REF - ISSN 1808-0804 Vol.

VI (2), 01 - 37, 2009 Preparao, caracterizao e aplicaes em frmacos e cosmticos de

nanopartculas lipdicas slidas

Preparation, characterization and application in drugs and cosmetics of solid lipid nanoparticles

Priscyla D. Marcato1
1

Laboratrio de Qumica Biolgica, Instituto de Qumica, Unicamp, CEP: 13084-862, C.P. 6154-Campinas-SP-Brasil,

Autor para correspodncia: priscyla@iqm.unicamp.br

Recebido em 08/01/2009 - Aceito em 19/01/2009

RESUMO: Carreadores nanoparticulados como lipossomas, emulses (leo em gua), nanopartculas polimricas e nanopartculas lipdicas slidas so extensivamente

investigados por promoverem muitas vantagens em relao s formulaes tradicionais como, por exemplo, a liberao sustentada de ativos, solubilizar ativos lipoflicos, aumentar a estabilidade fsica e qumica molculas lbeis, minimizar os efeitos colaterais entre outras. Dentre estes carreadores destacam-se as nanopartculas lipdicas slidas que apresentam vrias vantagens em relao aos demais carreadores como, por exemplo, menor toxicidade, facilidade de produo em larga escala, maior estabilidade durante a estocagem e maior estabilidade durante o processo de esterilizao. Este carreador foi desenvolvido nos anos 90 apresentando diversos mtodos de preparao, assim como diferentes estruturas, tendo aplicao tanto na rea farmacutica quanto na rea cosmtica. Neste trabalho, sero abordados os mtodos de preparao e caracterizao de diferentes estruturas de nanopartculas lipdicas slidas, assim como possveis aplicaes deste carreador.

PALAVRAS-CHAVES: Nanotecnologia, Nanopartculas, Frmacos, Cosmticos.

ABSTRACT: Nanoparticulated carriers as liposomas, emulsions (oil in water), polymeric nanoparticles and solid lipid nanoparticles are extensively investigated since they exhibit many advantages regarding the traditional formulations, such as, active sustained release, solubilize lipophilic active, increase the physical and chemical stability of

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

unstable molecules, minimize the collateral effects etc. Among these carries highlight the solid lipid nanoparticles present several advantages in relation to others carries as, for example, smaller toxicity, easily production on scale up, larger stability during the stock and larger stability during the sterilization process. This carries was developed in the 90s presenting several preparation methods, as well as different structures, having application in the pharmaceutical and as in the cosmetic areas. In this work, will be boarded the preparation methods and characterization of different structures of solid lipid nanoparticles, as well as possible applications of these carries.

KEYWORDS: Nanotechnology, Nanoparticles, Drugs, Cosmetics.

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

1. INTRODUO Sistemas como carreadores coloidais,

polmero, copolmeros.

incluindo Esta

sntese

de pode

modificao

nanopartculas,

nanoemulses, e micelas

diminuir a toxicidade dos polmeros e pode direcionar especficos. as partculas para este alvos sistema

lipossomas,

nanosuspenses

tm atrado ateno nos ltimos anos por diminurem a toxicidade de ativos, solubilizarem ativos lipoflicos e manterem o efeito do ativo no tecido alvo, entre outras vantagens (MEHNERT E MADER, 2001). Uns dos primeiros carreadores

Entretanto,

nanoestruturado apresenta desvantagens como, por exemplo, presena de solvente orgnico residual usado no processo de produo destas partculas, citotoxicidade dos polmeros de e escalonamento (MARCATO do E

processo

produo

desenvolvidos foram os lipossomas que so vesculas esfricas compostas por uma ou mais bicamadas de fosfolipdios. A adio de compostos naturais como

DURN, 2008). Outro tipo de nanocarreador so as nanoemulses lipdicas que foram

introduzidas nos anos 50 em produtos de nutrio parenteral. Nos ltimos anos,

polietilenoglicol (PEG) na superfcie dos lipossomas possibilita o aumento do tempo de permanncia deste carreador na

este carreador passou a ser utilizado no transporte de frmacos lipoflicos como, por exemplo, o diazepam, vendido como Diazepam-Lipuro injetvel, para aplicao intravenosa e intramuscular. As vantagens das nanoemulses incluem segurana

corrente sangunea por minimizar a sua captura por macrfagos. No mercado j existe um produto composto por lipossoma PEGlado, que contm o ativo anfotericina B encapsulado, vendido como Ambisome. Entretanto, os lipossomas apresentam

toxicolgica e o fcil escalonamento da produo deste carreador por

problemas de estabilidade fsico-qumica. Desta forma, os lipossomas podem se agregar durante o processo de estocagem (MARCATO E DURN, 2008). Posteriormente desenvolvidos polimricos, que os so foram nanocarreadores constitudos de

homogeneizao alta presso. Porm, a possibilidade do uso de nanoemulses

como sistema de liberao sustentada limitado devido o seu reduzido dimetro e o seu estado lquido o que promove, em muitos casos, uma rpida liberao do ativo. Para minimizar este efeito, as

polmeros naturais ou sintticos. Uma das vantagens deste sistema a variabilidade de polmeros biodegradveis que podem ser utilizados como material de cobertura das partculas. Alm disto, possvel modificar quimicamente a estrutura do

nanoemulses so utilizadas no transporte de ativos muito hidrofbicos com um

coeficiente de partio octanol/gua maior que 1000.000:1(MEHNERT Para minimizar E esta MADER, rpida

2001).

liberao do ativo, sistemas de liberao

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

sustentada

tm

sido

produzidos

com

tem

como

objetivo

mostrar

lipdios slidos. Lipdios slidos tm sido usados por vrios anos na forma de peletes para retardar a liberao de ativos aps a administrao no caso oral do como, por

desenvolvimento das partculas lipdicas slidas produo assim e como os mtodos de

caracterizao

destas

partculas e a sua aplicao nas reas farmacolgicas e cosmticas. Para isto, foi realizada uma busca dos principais artigos nesta rea incluindo artigos de reviso.

exemplo,

produto

Mucosolvan Retard Capsules (MEHNERT E MADER, 2001). Nesta linha, esta reviso

2.

Nanopartculas

Lipdicas

Slidas

estruturas: nanopartculas lipdicas slidas (NLS), carreador lipdico nanoestruturado

(NLS) Em introduziram 1996, o Mller e Lucks

(CLN) e conjugado frmaco-lipdio (CFL). As NLS so formadas por lipdios slidos temperatura ambiente e corporal, e

termo

nanopartculas

lipdicas slidas (NLS) ao patentearem um mtodo de produo de NLS por

estabilizadas por tensoativos. utilizados na preparao de

Os lipdios NLS so

homogeneizao alta presso (MLLER E LUCKS, 1996). As NLS usualmente

triglicerdeos, mistura de glicerdeos ou ceras. A desvantagem dessa estrutura a sua baixa capacidade de encapsulamento que varia de 25-50% dependendo da solubilidade do ativo na matriz lipdica, do mtodo utilizado e do estado polimrfico da matriz lipdica. A utilizao de lipdios muito semelhantes gera cristais perfeitos. Como o frmaco se localiza entre as cadeias lipdicas e nas imperfeies dos cristais, a alta organizao dos cristais diminui a eficincia de encapsulamento (Figura 1A). Para minimizar este efeito, utilizam-se lipdios complexos como monodi-triglicerdeos (Tabela 1). Entretanto, o ativo pode ser expulso da partcula aps a transio polimrfica da forma para a modificao mais estvel . Este processo pode ocorrer durante a estocagem da disperso (Figura 1B) (MLLER et al.,

consistem de ingredientes bem tolerveis fisiologicamente aplicaes e j aprovados em vezes as para

farmacuticas 10-100 do que

humanos, menos partculas

apresentando toxicidade

polimricas. Alm disto, as NLS podem ser facilmente produzidas em larga escala, tm boa capacidade de estocagem, -

apresentando estabilidade de at 3 anos podem ser esterilizadas em autoclave sem perderem a forma esfrica e sem um significativo aumento no tamanho das

partculas e tm um largo espectro de vias de administrao que incluem parenteral, oral, oftlmica e tpica (PEDERSEN et al., 2006; CAVALLI et al., 1997). A tabela 1 mostra exemplos de lipdios e

estabilizantes utilizados em preparao de NLS. As nanopartculas lipdicas podem ser classificadas em trs diferentes

2007; MLLER et al., 2000).

Tabela 1: Lipdios e estabilizantes utilizados na preparao de nanopartculas lipdicas slidas. LIPDIO ESTRUTURA
O
OH

cido Esterico
OH OH O O
O O O

Monoestearato de Glicerila

Triestearina
O

O O

SURFACTANTE

ESTRUTURA
CH3 O a O b O a OH a = 30 unidades b = 75 unidades

Poloxamer F68
HO

(CH2CH2O)y CHCH2 (OCH2CH2)Z OCOC17H33 O x + y + z + w = 20

HO HO

(CH2CH2O)x (CH2CH2O)W

Polissorbato 80

Para

melhorar

eficincia

de

ocasionando imperfeies no cristal. Estas imperfeies acomodar geram mais espao para desta

encapsulamento e minimizar a expulso do ativo das partculas durante a estocagem, no final dos anos 90, surgiram os CLN (carreadores lipdicos nanoestruturados)

mais

ativo

aumento,

maneira, a eficincia de encapsulamento. Este modelo conhecido como CLN

que apresentam 3 diferentes estruturas (WISSING et al., 2004). O primeiro

imperfeito (Figura 1C). O segundo modelo a mistura de lipdios slidos com lipdios lquidos (leo) como, por exemplo, Migliol (triglicrideo cprico/caprlico). Este

modelo consiste na mistura de glicerdeos compostos por diferentes cidos graxos. Esta mistura aumenta a distncia entre as cadeias de cidos graxos dos glicerdeos

modelo chamado de CLN amorfo no qual, a alta quantidade de leo misturado

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

com o lipdio slido gera partculas em um estado slido amorfo (Figura 1D). Esta estrutura evita a expulso do ativo das partculas durante a estocagem, j que o processo de cristalizao do lipdio para a forma no ocorre nessas condies. O terceiro modelo chamado de mltiplo CLN que pode ser considerado um

gua, isto , uma disperso de leo em lipdio slido em gua (Figura 1E). Neste modelo, a solubilidade das molculas de leo no lipdio slido excedida levando a uma separao de fase e formao de nanocompartimentos de leo dentro da matriz lipdica slida (NER et al., 2007; JENNING et al., 2000).

anlogo da emulso gua em leo em

B A
Cristalizao Forma Forma Ativo Ativo expulso

E C D
Lipdio slido Lipdio amorfo leo nanocompartimentado

Figura 1: A) NLS, B) Modelo de liberao de ativo durante a estocagem controlada pela transformao da forma para , C) CLN imperfeito, D) CLN amorfo, E) Mltiplo CLN.

