MIA I

Instrumento analtico: conjunto de mecanismos ordenados de modo a fornecer informao analtica. medida a magnitude de uma propriedade fsica que se relaciona directamente com a massa ou concentrao da espcie a medir. Um aparelho no um instrumento analtico pois no fornece informao analtica. Tcnica vs Mtodo Analtico: Tcnica Princpio cientfico capaz de fornecer informao sobre a composio da amostra. Mtodo Particular utilizao de uma tcnica para uma determinao em concreto. Grupos principais de tcnicas instrumentais de anlise: y y y y Tcnicas optomtricas: (absoro, emisso, disperso, rotao, refraco); Tcnicas termomtricas: (transferncia de calor); Tcnicas electroanalticas: (corrente, potencial, condutividade); Tcnicas que englobam o pr-processamento da amostra: tcnicas separativas e tcnicas de automatizao.

Vantagens das tcnicas instrumentais de anlise: y y y y y y Determinaes que no so possveis realizar pelas tcnicas clssicas; Determinar quantidades da ordem do picograma, fentomole/L, etc; Fornecer resposta num intervalo alargado de concentraes; Utilizar volumes de amostra da ordem do microlitro; Efectuar determinaes simultneas; Realizar monitorizao.

Feixe de Radiaes Monocromtico: Conjunto de radiaes electromagnticas de um nico comprimento de onda (frequncia) que percorrem direces paralelas no espao. Feixe de Radiaes Policromtico: Conjunto de radiaes electromagnticas de diferentes comprimentos de onda (frequncias) que percorrem direces paralelas no espao. Reflexo: Quando uma REM monocromtica incide numa interface entre dois meios com densidade pticas diferentes observa-se a reflexo de parte da radiao incidente. Refraco: Quando uma REM incide numa interface entre dois meios com densidade pticas diferentes observa-se uma variao brusca da direco de propagao que decorre da diferena de velocidade da REM em cada um.

Difraco: Quando uma REM incide numa interface irregular a radiao incidente reflectida sem direco preferencial. Monocromador: O monocromador permite isolar REM monocromtica a partir de luz policromtica. - A refraco um fenmeno til na decomposio de feixes policromticos. - As redes de difraco, por transmisso, ou de reflexo difusa proporcionam a sobreposio das REM, observando-se a decomposio da luz branca por fenmenos de interferncia construtiva e destrutiva.

Efeito fotoelctrico: emisso de electres por um material, geralmente metlico, quando exposto a uma radiao electromagntica de frequncia suficientemente alta, que depende do material. Efeito fotocondutivo: manifesta-se quando se faz incidir radiao electromagntica com frequncia apropriada sobre cristais de material semicondutor, traduzindo-se na formao de pares de electro-lacuna. Detectores: os detectores mais usados so o fotomultiplicador (baseado no efeito fotoelctrico), o fotododo, a matriz de dodos e o CCD ou dispositivo de acoplamento de carga (estes ltimos baseados no efeito fotocondutivo). Detectores baseados no efeito fotoelctrico (fototubos) caram em desuso pois eram dificilmente miniaturveis e consumiam bastante energia elctrica, apresentavam uma razo sinal/rudo reduzida. Propriedades do Detector ideal: - Gama alargada de resposta s REM; - Elevada sensibilidade; - Velocidade de resposta elevada; - Elevada razo sinal/rudo.

Viso: O que vemos atravs dos olhos uma construo subjectiva da realidade levada a cabo pelo nosso crebro. A nossa verso de realidade resulta da nossa percepo do mundo sensrio. A nossa viso possvel pois o olho formado por uma srie de estruturas transparentes a radiaes superiores de comprimento de onda superior a 350 nm. Os bastonetes so responsveis pela viso nocturna; os cones pela viso diurna e da cor. O all-trans-retinal derivado da Vitamina A e este grupo prosttico das opsinas influencia a recepo das REM ao nvel dos bastonetes e cones. Cores: A cor de uma soluo luz ambiente (cor complementar) resulta da subtraco de uma cor do espectro visvel (cor principal). A cor complementar assim resultado da adio das cores remanescentes. Espectro: representao grfica da variao da magnitude de uma propriedade fsica medida por via instrumental em funo do comprimento de onda. Regras (simplificadas) de transio electrnica: - Decorre em 10-15 s, intervalo de tempo insuficiente para ocorrer inverso de spin (cerca de 10 -9 s); - S so permitidas transies em que l varia obrigatoriamente de 1 e m de 0 ou 1. Espectros de emisso e absoro: O espectro de emisso mais complexo do que o espectro de absoro. Se ocorrerem transies electrnicas de nveis energticos mais elevados para nveis energticos mais baixos, verifica-se emisso, se ocorrer o inverso verifica-se absoro. Obtm-se um espectro de emisso quando se excitam os tomos e se analisa a radiao que emitem quando perdem o excesso de energia. uma srie de riscas de cor sob um fundo escuro. Obtm-se um espectro de absoro quando se faz incidir a REM e se analisa quais os comprimentos de onda que desaparecem (uma srie de riscas escuras no espectro). Causas principais do alargamento das riscas atmicas: - Alargamento natural; - Alargamento de presso; - Alargamento de Doppler. Transies electrnicas: - Transies -> * - requerem energia elevada (UV de vcuo) e frequentemente originam ciso molecular;

- Transies n -> * - UV vcuo/UV prximo (150 250 nm) e espcies que possuem heterotomos; - Transies -> * - altamente provveis com aumento da conjugao UV prximo (250-350 nm) na zona do visvel para grau de conjugao elevado; - Transies n -> * - molculas que possuem heterotomos, regio do UV prximo/ visvel, pouco provveis. Cromforo: regio ou grupo responsvel pela absoro de REM nas regies do UV prximo/VIS. Auxocrmos: grupos funcionais capazes de condicionar as caractersticas de absoro dos cromforos. Os auxocrmos no absorvem por si mesmos. Espcies moleculares: Nos complexos metlicos em soluo h desdobramento energtico das orbitai degeneradas d. Os complexos metlicos absorvem REM no UV/VIS em pelo menos um dos seus estados de oxidao. O comprimento de onda das REM mais absorvidas varia com a fora do ligando e com a estequiometria do complexo metlico, isto quanto maior o comprimento de onda, menor a fora do ligando. Absoro por transferncia de carga: absoro normalmente muito intensa que corresponde a uma transferncia de um electro entre duas regies diversas de uma mesma molcula ou entre uma espcie dadora e uma outra aceitadora. Efeito do Solvente: - Efeito solvatocrmico (+): estado excitado do soluto mais polar -> absoro deslocada para o vermelho; - Efeito solvatocrmico (-): estado excitado do soluto menos polar -> absoro deslocada para o azul. Premissas de Validade da Lei de Beer: - A radiao incidente monocromtica; - A composio da soluo homognea; - A temperatura constante; - As partculas absorventes tm carcter independente; - O ndice de refraco no varia com a concentrao. A = - log T

A = 2-log%T Constante de proporcionalidade na lei de Beer (k): na prtica corresponde para um comprimento de onda definido e um sistema soluto/solvente ao valor de A quando b unitrio e c unitrio: - se c= 1 mol/L, representa-se por (absortividade molar); - se c= 1 g/L, representa-se por a (coef. absoro especfico); - se c= 1 g/dL, representa-se por A1%1 cm (absortividade especfica).

