FERNNDEZ, C.C, CHIPATECUA, D.A. & GORDILLO, C.S.

Drosophila melanogaster: cruce entre los mutantes macho White y hembra Silvestre ( W/W x S+/S+). Para la posterior comprobacin experimental de las leyes de Mendel por medio de cultivos
Christian Camilo Fernndez, Diego Alexander Chipatecua & Karol Stefany Gordillo.
Herencia, Facultad de ciencias y educacin, Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, Bogot D.C.; Colombia.

Resumen: En la gran mayora de los experimentos gnicos, los individuos ms utilizados por su facilidad de crianza, economa, ciclo de vida corto y su gran productividad es Drosophila melanogaster, permitiendo identificar las leyes de la herencia. Fue Thomas Morgan genetista quien estudio la historia natural, zoologa y macromutacion en la mosca de la fruta Drosophila melanogaster. Sus contribuciones ms importantes fueron en el campo de la gentica, gracias a su trabajo Drosophila melanogaster se convirti en uno de los principales organismos modelo en la gentica. Este artculo tiene como objetivo: Identificar y analizar las leyes de Mendel, en el cruce entre el mutante macho White y la hembra Silvestre ( W/W x S+/S+), de Drosophila melanogaster. PALABRAS CLAVE: Leyes de Mendel; gen; Mutante White; Individuo Silvestre; cruces genticos, generacin filial

Para el cruce de los individuos, es necesario que las moscas hembras sean vrgenes, se deben identificar las caractersticas morfolgicas entre los mutantes macho y hembra, de las moscas involucradas en el cruce, adems debe haber una buena manipulacin de los individuos para realizar el cruce. En cada cultivo debe haber por mnimo cuatro pares de moscas entre macho White y hembra Silvestre. Para cada generacin filial (F1) y (F2), procedente de la generacin parental, se tomaron las fechas de siembra y el conteo de individuos discriminando entre machos y hembras, identificando sus fenotipos, donde en la (F1) el 100% de hembras y machos son silvestres, en la (F2) el 50% de los machos son silvestres, el otro 50% de los machos son White y el 100% de las hembras son silvestres.

1 Herencia, Facultad de ciencias y educacin, Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, Bogot D.C.; Colombia.

FERNNDEZ, C.C, CHIPATECUA, D.A. & GORDILLO, C.S.

Abstract: In the vast majority of gene experiments, individuals most commonly used for its ease of breeding, economics, short life cycle and high productivity is Drosophila melanogaster, allowing you to identify the laws of inheritance. Thomas Morgan was a geneticist who studied natural history, zoology and macromutation in the fruit fly Drosophila melanogaster. His major contributions were in the field of genetics, thanks to his work Drosophila became a major model organisms in genetics This article aims to: Identify and analyze the laws of Mendel, at the junction between the mutant male and female Silvestre White ( W / W x S + / S +), Drosophila melanogaster. The movement of individuals, it must be virgin female flies, you should identify the morphological characteristics between male and female mutants, flies involved in the crossing, must also be a good handling of individuals to make the crossing . In each crop must be at least four pairs of flies between male and female White Wild For each filial generation (F1) and (F2), from the parental generation were taken sowing dates and the count of individuals to discriminate between males and females, identifying phenotypes, where the (F1) 100% of females and males are wild, in (F2) 50% of the males are wild, the other 50% are White males and 100% of the females are wild.

KEY WORDS: Laws of Mendel, Gen, White Mutant, wild individuals; filial generation, genetic crosses INTRODUCCIN: En la gran mayora de los trabajos en que se utiliza la mosca de la fruta Drosophila melanogaster, resulta indispensable conocer sus caractersticas morfolgicas como el tipo, la forma y/o la disposicin de sus estructuras. En particular, en los estudios genticos es importante conocer de una manera general, la morfologa externa del adulto, para poder distinguir las caractersticas que presentan las moscas de ambos sexos o las que han sido afectadas por mutaciones. (Piqueras & Peralta, 2002). Existen diferencias entre los individuos masculinos y femeninos, lo que permita distinguirlos unos entre otros. La punta del abdomen es alongada en la hembra y redondeada en el macho, el abdomen de la hembra contiene siete segmentos visibles; mientras que el macho contiene solamente cinco, los machos poseen los peines sexuales, las hembras no lo presentan, el tamao de las hembras es mayor que el de los machos. (Piqueras & Peralta, 2002). El mutante White, fue la primer mutacin ligado al sexo que se haya descubierto en la mosca de la fruta Drosophila melanogaster . Esta se caracteriza por el color blanco de sus ojos y de sus ocelos, en las hembras los tbulos de Malpighi y cubierta testicular son blancos, mientras que en los machos los tbulos de Malpighi y la cubierta testicular son incoloros. Es un mutante de ojos recesivo ligado al
2

Herencia, Facultad de ciencias y educacin, Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, Bogot D.C.; Colombia.

