Reaccin enzimtica: Catalasa

Integrantes: -Bello Rodrguez Stephanie Zaraid -Cardoso Alvarado Sandra Carolina -De Blas Lpez Fernanda -Palacios Gutirrez Manuel -Reyes Romero Omar -Ruiz Prez Fernando Marcos Grupo: 604 Fecha de entrega: 23/Nov./2011

Ttulo: Reaccin enzimtica: Catalasa Introduccin: Como primer punto debemos saber que es la catalasa: La catalasa es una de las enzimas ms activas descubiertas hasta el momento; 1 mg de esta enzima en forma pura libera cerca de 3000 l. de oxgeno por hora 0 C. Pertenece al grupo de las hidroperoxidasas tambin comprende a las peroxidasas que contienen hierro. En la reaccin catalizada por la catalasa se encuentran los siguientes resultados: H2O2 + H2O2 2H2O + O2 La enzima utiliza una molcula del H2O2 como sustrato aceptor y otra de H2O2 como donador; como en este caso se libera oxgeno en forma gaseosa. (Laguna J., 1979) La catalasa se encuentra en los microcuerpos de las clulas animales tambin llamados peroxisomas. El perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene entre otras una funcin protectora contra microorganismos patgenos, principalmente anaerobios, pero dada su toxicidad debe transformarse rpidamente en compuestos menos peligrosos. Esta funcin la efecta esta enzima que cataliza su descomposicin en agua y oxgeno.(Lehninger, A. 1982) Para entender bien todo lo que se lleva a cabo en la reaccin tambin debemos describir la importancia de Km la catalasa, Una interpretacin de la constante de Michaelis, es que es igual a la concentracin de sustrato con la que el 50% de los sitios activos enzimticos estn ocupados por sustrato (Campbell M., 2004)

En la tabla 1 que Campbell M. (2004) nos presenta se muestran los ndices de recambio y los Km de algunas de las enzimas tpicas:

Tabla 1.- Km e ndices de recambio de algunas enzimas. Enzima Catalasa Funcin Conversin de H2O2 en H2O y Anhidrasa carbnica Acetilcolinesterasa Quimiotripsina Lisozima O2 Hidratacin de CO2 Regenera acetilcolina Enzima proteoltica Degrada polisacridos de la pared celular bacteriana Objetivo: 1.-Disear un dispositivo con materiales reciclados que sea capaz de medir el volumen de oxgeno liberado a causa de la reaccin que ocurre entre el agua oxigenada con hgado. 2.-Corroborar que existe liberacin de oxgeno con la reaccin de la catalasa con agua hidrogenada (Lehninger,1982) as como, con el dispositivo previamente realizado, medir la velocidad con la que el oxigeno es liberado. Metodologa: Para fabricar el dispositivo, slo se necesito de dos jeringas una de 10ml. y otra de 20 ml., y de una botella de refresco pequea. 1.-A la jeringa de 10 ml. se le remueve el embolo, slo dejando el hule que esta contiene, pues este hule ser el que ascienda. 2.-El hule de la jeringa de 10 ml. debe ser colocado de manera contraria a como estaba colocada en el embolo pues ahora la presin ir de abajo hacia arriba. 3.-Esta jeringa de 10 ml. debe ser colocada en la tapa de la botella de manera que la presin no termine por safarla de su posicin. En la imagen 1 se muestra como debe quedar colocada la jeringa y su embolo. 1 X 106 1.4 X 104 1.9 X 102 0.5 12 9.5 X 10-2 6.6 X 10-1 6 X 10-3 ndice de cambio 4 X 107 Km 25

4.-La jeringa de 20 ml. es necesaria para tomar y aplicar el volumen necesario de agua oxigenada al dispositivo. 5.-Hacer un pequesimo agujero con la jeringa de 20ml. en un costado de la botella, que ser por donde se inyecte el agua oxigenada. Hule colocado A la inversa. Botella de Refresco Colocar la jeringa de manera correcta Jeringa de 10 ml.

(Imagen 1 Dispositivo para medir oxgeno liberado en una reaccin de hgado con agua oxigenada)

Para llevar a cabo la reaccin entre el hgado y el agua oxigenada se necesit. 1.-Colocar 25 gramos de hgado molido en la botella de refresco, 2.-Cerrar perfectamente la botella con su tapa que ya tiene previamente bien puesta la jeringa de 10 ml. 3.- Con la jeringa de 20 ml. tomar 10ml. de agua oxigenada. 4.-En el costado de la botella que tiene el agujero, meter la aguja de la jeringa y aplicar los 10ml. de agua oxigenada. En la imagen 2 se muestra el momento en el que se le agrega el agua oxigenada a la botella con el hgado. 5.-Medir el volumen de oxgeno liberado cada 2 segundos.