Espectrofotometria de Absoro UV/Vis: Fundamenta-se na medida da absoro selectiva de REM no UV/VIS, quantificada e proporcional concentrao, que se verifica nas espcies moleculares como resultado de transies electrnicas, vibracionais e rotacionais. Componentes bsicos: - Fonte de radiao policromtica; - Sistema de monocromao; - Compartimento de amostragem; - Dispositivo de deteco; - Dispositivo de leitura. Lmpadas: - UV: Nas lmpadas de deutrio, a descarga elctrica ocasiona a dissociao molecular com libertao de fotes de comprimento de onda entre 160 e 375 nm. - Visvel: As lmpadas de tungstnio/halogneo emitem REM entre os 350 e os 2500 nm. O halogeneto de tungstnio formado aps sublimao decompe-se no filamento incandescente aumentando o tempo de vida til da lmpada. Monocromadores: seleco dos comprimentos de onda contnua: prisma e rede de difraco. Qualidade do dispositivo de seleco de REM: - Pela transparncia mxima; - Pela largura da banda isolada. Largura de banda efectiva: intervalo de comprimento de onda isolado com T% maior que metade da T% mxima. Filtros: apenas permitem a seleco de alguns dos comprimentos de onda. Os mais usados so os filtros corados, os de interferncia e os filtros de corte. Compartimento de clulas: As clulas devem ser colocadas na mesma posio ou com a mesma face para a REM incidente: - Deve ser estanque luz exterior; - Pintado internamente de negro de forma a absorver REM estranha medida. Clulas: - UV: clulas de quartzo ou slica fundida;

- Visvel: clulas de vidro ou plstico. Dispositivo de Leitura: No necessrio um detector com elevada sensibilidade: dodos ou uma matriz de dodos. Aps amplificao a leitura comunicada por via analgica, digital ou em monitor de um computador.

y Espectrofotmetro de feixe simples. Componentes bsicos: - Fonte de radiao policromtica; - Sistema de monocromao; - Compartimento de amostragem; - Dispositivo de deteco; - Dispositivo de leitura. Tipos de Dispositivos: - Colormetros: funcionam no VIS; - Fotmetros: apenas alguns ; - Espectrofotmetros: seleco contnua de ; -Analisadores multicanal: usam policromador. Os analisadores multicanal utilizam matrizes de dodos como detectores e controlam por computador. Permitem obter espectros em tempo reduzido e de forma automtica. Estes equipamentos utilizam igualmente um policromador (rede de difraco) em vez de um sistema de monocromao. A obteno de espectros nos analisadores multicanal resulta de subtraco do espectro da amostra do espectro branco guardado previamente na memria do computador. Os espectrofotmetros de duplo feixe e os analisadores multicanal possibilitam no s a obteno de espectros mas das derivadas dos mesmos at quarta ordem. Em cada derivada esbatem-se as bandas largas do anterior e acentuam-se as bandas estreitas, podendo proceder-se analise nos em que o espectro da interferncia se anula, j que a validade da lei de Beer se mantm. Modo de operar: 1 - Ligar o equipamento e esperar para garantir a estabilizao trmica dos componentes elctricos; 2 - Ajustar o comprimento de onda de trabalho;

3 - Acertar o 0 de absorvncia ou 100%T colocando no trajecto ptico uma clula com o branco soluo com composio semelhante da amostra em que est ausente a espcie a determinar; 4 - Proceder leitura de solues de calibrao ou amostras utilizando a mesma clula do branco .

y Espectrofotmetros de duplo feixe. Fundamento: permitem obter espectros de modo automtico com a medida simultnea do branco e da amostra. A REM proveniente da fonte subdivida ou direccionada de modo alternado entre uma clula contendo o branco ou uma clula contendo a amostra. Modo de operar: 1 - Define-se o comprimento de onda de trabalho ou o intervalo de comprimentos de onda em que se pretende obter o espectro; 2 - As duas clulas so preenchidas com o branco , e traa-se o espectro (por vezes referido como baseline) ou acerta-se o 0 de absorvncia; 3 - No suporte da amostra substitui-se a soluo do branco pela da amostra e procede-se ao traado do espectro ou leitura de absorvncia. Leitores de Placas: equipamentos que possibilitam efectuar muitas medidas em simultneo por diferentes tcnicas incluindo a absoro molecular no UV/Vis. Espectrofotmetros modulares: equipamentos permitem alojar no compartimento de amostragem um mdulo de fibras pticas para medidas remotas. Neste caso a fonte de radiao deve ser modulada para que se possa distinguir da luz ambiente. Alguns equipamentos permitem o acoplamento de esferas de integrao para medidas sobre amostras slidas. O formato esfrico permite colher toda a radiao reflectida nas diferentes direces aumentando desse modo a sensibilidade das medidas.

Desvios Lei de Beer na tcnica de espectrofotometria de UV/Vis: - Natureza da amostra (desvios sistemticos); - Qualidade do equipamento utilizado (desvios sistemticos e fortuitos).

Desvios de soluo: - Cada partcula absorvente perde o carcter independente (c > 0,01 mol/L); - Solues com um ndice de refraco varivel; - Participao das partculas absorventes em equilbrios qumicos em soluo. Desvios instrumentais analticos: - Presena de radiao estranha no detector: pode ter origem na banda isolada pelo monocromador, reflexo nas paredes da clula e ser proveniente do exterior; - Diferente largura efectiva de banda dos sistemas de monocromao. Desvios instrumentais sistemticos: - Os valores de absorvncia fornecidos resultam de leituras de transmitncia afectadas por rudo elctrico; - O erro de posicionamento das clulas entre medidas mensurvel para valores de Abs baixos; - O detector pouco sensvel a pequenas variaes da intensidade de radiao. Curvas de Ringbom: A avaliao do intervalo em que o erro da determinao mnimo pode na prtica ser visualizada, para um procedimento especfico com um determinado equipamento, pelo traado da curva. O intervalo em que o declive constante corresponde ao intervalo de %T ou de A em que o erro da concentrao calculada menor. Farmacopeia Portuguesa: A qualidade dos resultados depende da prvia verificao da qualidade do espectrofotmetro, sendo propostos quatro testes: - Calibrao da escala de absorvncias; - Calibrao da escala de comprimentos de onda; - Determinao da resoluo instrumental; - Determinao do nvel de radiao estranha. Espectros na anlise qualitativa: - A maior parte das espcies moleculares apresentam um nmero reduzido de bandas de absoro no UV/VIS limitando a utilidade na identificao molecular a partir dos respectivos espectros. Estes instrumentos permitem ultrapassar esta limitao, permitindo a obteno de derivadas do espectro que possibilitam acentuar detalhes do espectro.