FERNNDEZ, C.C, CHIPATECUA, D.A. & GORDILLO, C.S.

sexo, situado en la posicin 1,5 del cromosoma X en el primer par (I). (Cooper, j. 2008). El ciclo vital de Drosophila melanogaster consta de cuatro estadios huevo, larva, pupa y adulto o imago, en el cual el desarrollo completo de la mosca tiene una duracin aproximada de nueve (9) das en condiciones ambientales optimas, como son la temperatura a 25, humedad del 60%, un medio de cultivo apropiado y un PH optimo. (Colomer, F. 2001). El huevo de Drosophila mide alrededor de 0,5 mm de longitud, est revestido por una membrana externa, el corin, constituida de clulas hexagonales. Las larvas de Drosophila pasan por tres estados de desarrollo: Estado I donde las larvas van desde que eclosiona el huevo hasta que cumplen 24 horas, este estado se caracteriza porque las larvas presentan gran movilidad y su principal funcin es la bsqueda de alimento. Estado II va desde las 24 horas a las 72 horas de vida, en general se consideran larvas de estado II las que tienen entre 48 y 72 horas y su funcin principal tambin es la bsqueda del alimento. Estado III va desde las 72 a las 96 horas de vida, en este estado las larvas pierden su inters por el alimento y su principal funcin es encontrar un lugar seco donde pupar. (Strasinger, S & Di Lorenzo, M. 2008). La larva se transforma en pupa dentro del penltimo tegumento larval que al principio es suave y blando pero lentamente se endurece y oscurece su color. La transformacin emprendida durante el perodo de pupa, culmina con la formacin del imago. Cuando estos cambios se han completado, el adulto emerge por el extremo de la

pupa. En un principio la mosca es alargada y con las alas sin expandir todava, dentro de poco tiempo, sin embargo, las alas se expanden y el cuerpo gradualmente adquiere la forma redonda del adulto. Las moscas recin nacidas son de color claro, pero se oscurecen dentro de pocas horas. Es posible, entonces, distinguir en el cultivo las moscas recin emergidas de las ms viejas. (Colomer, F. 2001). Drosophila melanogaster presenta 4 parejas de cromosomas, los cromosomas sexuales X y Y pertenecen al primer par (I), las otras tres parejas son autosmicas (II, III, IV), las parejas (II, III) son metacntricos y grandes, el cromosoma X es donde se localizan la mayora de los genes y el cromosoma Y y el par IV, son pequeos y telocntricos. (Cooper, J. 2008). METODOLOGA Al inicio de este trabajo se utilizaron unas pocas gotas de ter en una mota de algodn. Luego se introdujo en un frasco de vidrio como eterizador para que las moscas queden inmviles y as transportarlas a la caja de petri. Luego se identificaron las partes del cuerpo de la mosca Drosophila melanogaster silvestre y el mutante White mediante la observacin directa utilizando el estereoscopio reconociendo las diferencias entre hembras y machos. De inmediato los frascos a utilizar se sometieron aun proceso de esterilizacin de tres a seis horas en autoclave

3 Herencia, Facultad de ciencias y educacin, Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, Bogot D.C.; Colombia.

FERNNDEZ, C.C, CHIPATECUA, D.A. & GORDILLO, C.S.