(Imagen 2 al dispositivo se le agrega agua oxigenada)

Resultados

En esta seccin de la prctica interpretaremos los valores obtenidos del experimento realizado en cuatro ocasiones. Tabla 1 Tiempo (s) 2 4 6 8 Volumen (mL) 1 3 6 8

En la Tabla 1 se muestran los valores correspondientes a tiempo de la reaccin y volumen de oxigeno que se liber mientras ocurra dicha reaccin obtenidos en la primera ocasin en la que se realiz el experimento. Grfica 1

En la Grafica 1 se muestran los valores dados en la tabla anterior, y con los cuales podemos saber la velocidad, as como el grado de perfeccin que se logr al hacer la reaccin, que en este caso es casi el mximo valor. La lnea que pasa transversalmente por la grafica se conoce como la grafica de regresin, con la cual podemos determinar si nuestros valores son correctos. Tabla 1 Tiempo (s) 2 4 6 Volumen (mL) 2 5 7

8 10 En la Tabla 2 podemos observar valores que corresponden al tiempo en el que se llev a cabo la reaccin y el volumen de oxigeno que se desplaz, todos los valores en base a la segunda experimentacin que el equipo llev a cabo. Grfica 2

En la grfica superior vemos los valores de la Tabla 2 llevados a una grfica para poder as determinar su velocidad y la tasa de regresin, la cual es la ms alta que logramos encontrar (0.994) con base en los valores dados en todas las veces que se realiz la reaccin. Tabla 2 Tiempo (s) Volumen (mL) 2 2 4 4 6 7 8 8 En la Tabla 3 se dan los valores provenientes de la tercera medicin que el equipo realiz y de donde se obtuvieron valores razonables de volumen en cuanto al tiempo antes determinado. Grfica 3

En la grafica 3 que se obtuvo al poner en orden los valores dados en la tercera experimentacin se logr encontrar que fue la ocasin con ndice mas bajo de regresin en comparacin con las otras tres grficas. A pesar de esto, se puede asegurar que el ndice es alto, es decir, que se puede determinar con ms facilidad la velocidad real que tiene la reaccin. Tabla 3 Tiempo (s) Volumen (mL) 2 3 4 5 6 8 8 10 En la tabla 4 por fin encontramos los valores obtenidos de la ltima reaccin que se logr. Como podemos observar, son valores convincentes y lgicos, ya que no vemos valores disparados.

Grfica 4

La Grfica 4 es convenientemente parecida a la Grfica 1 en cuanto a la tasa de regresin, ya que las dos registran un valor de 0.993. Cabe recalcar que los valores son diferentes y que por consiguiente la velocidad tambin ser diferente.

Discusin: Despus de haber llevado a cabo la realizacin de la prctica, hemos discutido acerca de los resultados obtenidos y, al comparar con los otros equipos, llegamos a algunos puntos de vista sobre el por qu de la variedad de nuestros resultados. La catalasa aumenta la velocidad de la descomposicin del perxido de hidrogeno. (Lehninger, A. 1982, p. 514) Tras catalizar la descomposicin de una molcula de H2O2, la catalasa vuelve a encontrarse exactamente en el mismo estado que antes, preparada para un nuevo ciclo. (Devlyn, 1999, p. 390) Podemos decir que los resultados que obtuvimos se refieren a la velocidad de la reaccin qumica, la cual explica los detalles del mecanismo cataltico. (Bohinsky, R. 1991, p. 624) Al comparar los resultados obtenidos en las cuatro tablas con sus respectivas grficas observamos que los valores no difieren mucho entre s. Esto se debe tal vez a que al realizar la reaccin para cada una de las cuatro tablas, pusimos atencin al medir las cantidades agregadas, que estas fueran

exactamente iguales para que no fueran un factor de error a la hora de registrar los resultados. Aunque nuestros resultados no fueron idnticos, debido a posibles fallas con el dispositivo, probablemente habra alguna pequea fuga de oxigeno que provoco un ligero error en nuestros resultados. Debido a que la diferencia fue de un margen muy chico, acordamos que la realizacin del dispositivo, que midi la reaccin, fue correcta, y nuestros resultados fueron registrados de manera exacta. Conclusin: Para finalizar nuestra practica, es importante que se relacione con lo visto en clase, y el equipo encontr varias similitudes entre el tema de metabolismo y enzimas visto en la Unidad II del Programa de Biologa V, con la prctica que anteriormente realizamos. El mayor parecido que encontramos fue con el tema de enzimas, ya que la catalasa se encuentra en este grupo y como anteriormente citamos pertenece al grupo de las oxidorreductasas, las cuales funcionan para catalizar funciones qumicas, las cuales son energticamente posibles. En el caso del experimento, nuestro sustrato es el hgado, el cual se convierte en molculas diferentes, denominadas productos. Respecto al metabolismo, podemos decir que la reaccin que obtuvimos al mezclar agua oxigenada (perxido de hidrogeno) con el hgado de pollo es de tipo catablica, ya que descompone al agua oxigenada en agua y oxigeno, reaccin en la que tambin se desprende calor, por lo que se define como reaccin exergnica.

Bibliografa:

Laguna J. 1979 Oxidaciones Biolgicas, Bioqumica, La prensa mdica mexicana, Mxico D.F, pg. 89 Campbell M. 2004.El enfoque Michaelis Menten de la cintica enzimtica. Bioqumica, Thompson International, pp. 148-149 Lehninger, A. 1982 Catabolismo y produccin de la energa del enlace de fosfato, Bioqumica. Omega Espaa. pg. 514