- A constante de dissociao de cidos e bases fracas podem ser determinada desde que pelo menos uma das partculas absorva, absorvam ambas a distintos ou com e diversos num mesmo comprimento de onda. Pontos isobsticos: comprimentos de onda para os quais os valores de so similares independentemente da forma em que a espcie pKa = pH + log [(Adissoc A) / (A Andissoc)] qumica se encontra (dissociada ou no).

Espectros na anlise quantitativa: - Mtodo de Job: Prepara-se uma srie de solues em que a soma das fraces molares de ligando e de metal seja constante, mas crescente num deles e decrescente no outro. Mede-se a absorvncia das solues ao max do complexo. Traa-se uma grfico de A = f(fraco molar de ligando ou metal). - Mtodo da Curva de Calibrao: Fundamenta-se no traado de uma curva de calibrao de A em funo da concentrao da espcie que se pretende quantificar. Pode ser obtida por ensaio de solues de calibrao com concentrao crescente na espcie a medir ou por calibrao in situ . A concentrao da espcie na amostra obtida por interpolao da respectiva absorvncia na curva de calibrao. utilizado quando a matriz da amostra simples e fcil de simular. utilizado quando o nmero de amostras a analisar elevado. Preciso das medidas aumenta com: - Nmero de solues de calibrao utilizadas; - Declive da recta de calibrao; - Nmero de medidas sobre cada amostra; - Proximidade entre o valor de absorvncia medido e o valor mdio das absorvncias obtidas para as solues de calibrao.

Impreciso das medidas: comprometida se outro componente absorver ao mesmo comprimento de onda (interferncia espectral) ou se a matriz condicionar a extenso de absoro do componente sob medida (interferncia fsico-qumica). Mtodo das Adies Padro: Recta de regresso de A em funo da concentrao, volume ou massa de padro adicionado a alquotas da amostra contendo a espcie que se pretende quantificar. Devem estar ausentes outras substncias que absorvam no mesmo comprimento de onda e deve existir proporcionalidade entre absorvncia e concentrao. Utilizado quando a matriz da amostra condiciona a magnitude da absoro, quando a matriz da amostra complexa e difcil de simular e quando o nmero de amostras a analisar reduzido. A abcissa correspondente pode ser encontrada interpolando o dobro do seu valor ou prolongando a recta at ao eixo das abcissas no 2 quadrante. Volumetrias Espectrofotomtricas: Variao de absorvncia em funo do volume de uma soluo reagente adicionada amostra e com o qual a espcie a determinar reage com uma estequiometria conhecida. Utilizado quando a matriz da amostra bastante complexa, quando existem erros sistemticos aditivos e proporcionais e quando o nmero de amostras a analisar muito reduzido. O traado de curvas de proporciona o traado de dois segmentos de recta que extrapolados se intersectam no volume equivalente. O deve ser escolhido de modo a que apenas uma das espcies absorva Os segmento de recta so definidos por pontos experimentais afastados do volume equivalente mas em que vlida a lei de Beer. Medidas Cinticas: A cintica de uma reaco de desenvolvimento ou de decremento de cor constitui um mtodo vulgar de obter informao quantitativa quando se pretende ultrapassar o carcter absorvente da matriz. A realizao de medidas cinticas requer a utilizao de clulas de leitura com agitao magntica e controlo de temperatura. Limite de quantificao menor valor de concentrao que pode ser determinado com preciso aprecivel (melhor que 10%). Normalmente calculado assumindo para K o valor 10. Sensibilidade variao da resposta instrumental obtida com a variao unitria da concentrao (declive): - Quanto maior o declive mais sensvel o procedimento; - Para procedimentos com igual declive mais sensvel o que apresentar melhor preciso (obtido pela curva de Ringbom ou pelo desvio padro do declive).

Tcnicas de Fotoluminescncia Molecular: Os tomos, quando excitados, passam a estados de maior energia (um dos seus electres promovido a um nvel de energia superior). Como os tomos tendem a passar aos estados de menor energia possvel, este tomo vai libertar a energia que absorveu e o electro regressa ao nvel energtico inicial. Estado fundamental: dois electres por orbital, os electres tem spin oposto e esto emparelhados. Estado excitado singlete: um electro numa orbital de maior energia o qual tem a orientao do spin oposto em relao ao electro que se encontra na orbital de menor energia. Estado excitado tripleto: um electro numa orbital de maior energia o qual tem a mesma orientao do spin em relao ao electro que se encontra na orbital de menor energia. Luminescncia: O fenmeno de luminescncia (atmica ou molecular) caracteriza-se pela emisso de luz pela matria e decorre como consequncia da absoro prvia de alguma forma de energia. Fotoluminescncia: fenmeno que ocorre com alguns materiais que ao absorverem radiaes electromagnticas, emitem luz visvel. Tipos de emisso: - Fluorescncia passagem do estado excitado singlete para estado fundamental, no requer mudana na orientao do spin, a emisso ocorre imediatamente aps a incidncia da radiao electromagntica. - Fosforescncia passagem de um estado excitado triplete para o estado fundamental; electro exige uma mudana na orientao do spin, a emisso demora alguns segundos ou at mesmo algumas horas. Diagrama de Perrin-Jablonski: Quando a luz emitida pelo decaimento para o estado electrnico fundamental (S0) proveniente de uma transio entre estados electrnicos de mesma multiplicidade (S1 S0), ou seja, permitidas pela regra da conservao do spin, tem-se o fenmeno de Fluorescncia. Quando a luz emitida pelo decaimento para o estado electrnico fundamental (S0) proveniente de uma transio entre estados electrnicos de multiplicidade diferente (T1 S0), tem-se o fenmeno de Fosforescncia.

Converso interna (IC): Transio no radiante, entre dois estados electrnicos com a mesma multiplicidades. Quanto menor a diferena de energia entre os dois estados, mais eficiente o processo de IC. Cruzamento inter-sistemas (ISC): Transio no radiante, entre dois estados vibracionais isoenergticos, pertencentes a estados electrnicos com diferentes multiplicidades. A converso inter-sistemas (ISC) muito mais lenta que a converso interna. Como a converso inter-sistemas (ISC) lenta, o estado tripleto excitado tem tempos de vida longos. Perda de energia absorvida: Emisso de fotes, amortecimento radiante e reaco qumica. O amortecimento no radiante deve-se a fenmenos extramoleculares como transferncia ressonante e colises no elsticas e a fenmenos intramoleculares como a IC e ISC. Regra da imagem no espelho: Os nveis vibracionais nos estados excitados e estados fundamentais so semelhantes. Um espectro de absoro reflecte os nveis vibracionais do estado electrnico excitado. Um espectro de emisso reflecte os nveis vibracionais do estado electrnico fundamental. O espectro de fluorescncia de emisso a imagem espelhada do espectro de absoro. A regra da imagem no espelho normalmente s se aplica quando a excitao ocorre de S0 S1. Os desvios regra da imagem no espelho so observados quando as transies ocorrem de S0 S2 ou transies para estados ainda mais excitados. Deslocamento de Stokes: a diferena em comprimento de onda entre posies dos mximos da faixa do espectro de absoro e espectro de emisso, da mesma transio electrnica.