Tanto

nos

CLN

quanto

nas

NLS,

chamado de ligao covalente, no qual o ativo (sal) e um lcool graxo reagem em presena grandes de um catalisador de CFL formando que so

eficincia de encapsulamento de ativos hidroflicos muito baixa, o que pode ser aumentada utilizando baixas

partculas

concentraes do ativo. Em funo disto, foi desenvolvido os CFL (conjugado

purificados por cristalizao. Estas grandes partculas de CFL so misturadas em uma soluo de tensoativo e homogeneizadas alta presso formando nanopartculas de CFL. Em geral, mais os de CFL 33% possibilitam de ativos

frmaco-lipdio) que podem ser produzidos por dois mtodos. O primeiro mtodo chamado de formao de sal que consiste em dissolver o ativo (sal) e o lipdio em um solvente que , em seguida, evaporado baixa presso. O segundo mtodo

encapsular

hidroflicos (WISSING et al., 2004).

3. Mtodos de Preparao

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

Existem 5 mtodos de preparao de nanopartculas incluem lipdicas slidas que

de

lipdio

fundido

(exemplo:

cido

esterico-Tabela 1), 15% de surfactante (exemplo: Polisorbato de 10% soja de 20 ou 60, 1),

microemulso

quente,

emulsificao e evaporao de solvente, difuso de solvente, spray-drying e

fosfatidilcolina acima de

etc-Tabela

co-surfactante

homogeneizao alta presso.

(exemplo: Poloxamer-Tabela 1) e gua. O processo de formao das microemulses

3.1. Mtodo de Microemulso a Quente O quente mtodo foi de microemulso por Gasco a e

est esquematizado na Figura 2. A ultima etapa deste mtodo a adio da

desenvolvido

microemulso quente em uma soluo de surfactante fria resultando na solidificao das nanopartculas lipdicas slidas (HOU et al., 2003; CORTESI et al., 2002).

colaboradores e modificado por diversos grupos. As microemulses so preparadas por agitao, contendo tipicamente: 10%

Lipdio Fundido (5-10 C acima da temperatura de fuso do lipdio) Agitao Soluo de Surfactante e co-surfactante na mesma temperatura do lipdio Agitao Soluo de Surfactante gelada (2-3 C) Figura 2: Esquema da preparao de NLS pelo mtodo de microemulso a quente. arranjo cristalino com baixa organizao A desvantagem deste mtodo a remoo do excesso de gua que pode ser retirada por ultracentrifugao, por liofilizao ou por dilise - e o uso de altas concentraes de surfactantes (15% m/v) e co-surfactantes (10% m/v) (NER, geral, favorecendo a encapsulao do ativo que foi de 87%. O mtodo de microemulso , em utilizado para encapsular ativos Microemulso leo em gua

lipoflicos, mas ativos hidroflicos tambm podem ser encapsulados utilizando

2006). HOU et al. (2003) encapsularam mifepristone em NLS pelo mtodo de microemulso. Foram obtidas partculas de 106 nm e foi verificado por difrao de Raio-X e por calorimetria diferencial de varredura (DSC) que as NLS tm um

emulso gua em leo em gua como esquematizado na Figura 3 (PEDERSEN et al., 2006; HOU et al., 2003; MEHNERT E MADER, 2001). Atravs deste mtodo, Cortesi et al. (2002) preparam

micropartculas lipdicas slidas de 20 m

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

no encapsulamento do ativo hidroflico cromoglicato de sdio. A eficincia de encapsulamento foi de 50%, e no estudo

de liberao in vitro em tampo fosfato foi verificado que 100% do ativo foram

liberados aps de 5 horas.

Soluo quente do Ativo hidroflico + Surfactante Agitao Lipdio Fundido (5-10 C acima da temperatura de fuso do lipdio) Agitao Figura 3: Esquema da preparao de NLS pelo mtodo de microemulso a quente no encapsulamento de ativos hidroflicos. Soluo de Surfactante gelada (2-3 C) 3.2. Emulsificao e evaporao de solvente A Figura 4 mostra o esquema de preparao de NLS pelo mtodo de emulsificao e evaporao de solvente (NER, 2006). Microemulso gua em leo

Lipdio dissolvido em um solvente imiscvel em gua (ex. clorofrmio, tolueno etc) Agitao Soluo de Surfactante Emulso leo em gua

Evaporao do solvente orgnico baixa presso

Figura 4: Esquema da preparao de NLS pelo mtodo emulsificao e evaporao de solvente. desvantagens Uma das vantagens deste mtodo o encapsulamento de ativos como, por exemplo,

solvente residual na disperso final e o fato das disperses serem muito diludas, devido limitada solubilidade do lipdio no solvente orgnico (WISSING et al., 2004). Outra desvantagem a produo de

termosensveis, pois neste mtodo no utilizado aquecimento na produo das partculas. Entretanto, apresenta

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

micropartculas

lipdicas

no

de

dispersa em gua fria. Partculas de 70 a 200 nm foram obtidas dependendo das condies de preparao encapsulando

nanopartculas, o que pode ser revertido utilizando homogeneizao alta presso ou ultra-som. LUO et al. (2006) utilizando o mtodo de ultra-som/emulsificao e evaporao de solvente prepararam NLS com um dimetro menor que 100 nm. As partculas foram preparadas dissolvendo o lipdio (monoestearato de glicerila), o ativo e o estabilizante (lecitina de soja) em diclorometano 50 C e dispersando esta mistura em gua na mesma temperatura. Aps a evaporao do diclorometano, a fase aquosa foi adicionada gota gota uma fase oleosa 50 C sob agitao magntica. (600W) por Esta 5 emulso minutos foi sonicada um

98% de ativo (LUO et al., 2006).

3.3. Difuso de solvente O mtodo de difuso e evaporao de solvente para foi a primeiramente preparao de

desenvolvido

nanopartculas com polmeros sintticos. Este mtodo simples e no requer nenhum equipamento especial. Porm,

como desvantagens este mtodo inclui o uso de solvente orgnico e a dificuldade de produzir as partculas em larga escala (Figura 5) (CHATTOPADHYAY et al., 2008; HU et al., 2006; HU et al., 2005).

utilizando

sonicador de sonda e, em seguida, foi

Lipdio dissolvido em um solvente miscvel em gua (ex. acetona) Agitao Soluo de Surfactante

Evaporao do solvente orgnico baixa presso

Figura 5: Esquema da preparao de NLS pelo mtodo difuso de solvente.

HU et al. (2006) prepararam, pelo mtodo de difuso de solvente, NLS e CLN,

encapsulamento

de

propionato

de

clobetasol, um modelo de ativo lipoflico. Neste estudo, os autores observaram que a eficincia de encapsulamento (EE) foi maior nos CLN devido a menor

utilizando o lipdio slido monoestearato de glicerila e o lipdio lquido Migliol. O objetivo deste trabalho foi o

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

organizao de seu arranjo cristalino. Alm disto, a EE aumentou com o aumento da quantidade de lipdio lquido, o que j era esperado, uma vez que a adio de lipdio lquido ocasiona a formao de um cristal imperfeito molculas que de pode ativo, acomodar como mais

em

um

solvente

orgnico Em em

como, seguida,

por a

exemplo, soluo

clorofrmio. aspergida

um

aparelho

(spray-drier), no qual um fluxo contnuo de ar quente evapora rapidamente o

solvente das gotas aspergidas obtendo partculas secas. Para evitar a agregao das partculas de e para fluxo aumentar do por a

discutido

anteriormente. Utilizando este mtodo, HU et al. (2004) encapsularam o peptdeo

propriedade pulverizado,

produto exemplo,

utiliza-se,

gonadorelina em NLS com um dimetro de 422 nm. Poucos trabalhos tm relatado o encapsulamento de peptdeos em NLS

lecitina juntamente com o lipdio. A rpida evaporao do solvente pode influenciar e modificar a estrutura Por este cristalina motivo das foi

devido dificuldade de encapsular ativos hidroflicos como peptdeos em matrizes lipoflicas. Os autores observaram que a diminuio da temperatura da fase aquosa contendo PVA de 25 C para 0 C

substncias.

desenvolvido o congelamento por asperso (spray-congealing) que consiste em

aspergir o lipdio fundido no spray-drier temperatura formando as ambiente, solidificando e

aumentou a eficincia de encapsulamento da gonadorelina de 50 para 69%. Este aumento da eficincia de encapsulamento foi atribudo rpida deposio interfacial do lipdio entre a gota formada

micropartculas

lipdicas

slidas. O uso de diferentes velocidades de resfriamento pode ocasionar a cristalizao do lipdio em diferentes formas

polimrficas (ELDEM et al., 1991).

(constituda pelo lipdio, solvente orgnico e peptdeo) e o meio aquoso, antes da sada do peptdeo para a fase aquosa. No estudo de liberao in vitro foi observada uma liberao bifsica, com um burst nas primeiras liberao 2 horas, seguida em por que uma foram uma 3.5. Homogeneizao alta presso Na homogeneizao alta presso disperso de partculas

impulsionada com alta presso (100-2000 bar) atravs de uma cavidade estreita (poucos micrmetros), e acelerada em uma curta distncia, com alta velocidade (cerca de 100 km/h) ao encontro de uma barreira. A coliso com a barreira

sustentada,

liberados 4% do peptdeo por dia durante 14 dias.

3.4. Secagem por asperso Micropartculas lipdicas slidas

possibilita a formao de nanopartculas com reduzido dimetro (MEHNERT E

podem ser produzidas pelo processo de secagem por asperso (spray-drying) que consiste na dissoluo do lipdio e do ativo

MADER, 2001).