Posteriormente se inicio la preparacin de los medios de cultivo de harina de trigo, inicialmente se calentaron 300ml de agua luego se adiciono 20gr de azcar y 95gr de harina dejando hervir durante 4 minutos. Luego se disolvi lentamente la levadura en agua tibia en un recipiente aparte. Seguidamente se adiciono el agar, se dejo disolver a fuego lento y se agrego la levadura disuelta; a continuacin se mezclo y se aadi 12,5gr de cido actico. Finalmente el medio se verti en los frascos (previamente esterilizados) y se tapo con los tapones de gasa se dejaron por 24 horas para que solidifique y se puedan pasar las moscas a los medios de cultivo flameando los frascos y teniendo la mayor asepsia posible. Finalmente se procedi a realizar el cruce de la mosca Drosophila melanogaster silvestre y el mutante White. En primera instancia se pasaron a un medio de cultivo 4 parejas entre macho y hembra de moscas silvestres para obtener hembras vrgenes. Luego se realizo el cruce introduciendo 4 parejas entre un macho White y una hembra silvestre en un nuevo medio de cultivo, siendo esta la generacin parental. Posteriormente se obtuvo la primera generacin filial (F1), procedente de la generacin parental y por ltimo se obtuvo la segunda generacin filial (F2), realizando el cruce de la primera generacin filial (F1) con 4 parejas de moscas en un medio de cultivo aparte. A cada medio de cultivo se le realizo la toma de datos pertinente los cuales consisten en: fecha de siembra, conteo de individuos sin discriminacin entre

machos y hembras y el fenotipo que presentaban. RESULTADOS En el siguiente cuadro se muestra las fechas y la descripcin de la generacin parental, la primera generacin filial (F1) y la segunda generacin filial (F2). (Fig. 1.). Fecha 31 Agosto 2011 de de Descripcin De la sepa de moscas de Drosophila melanogaster silvestre, se tomaron 4 parejas de machos y hembras silvestres, para obtener hembras vrgenes. A las 6.30am se observan varios huevos de moscas, aproximadamente 37 a una temperatura de 18C. Se observan 12 larvas de mosca Drosophila melanogaster Silvestre, tambin se libera la generacin parental, para que estos no sean confundidos con la futura progenie. Aparecen las primeras 4 pupas de Drosophila melanogaster Silvestre. Aun no emergen las primeras moscas y aparecen alrededor de 13 pupas ms en el medio de cultivo.
4

3 de septiembre de 2011

5 de septiembre de 2011

8 de septiembre de 2011 12 de septiembre de 2011

Herencia, Facultad de ciencias y educacin, Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, Bogot D.C.; Colombia.

FERNNDEZ, C.C, CHIPATECUA, D.A. & GORDILLO, C.S.

15 de Emergen las septiembre primeras 4 moscas de 2011 Silvestres a las 12:30 pm, a las 3:30 pm en los laboratorios de la macarena B en la Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, se procede a identificar si son machos o hembras con la ayuda de una lupa. Afortunadamente las 4 moscas que emergieron son hembras y se introducen en un nuevo medio de cultivo. Dos das despus emergen 2 moscas mas, al realizar la identificacin estos son machos. 22 de Se realiza la septiembre identificacin de 4 de 2011 mutantes machos White a las 11:30 am en los laboratorios de la macarena B y se introducen en el medio de cultivo donde se encuentran las moscas hembras silvestres vrgenes, las cuales fueron dormidas con ayuda del eterizador. 27 de Aparecen los Septiembre primeros huevos muy de 2011 poco visibles, entre el cruce de machos White con hembras Silvestre ( W/W) x S+/S+) y Se libera la generacin parental de la primera generacin

29 de Septiembre de 2011

2 Octubre 2011

de de

7 Octubre 2011

de de

8 Octubre 2011

de de

filial, entre el cruce de machos White con Hembras Silvestre ( W/W) x S+/S+), para no confundirlos con la progenie. Se observan las primeras pupas en el cultivo que presenta el cruce entre machos White con hembras Silvestre ( W/W) x S+/S+). A las 3:56 pm se observan 2 primeras moscas en el cruce entre machos White con Hembras silvestre ( W/W) x S+/S+), en la realizacin de la identificacin hay 1 macho que tiene ojos de color rojo y abdomen con terminacin redonda y la otra mosca es hembra y presenta los ojos rojos y la terminacin de su abdomen es puntiagudo. Siendo las 4:26 pm se observan 12 moscas, 7 hembras y cinco machos, todos con ojos rojos lo que indica que son 100% silvestres heterocigotos. A las 12:11 pm se introducen en un nuevo cultivo 4 parejas procedentes del cultivo de la primera generacin filial (F1), para obtener la segunda generacin filial (F2).
5

Herencia, Facultad de ciencias y educacin, Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, Bogot D.C.; Colombia.

FERNNDEZ, C.C, CHIPATECUA, D.A. & GORDILLO, C.S.