Fenmenos de fluorescncia tardia x fosforescncia: distinguem-se porque o espectro resultante se situa tipicamente na regio do espectro onde esperada. No entanto o tempo de fluorescncia decorre num perodo de tempo longo mesmo aps cessar a excitao radiante. Factores que afectam a Fotoluminescncia: - Rendimento quntico ou eficincia quntica (f): a razo do n de fotes emitidos e o n de fotes absorvidos.

- Tipos de transies na fluorescncia: A transio electrnica mais provvel no deve corresponder a energia que promova a fotodissociao (<250 nm); - Eficincia quntica e tipo de transio: A fluorescncia mais frequentemente encontrada em compostos nos quais as transies de menor energia so do tipo -> * que em compostos nos quais a transio de menor energia do tipo n -> *. A eficincia quntica maior para as transies -> *. A fluorescncia est mais frequentemente associada a transies -> * porque apresentam tempos de vida mdios menores, maior absortividade molar e porque os processos de desactivao que competem com a fluorescncia so de ocorrncia menos provvel; - Fluorescncia e estrutura: Estruturas aromticas condensadas e/ou com alto grau de conjugao apresentam alta eficincia quntica. Transies -> * de baixa energia; - Efeito da rigidez estrutural: A fluorescncia favorecida em molculas que possuem estruturas rgidas; - Efeito do tomo pesado: Os halogneos facilitam a ocorrncia de transies n *, aumenta a probabilidade de cruzamento inter-sistema para o estado triplete. Quando presentes no solvente favorecem o amortecimento dinmico da fluorescncia; - Grupos funcionais: y Alquilo e Sulfonato: no influem; y Amino e Hidroxilo: aumentam de modo dependente do pH; y Carbonilo e nitro: diminuem (n -> * de baixa energia); y Ciano: no influem (transies n -> * de elevada energia). - Solvente e Temperatura: O rendimento quntico da maioria das molculas diminui com o aumento da temperatura e com a diminuio da viscosidade do solvente, porque aumentam as colises entre as molculas; - pH: Nos compostos aromticos com substituintes cidos ou bsicos, a fluorescncia do anel depende do pH; as duas formas cidas/base tm comprimentos de onda e intensidades de emisso e absoro diferentes. - Oxignio dissolvido: Diminui a intensidade de emisso de uma soluo fluorescente pelo aumento do cruzamento inter-sistemas (fosforescncia) e tambm possvel a oxidao da espcie fluorescente. Fluorimetria: tcnica analtica instrumental baseada na Fotoluminescncia molecular rpida que decorre de transies electrnicas entre estados de singlete electrnico de modo quantificado e proporcional concentrao.

Fosforimetria: tcnica analtica instrumental baseada na Fotoluminescncia molecular lenta que decorre de transies electrnicas entre estados de triplete excitado singlete fundamental de modo quantificado e proporcional concentrao. Componentes: - Fonte de elevada potncia (F); - Dois selectores de com largura efectiva de banda varivel (M); - Um contador de fotes (CF); - Clula de slica fundida (C); - Detector de elevada sensibilidade a 90 relativamente ao feixe incidente: fotomultiplicador ou CCD (D) Lmpadas: - Xenon a elevada presso; - Descarga elctrica em vapor de mercrio (na instrumentao equipada com filtros). Ajuste da sensibilidade de deteco: - Ajuste da largura efectiva de banda dos sistemas de monocromao primrio e secundrio; - Variao do ganho do detector. Contador de fotes: como a fonte de radiao no emite com igual intensidade nos diferentes comprimentos de onda, esta causa de erro deve ser corrigida. uma espcie qumica que possui um rendimento quntico de fluorescncia constante e independentemente do comprimento de onda da radiao absorvida. Na ausncia de correco (ausncia do contador de fotes) o espectro de absoro obtido bastante diverso do espectro real. O espectro de emisso no corrigido similar ao espectro real apresentando um deslocamento batocrmico entre 10-20 nm. Clulas: - Clula de Dewar; - Clulas de slica fundida; - Clula plstico. Sensibilidade de um espectrofluormetro: A razo sinal/rudo pode, num espectrofluormetro, ser avaliada utilizando o sinal de intensidade de fluorescncia emitido por um padro estvel e fcil de reproduzir com a pequena flutuao de

leituras que o equipamento fornece na ausncia de qualquer espcie fluorescente. Depende da: - Potncia da fonte de radiao utilizada; - Eficincia ptica dos componentes do equipamento; - Largura efectiva de banda dos sistemas de monocromao; - Eficincia de resposta do detector. Espectros de emisso: quando se faz incidir radiao monocromtica numa soluo, dois tipos de radiao emergem a 90: - Radiao fluorescente ou fosforescente; - Radiao incidente dispersa pela soluo: (banda de Rayleigh sem variao de l); (bandas de Raman variao de l). Tipos de espectros em espectrofluorimetria: - Emisso; - Absoro; - Sincronizado. Modo de obteno: Espectros de emisso: - Coloca-se a clula contendo a soluo em estudo no compartimento de clulas do equipamento; - Fixa-se o max no monocromador primrio; - Com o monocromador secundrio, faz-se o varrimento desde o max no sentido do vermelho. Espectros de absoro: - Coloca-se a clula contendo a soluo em estudo no compartimento de clulas do equipamento; - Com o monocromador primrio, faz-se o varrimento desde o no sentido do azul; - Fixa-se o para IntensidadeLuminosa max no monocromador secundrio. Espectros de varrimento sincronizado: - O varrimento simultneo dos 2 monocromadores separados por um fixo, origina um espectro com 1 banda intensa junto do max de absoro da espcie presente na amostra com deslocamento de Stokes igual, identificando assim a sua presena.