Nanopartculas lipdicas

slidas podem ser preparadas por esta tcnica por dois mtodos bsicos:

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

homogeneizao

quente

um exemplo de homogeneizador de alta presso utilizados na produo de NLS.

homogeneizao frio. A figura 6 mostra

Figura 6: A) Homogeneizador de Alta presso da Niro-Soavi (Panda 2k). No processo de homogeneizao Quente, inicialmente, o ativo dissolvido no lipdio fundido. Em seguida, esta resfriada a uma temperatura abaixo da temperatura ambiente ocasionando a

cristalizao do lipdio e formao das NLS. Este mtodo utilizado principalmente no encapsulamento de ativos lipoflicos, isto porque, no caso de ativos hidroflicos, este migra para a fase aquosa durante a homogeneizao resultando em uma baixa eficincia de encapsulamento et al., 2008a; 2008).

mistura adicionada em uma soluo quente de tensoativo sob alta agitao, formando uma pr-emulso (leo em

gua). Esta pr-emulso homogeneizada em um homogeneizador de alta presso (100-1500 bar) (Figura 7). Em geral, so suficientes um a trs ciclos para formar as NLS. Em seguida, esta disperso

(TEERANACHAIDEEKUL ATTAMA E

MLLER-GOYMANN,

Ativo disperso no Lipdio Fundido (5-10 C acima da temperatura de fuso do lipdio) Alta Agitao Soluo de Surfactante na mesma temperatura do lipdio Pr-Emulso

Homogeneizao Alta Presso (500-2000 bar) Figura 7: Esquema da preparao de NLS pelo mtodo Homogeneizao Quente.

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

A Homogeneizao Frio mais apropriada para ativos hidroflicos. Neste mtodo, inicialmente, o ativo dissolvido no lipdio fundido com ou sem surfactante. A adio do surfactante nesta etapa pode aumentar a solubilidade do ativo hidroflico no lipdio fundido. Em seguida, esta

micropartculas (aproximadamente 50-100 m) que so dispersas em uma soluo de tensoativo. Em seguida, esta disperso homogeneizada a alta presso

temperatura ambiente ou a 0 C (Figura 8). O estado slido da matriz minimiza a migrao do ativo hidroflico para a fase aquosa aumentando a sua eficincia de encapsulao. Ativos termosensveis

mistura (lipdio+ativo) solidificada em gelo seco ou nitrognio lquido para

aumentar a fragilidade do lipdio e facilitar o processo de moagem das partculas que realizado em um moinho de bolas, por exemplo. Aps a moagem so obtidas

podem ser encapsulados por este mtodo, j que o tempo de exposio deste ativo a altas temperaturas muito curto

(DEMIREL et al., 2001).

O ativo disperso no Lipdio Fundido (5-10 C acima da temperatura de fuso do lipdio)

Solidificao com nitrognio lquido ou gelo seco

Moagem das partculas em um moinho formando micropartculas (50-100 m)

Soluo de Surfactante temperatura ambiente

Agitao Homogeneizao Alta Presso (500-2000 bar) Figura 8: Esquema da preparao de NLS pelo mtodo Homogeneizao Frio.

A maior vantagem da tcnica de homogeneizao possibilidade de alta presso a das

nanopartculas em larga escala, alm de produzir estreita faixa de dimetro de partculas (com baixo nmero de

produo

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

micropartculas) e de no utilizar solvente orgnico. Entretanto, a alta temperatura no processo pode aumentar a velocidade de degradao do ativo e do carreador, e modificar a conformao de protenas, enquanto a alta presso pode ocasionar a coalescncia das partculas (HU et al., 2006). As nanopartculas lipdicas

presso de homogeneizao e utilizando 37 ciclos, tanto na homogeneizao

quente quanto frio. SAKULKHUL et al. (2007) presso investigaram e do a influncia de ciclos de da de NLS de

nmero no pelo

homogeneizao produzidas

dimetro

mtodo

homogeneizao quente. Os autores observaram que o aumento da presso e o aumento do nmero de ciclos de

produzidas por homogeneizao quente produz, em geral, partculas abaixo de 500 nm e poucas micropartculas. J a

homogeneizao reduziram o dimetro e o ndice de polidispersidade das partculas como mostra a Figura 9. Para este estudo foi escolhida a presso de 500 bar e 3 ciclos de homogeneizao para produzir partculas de 200 nm de dimetro com ndice de polidispersidade de 0,3.

homogeneizao a frio, produz partculas maiores dimetro e com mais uma larga distribuio (NER, de

2006).

Entretanto, a reduo do dimetro das partculas pode ser obtida aumentando a

300 0,6

300

0,6

ndice de polidispersidade (IP)

ndice de polidispersidade (IP)

200

0,4

Dimetro (nm)

Dimetro (nm)

200

0,4

100

0,2

100

0,2

0,0

0,0

250

500

1000

1500

Presso (bar)

3 Nmero de Ciclos

Figura 9: Efeito da: A) Presso, B) nmero de ciclos de homogeneizao, no dimetro e no ndice de polidisperso (IP) das NLS preparadas pelo mtodo de homogeneizao quente.(Modificada da Ref. SAKULKHUL et al., 2007)

Estudo similar foi realizado por LIU et al. (2007). Neste estudo foi observado que a homogeneizao sob presso de 500 bar produziu aumento partculas do de 143 de nm, ciclos e o de

homogeneizao ocasionou a formao de partculas polidispersas. Entretanto, o

aumento da presso para 1000 bar com um ciclo reduziu o dimetro das partculas para 37 nm. O aumento do nmero de

nmero

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

ciclos de homogeneizao mantendo a mesma presso de 1000 bar ocasionou um leve aumento no dimetro das partculas. Este resultado se deve ao fato de que a homogeneizao formar pequenas alta presso com pode alta

disperso no lipdio fundido formando uma mistura. Em seguida, esta mistura

congelada, minimizando o enriquecimento do ativo em diferentes partes da partcula lipdica. O segundo e o terceiro modelo so, respectivamente, o de parede rica em ativo e ncleo rico em ativo (Figura 10 B e C). Estas estruturas de NLS so pelo obtidas mtodo na de

partculas

energia cintica que pode levar sua agregao aps o J processo para de a

homogeneizao.

produo

homogeneizao presso de 800 bar, os autores obtiveram partculas de 43 nm com uma faixa estreita de dimetro

homogeneizao quente. O modelo de parede rica em ativo obtido quando se utiliza baixa concentrao do ativo no lipdio. Neste caso, durante o processo de resfriamento da nanoemulso (leo em gua), o lipdio um precipita primeiro da

utilizando 5 ciclos de homogeneizao. Com o mtodo de homogeneizao alta presso, vrios ativos tm sido encapsulados em nanopartculas lipdicas slidas apresentando grande potencial de incorporao como no encapsulamento da coenzima Q10 (WISSING et al., 2004b), prednisolona mifepristone (MHLEN (HOU et et al., al., 1998), 2003),

ocasionando

contnuo

aumento

concentrao do ativo no lipdio fundido restante. O modelo de ncleo rico em ativo obtido quando a concentrao do ativo no lipdio fundido alta, atingindo a saturao. No processo de resfriamento das gotas quentes de leo ocorre, na

clotrimazole (SOUTO E MLLER, 2006). Dependendo homogeneizao ( do mtodo de

maioria

dos

casos,

uma

reduo

da

frio ou quente)

solubilidade do ativo no lipdio. Quando a solubilidade excede a saturao, o ativo precipita levando a formao de um ncleo rico em ativo (NER et al., 2007; SOUTO et al., 2004). A liberao do ativo das NLS est

utilizado e das condies de preparao das NLS, o ativo ser incorporado de diferentes maneiras dentro das partculas, o que influenciar diretamente na sua liberao. Alm disto, o tipo de NLS

depende da natureza qumica do ativo e do lipdio e da solubilidade do ativo no lipdio fundido. A Figura 10 mostra 3 modelos de incorporao. O primeiro modelo o de matriz homognea (soluo slida) (Figura 10A). Esta estrutura obtida na produo de NLS por homogeneizao frio. Neste mtodo, o ativo est molecularmente

diretamente relacionada com a estrutura das nanopartculas. A liberao do ativo no modelo de parede rica em ativo mais rpida do que no caso do modelo de ncleo rico em ativo, apresentando um grande burst (rpida liberao inicial do ativo) como mostra a Figura 11 (NER et al., 2007; SOUTO et al., 2004).

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

Figura 10: Modelo de incorporao de ativos em NLS: A) Matriz homognea (soluo slida), B) Parede rica em ativo, C) Ncleo rico em ativo.
30

25

B A

% de Ativo Liberado

20

15

10

0 0 5 10 15 20 25

Tempo (h)

Figura 11: Liberao in vitro de ativo encapsulado em NLS: A) Ncleo rico em ativo, B) Parede rica em ativo. (Modificada da Ref. SOUTO et al., 2004).

4. Tcnicas de Caracterizao Tcnicas microscpicas,

organizao das cadeias de alcano nos empacotamentos (ortorrmbica) e (hexagonal), (triclnica). O

Espectroscpicas, Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC) e Ressonncia

empacotamento hexagonal a forma mais desordenada, a ortorrmbica menos desordenada e o empacotamento triclnico o mais organizado. Desta forma, para uma aplicao industrial das partculas lipdicas slidas necessrio controlar este polimorfismo (BUNJES et al., 2007; ALLAIS, 2003). A influncia estrutura direta na polimrfica eficincia tem de

Magntica Nuclear de Prtons tm sido utilizadas na caracterizao e elucidao da estrutura das nanopartculas lipdicas slidas. Neste trabalho, sero abordadas as informaes que cada uma destas tcnicas pode fornecer no estudo de

nanopartculas lipdicas slidas e exemplos destas literatura. caracterizaes citados na

encapsulamento e na expulso do ativo 4.1. Difrao de Raio-X Os diferentes polimorfismo lipdios formas podem apresentar O durante o processo de estocagem sendo, portanto, muito importante Uma das a sua

polimrficas. devido

caracterizao.

tcnicas

observado

empregadas para caracterizar a estrutura

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

polimrfica das NLS a difrao de RaioX, que determina o comprimento dos espaamentos longos e curtos do retculo lipdico. Alm disto, a difrao de Raio-X permite diferenciar entre um material

triestearina,

observaram

que

espaamento longo na modificao foi de 5,1 nm e 4,5 nm nas amostras contendo nanopartculas na forma . Resultados similares foram obtidos por Attama et al. (2006) no estudo de CLN de cera de abelha com leo de teobroma. A Figura 12 mostra exemplos de padres de difrao de Raio-X do ativo podofilotoxina (POD), do lipdio

amorfo e um material cristalino e serve para avaliar a influncia do constituinte leo nos espaamentos dos longos dos

nanocristais

carreadores (CLN).

lipdicos

nanoestruturados

Entretanto,

importante a associao desta tcnica com a tcnica de calorimetria diferencial de varredura (DSC), visto que, o DSC permite diferenciar slidos amorfos e lquidos

tripalmitato, de NLS de tripalmitato sem ativo e do POD encapsulado em NLS de tripalmitato (CHEN et al., 2006) Nesta figura pode-se observar que o pico de difrao do ativo POD desapareceu quando este foi encapsulado em NLS. Este

(RUKTANONCHAI et al., 2008; MEHNERT E MADER, 2001; MLLER et al., 2000). Atravs da tcnica de Difrao de Raio-X possvel calcular o espaamento longo (correspondente a deflexo d001) derivado do pequeno ngulo da difrao de Raio-X. BUNJES et al. (2007) realizaram este estudo em nanopartculas de

resultado demonstra que o POD est no estado amorfo nas NLS. Alm disto, os autores concluram estava que o lipdio

tripalmitato

parcialmente

cristalizado devido ao fraco e largo pico de difrao.

