Nutrio e cultivo de microrganismos crescimento microbiano

- Crescimento microbiano: no tamanho.

n de microrganismos

Fatores qumicos nutrientes (meios de cultura) e oxignio atmosfrico Fatores fsicos: temperatura pH

Meios utilizados para o cultivo de microrganismos

* Meio de cultura: material nutriente preparado em laboratrio para o crescimento de microrganismos. Contm: C, N, S, P e outros componentes. - Os meios de cultura tentam simular o ambiente natural. * meio de cutura quimicamente definido * meio de cultura complexo: extrato de levedura, peptona, sangue. - microrganismos fastidiosos: necessitam de vrios fatores de crescimento (aa, vitaminas).

- Meio de cultura lquido X slido: adio de agente solidificador: gar funde-se < 1000C / solidifica-se 400C. . existem centenas de meios disponveis comercialmente Meios com finalidades diferentes Meios seletivos Meios diferenciais Meios diferenciais / seletivos Meios de ensaios microbiolgicos

Cmara de anaerobiose

Jarra de anaerobiose

 Fatores fsicos . Temperatura . pH

Estufa de incubao

Tolerncia microbiana ao pH

Crescimento bacteriano: Fisso binria crescimento exponencial

 Tempo de gerao - o intervalo de tempo requerido para que cada

microrganismo se divida, ou para que uma populao em uma cultura duplique em nmero - o tempo de gerao diferente para cada espcie de microrganismo: Escherichia coli 12,5 min Mycobacerium tuberculosis 13 a 15 horas - os tempos de gerao so fortemente influenciados pelas condies nutricionais e fsicas de cultivo.

Curva de unicelulares

crescimento

de

microrganismos

. fase lag no ocorre diviso celular . fase log ou exponencial diviso celular exponencial . fase estacionria parada do crescimento . fase de declnio fase de morte celular Medidas do crescimento da populao existem diferentes tcnicas para quantificar o crescimento microbiano: contagem em lmina, contagem de UFC, contagem eletrnica, etc.

Isolamento e Identificao de Bactrias

Mtodos de Isolamento de Cultura Pura

Tcnica de esgotamento do inculo Tcnica de sementeira em superfcie Tcnica da placa derramada (pour-plate) Tcnica de diluies sucessivas Tcnica do isolamento de uma nica clula

Tcnica de esgotamento do inculo

MTODOS DE ESTUDO DOS MICRORGANISMOS

Observaes microscpicas

Tcnicas de colorao
- coloraes diferenciais: Gram e Zielh- Nielsen (BAAR) Observaes macroscpicas Caractersticas em meios de cultura

Colorao de Gram
* Diferenas na estrutura da parede celular das bactrias Gram positivas e Gram negativas Esfregao Cristal Violeta Lugol Soluo ter-acetona

Safranina
GRAM + GRAM -

Exemplos de bactrias Gram negativas Neisseria spp. E. coli

Colorao de Zielh- Nielsen (BAAR)

M. tuberculosis

M. leprae

Exemplos de bactrias Gram positivas

Staphylococcus

Streptococcus

Clostridium

Caracterstica macroscpica em meios de cultura

Tamanho

cor Caractersticas microscpicas

odor

Isolamento e identificao

Testes bioqumicos
Substrato utilizado Enzima produzida Metabolismo

Teste de tolerncia
Alterao: Temperatura pH Substncias diversas

Testes imunolgicos
Deteco de antgeno: aglutinao, imunoenzimtico

Klebsiella pneumoniae

Proteus sp

MTODOS DE ESTUDO DOS MICRORGANISMOS

Mtodos diagnsticos
- mtodos bioqumicos - anlise micromorfolgica

- tcnicas moleculares

Interpretao das provas em TSI

Identificao presuntiva

Vermelho/amarel Fermentao o (pice) apenas de vermelho e base glicose (lactose e amarelo sacarose negativas)
Amarelo/amarelo Fermentao de (pice e bases glicose + lactose amarelos) e/ou sacarose (2 ou 3 acares) Presena de gs (C02) Bolhas ou meio fragmentado

H2S positivo

Presena de precipitado negro