- Os espectros de varrimento sincronizado permitem o traado de mapas, (sucessivos espectros de varrimento sincronizado com crescentes) que auxiliam na caracterizao da natureza de amostras e dos compostos luminescentes que as constituem. Relao entre a intensidade de luminescncia e a concentrao: no se mantm pois com o aumento da concentrao aumenta a probabilidade de ocorrncia de: - Fotodecomposio; - Amortecimento dinmico no radiante; - Efeito de filtro interno; Efeito de rollover : efeito conjugado dos trs factores. A probabilidade de ocorrer o efeito de rollover determina que de modo praticamente obrigatrio se deva proceder a uma ou duas diluies sobre a amostra submetida a ensaio de forma a excluir a hiptese de aumento da intensidade de luminescncia com a diminuio da concentrao do componente da amostra sob anlise. Efeito do filtro interno: auto-absoro. Ocorre para concentraes elevadas das espcies fluorescente ou por efeito do solvente. Quando capazes de absorver fortemente, a intensidade de radiao incidente diminui medida que penetra na soluo. O filtro interno tem efeito nos espectros: -Excitao: inverso da banda de mxima absoro; -Emisso: induz uma deslocao do mximo de emisso e uma diminuio das intensidades de fluorescncia. Aplicaes de carcter quantitativo: As espcies qumicas orgnicas ou inorgnicas podem ser quantificadas pelas tcnicas de fotoluminescncia de modo: - Directo: so fluorescentes ou fosforescentes e adquirem comportamento fotoluminescente por derivatizao qumica; - Indirecto: actuam como amortecedores estticos ou dinmicos da fluorescncia. Tipos de aplicaes: - Anlises de carcter biolgico de rotina: utilizam-se marcadores fluorescentes na marcao de protenas e nas reaces imunolgicas por marcao dos antignios ou dos anticorpos. - Hibridizao in situ: segmento de DNA cromossmico especfico (sonda) hibridizado com cromossomas metafsicos, profsicos ou interfsicos, e ento observado com microscopia de fluorescncia. - Citrometria de fluxo: Fazer passar as partculas em suspenso, de uma forma alinhada, por um feixe de luz. A interaco das partculas com o feixe gera sinais que so captados por detectores apropriados. A informao produzida pode ser gerada

pela disperso do feixe de luz ou pela luz emitida por fluorocromos aps excitao pelo feixe de luz. - Tecnologia Luminex xMAP: Deteco simultnea de mltiplos analitos com pequena quantidade de amostras (10 50 L). A Tecnologia Luminex xMAP envolve um processo exclusivo que cora microesferas de poliestireno com dois fluoroforos. Amortecimento esttico: o fluorforo forma um complexo com a espcie que provoca amortecimento; Amortecimento dinmico: o fluorforo choca, no estado de singlete excitado com as molculas ou ies da espcie que provocam o amortecimento. Quimiluminescncia Molecular: utilizao de reaces qumicas que no produzem calor, mas em que um dos produtos a emisso de radiao electromagntica num intervalo de comprimentos de onda definidos e proporcionais concentrao. Existem dois tipos de quimiluminescncia: directa e indirecta. A intensidade da radiao produzida depende da eficincia da reaco na gerao de molculas em estado energtico excitado e da velocidade da reaco. Cuidados a ter nas reaces de quimiluminescncia: - Ordem de adio de reagentes; - pH; - Temperatura; - Concentrao da espcie/interferentes; - Solvente. Condies necessrias para a emisso de REM: - Reaco exotrmica; - Favorecida a formao de um estado metaestvel de singleto ou tripleto excitado num dos produtos; - Seja favorecida a desactivao energtica radiante. Aplicaes: - Quantificao de espcies orgnicas e inorgnicas; - Utilizao associada cromatografia, electroforese, reaces enzimticas, reaces imunolgicas, ensaios com sondas de ADN. Tipos de Aplicaes: - Reaces bioluminescentes: utilizam como enzimas a luciferase, a peroxidase, a fosfatase alcalina e a FMN redutase;

- Luminol: precursor quimiluminescente podendo ser usado permanganato, hipoclorito ou iodo como agentes oxidante. Como catalisadores Co(II), Cu(II) e Fe(III), io ferricianeto e complexos porfirnicos; - steres de acridinio: espcies precursoras da quimiluminescncia em condies reaccionais similares ao luminol; - Sais de bipiridilrutnio: apresentam emisso centrada a 610 nm; - Peroxioxalatos: proporcionam, associados a fluorforos, as reaces quimiluminescentes indirectas mas eficientes;

Espectrofotometria de Infravermelho: mtodo instrumental de anlise que pode ser utilizado para identificar e quantificar vrios tipos de amostras. A radiao IV no energtica o suficiente para causar as transies electrnicas verificadas com as radiaes UV e radiaes vis. A absoro de radiaes IV est muito restrita a espcies moleculares que tm diferenas de energia entre vrios estados vibracionais. Para absorver radiao IV, uma molcula precisa sofrer uma variao no momento dipolar como consequncia do movimento vibracional ou rotacional. Apenas nessas circunstncias o campo elctrico alternado da radiao pode interagir com a molcula e causar variaes na amplitude de um dos seus movimentos. Variaes de dipolo durante vibraes e rotaes: - Molculas polares: Quando uma molcula polar vibra, ocorre uma variao do momento dipolar e surge um campo que pode interagir com o campo elctrico associado radiao. Se a frequncia da radiao coincidir exactamente com a frequncia vibracional natural da molcula, ocorre uma transferncia de energia efectiva e resulta uma variao da amplitude da vibrao molecular; e a consequncia a absoro da radiao; - Molculas assimtricas: A rotao de molculas assimtricas em torno dos seus centros de massa resulta numa variao peridica do dipolo que pode interagir com a radiao; - Molculas homonucleares: Nenhuma variao efectiva no momento dipolar ocorre durante a vibrao ou rotao de uma molcula homonuclear como o O2, N2 ou Cl2. Vibraes moleculares: - Estiramento envolve uma variao contnua na distncia interatmica ao longo do eixo da ligao entre dois tomos; - Deformao angular caracterizada pela variao do ngulo entre duas ligaes e so de 4 tipos: - tesoura (scissoring); - balanar (rocking); - sacudir (wagging); - toro (twisting). Somente as vibraes moleculares que produzam uma mudana do momento dipolar absorvero radiao IV. A cada tipo de vibrao corresponde uma banda de absoro. Algumas vibraes tm a mesma frequncia, havendo por isso sobreposio. Diferentes ligaes qumicas possuem diferentes frequncias vibracionais.

O espectro no infravermelho indica a presena destes diferentes tipos de ligaes nas molculas. Nmero de vibraes: - Para uma molcula no linear com N tomos, existem 3N-6 modos de vibrao; - Para uma molcula linear com N tomos, existem 3N-5 modos de vibrao; - Para molculas muito grandes e com diferentes tipos de ligao muitos modos de vibrao espectros complexos. Factores determinantes da intensidade e nvel energtico da absoro: - Intensidade da absoro: A intensidade da absoro da radiao IV depende da electronegatividade relativa dos tomos envolvidos na ligao; - Nvel energtico da absoro: as ligaes de maior energia correspondem a XH (OH, NH, CH). Espectro de IV: - Caracterizados por: bandas, picos e formato; - Duas molculas diferentes nunca apresentam espectros de IV iguais (excepto enantimeros); - 4000-1400 cm-1: frequncia de grupos qumicos; - 600-1400 cm-1: regio de impresso digital. Fontes: slido inerte que aquecido electricamente a uma temperatura entre 1.500 e 2.200 K, o material aquecido emitir, assim, uma radiao IV: - Fonte de Nernst: xidos de terras raras (xido de zircnio e trio); - Fonte de Globar: barra de carbeto de silcio; - Arco de Mercrio: tubo encapsulado em quartzo contendo vapor de mercrio a uma presso maior que uma atmosfera; - Lmpada de Filamento de Tungstnio. Detectores: convertem a radiao IV num sinal elctrico, para ser amplificado e posteriormente registado. Tipos: - Baseiam-se no facto da radiao produzir efeito calorfico que altera determinada propriedade fsica do detector: Trmicos (termopares e bolmetros) e piroelctricos; - Baseiam-se no efeito fotocondutor interno, em consequncia da transio de um electro, de uma banda de valncia para uma banda de conduo, no receptor semicondutor: Fotocondutores. Instrumentos para o IV: - Espectrofotmetros dispersivos: Usados principalmente para determinaes qualitativas;