Figura 12: Padro de difrao de Raio-X. (Modificada da Ref CHEN et al., 2006)

4.2. Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC)

tcnica

de

Calorimetria

Diferencial de Varredura (DSC) muito importante na caracterizao de

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

nanopartculas

lipdicas

slidas,

pois

alterao da temperatura e a perda de gua da disperso iniciam a transformao da forma para a modificao , liberando o ativo das partculas. Portanto, o controle do ativador da transformao da forma para a forma possibilita a criao de um carreador de ativos inteligente

fornece informaes sobre a cristalinidade das mesmas. O grau de cristalinidade de uma partcula extremamente importante, porque influencia na na eficincia velocidade de de

encapsulamento,

liberao do ativo e na expulso do ativo durante anlise o de processo DSC de estocagem. ainda A a

(TEERANACHAIDEEKUL et al., 2008b). CASTELLI et al. (2005)

fornece

temperatura e a entalpia de fuso das partculas. Um valor alto de entalpia de fuso sugere alta organizao no retculo cristalino, isto porque a fuso de um cristal altamente organizado (cristal perfeito)

investigaram, por DSC, a organizao e distribuio de lipdios em NLS

(nanopartculas lipdicas slidas) e em CLN (carreadores lipdicos slidos), assim como a disperso do ativo lipoflico indometacina nas partculas. As partculas foram

requer mais energia para superar as foras de coeso do retculo cristalino do que um cristal pouco ordenado ou amorfo. Alm disto, com essa tcnica possvel observar o comportamento de cristalizao das

preparadas pela tcnica de microemulso, utilizando o lipdio slido behenato de glicerila e o lipdio lquido Migliol. Os autores observaram eram que os CLN por

partculas, que influencia na expulso ou no do ativo, uma vez que, durante o processo de estocagem o lipdio pode passar da forma para a modificao , que convertida rapidamente para a forma . Com o aumento da formao da modificao mais estvel (/), o retculo cristalino promovendo torna-se a mais do perfeito, ativo das

preparados

constitudos

nanocompartimentos oleosos dentro da matriz slida (mltiplo CLN). Alm disto, foi observado que o ativo possui maior solubilidade no leo do que na matriz lipdica. Isto porque as curvas de DSC do Migliol sozinho e do Migliol com o ativo no mostraram implicando nenhum na pico calorimtrico, dissoluo do

expulso

completa

partculas como mostrado na Figura 1B (ATTAMA et al., 2006). Em geral, essa transformao lenta para triglicerdeos de cadeia longa do que para triglicerdeos de cadeia curta. Fatores que levam a transformao da forma para a forma so: a temperatura, a exposio luz e a perda de gua da disperso de NLS. Por exemplo, quando as partculas so

ativo no leo. Este resultado tambm foi observado nos ensaios de liberao

cintica, que avalia se um composto em contato com o sistema lipdico em meio aquoso capaz de migrar ou se difundir atravs das NLS e se dissolver dentro da fase lipdica. Este teste realizado

incubando o composto com as NLS na mesma temperatura de preparao das partculas. Se a migrao ocorrer, ela ser

aplicadas na pele ou no corpo humano, a

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

detectada pela mudana da forma do pico calorimtrico, que devido ao aumento da quantidade do composto dentro das

soja.

Fosfolipdio para

foi

utilizado por

como mais desta

estabilizante tempo a

preservar

forma

aumentando,

partculas. Neste ensaio, no se observou alterao na forma do pico calorimtrico quando as NLS foram incubadas com o ativo a 80 C. Entretanto, quando os CLN foram incubados com o ativo na mesma temperatura foi observada uma alterao na forma do pico calorimtrico sugerindo a migrao do ativo para dentro das NLS. Este resultado do demonstra ativo na fase a alta oleosa

forma, a eficincia de encapsulamento e minimizando a expulso do ativo das partculas durante o processo de

estocagem. O lipdio utilizado neste estudo foi a triestearina. Foi observado que as nanopartculas estabilizadas por lecitina de soja S-100 apresentavam-se transformadas na

completamente

modificao (Figura 13A). Entretanto, as partculas estabilizadas por lecitina de soja hidrogenada (S100-3) apresentaram uma predominante frao da forma (Figura 13B).

solubilidade (Migliol).

BUNJES et al. (2007) investigaram a forma e a estrutura das NLS

estabilizadas pelo fosfolipdio lecitina de

Figura 13: Curva de DSC de aquecimento (10 C/min) e de resfriamento (5 C/min) de nanopartculas de triestearina estabilizadas com: A) Lecitina de soja S-100, B) Lecitina de soja hidrogenada S-100-3.(Modificado da Ref. BUNJES et al., 2007)

4.3. Ressonncia Magntica Nuclear de Prtons (RMN-H ) A ressonncia magntica nuclear de prtons uma tcnica importante na caracterizao lquidos de domnios das de lipdios
1

lipdicas. Quando o lipdio lquido (leo) incorporado na fase lipoflica das NLS, este leo pode permanecer dentro da partcula no estado lquido mesmo que a partcula esteja no estado slido. Informaes sobre a mobilidade e arranjo das molculas de

dentro

nanopartculas

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

leo podem ser obtidas pela tcnica de espectroscopia de RMN-H . Atravs da

1

CH3 (0,9 ppm). O lipdio slido behenato de glicerila (C22) possui alta razo de prtons CH2/CH3 (12,2), enquanto que o lipdio lquido (C8-12) possui baixa razo CH2/CH3 (3,1). A razo CH2/CH3 nos CLN foi abaixo de 3,2, indicando apenas as molculas do lipdio lquido.

tcnica de RMN-H1 possvel verificar se um lipdio est no estado lquido ou semislido/slido atravs da diferena do

tempo de relaxao de prtons no estado lquido e no estado semi-slido/slido. Prtons em estado lquido tm um sinal fino e com alta amplitude, enquanto que prtons no estado semi-slido/slido tm um sinal fraco et e al., largo 2008a;

4.4. Microscopia Eletrnica de Transmisso (MET) Dentre as tcnicas microscpicas, a microscopia eletrnica de transmisso tem se mostrado a mais adequada na obteno de imagens diretas a de de nanopartculas, da sua da

(TEERANACHAIDEEKUL

NER, 2006; MEHNERT E MADER, 2001). JENNING et al. (2000) investigaram atravs da tcnica de RMN-H1 a estrutura do lipdio lquido (Migliol) dentro da matriz lipdica slida. Para isto, foram realizados espectros de RMN-H de NLS de behenato de glicerila, de CLN de behenato de
1

possibilitando distribuio

determinao dimetro,

alm

determinao da sua estrutura cristalina, no caso do uso de microscpios de alta resoluo (HOU et al., 2003). BUJES et al. (2007) investigaram a estrutura cristalina de nanopartculas lipdicas estabilizadas por lecitina de soja por MET em condies criognicas. Neste mtodo, o vcuo substitudo por um meio criognico. O diferencial possibilidade desta de tcnica se consiste alm na da

glicerila com Migliol e de nanoemulso com apenas Migliol. Os autores

observaram que as NLS apresentam um fraco e largo pico entre 0,9 e 2,5 ppm referente aos prtons do lipdio. Este sinal fraco e largo corresponde ao lipdio no estado slido. J no caso das

avaliar,

nanoemulses foi observado um sinal fino e de alta amplitude entre 0,9 e 2,5 ppm correspondente ao lipdio liquido.

morfologia e do dimetro das partculas, a lamilaridade e a difrao de eltrons em estruturas cristalinas. Na figura 14A,

Entretanto, nos espectros dos CLN foi observado um sinal com intensidade e largura intermedirio entre os sinais da NLS e da nanoemulso, demonstrando a incorporao do leo. Atravs da RMN-H possvel verificar se o sinal dos prtons de lipdio lquido se referente ao lipdio slido fundido ou ao lipdio lquido, pelo clculo da razo dos prtons de CH2 (1,25 ppm) e
1

observa-se partculas lipdicas esfricas na forma . Estas partculas apresentam que as em

camadas camadas

concntricas, ficam mais

sendo

distorcidas

direo ao centro das partculas e com uma alta densidade eletrnica (regio mais escura dentro das partculas). Isto

acontece devido a grande espessura da partcula nesta rea. A distncia das listras

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

foi de 5,2 nm. Na figura 14B, observa-se a estrutura de partculas Nesta lipdicas com

torno

de

4,6

nm.

partir

destes

resultados e dos resultados obtidos por medidas de difrao de Raio-X e de

modificao .

imagem

pode-se

observar partculas com forma circular e elongada constitudas por camadas

calorimetria diferencial de varredura, os autores propuseram um modelo do

orientadas em paralelo. No interior das partculas podem ser observadas listras regulares escuras com uma distncia em

processo de solidificao das partculas de triestearina estabilizadas por lecitina de soja como mostra a figura 14C.