13 Octubre 2011

16 Octubre 2011 22 Octubre 2011 28 Octubre 2011

de Se observan los de primeros huevos de la segunda generacin filial (F2), aproximadamente 23. de A las 8:18 am se de observaron 16 larvas aproximadamente. de Siendo las 12:40 pm de se observan 8 pupas pertenecientes a la segunda generacin filial (F1). de A las 3:12 pm surgen de las primeras moscas correspondientes a la segunda generacin filial (F2), ocho 8 moscas 4 machos y 4 hembras, 4 hembras con ojos rojos (silvestres), 2 machos con ojos rojos (silvestres), 2 machos con ojos y ocelos de color blanco (mutantes White).

Xw Y

X+ X+ Xw X+ Y

X+ X+ X w X+ Y
Silvestres Ojos Silvestres Ojos X+ Y

Fenotipo: 100% Rojos. Rojos. 100%

Genotipo: 100% X+ XW Heterocigotos

Fig. 2. Cuadro de Punet de la primera generacin filial (F1), del cruce entre un macho White y una hembra Silvestre homocigota. Primera generacin filial (F1).

Fig. 1. Fechas del da de siembra y descripcin del nmero de individuos y fenotipos de los mismos, correspondiente a los medios de cultivo, de la generacin parental, la primera generacin filial (F1) y la segunda generacin filial (F2). Cuadro de Punnett de la primera generacin filial (F1). Cuadro de Punnett de la primera generacin filial (F1), del cruce entre un macho White y una hembra Silvestre, donde se obtiene 100% hembras Silvestres heterocigotas y 100% machos Silvestres. (Fig. 2.).

Fig. 3. Imagen del cultivo de la primera generacin filial (F1). Cuadro de Punett de la segunda generacin filial (F2). Cuadro de Punnett de la segunda generacin filial (F2), del cruce entre un macho White y una hembra Silvestre, donde se obtiene 50% hembras Silvestres homocigotas, 50% hembras White homocigotas, 50% machos Silvestres y 50% Machos White. (Fig. 4.).

6 Herencia, Facultad de ciencias y educacin, Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, Bogot D.C.; Colombia.

FERNNDEZ, C.C, CHIPATECUA, D.A. & GORDILLO, C.S.

Xw Y

X+ X+ X+ X+ Y

Xw Xw Xw Xw Y

ANLISIS DE RESULTADOS Encontramos totalmente congruente lo observado con las referencias bibliogrficas y tericas. La diferenciacin de sexo resulto muy sencilla, en la mayor parte de ocasiones se pudo hacer a simple vista; debido a la caracterstica ms notoria, como por ejemplo, el abdomen oscuro de los machos. Esta caracterstica se convirti en el principal referente para su identificacin. Es importante el orden y la buena planeacin de los movimientos que realizamos a la hora de la extraccin de las moscas del frasco original al eterizador y a la caja de petri ya que se pueden perder muchos ejemplares con facilidad. En la realizacin de los medios, la asepsia, esterilizacin del rea de trabajo, el uso del mechero los cuales fueron indispensables para la eliminacin de esporas de hongos y bacterias que se encuentren en el ambiente. El uso de los elementos de barrera personales tales como gorro, tapabocas, bata y guantes, son claves en el desarrollo de este experimento; ya que la no contaminacin de los medios influye en que la prctica se pueda seguir desarrollando. Es importante tomar la precaucin de no mover los frascos hasta que el frasco se seque. En el frasco 1 se obtuvo la F1 con 100% de especmenes silvestres heterocigotos con ojos rojos de los cuales identificamos 15 hembras y 10 machos. En este caso se cumple la primera ley de Mendel la cual habla de la uniformidad, ya que los descendientes de esta primera generacin son todos iguales entre
7

Fenotipo: White 50%; Silvestre 50% White 50% ;Silvestre 50% Genotipo: 50%

X+ Y, XW Y X Homocigoto
+

50% 50%

X+

50% Heterocigoto

X + XW

Fig. 4. Cuadro de Punnett de la segunda generacin filial (F2), del cruce entre un macho White y una hembra Silvestre. Segunda generacin filial (F2).

Fig. 5. Imagen del cultivo de la segunda generacin filial (F2).

Herencia, Facultad de ciencias y educacin, Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, Bogot D.C.; Colombia.