- Espectrofotmetros com transformada de Fourier: Usados em determinaes qualitativas e quantitativas; - Instrumentos no dispersivos: Usados em determinaes quantitativas de vrias substncias orgnicas na atmosfera (Fotmetros de filtro). Anlise quantitativa: intensidade de uma banda de absoro proporcional a concentrao do componente que causou esta banda, logo a quantidade de um composto presente em uma amostra pode ser determinada atravs de uma curva de calibrao construda a partir de amostras com concentraes conhecidas do composto em questo. Cartes descartveis para IV: constitudos por filmes microporosos, quimicamente resistentes, livres de partculas e adequados para vrios tipos de amostras. Constitudos por politetrafluoroetileno (PTFE) ou polietileno (PE), tendo um tamanho universal, o que permite a sua utilizao por grande parte dos FTIRs. Espectrofotmetros dispersivos: Quase todos os espectrofotmetros dispersivos so de feixe duplo, onde o feixe passa, alternadamente atravs da amostra e da referncia. Utilizam como monocromadores prismas ou redes de difraco. A radiao ao atravessar a amostra reflectida por um sistema de espelhos, passa por fendas estreitas em direco ao detector. Apresenta fraca potncia de radiao infravermelho, dificultando sua medio, necessita de redes de difraco apuradas, a preciso afectada pelo frequente desalinhamento do sistema ptico e alto valor em relao sinal rudo e lento. Instrumentos no dispersivos: Projectados para anlise quantitativa de vrias substncias orgnicas na atmosfera. O fotmetro de filtro sensvel a dcimos de parte por milho de substncias. Espectrofotmetros com Transformada de Fourier (FTIR): componente principal o interfermetro de Michelson. constitudo por dois espelhos, um fixo e o outro mvel. A velocidade do espelho mvel deve ser constante e a sua posio exactamente conhecida a cada instante. medida que o espelho mvel percorre determinada distncia, formada um interferograma - srie de combinaes destrutivas e construtivas. A operao matemtica de

TF resolve o interferograma e transforma a relao resultante entre a intensidade versus tempo, num espectro de IV. Vantagens da Espectroscopia de IV com TF (FTIR): - Apresenta poucos elementos pticos e no necessita de fenda. A potncia da radiao que chega ao detector maior do que nos instrumentos dispersivos e so observadas maiores relaes sinal/rudo; - Melhor preciso e exactido em termos de comprimento de onda; - Todos os sinais da fonte alcanam o detector simultaneamente. Essa caracterstica torna possvel a obteno de todo o espectro de uma s vez e, com essa economia de tempo, possvel aumentar o nmero de varreduras ( scans ) para aumentar a razo sinal/rudo. O interfermetro de Michelson tem uma dupla vantagem: - A perda de energia radiante reduzida relativamente aos melhores monocromadores pois a radiao atravessa apenas um espelho semi-transparente; - A deslocao do espelho mvel permite informar o detector da natureza da radiao que o atinge. Princpio da Transformada de Fourier discreta: Todos os sinais no tempo ou no espao so resultado da adio de ondas sinusoidais coseno e seno com amplitudes apropriadas. Assim, a transformada converte um grfico de tempo (ou espao) noutro grfico em que o eixo das abcissas corresponde s frequncias das ondas sinusoidais que permitem construir o primeiro (nmeros de onda ou comprimentos de onda).

Vantagens do design FTIR: - Maior densidade de fluxo radiante no detector; - Modulao do sinal analtico menos rudo; - Maior n de espectros por unidade de tempo; - Maior exactido na determinao de nmeros de onda da radiao incidente. Vantagens analticas: - Possibilidade de realizar medidas quantitativas; - Possibilidade do uso como detector cromatogrfico.

Espectrometria de Absoro Atmica: absoro de radiao electromagntica de modo proporcional concentrao da espcie a quantificar. A absoro ocorre em intervalos de comprimentos de onda limitados e bem definidos, capazes de originarem transies electrnicas.

Aplicaes comuns: microconstituintes biolgicos, clnicos; deteco cromatogrfica; anlise ambiental (guas, ar, sedimentos); anlise farmacutica; anlise alimentar e toxicolgica. Desvantagens: - Carcter monoelementar da determinao; - Ajuste demorado do equipamento; - Dificuldade de especiao; - Os custos de aquisio do equipamento; - Os custos associados manuteno: (lmpadas, gases, cmaras de grafite). Fontes de Radiao: - Lmpadas de ctodo oco (HCL): uso mais generalizado com ctodo revestido internamente pela espcie elementar que se pretende quantificar. Emisso por triboluminescncia atmica. A atmosfera rarefeita no interior da lmpada garante a ausncia do alargamento de presso das riscas emitidas. O gs raro que preenche a lmpada no deve possuir um espectro de emisso que interfira com o da espcie que recobre o ctodo. As lmpadas podem ser bielementares ou tri-elementares; - Lmpada de descarga sem elctrodos (EDL): bobina de radiofrequncia mantm um campo magntico oscilante sobre um sal da espcie voltil contida num bolbo. As lmpadas EDL so vulgares em espectrometria de fluorescncia atmica e possuem uma intensidade de emisso de 5 a 100 x superiores s HCL. Dispositivo de amostragem aberto luz exterior. Assim, ocorre presena de radiao estranha no detector causando desvios lei de Beer em EAA a proporcionalidade entre absorvncia e concentrao inferior a uma dcada. Para minimizar a radiao estranha: - monocromador de largura de banda varivel antes do detector;