C
Figura 14: MET criognica: A) NLS de triestearina na forma , B) NLS de triestearina na modificao e C) Esquema do modelo proposto por Bujes et al. (2007) do processo de solidificao de partculas lipdicas. (Modificada da Ref. BUNJES et al., 2007)

4.5. Microscopia de Fora Atmica O desenvolvimento da tcnica de Microscopia de Fora Atmica data da dcada de 1980. Ela envolve o arraste de uma sonda com uma ponta extremamente fina (tip) ao longo da amostra ou muito prxima sua superfcie gerando imagens em 3 dimenses com uma capacidade de resoluo de at 0,01 nm. Esta tcnica uma ferramenta chave na obteno de imagens de materiais moles, sistemas

biolgicos e sistemas coloidais. As imagens podem ser obtidas utilizando diferentes modos de anlise que so: contato, nocontato e contato intermitente ou

dinmico. A utilizao de diferentes modos na aquisio da imagem permite analisar vrias propriedades da superfcie da

amostra, alm de detalhar a natureza e o local destas propriedades (SHAHGALDIAN et al., 2003). por CHEN et al. de (2006) Fora

observaram

Microscopia

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

Atmica as NLS, utilizando o modo de contato intermitente no qual o tip toca periodicamente a superfcie do material. Partculas de NLS de tripalmitato com morfologia esfrica foram observadas

de NLS sobre o suporte de mica. Alm disto, no se observa clusters de

nanopartculas que comum em imagens de NLS por Microscopia de Fora Atmica. Em geral, clusters de NLS so formados durante a secagem de partculas em alta concentrao. Neste estudo, as partculas foram diludas 80 vezes evitando, desta forma, a formao de clusters.

como mostram as imagens de AFM da Figura 15. Nesta imagem, pode ser

observada uma pequena diferena entre a largura e altura das partculas, que se deve ao processo de secagem da disperso

Figura 15: Imagens planar (4x4 m) de AFM de NLS (Modificada da Ref. CHEN et al., 2006).

4.6. Espectroscopia de correlao de ftons (PCS) e Potencial Zeta O dimetro e a distribuio das partculas so parmetros muito

dimetro so influenciadas pelas camadas de surfactantes adsorvidas nas partculas assim como pela camada de hidratao. Uma limitao desta tcnica a faixa de dimetro possvel de medir. O DLS s capaz de medir dimetro de partculas menores que 3 1999). O tamanho das nanopartculas m (HANUS E PLOEHN,

importantes na determinao da qualidade da disperso. Estes parmetros podem ser medidos por espectroscopia de correlao de ftons (PCS), tambm chamado de espalhamento dinmico de luz (DLS). O PCS uma tcnica de sonda no evasiva de difuso em fluidos desta de complexos. tcnica A a de

lipdicas afetado por vrios parmetros, como a composio da formulao (a concentrao lipdio, de surfactante, do ativo tipo a de ser

principal medida

aplicao de

dimetro

partculas

propriedades

disperses coloidais diludas. O PCS mede o movimento Browniano das partculas, de maneira que as determinaes do

encapsulado etc), mtodo e condies de produo (tempo, temperatura, presso, esterilizao etc). O crescimento das

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

partculas durante a estocagem um indicativo da instabilidade do material e, conseqentemente, da baixa qualidade do produto. Alm disto, o aumento do

produzidas por homogeneizao quente. Para avaliar a estabilidade das partculas durante o processo de estocagem, foram utilizadas as tcnicas de espectroscopia de correlao de ftons e calorimetria

dimetro das partculas est diretamente relacionado com o ndice de recristalizao do lipdio que pode passar da forma polimrfica para a modificao . Quanto maior a recristalizao do lipdio, mais rpido ser o crescimento das partculas. Entretanto, este processo pode ser

diferencial de varredura. Foi observado que a reduo da concentrao das NLS na disperso aumentou sua estabilidade

durante a estocagem (Figura 16). Na disperso de 10% (m/v) de NLS, o

dimetro das partculas aumentou de 770 nm para 23 m aps 3 dias. J na

retardado por semanas, ou at meses. Alm disto, o dimetro das partculas determina formulao. a via Por de administrao exemplo, da

disperso de 2% (m/v) de NLS, o dimetro das partculas no aumentou

para

significativamente. A baixa concentrao das nanopartculas diminui a probabilidade de coliso entre elas, reduzindo a

administraes intravenosas o dimetro mximo das partculas de 5 m

(SAKULKHUL et al., 2007; FREITAS E MLLER, 1999). FREITAS E MLLER (1999)

agregao das mesmas durante o processo de estocagem. Alm disto, foi observado um crescente aumento da cristalinidade das partculas durante o processo de

investigaram os efeitos das condies de estocagem, como temperatura e exposio luz, na estabilidade de nanopartculas lipdicas de behenato de glicerila

estocagem principalmente na disperso contendo 10% (m/v) de NLS, resultando no aumento do dimetro das partculas.

45 16 40 14 35 30 12

Dimetro (m)

Entalpia (J g )

25 20 15 10 5 0

10 8 6 4 2 0

-1

3 Dias

14

Figura 16: Dimetro (barras) e entalpia (linhas) de 10%, 5% e 2% (m/v) de NLS: Barra preta () 10%, Barra branca () 5% e Barra cinza () 2% estocadas a 20 C sob agitao por 14 dias. (Modificada da Ref FREITAS E MULLER, 1999).

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

Alm do dimetro e da distribuio das partculas, o Potencial Zeta (PZ) tambm um indicativo da estabilidade das

das NLS a 4, 25 e 40 C. As partculas estocadas a 4 C no apresentaram

mudana significativa de dimetro e PZ durante 8 semanas. Entretanto, as

partculas. Em geral, devido repulso eletrosttica, partculas com carga se

partculas estocadas a 25 C tiveram uma significativa alterao do dimetro aps 4 semanas e as partculas estocadas a 40 C formaram gel dentro de 1-2 semanas. Mas o Potencial Zeta das partculas estocadas a 25 e a 40 C no sofreu, praticamente, alterao. Este resultado demonstra que a medida de PZ no foi um bom parmetro, neste caso, para avaliar a estabilidade da disperso devido, provavelmente, ao fato de que estas partculas foram estabilizadas por um estabilizante estrico (PEG).

agregam menos durante a estocagem. Partculas com PZ maior que 30 mV so requeridas para uma excelente

estabilizao eletrosttica. Entretanto, esta regra no pode ser utilizada em sistemas com estabilizadores destes estricos, pois a

adsoro

estabilizadores

pode

diminuir o PZ (NER et al., 2007). O aumento da temperatura e a exposio luz ocasionam o aumento da energia cintica, mudando a cristalinidade das partculas (transformao da forma para a modificao ) ocasionando a

5. Aplicao As nanopartculas lipdicas slidas podem tpicas, ser utilizadas e em em aplicaes injees

agregao das mesmas. A recristalizao pode resultar na mudana de carga na superfcie e, conseqentemente, alterar o Potencial diminuio Zeta do das partculas. Zeta A e,

intravenosa

extravenosas (intramuscular, subcutnea e em infiltraes nervosas) (MLLER et al., 2000; TOONGSUWAN et al., 2004). Alm disto, estas no partculas tm sido de

Potencial na a

conseqentemente, eletrosttica, facilita

repulso das

agregao

partculas, sendo por isto utilizado como indicativo disperso 2006). LEE et al. (2007) investigaram o efeito da temperatura na estabilidade de NLS de trimiristina estabilizadas por da (NER estabilidade et al., de uma NER,

investigadas

encapsulamento

partculas magnticas para a deteco de tumores cerebrais (SILVA, 2007). Neste trabalho, carreador frmacos, ser na abordado rea de o uso deste e

2007;

cosmticos sua

assim

como

vantagem

nestas aplicaes.

polietilenoglicol (PEG), produzidas atravs do mtodo de homogeneizao quente. A estabilizao foi avaliada atravs das tcnicas de PCS e PZ durante a estocagem uma 5.1. Cosmtico A via cutnea apresenta-se como via de administrao bastante

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

atrativa e acessvel para a administrao de ativos. Entretanto, a via cutnea altamente seletiva em relao aos ativos que conseguem difundir passivamente

literatura.

Alm

de

aumentar

estabilidade de compostos lbeis, as NLS diminuem a perda de gua da pele,

aumentando, conseqentemente, a sua hidratao. apresentam Desta forma, as NLS

atravs da camada mais externa da pele, o estrato crneo (GUTERRES et al. 2007; CEVC, estudos 2004). tm Em vista disto, muitos no

propriedades

oclusivas,

mostrando ser mais eficiente, em relao perda de gua, quanto menor for as partculas, como mostra a Figura 17. Alm disto, esta propriedade suaviza rugas e aumenta a penetrao de compostos em camadas especficas (NER et al., 2007; SOUTO E MULLER, 2008). Outras

sido de

realizados

desenvolvimento

carreadores

nanoparticulados. Nos ltimos 5 anos, a ateno para o uso de nanopartculas lipdicas slidas na rea de cosmticos tem aumentado. Estudos aumento compostos da que descrevem qumica o de

estabilidade

vantagens deste carreador em cosmticos so: promover liberao sustentada do ativo, reduzir a absoro sistmica e atuar como um protetor solar fsico (ATTAMA et al.,2006)

cosmticos

lbeis

utilizando

NLS, como retinol (JEE et al., 2006), coenzima Q10 (WISSING et al., 2004b) e derivados de vitamina C (NER et al., 2005) . podem ser encontrados na

Figura 17: Modelo da formao de filme sobre a pele de partculas lipdicas de 2

m e de

200 nm e modelo de difuso das nanopartculas para um filme de poucos poros (Modificada da Ref. WISSING E MLLER, 2003).

WISSING

MLLER

(2003)

com cremes (leo em gua). As partculas foram preparadas pelo mtodo de

estudaram o aumento da hidratao da pele in vivo aps 28 dias de tratamento com NLS, comparando-o ao tratamento

homogeneizao quente utilizando o lipdio palmitato de cetila. O creme

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

contendo NLS apresentou maior hidratao do que o creme sem NLS como mostra a Figura 18. Este efeito se deve a formao do filme de NLS. Foras capilares dos poros nanomtricos entre as NLS podem promover a fuso das partculas formando um denso filme sobre a pele (Figura 17).

Este estudo demonstra o efeito oclusivo de nanopartculas lipdicas e o possvel e eficiente uso deste carreador em cremes cosmticos com o intuito de aumentar a hidratao da pele (SOUTO E MLLER, 2008).

40 35

Mudana da Hidratao (%)

30 25 20 15 10 5 0 Controle Creme com NLS

Figura 18: Mudana da hidratao aps 28 dias de tratamento (Modificada da Ref. WISSING E MLLER, 2003).

