnico o galactosa. Los principales glicosamino glicanos son: Acido Hialurnico, Condroitin sulfato, Dermatn sulfato, Heparan sulfato y Queratn sulfato. Debido a la presencia de los sulfatos y a los grupos hidroxilos son molculas muy + cidas y que tienen cargas negativas, as atraen cantidades de Na por lo tanto H2O, lo que da turgencia a la matriz extracelular 2. Proteoglicanos: Los Glicosaminoglicanos (GAGs) pueden asociarse entre s o con protenas formando complejos glicoproteicos denominados proteoglicanos. Se pueden formar grandes y complejas asociaciones. Pueden asociarse mas de 100 GAGs a una sola protena para formar un proteglicano. En algunas ocasiones varios proteoglicanos pueden unirse a una molcula de acido hialurnica (el GAG mas grande) y formar agregados de gran tamao

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3. Fibras de Colgeno: Las protenas estructurales ms importantes de la matriz son las fibras de Colgeno Las fibras de Colgeno, estan formadas por fibrillas. La unidad estructural de las fibrillas es el tropocolgeno Existen alrededor de 25 tipos de tropocolgeno que se combinan dando 15 tipos de fibras colgenas (Sob importantesI,II,III,IV,VII, IX XI) La unidad estructural bsica del colgeno es una triple hlice 4. Fibronectina y Laminina a. La Fibronectina es una glicoprotena filamentosa que se une por un extremo a una protena de membrana y el otro con una fibra de colgeno. Determinan el itinerario de clulas migratorias (unen filopodios con colgeno) b. La Laminina: glicoprotena en forma cruz. Es abundante en las lminas basales all se une a colgeno IV y a heparnsulfato. Es la primera protena adhesiva que aparece en el embrin Es la primera protena adhesiva que aparece en el embrin

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UNIONES DE LAS CLULAS CON LA MATRIZ EXTRACELULAR En algunos tejidos conectivos las clulas aun cuando pueden desplazarse generalmente estn unidas a componentes de la matriz extracelular. Esta unin se logra a travs de los contactos focales de las clulas que se unen a fibras de colgeno HEMISDESMOSOMA En los epitelios las clulas se vinculan con una zona especializada de la matriz: la Lmina Basal. Esta unin en bien firme y se realiza a travs de Hemidesmosomas Los Hemidesmosomas tambin poseen Integrinas pero estn agrupadas. En los dominios citoslicos se unen a fibras de queratina y los dominios extracelulares se conectan con fibras de ColgenoIV UNIONES TRANSITORIAS ENTRE LAS CLULAS Durante las respuestas inmunitarias, la reparacin de heridas y la detencin de las hemorragias es necesario que algunas clulas establezcan uniones transitorias con otro tipo de clulas. Esta uniones so producen debido a fenmenos llamados reconocimiento y adhesin celular en la cual participan molculas denominadas CAMs Cell Adhesion Molecules TIPOS DE CAMs Cadherinas Super Gen Inmunoglobulinas Selectinas Proteoglicanos Integrinas CLASIFICACIN DE LAS CAMs Segn sus Cadenas: Monomricas, Dimricas, Heteromricas Segn el Tipo de Unin: Homoflica, Heteroflica Segn la Clula a la que se unen: Homotpicas, Heterotpicas Estos procesos tienen lugar cuando clulas de la sangre (neutrfilos, linfocitos, monocitos, plaquetas) se une transitoriamente con clulas endoteliales de los vasos sanguneos, lo cual es prerequisito para salir de la circulacin y pasar a los tejidos La adhesin se produce porque en la M. Plasmtica de las clulas sanguneas existen glicolpidos y glicoprotenas que interactan con molculas especficas de la membrana de las clulas endoteliales. Estas interacciones son necesarias para que las clulas sanguneas se detengan en el sitio apropiado y atraviesen entre dos clulas endoteliales (diapedesis) y alcancen al tejido donde procederan a la respuesta inmunitaria o participaran en la detencion de la hemorragia o cicatrizacin de la herida Los glicolpidos y glicoprotenas de las clulas sanguneas se une a glicoprotenas de las clulas endoteliales denominadas Selectinas, a travs de uniones hetroflicas. Selectinas porque establecen uniones selectivas y son lectinas que tienen gran avidez por los oligosacridos

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UNIONES ESTABLES ENTRE LAS CLULAS Las Clulas Epiteliales se pueden unir entre s mediante 4 tipos de Uniones Uniones Oclusivas (Tight Junctions) Cinturones Adhesivos (Adhesive Belt) Desmosomas Uniones Comunicantes (Gap Junctions)

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