- modulao do sinal proveniente da fonte. Modulador de sinal: amplificador lock-in , filtra selectivamente a radiao modulada com frequncia f, multiplicando-a pela frequncia de rotao do sector giratrio. Qualque outra frequncia (radiao estranha) eliminada (por interferncia destrutiva). Atomizador: Para que uma espcie elementar presente na amostra possa absorver REM, torna-se necessrio que se apresente no trajecto da radiao sob a forma de tomos livres. So utilizados diferentes processos de atomizao em EAA recorrendo a diferentes: - Atomizao por chama; - Atomizao electrotrmica; - Atomizao por gerao de hidretos. Atomizao por chama: recorre-se a um nebulizadorqueimador de mistura prvia devendo a amostra ser apresentada sob a forma de soluo. A amostra aspirada pelo fluxo de comburente, sendo por ele dividido numa fina neblina. O alinhamento do queimador um dos aspectos mais importantes para obter uma boa sensibilidade. A natureza da chama, a matriz da amostra, a temperatura e a proporo entre combustvel e comburente, condicionam o modo de atomizao da espcie a determinar e a forma predominante desta. A temperatura de uma chama tambm funo da proporo entre combustvel e comburente. Na chama o solvente vaporizado, restando pequenas partculas de sais que so fundidas, vaporizadas e cindidas. Os tomos resultantes podem: - Combinar-se com outros formando espcies e ies estveis; - Ionizar-se ou excitarem-se parcialmente com emisso de REM; - Permanecer no estado fundamental e absorver REM da fonte. Atomizao por gerao de hidretos: Para gerar o hidreto adiciona-se a um volume definido de amostra, contido num recipiente fechado com atmosfera de azoto, uma soluo a 1% (m/v) em NaBH4 e HCl (0,5 a 5 mol/L). O cloreto de estanho (II) tambm vulgarmente utilizado como agente redutor. A possibilidade de determinar concentraes 1000 x inferiores s que se conseguem obter na atomizao em chama deve-se a: - Menor radiao estranha com origem no atomizador; - Maior tempo de residncia dos tomos no percurso da radiao.

As verses automatizadas possibilitam miniaturizar a atomizao por gerao de hidretos bem como aumentar significativamente a preciso das medidas e o ritmo de amostragem. Sinal transiente: sinal analtico obtido registado em funo do tempo. A rea sob a curva proporcional massa total da espcie a determinar. Sistema de gerao de hidretos: muito utilizado na determinao de mercrio gerao de vapor frio de mercrio proporcionando uma elevada sensibilidade nas medidas. O mercrio liquido temperatura ambiente. Possui contudo uma elevada tenso de vapor (isto , muito voltil). Na presena de um redutor forte (cloreto estanhoso) formam-se tomos neutros de mercrio metlico volteis temperatura ambiente (no necessria a chama):

Atomizao electrotrmica: volume reduzido de amostra colocado, por meio de um amostrador automtico, no interior de um tubo de grafite piroltica atravessado pela REM. A atomizao produzida pelo aquecimento programado do tubo quando atravessado por uma corrente elctrica elevado tubo. A permanncia do vapor atmico durante alguns segundos garante a maior sensibilidade da medida. A exactido dos resultados depende do conhecimento exacto do volume de amostra medida pois a medida de A proporcional massa total de tomos do determinando colocados no tubo. A preciso das medidas dependente do uso de um bom amostrador. Monocromador: possuem largura de banda regulvel de modo a poder maximizar a razo sinal/rudo. Em alguns equipamentos o ajuste do comprimento de onda nominal isolado pelo monocromador deve ser ajustado manualmente. Para o efeito aps ligar a lmpada de ctodo oco do elemento a determinar, ajusta-se o comprimento de onda verificando a posio que garante uma mxima intensidade de radiao a atingir o detector. Detectores: como os espectrofotmetros de absoro atmica fornecem medidas de absorvncia, que no requerem elevada sensibilidade de deteco, as matrizes de dodos so os detectores mais utilizados. Interferncias em EAA: As medidas efectuadas por EAA esto sujeitas a diferentes tipos de interferncias: - Interferncias no espectrais: interferem na atomizao - Qumicas , Fsicas, Ionizao;

- Interferncias espectrais: interferem na absoro - absoro inespecfica entre espcies elementares.

Minimizao de interferncias qumicas: - Por simulao da matriz da amostra; - Elevar a temperatura de atomizao; - Aplicar o mtodo das adies de padro (parcial/ eficaz); - Adicionar s solues agentes libertadores ou ag. Protectores. Agentes libertadores: Os agentes libertadores (lantnio ou estrncio) combinam-se preferencialmente com os anies deslocando determinandos por a forma livre por efeito de massa. Interferncias qumicas na atomizao electrotrmica: - A elevada temperatura algumas espcies reagem com a superfcie interna dos tubos de grafite originando a formao de carbetos estveis; - A espcie pode estar presente sob a forma de sais volteis que so eliminados na etapa de pirlise ou sob diferentes formas que atomizam a temperaturas diversas originando dois sinais transientes. A minimizao do problema pode ser conseguida por adio de modificadores de matriz: - Permitem aumentar a temperatura de pirlise; - Diminuir a volatilidade do determinando; - Ambos os efeitos. Interferncias fsicas: Decorrem das diferenas entre amostra e solues de calibrao caractersticas de viscosidade, densidade, tenso superficial e contedo em matria orgnica. Manifestam-se sobretudo na atomizao por chama e podem ser detectadas pela obteno de declives diferentes para a calibrao e mtodo das adies de padro. Minimizao das interferncias fsicas: - mtodo das adies de padro; - solues de calibrao de matriz sinttica. Interferncias de ionizao: podem ocorrer quando se pretende quantificar espcies do I e II grupos da tabela peridica. A baixa energia de ionizao destas espcies determina que se encontrem ionizadas para temperaturas da ordem dos 2000C. A ionizao observada em maior grau para concentraes diminutas da espcie a medir. As interferncias de ionizao podem ser minimizadas: - Mtodo das adies de padro; - Adio de um tampo de ionizao.

Interferncias espectrais: As interferncias causadas pela absoro da radiao analtica por uma segunda espcie elementar so raras pelo que a espectrofotometria de absoro atmica considerada uma tcnica instrumental de elevada selectividade. Minimizao das interferncias espectrais: - Optar por uma radiao analtica de outro comprimento de onda; - Extrair selectivamente a espcie a determinar ou o interferente. Absoro inespecfica ou background: presena de espcies moleculares, ies ou radicais moleculares no trajecto da radiao analtica tambm ocasionam absoro. A absoro inespecfica mais importante na atomizao electrotrmica uma vez que as partculas absorventes e dispersantes permanecem mais tempo no trajecto da radiao analtica. A absoro inespecfica pode ser minimizada pelo recurso aos sistemas de correco de backgroung : - Corrector contnuo: fundamenta-se em fazer incidir alternadamente sobre a amostra uma radiao com largura superior da risca analtica, mas de igual intensidade; - Corrector de Smith-Hieftje: fundamenta-se em fazer incidir alternadamente sobre a amostra uma radiao com largura superior da risca analtica, obtida por aplicao de diferentes intensidades de corrente HCL; - Corrector por efeito de Zeeman: fundamenta-se no desdobramento magntico das orbitais atmicas por um campo magntico intenso). A sobreposio parcial entre as bandas e a banda responsvel pela diminuio da sensibilidade das determinaes e pelo aparecimento do efeito de rollover nas curvas de calibrao. A simples diluio da amostra permite confirmar se a concentrao encontrada se encontra ou no no intervalo de proporcionalidade entre Abs. e concentrao. Modo de operar: - Colocar e ligar o LCO; - Ajustar o comprimento de onda e a largura de banda do monocromador para a espcie em causa; - Ajustar a posio da LCO, procurando que o mximo de energia atinja o detector; - Ligar o corrector contnuo e ajustar a sua energia; - Optimizar a posio do atomizador relativamente ao trajecto da radiao. Corrector contnuo: utiliza uma fonte de radiao contnua de elevada sensibilidade, um monocromador duplo de elevada resoluo e um CCD. A fonte de radiao uma lmpada de arco reduzida preenchida por xnon a elevada presso.