BORGI et al. (2005) estudaram a penetrao em pele de porco de um corante modelo (vermelho do nilo-VN) em NLS, CLN e nanoemulses por Microscopia Confocal partculas de Varredura a Laser. mtodo As de

para os CLN produzidos com o lipdio lquido acido olico, quanto para os

produzidos com Migliol. E, no caso das nanoemulses, no foi observado nenhum aumento da penetrao do corante em relao ao ativo livre, ao contrrio, aps 8 horas de tratamento o nvel do corante no estrato crneo foi muito menor do que o corante livre a em creme. Este de estudo em

produzidas

pelo

homogeneizao quente apresentaram dimetro de 200 nm. A distribuio do corante foi significativamente influenciada pelo tipo de carreador nanoparticulado. Quando o corante encapsulado em NLS foi aplicado, a concentrao do corante no estrato crneo, na epiderme e na

demonstra

eficincia

NLS

aumentar a penetrao do corante VN e a possibilidade de acompanhar a penetrao de ativos na pele por Microscopia Confocal. LIU et al. (2007) investigaram o uso de NLS no encapsulamento de

superfcie da derme foi 4 vezes maior em relao ao corante livre em creme. J no caso dos CLN, foi observado um aumento de 2 vezes em relao ao ativo livre, tanto

isotretinoina, que um ativo utilizado no tratamento de acne. As NLS foram

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

preparadas por homogeneizao quente utilizando o lipdio Precirol ATO 5, com o objetivo de diminuir a absoro sistmica deste ativo e aumentar a sua eficcia no tecido alvo (derme). Foram preparadas

sistema de clula de difuso de Franz com pele abdominal de rato (Figura 19). Os autores observaram que o ativo

encapsulado evitou a absoro sistmica, aumentando o tempo de residncia do ativo na pele, demonstrando que as NLS so promissores carreadores em

partculas de 42 nm e a eficincia de encapsulamento foi de 82%. Para estudar a penetrao do ativo, foi utilizado o

aplicaes

tpicas.

Figura 19: Clula de difuso de Franz. As NLS so tambm utilizadas para aumentar a estabilidade de compostos lbeis. JEE et al. (2006) investigaram o uso de NLS no aumento da estabilidade de trans-retinol (AR) que um composto hidrofbico da vitamina A. Este composto protege a pele contra radicais livres que causam o envelhecimento precoce e at cncer de pele. Em vistas destas propriedades, o trans-retinol vem sendo estudado em aplicaes na rea de cosmticos. Entretanto, o seu uso limitado devido a sua baixa estabilidade qumica quando exposto ao ar, gua ou luz. Desta forma, sistemas nanoparticulados como NLS podem aumentar a sua estabilidade. Neste trabalho de JEE et al. (2006), as NLS foram preparadas pelo mtodo de homogeneizao quente obtendo partculas com dimetro de 96 nm e com um Potencial Zeta (PZ) de -28 mV. Foi observado que as NLS no foram capazes de estabilizar o ativo AR contra a degradao por exposio luz. Aps 48h, apenas 1% de AR estava intacto sendo que o restante foi oxidado. Esta baixa proteo das NLS contra degradao do ativo AR pode estar relacionada ao tipo de lipdio utilizado, j que em outros estudos foi demonstrado que NLS podem aumentar significativamente a estabilidade de AR. O lipdio utilizado neste estudo (DS-CBS) pode estar se autooxidando e o AR encapsulado nas NLS pode estar atuando como um anti-oxidante,

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

removendo os radicais lipoperoxil, resultando na degradao do AR. Para aumentar a sua estabilidade, foi encapsulado antioxidantes juntamente com o AR em NLS, como Vitamina C, tocoferol e mistura de BHT-BHA (butilato hidroxitolueno-butilato

hidroxianisol). Os anti-oxidantes protegeram o AR da degradao sendo que, aps 72 horas at 89% do AR estava intacto. O anti-oxidante mais eficiente foi a mistura de BHTBHA, por ter maior interao com ativo AR e por ser lipoflico, o que aumentou a sua eficincia de encapsulao. Outra aplicao das NLS no encapsulamento de protetores solares. O interesse em protetores solares mais eficientes tem aumentando devido reduo da camada de oznio, que resulta em um aumento do nmero de casos de cncer de pele. Sendo

assim, protetores solares so utilizados regularmente por milhes de pessoas e o conhecimento dos efeitos nocivos destes agentes se faz muito importante. Muitos protetores solares penetram na pele causando efeitos adversos como fotoalergias, reaes fototxicas e irritaes na pele (XIA et al., 2007). O desenvolvimento de formulaes que diminuem ou evitam a penetrao destes ativos na pele, diminui os seus efeitos adversos. Isto possvel com nanopartculas lipdicas slidas que atuam como protetores solares fsicos por espalhar e refletir a radiao UV (SIMEONI et al., 2006). Esta propriedade de espalhamento de luz depende fortemente do grau de cristalinidade da matriz lipdica. WISSING E MLLER (2002a) encapsularam o

fotoprotetor qumico oxibenzofenona em CLN pelo mtodo de homogeneizao quente utilizando o lipdio lquido Migliol. Em estudo in vivo foi observado que este ativo tem absoro sistmica, gerando efeitos adversos. Neste estudo, foi observado que as partculas sem ativo apresentaram um efeito de espalhamento de luz, e a encapsulao da oxibenzofenona no CLN levou a um efeito de fotoproteo sinergstico. Alm disto, foi observado que CLN com 5% de oxibenzofenona apresentou o mesmo valor de absoro que CLN com 10% do ativo. Portanto, o mesmo fator de proteo pode ser obtido utilizando menos ativo e, consequentemente, isto diminuir os efeitos adversos do fotoprotetor qumico. Em estudo de liberao in vitro do ativo foi observado que aps 4 horas de experimento, apenas 3% do ativo foram liberados dos CLN, mantendo uma liberao sustentada por 24 horas (WISSING E MLLER (2002b).

5.2. Frmacos

As nanopartculas lipdicas podem ser administradas por diversas vias que incluem oral, parenteral, oftlmica e drmica.

5.2.1. Oral

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

A rota oral continua sendo a via de administrao de frmacos mais atrativa, devido ao seu grande potencial comercial. A incorporao de frmacos em NLS abre perspectivas de aumentar a biodisponibilidade e prolongar os nveis plasmticos de frmacos. Alm disto, as NLS podem oferecer maior flexibilidade na modulao da liberao de frmacos dentro do trato gastrointestinal e evitar ou diminuir a degradao qumica de molculas lbeis como peptdeos (GASCO, 2007). PANDEY et al. (2005) estudaram o uso de NLS no encapsulamento de antibiticos utilizados no tratamento da tuberculose. As partculas foram preparadas pelo mtodo de difuso de solvente utilizando o lipdio cido esterico. A eficincia de encapsulamento foi de 51%, 45% e 41% para, respectivamente, rifampicina, isoniazida e pirazinamida. Estas partculas foram administradas oralmente a ratos e a frmacocintica desses frmacos foi avaliada. Um dia aps a administrao dos frmacos livres, estes no foram mais detectados na corrente sangunea, enquanto que, no caso dos frmacos encapsulados em NLS, s aps 9 dias, esses no foram mais detectados. Alm disto, os frmacos foram detectados no pulmo, fgado e bao aps o dcimo dia da administrao oral das NLS contendo os frmacos. J na administrao dos frmacos livres, aps 48 horas no se detectou mais os frmacos nestes rgos. Estes resultados mostram o efeito de

liberao sustentada do ativo que aumentou de 10-29 vezes o tempo de residncia dos frmacos quando estes foram encapsulados em NLS em relao aos ativos livres. No

estudo da atividade quimioterpica, foi verificado que o uso de NLS no encapsulamento dos frmacos pode reduzir o nmero de dosagem de 46 para 5 devido ao efeito de liberao sustentada que obtido com NLS. Este resultado demonstra que o encapsulamento destes ativos em NLS poderia evitar que os pacientes interrompessem o tratamento no meio, por ser muito longo, diminuindo os ndices de tuberculose. LUO et al. (2006) estudaram a administrao oral em ratos de NLS contendo vinpocetina. Este ativo utilizado apresenta no tratamento de desordens oral sendo circulatrias rapidamente

cerebrovascular,

entretanto,

baixa

absoro

metabolizada e eliminada do corpo. Para aumentar a sua biodisponibilidade, este ativo foi encapsulado em NLS pelo mtodo de emulsificao e evaporao de solvente. Estas partculas (70 a 200 nm) foram administradas oralmente em ratos para o estudo de frmacocintica. Neste estudo, os autores observaram que o reduzido dimetro das NLS possibilitou sua bioadeso no trato gastrointestinal aumentando assim o seu tempo de residncia. Como conseqncia, houve um aumento da biodisponibilidade do ativo vinpocetina encapsulado comparado com este ativo livre. Alm disto, observaram que a quantidade de estabilizante tambm aumentou significativamente a absoro oral do ativo em NLS. O estabilizante pode ter contribudo no aumento da permeabilidade da membrana intestinal ou no aumento da afinidade entre a partcula lipdica e a membrana intestinal.

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

5.2.2. Parenteral Muitos frmacos, como peptdeos, tm baixa estabilidade fsica e qumica no trato gastrointestinal, sendo por isto, administrados pela via parenteral. Entretanto, pela via intravenosa estas molculas tambm podem ser rapidamente degradadas. Por este motivo o encapsulamento destas molculas uma grande vantagem. NLS so geralmente injetadas intravenosamente, intramuscularmente ou subcutanemente.

Devido reduzido dimetro das NLS (menor que 1

m), estas podem ser usadas em

administrao sistmica com um risco mnimo de agregao nos vasos sanguneos (ALMEIDA E SOUTO, 2007). LU et al. (2006) estudaram a administrao subcutnea de NLS no tratamento de cncer de mama. As partculas foram preparadas pelo mtodo de microemulso

utilizando o lipdio behenato de glicerila. Partculas de 61 nm foram obtidas com eficincia de encapsulamento do ativo mitroxantrona (MTO) de 87%. Foi observado que uma menor concentrao (50% menor) do ativo MTO encapsulado em NLS apresentou a mesma porcentagem de inibio do tumor do que o ativo livre em maior concentrao. Este fato se deve a alta afinidade das NLS pelo tumor, verificada por Microscopia Eletrnica de Varredura, na qual NLS foram observadas na superfcie do tumor. Este resultado demonstra que partculas lipdicas slidas pode ser um promissor sistema carreador de ativos antitumorais contra cncer de mama.