FERNNDEZ, C.C, CHIPATECUA, D.A. & GORDILLO, C.S.

s fenotpicamente, pero genotpicamente son diferentes a sus progenitores ya que las hembras son heterocigotas En el frasco numero 3 obtuvimos la filial 2, en la cual observamos 50% de individuos silvestres de los cuales 14 eran hembras y 10 eran machos y 50% de individuos White de los cuales 9 eran hembras y 15 eran machos; por lo cual se deduce que el 50% de la poblacin corresponde a individuos homocigotos y 50% a individuos heterocigotos. Relacionando con la segunda ley de Mendel la cual habla de la segregacin de los caracteres, ya que para cada caracterstica un individuo hereda dos alelos, uno de cada progenitor y estos pueden ser homocigotos o heterocigotos.

CONCLUSIONES.

El cruce de una mosca Hembra Silvestre y un macho White en al generacin filial se obtienen individuos de ojos rojos silvestre desde el punto de vista fenotpico; sin embargo las hembras obtenidas de este cruce son heterocigotas para el carcter de ojos rojos y los machos por ser hemicigotos tambin son fenotpicamente silvestres. Se determin que el fenotipo de ojos rojos de las moscas silvestres es de carcter dominante y el de ojos blancos es de carcter recesivo. Es decir, se cumple

la primera ley de Mendel de la Uniformidad. En el caso de la F2 (Segunda generacin filial) se obtuvo un 50 % de los individuos tanto hembras como machos con el carcter fenotpico de mosca White y el restante 50% fenotpicamente moscas silvestres quedando de esta manera los caracteres de la generacin parental en igual proporcin fenotpica con respecto a la misma cumplindose de esta manera la segunda ley de Mendel acerca de la segregacin de los caracteres en la segunda generacin filial. Esto es debido entonces, a que los genes parentales que se separaron se recombinan en la segunda generacin permitiendo as la expresin de los mismos. De igual forma se comprob que el carcter de los ojos blancos es ligado al sexo y es de carcter recesivo debido a que se debi esperar hasta un cruce entre hembras heterocigotos silvestres con machos White para que este este carcter se expresara y es ligado al X ya que tanto hembras como machos expresaban este carcter pues el carcter holandrico solo se hereda de padre a hijo Varn. La Drosophila melanogaster es til para realizar estudios sobre gentica de poblaciones y de las leyes de Mendel debido a que son individuos que tienen un acelerado crecimiento poblacional y como pudimos
8

Herencia, Facultad de ciencias y educacin, Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, Bogot D.C.; Colombia.

FERNNDEZ, C.C, CHIPATECUA, D.A. & GORDILLO, C.S.

comprobar la preparacin de los medios es sencilla y econmica y el ciclo de vida de estos individuos es relativamente corto.

Iglesias, B & Gallardo, M. 2005. Bases de la Fisiologa. 20 ed. Editorial Tebar. Quito. Ecuador. 472p. Nusslein, C. 2009. Gnesis y desarrollo de la vida. 4ta edicin. Editorial Brosmac sl. Madrid, Espaa. pp. 48. Piqueras J, peralta a, 2002. Gentica. 1era edicin. Editorial Ariel ciencia. Quito, ecuador. pp. 39-41. Strasinger, S & Di Lorenzo, M. 2008. Anlisis de Orina y de los Lquidos Corporales. 50 ed. Editorial Mdica Panamericana. S.A. Buenos Aires. Argentina. 203-214p. Teora cromosmica de la herencia. Ubicacin de los genes en cromosomas Morgan 2011 (s.f). Extrado el 01 de octubre de 2011 de http://es.scribd.com/doc/1567 7355/ligamientoentrecruzamiento.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS Berg, E. 2006. DNA. 3era edicin. Editorial Elsevier. Madrid, Espaa. pp. 459-462. Colomer, F. 2001. Enfermera Maternal y Ginecolgica. 10 ed. Editorial Elsevier. Barcelona. Espaa. 45-46 p. Cooper, J (2008). La clula. Editorial Marban: Madrid Espaa. 726p. Gardner E, Michael J, Simmons D, Peter S (1998). Principios de gnetica. Editorial Limusa: buenos aires argentina 649 p. Goldstein, I. 1994. Drosophila melanogaster: usos prcticos en la clula y la biologa molecular. 1era edicin. Editorial Academic Press, buenos aires, argentina. Inc. pp. 51-53.

9 Herencia, Facultad de ciencias y educacin, Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, Bogot D.C.; Colombia.