Tcnicas instrumentais para determinao de metais e metalides: - EEA: Fotometria de Chama e ICP-AES; - EAA: chama, elctrodos, gerao de hidretos e vapor frio para Mercrio; - Espectrometria de Massa: ICP-MS. ICP-MS e ICP-AES so tcnicas analticas multi-elementares, tendo a primeira um maior limite de deteco. Num espectrofotmetro de absoro atmica a amostra levada at chama aps nebulizao no nebulizador por aco do gs comburente e posterior mistura com o gs combustvel. S gotculas muito finas so arrastadas para a chama. Processos: - Dessolvatao: evaporao do solvente; - Vaporizao: fuso e passagem da matria do estado gasoso sob a forma de molculas; - Atomizao: ciso das molculas originando tomos. Estes tomos esto predominantemente no estado Fundamental podendo absorver REM de comprimento de onda especifico - EAA. Outros tomos pode passar ao estado excitado emitindo REM de comprimento de onda especifica EEA. Outros ainda podem perder electres e converterem-se em ies monovalentes positivos podendo ser analisados por ICP-MS. Espectrometria de Absoro Atmica

EAA/Chama Lei de Boltzmann: temperatura das chamas os tomos esto em grande maioria no estado fundamental, podendo absorver REM de um dado comprimento de onda. Vantagens: baixo custo e rapidez; Desvantagens: carcter mono-elementar e elevados LD; Aplicaes: Na, K, Mg, Ca, etc.

EEA/AE Aquecimento feito pelo efeito de Joule. tambm conhecida como EEA/em forno ou cmara de grafite porque a amostra introduzida dentro de um pequeno tubo de grafite onde se vai processar a atomizao. Este tubo colocado entre dois elctrodos e aquecido por efeito de Joule. Vantagens: maior sensibilidade, menores volumes de amostra, custo moderado, baixos LD e grande aplicabilidade. Desvantagens: moroso, carcter mono-elementar. Aplicaes: Pb, Cd, Cr, etc. EAA/Gerao de hidretos Usa-se um espectrofotmetro de EAA/chama, com queimador convencional e um sistema de gerao de hidretos. A mistura da amostra com um agente redutor muito forte (NaBH4 ou SnCl2) leva formao de um vapor o hidreto do elemento a determinar. Os hidretos so dissociados pelo calor da chama originando a formao de tomos livres no estado fundamental capazes de absorver REM. Vantagens: Baixo custo, rapidez e muito baixos LD. Desvantagens: carcter mono-elementar e aplicvel a poucos elementos. EAA/vapor frio Hg Tcnica que permite obter muitos baixos limites de deteco uma vez que no h necessidade de ligar a chama pois a reduo do Hg leva directamente produo de tomos de Hg.

Espectrofotometria de Emisso Atmica

Queimador tipo Bunsen: alimentado por um combustvel (propano) e um comburente (ar comprimido). A temperatura da chama relativamente baixa mas suficiente para atomizar e excitar os metais alcalinos mas no os outros metais. Vantagens: muito baixo custo. Desvantagens: poucos elementos determinveis; carcter monoelementar, elevados limites de deteco. Plasma: atingem-se temperaturas maiores, havendo grande rendimento do processo de atomizao, grande populao de tomos excitados e ies monovalentes positivos e mesmo ies excitados. Possibilitam a determinao de uma grande quantidade de elementos e ainda de determinar muitos em simultneo. Dois tipos: - ICP-AES: fotes produzidos no plasma so separados e quantificados. - ICP-MS: ies produzidos no plasma so separados e quantificados. Plasma: gs (rgon, geralmente), completamente ionizado, meio altamente energtico, muito inerte, excelente meio de atomizao/excitao das espcies qumicas da amostra. Quando a soluo sob a forma de um aerossol de gotculas muito pequenas entra no plasma, ocorrem em sequncia quatro processos: - Dessolvatao; - Vaporizao; - Atomizao; - Ionizao.

Tratamento pr-analtico de amostras Pr-Tratamento de amostras: transferir o analito da matriz da amostra para uma outra matriz adequada anlise (medida instrumental). Tipos: - Secagem; - Moagem; - Filtrao; - Separao; - Decomposio e solubilizao de amostras slidas; Solubilizao de amostras slidas: - Dissolver: colocar em soluo; - Solubilizar: tornar solvel; Procedimento ideal de solubilizao: - Deve ser capaz de solubilizar a mostra completamente, sem deixar nenhum resduo; - Deve ser rpido; - Reagentes usados no devem interferir com a determinao posterior ou devem ser facilmente eliminveis; - Reagentes usados devem estar disponveis em elevado grau de pureza para no contaminarem a amostra; - As perdas de analito(s) devem ser insignificantes; - Os reagentes / produtos da reaco no devem atacar os recipientes onde se efectua o procedimento de solubilizao; - Dever tratar-se de um procedimento seguro. Solubilizao de amostras slidas para determinao de metais: - Dry Ashing: incinerao; reduo a cinzas; mineralizao por via seca: dissoluo em gua e solubilizao com cidos diludos; - Wet Ashing: digesto; mineralizao por via hmida: solubilizao com cidos concentrados ou outros reagentes oxidantes. gua-rgia: mistura de cidos que podem reagir formando produtos mais reactivos. Exemplo: cido ntrico e cido clordrico. Digesto de amostras com microondas: As microondas so radiao electromagntica (REM): ondas elctricas e magnticas perpendiculares. Se a frequncia da REM muito elevada a molcula no tem tempo de responder. Se muito baixa todas as molculas se movem precisamente ao mesmo tempo e no h produo de calor (choques; energia cintica). O aquecimento com microondas muito eficiente porque o calor se desenvolve no seio da amostras e no conduzido atravs das paredes dos vasos

como acontece se colocarmos a amostra dentro de vaso sobre o disco elctrico. Isso faz tambm com que o aquecimento seja muito uniforme. Resumo: Para amostras inorgnicas usa-se geralmente a solubilizao com cidos ou a fuso. Para amostras orgnicas usa-se geralmente a incinerao [dry ashing] e a solubilizao com cidos (e outros reagentes oxidantes) [wet ashing]. Neste ltimo caso, em vaso aberto ou em vaso fechado. Em qualquer dos casos pode usar-se as microondas para produzir energia trmica. Atender a: - Elementos que se pretendem determinar; - Natureza da soluo final que se vai obter. Necessidade / possibilidade de remover o excesso de reagentes; - Pureza dos reagentes nvel dos brancos (compromete os LD); - Perdas por volatilizao; - Aspectos de segurana; - HF queimaduras; - HClO4 exploses; - Produo de vapores txicos: H2S; Cl2; - Rebentamento de vasos fechados.