5.2.3. Drmica CHEN et al. (2006) investigaram o uso de NLS no encapsulamento de podofilotoxina (POD) que inibi o crescimento de clulas epiteliais infectadas pelo vrus papiloma humano (HPV) na epiderme, e utilizado como um frmaco de primeira-linha no tratamento de verrugas vaginais. Entretanto, este ativo apesar de ser aplicado topicamente absorvido sistemicamente gerando severos efeitos adversos sendo, portanto, necessrio o desenvolvimento de uma formulao que reduza a sua absoro sistmica e aumente o seu tempo de residncia na epiderme o que possvel atravs do encapsulamento do POD em nanoestruturas. O POD foi encapsulado em NLS preparadas pelo mtodo de microemulso utilizando o lipdio tripalmitato. Foram realizados estudos de permeao cutnea em clula de difuso de Franz utilizando pele de porco. Neste estudo foram obtidas partculas com dimetro de 73 nm e com PZ de -48 mV. No estudo de permeao cutnea, no foi observado a presena do ativo na clula receptora de Franz aps 8 horas da aplicao de POD encapsulado em NLS indicando que o ativo encapsulado no penetrou atravs da pele de porco. Entretanto um constante aumento da concentrao do ativo na clula receptora foi observado para ativo livre. Desta forma, o encapsulamento do ativo em NLS pode evitar a absoro sistmica deste ativo em

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

aplicaes tpicas quando comparado com o ativo livre. Alm disto, foi observada uma acumulao 4 vezes maior do ativo na pele de porco no caso do ativo encapsulado em NLS em relao ao ativo livre. A profundidade de penetrao na pele de porco do POD livre e encapsulado foi avaliada por Microscpio Confocal de Varredura a Laser. Os autores observaram que o POD encapsulado em NLS se localizou principalmente na epiderme e na rea do folculo capilar. Este resultado demonstra que o ativo encapsulado pode penetrar na pele atravs de dois caminhos que incluem o estrato crneo e os folculos capilares. J o ativo (POD) livre foi distribudo tanto na derme quanto na epiderme. Alm disto, foi observado no caso das NLS-POD que a maior parte do ativo se localizou no estrato crneo devido alta fluorescncia na seo horizontal da pele (10 m de profundidade). Mas o ativo POD tambm foi encontrado na epiderme nas profundidades de 75, 135 e 275 275 m, porm em menor quantidade. Na profundidade de

m o ativo s aparece ao redor dos folculos capilares que uma das vias de do ativo encapsulado. Os folculos capilares tm um dimetro de

penetrao

aproximadamente 40

m sendo que partculas pequenas podem penetrar dentro da

epiderme e da derme, principalmente, atravs desta via.

5.3. Outras Aplicaes MONTANA et al. (2007) estudaram o uso de NLS como carreadores de RNA para transferncia de genes. Para isto nanopartculas de NLS catinicas foram preparadas pelo mtodo de microemulso com o lipdio behenato de glicerila e o tensoativo catinico brometo de dimetildioctadecylamonia (DDAB). Partculas de 100 nm com PZ de +41 mV foram obtidas. Estas partculas apresentaram eficiente ligao com molculas de RNA que foi verificado pela alterao do PZ para -17 mV. Alm disto, em estudo in vitro, estas partculas conseguiram se difundir atravs da membrana celular e liberar o RNA demonstrando serem um potencial carreador na terapia gentica em humanos. Outra aplicao das NLS no encapsulamento de partculas magnticas para o diagnostico de cncer cerebral. Nanopartculas magnticas encapsuladas em NLS foram administradas intravenosamente em ratos e foi observado que estas partculas se concentraram mais no crebro comparado s partculas magnticas livres. Este estudo demonstra o potencial das NLS em ultrapassar a barreira hemato-enceflica sendo, portanto, possvel o seu uso na administrao de ativos que atuem no crebro e no carreamento de partculas magnticas para o diagnstico de cncer cerebral (KOO et al., 2006).

6. Consideraes Finais As NLS so atrativos carreadores de ativos utilizados em produtos cosmticos e farmacuticos. Uma das vantagens das NLS a sua fcil produo em larga escala, o que

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

aumenta o interesse de indstrias na produo deste carreador. Diferentes mtodos podem ser utilizados na produo de NLS, sendo possvel em alguns deles no utilizar solventes orgnicos, mas apenas reagentes aprovados por rgos regulatrios como a FDA (Food Drug Administration). Uma das desvantagens a baixa eficincia de encapsulamento. Entretanto, isto pode ser melhorado pela produo de diferentes estruturas de nanopartculas lipdicas como os CLN. As NLS e CLN apresentam grande versatilidade no carreamento de diferentes ativos, podendo ser administradas por diversas vias como oral, parenteral, drmica e oftlmica. 7. Agradecimentos Agradeo o apoio financeiro do CNPq, da Rede de Nanobiotecnologia MCT/CNPq, da Rede de Nanocosmticos MCT/CNPq e as importantes contribuies do Professor Nelson Durn.

8. Referencias

ALLAIS,

C.;

KELLER,

G.;

LESIEUR,

P.;

OLLIVON,

M.;

ARTZNER,

F.

X-Ray

diffraction/calorimetry coupling A tool for polymorphism control. Analysis Calorimetry. v. 74, n. 3, p. 723728, 2003.

Journal of Thermal

ALMEIDA, A.J.; SOUTO, E. Solid lipid nanoparticles as a drug delivery system for peptides and proteins. Advanced Drug Delivery Reviews. v. 59, n. 6, p. 478-490, 2007.

ATTAMA, A.A.; MLLER-GOYMANN, C.C. Effect of beeswax modification on the lipid matrix and solid lipid nanoparticle crystallinity. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. v. 315, n. 1-3, p. 189195, 2008.

ATTAMA, A.A.; SCHICKE, B.C.; MLLER-GOYMANN, C.C. Further characterization of theobroma oil beeswax admixtures as lipid matrices for improved drug delivery systems. European Journal of Pharmaceutical Biopharmaceutics. v. 64, n. 3, p. 294306, 2006.

BORGIA, S.L.; REGEHLY, M.; SIVARAMAKRISHNAN, R.; MEHNERT, W.; KORTING, H.C.; DANKER, K.; RDER, B.; KRAMER, K.D.; SCHFER-KORTING, M. Lipid nanoparticles for skin penetration enhancement correlation to drug localization within the particle matrix as determined by fluorescence and parelectric spectroscopy. Journal of Controlled Release. v. 110, n. 1, p. 151 163, 2005.

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

BUNJES, H.; STEINIGER, F.; RICHTER, W. Visualizing the structure of triglyceride nanoparticles in different crystal modifications. Langmuir. v. 23, n. 7, p. 4005-4011, 2007.

CASTELLI, F.; PUGLIA, C.; SARPIETRO, M.G.; RIZZA, L.; BONINA, F. Characterization of indomethacin-loaded lipid nanoparticles by differential scanning calorimetry.

International Journal of Pharmaceutics. v. 304, n. 1-2, p. 231238, 2005.

CAVALLI, R.; CAPUTO, O.; CARLOTTI, M.E.; TROTTA, M.; SCARNECCHIA, C.; GASCO, M.R. Sterilization and freeze-drying of drug-free and drug-loaded solid lipid

nanoparticles. International Journal of Pharmaceutics. 148, p. 47-54, 1997.

CEVC, G. Lipid vesicles and other colloids as drug carriers on the skin. Advanced Drug Delivery Reviews. v. 56, n. 5, p. 675 711, 2004.

CHATTOPADHYAY, N.; ZASTRE, J.;

WONG, H-L.;

WU,

X.Y.; BENDAYAN, R.Solid lipid

nanoparticles enhance the delivery of the HIV protease inhibitor, atazanavir, by a human brain endothelial cell line. Pharmaceutical Research. v. 25, n. 10, p. 2262-2271, 2008.

CHEN, H.; CHANG, X.; DU, D.; LIU, W.; LIU, J.; WENG,T.; YANG, Y.; XU, H.; YANG, X. Podophyllotoxin-loaded solid lipid nanoparticles for epidermal targeting. Journal of Controlled Release. v. 110, n. 2, p. 296 306, 2006.

CORTESI, R.; ESPOSITO, E.; LUCA, G.; NASTRUZZI, C. Production of lipospheres as carriers for bioactive compounds. Biomaterials v. 23, n. 11, p. 22832294, 2002.

DEMIREL, M.; YAZAN, Y.; MLLER, R.H., KILI, F.; BOZAN, B. Formulation and in vitroin vivo evaluation of piribedil solid lipid microand nanoparticles. Journal of

Microencapsulation, v. 18, n. 3, p. 359-371, 2001.

ELDEM, T.; SPEISER, P.; HINCAL, A. Optimization of spray-dried and congealed lipid micropellets and characterization of their surface morphology by scanning electron microscopy. Phamaceutical Research. v. 8, n. 1, p. 47-54, 1991.

FREITAS, C.; MULLER, R.H. Correlation between long-term stability of solid lipid nanoparticles (SLNTM) and crystallinity of the lipid phase. European Journal Pharmaceutical Biopharmaceutics. v. 47, n. 2, p. 125132, 1999. of

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

GASCO, M.R. Lipid nanoparticles: perspectives and challenges. Advanced Drug Delivery Reviews. v. 59, n. 6, p. 377-378, 2007.

GUTERRES, S.S.; ALVES, M.P.; POHLMANN, A.R. Polymeric Nanoparticles, Nanospheres and Nanocapsules, for Cutaneous Applications. Drug Target Insights. v. 2, p. 147157, 2007.

HANUS, L.H.; PLOEHN, H.J. Conversion of Intensity-Averaged Photon Correlation Spectroscopy Measurements to Number-Averaged Particle Size Distributions. 1.

Theoretical Development. Langmuir. v.15, n. 9, p. 3091-3100, 1999.

HOU, D.; XIE, C.; HUANG, K.; ZHU, C. The production and characteristics of solid lipid nanoparticles (SLNs). Biomaterials. v. 24, n. 10, p. 17811785, 2003.

HU, F.-Q.; JIANG, S.-P.; DU, Y.-Z.; YUAN, H.; YE, Y.-Q.; ZENG, S. Preparation and characteristics of monostearin nanostructured lipid carriers. International of Journal Pharmaceutics. v. 314, n. 1, p. 8389, 2006.

HU, F-Q., JIANG, S-P., DU, Y-Z. Preparation and characterization of stearic acid nanostructured lipid carriers by solvent diffusion method in an aqueous system. Colloids Surface B-Biointerfaces. v. 45, n. 3-4, p. 167173, 2005.

HU, F.Q.;

HONG, Y.; YUAN, H. Preparation and characterization of solid lipid

nanoparticles containing peptide. International of Journal Pharmaceutics. v. 273, n.1-2, p. 2935, 2004.

JEE, J.-P.; LIM, S.-J.; PARK, J.-S.; KIM, C.-K. Stabilization of all-trans retinol by loading lipophilic antioxidants in solid lipid nanoparticles. European Journal of Pharmaceutical Biopharmaceutics. v. 63, n. 2, p. 134139, 2006.

JENNING, V.; MDER, K.; GOHLA, S.H. Solid lipid nanoparticles (SLN) based on binary mixtures of liquid and solid lipids: a
1

H-NMR

study.

International

Journal

of

Pharmaceutics. v. 205, n. 1-2, p.1521, 2000.

KOO, Y-E. L.;

REDDY, G.R.; BHOJANI, M.; SCHNEIDER, R.; PHILBERT, M.A.;

REHEMTULLA, A.; ROSS, B.D.; KOPELMAN, R. Brain cancer diagnosis and therapy with nanoplatforms. Advanced Drug Delivery Reviews. v. 58, n. 14, p. 15561577, 2006.

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

LEE, M.-K., LIM, S.-J.; KIM, C.-K. Preparation, characterization and in vitro cytotoxicity of paclitaxelloaded sterically stabilized solid lipid nanoparticles. Biomaterials. v. 28, n. 12, p. 21372146, 2007.

LIU, J.; HU, W.; CHEN,H.; NI, Q.; XU,H.; YANG, X. Isotretinoin-loaded solid lipid nanoparticles with skin targeting for topical delivery. International Journal of

Pharmaceutics. v. 328, n. 2, p. 191195, 2007.

LU, B.; XIONG, S.-B.; YANG,H.; YIN, X.-D.; CHAO, R.-B. Solid lipid nanoparticles of mitoxantrone for local injection against breast cancer and its lymph node metastases. European Journal of Pharmaceutical Sciences. v. 28, n. 1-2, p. 8695, 2006.

LUO,Y.; CHEN, D.; REN, L.; ZHAO, X.; QIN, J. Solid lipid nanoparticles for enhancing vinpocetine's oral bioavailability. Journal of Controlled Release. v. 114, n. 1, p. 5359, 2006.

MARCATO, P.D.; DURN, N. New aspects of nanopharmaceutical delivery systems. Journal of Nanoscience and Nanotechnology. v. 8, n. 5, p. 2216-2229.

MEHNERT, W.; MADER, K. Solid lipid nanoparticles: Production, characterization and applications. Advanced Drug Delivery Reviews. v. 47, n. 2-3, p.165-196, 2001.

MONTANA, G.; BOND, M.L.; CARROTTA, R.;

PICONE, P.; CRAPARO, E.F.; BIAGIO,

P.L.S.; GIAMMONA, G.; DI CARLO, M. Employment of Cationic Solid-Lipid Nanoparticles as RNA Carriers. Bioconjugate Chemistry. v. 18, n. 2, p. 302-308, 2007.

MHLEN, A.; SCHWARZ, C.; MEHNERT, W. Solid lipid nanoparticles (SLN) for controlled drug delivery drug release and release mechanism. European Journal of Pharmaceutical Biopharmaceutics. v. 45, n. 2, p. 149155, 1998.

MLLER,

R.H.;

LUCKS,

J.S.

Arzneistofftrger

aus

festen

Lipidteilchen,

Feste

Lipidnanosphren (SLN). European Patent EP 0605497, 1996.

MLLER, R.H.; MADER, K.; GOHLA, S. Solid lipid nanoparticles (SLN) for controlled drug delivery a review of the state of the art. European Journal of Pharmaceutical Biopharmaceutics. v. 50, n. 1, p. 161-177, 2000.

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

MLLER, R.H.; PETERSEN,R.D.; HOMMOSS, A.;

PARDEIKE J. Nanostructured lipid

carriers (NLC) in cosmetic dermal products. Advanced Drug Delivery Reviews. v.59, n. 6, p. 522530, 2007.

PANDEY,

R.;

SHARMA,

S.;

KHULLER,

G.K.

Oral

solid

lipid

nanoparticle-based

antitubercular chemotherapy. Tuberculosis. v. 85, n. 3-6, p. 415420, 2005.

PEDERSEN, N.; HANSEN, S.; HEYDENREICH, A.V.; KRISTENSEN, H.G.; POULSEN, H.S. Solid lipid nanoparticles can effectively bind DNA, streptavidin and biotinylated ligands. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. v. 62, n. 2, p. 155162, 2006.

RUKTANONCHAI, U.; LIMPAKDEE, S.; MEEJOO, S.; SAKULKHU, U.; BUNYAPRAPHATSARA, N.; JUNYAPRASERT, V.; PUTTIPIPATKHACHORN, S. The effect of cetyl palmitate crystallinity on physical properties of gamma-oryzanol encapsulated in solid lipid nanoparticles. Nanotechnology. v. 19, n. 9., 095701, 2008.

SAKULKHUL, U.; JARUPAIBOON, S.; TRITHONG, A.; PRATHONTEPL, S.; JANYAPRASERT, V.; PUTTIPIPATKHACHORN, S.; RUKTANONCHAIL, U. Production and Characterization of Rice bran extract encapsulated in Solid Lipid Nanoparticles for Dermal Delivery. Proceedings of the 2nd IEEE International Conference on Nano/Micro Engineered and Molecular Systems, January 16 - 19, Bangkok, Thailand, 2007.

SHAHGALDIAN, P.; QUATTROCCHI, L.; GUALBERT, J.; COLEMAN, A.W.; GORELOFF, P. AFM imaging of calixarene based solid lipid nanoparticles in gel matrices. European Journal of Pharmaceutical Biopharmaceutics. v. 55, n. 1, p. 107113, 2003.

SILVA, G.A. Nanotechnology approaches for drug and small molecule delivery across the blood brain barrier. Surgical Neurology. v. 67, n. 2, p. 113 116, 2007.

SIMEONI, S.; SCALIA, S.; TURSILLI, R.; BENSON, H. Influence of Cyclodextrin Complexation on the in vitro Human Skin Penetration and Retention of the Sunscreen Agent, Oxybenzone. Journal of Inclusion Phenomena and Macrocrocyclic Chemistry. v. 54, n. 3-4, p. 275282, 2006.

SOUTO, E.B.; MLLER, R. H. Investigation of the factors influencing the incorporation of clotrimazole in SLN and NLC prepared by hot high-pressure homogenization. Journal of Microencapsulation. v. 23, n. 4, p. 377388, 2006.

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

SOUTO, E.B.; MLLER, R.H.Cosmetic features and applications of lipid nanoparticles (SLN , NLC). International Journal of Cosmetic Science. v. 30, n. 3, p. 157165, 2008.

SOUTO, E.B.; WISSING, S.A.; BARBOSA,C.M.; MULLER, R.H. Development of a controlled release formulation based on SLN and NLC for topical clotrimazole delivery. International Journal of Pharmaceutics. v. 278, n. 1, p. 71-77, 2004.

TEERANACHAIDEEKUL, V.; BOONME, P.; SOUTO, E.B.; MLLER, R.H.; JUNYAPRASERT, V.B. Influence of oil content on physicochemical properties and skin distribution of Nile red-loaded NLC. Journal of Controlled Release. v. 128, n. 2, p. 134141, 2008a.

TEERANACHAIDEEKUL,

V.;

SOUTO,

E.B.;

MLLER,

R.H.;

JUNYAPRASERT,

V.B.

Physicochemical characterization and in vitro release studies of ascorbyl palmitate-loaded semi-solid nanostructured lipid carriers (NLC gels). Journal of Microencapsulation. v. 25, n. 2, p. 111-120, 2008b.

TOONGSUWAN,

S.;

LI,

L.C.;

ERICKSON,

B.K.,

CHANG,

H.C.

Formulation

and

characterization of bupivacaine lipospheres. International Journal of Pharmaceutics. v. 280, n. 1-2, p. 5765, 2004.

NER, M.; RADTKE, M.; WISSING, S.A. Solid lipid nanoparticles and nanostructure lipid carriers. Encyclopedia of Nanoscience and Nanotechnology, American Scientific

Publishers. v.10, p. 43-56, 2007.

NER, M. Preparation, characterization and physico-chemical proprieties of solid lipid nanoparticles (SLN) and nanostructure lipid carriers (NCL): Their benefits as colloidal drug carrier system. Phamazie. v. 61, n. 5, p. 375-386, 2006.

NER, M.; WISSING, S.A.; YENER, G.; MLLER, R.H. Skin moisturizing effect and skin penetration of ascorbyl palmitate entrapped in solid lipid nanoparticles (SLN) and nanostructures lipid carrier (NCL) incorporated into hydrogel. Phamazie. v. 60, n.10, p. 751-755, 2005.

WISSING, S.A.; KAYSERB, O.; MLLER, R.H. Solid lipid nanoparticles for parenteral drug delivery. Advanced Drug Delivery Reviews. v. 56, n. 9, p. 1257 1272, 2004a.

MARCATO, P. D. et al./Revista Eletrnica de Farmcia Vol 6(2), 1-37, 2009.

WISSING, S.A.; MLLER, R.H.; MANTHEL, L.; MAYER, C. Structural characterization of Q10-loaded solid lipid nanoparticles by NMR spectroscopy. Pharmaceutical Research. v. 21, n. 3, p. 400405, 2004b.

WISSING, S.A.; MLLER, R.H. The influence of solid lipid nanoparticles on skin hydration and viscoelasticity in vivo study. European Journal of Pharmaceutical Biopharmaceutics. v. 56, n. 1, p. 6772, 2003.

WISSING, S.A.; MLLER, R.H. The development of an improved carrier system for sunscreen formulations based on crystalline lipid nanoparticles. Internationa Journal of Pharmaceutics. v. 242, n. 1-2, p. 373375, 2002a.

WISSING, S.A.; MLLER, R.H. Solid lipid nanoparticles as carrier for sunscreens: in vitro release and in vivo skin penetration. Journal of Controlled Release. v. 81, n. 3, p. 225233, 2002b.

XIA, Q.; SAUPE, A.; MLLER, R.H.; SOUTO, E.B. Nanostructured lipid carriers as novel carrier for sunscreen formulations. International Journal of Cosmetic Science. v. 29, n. 6, p. 473482, 2007.