Apuntesmicrobiologia 090921163614 Phpapp02

Apuntes de Anlisis Biolgicos (2009) Microbiologa Dr.
Jos Luis Pea Manjarrez
Introduccin La Microbiologa se puede definir, como la ciencia que estudia los seres vivos muy pequeos, con escalas de tamao del orden de micras por lo cual se encuentran por debajo del poder resolutivo del ojo humano. Por esto, la microbiologa utiliza una metodologa especializada para estudiar a los microorganismos. El origen tardo de esta disciplina con relacin a otras ciencias biolgicas, y el reconocimiento de las mltiples actividades desplegadas por los microorganismos, se atribuye a la carencia, durante mucho tiempo, de los instrumentos y tcnicas pertinentes. Con la invencin del microscopio en el siglo XVII comienza el despegue de una nueva rama del conocimiento. Durante los siguientes 150 aos su progreso se limit casi simplemente a la descripcin de tipos morfolgicos microbianos, y a los primeros intentos taxonmicos, que buscaron su encuadramiento en el marco de los sistemas naturales de los Reinos Animal y Vegetal. El reconocimiento de la Microbiologa como ciencia est ligado a una serie de controversias asociadas a preceptos filosficos y religiosos del siglo XVII, que se continuaron hasta finales del siglo XIX. La resolucin de estas polmicas dependi del desarrollo de una serie de estrategias experimentales confiables (esterilizacin, cultivos puros, perfeccionamiento de las tcnicas microscpicas, etc.), que a su vez dieron origen a una serie de conocimientos que constituyeron a la ciencia microbiolgica. El reconocimiento del origen microbiano de las fermentaciones, el abandono de la idea de la generacin espontnea, y el triunfo de la teora germinal de la enfermedad, representan las conquistas de la Microbiologa como ciencia joven en el cambio de siglo. Tras la Edad de Oro de la Bacteriologa, con figuras como Pasteur y Koch, la Microbiologa fue al principio una disciplina descriptiva y aplicada, estrechamente ligada a la Medicina, y con un desarrollo paralelo al de la Qumica, que le aport avances metodolgicos fundamentales. Sin embargo, una corriente, dedicada a los estudios bsicos en ciertas bacterias del suelo con capacidades metablicas especiales, incluyendo el descubrimiento de las que afectan a la nutricin de las plantas, logr poner de manifiesto la ubicuidad ecolgica y la diversidad fisiolgica de los microorganismos. De esta forma, se estableci un enlace entre la Microbiologa y otras ciencias biolgicas, que lleg a su momento decisivo cuando se comprob la unidad qumica de todo el mundo vivo, y se demostr, con material y tcnicas microbiolgicas que la molcula de la herencia era el ADN. Con ello se present un cercano y productivo intercambio entre la Microbiologa, la Gentica y la Bioqumica, que se manifiesta en el nacimiento de la Biologa Molecular, que constituye la base fundamental para el sensacional avance de la Biologa desde mediados del siglo XX. Por otro lado, el objetivo inicial de la Microbiologa consista en la bsqueda de agentes infectivos, en el entendimiento y aprovechamiento de los mecanismos de defensa del hospedador. En el intento por cumplir estos objetivos, se crearon ciencias de apoyo como la Virologa y la Inmunologa, que posteriormente lograron su autonoma. Finalmente, la lnea de aplicacin de la Microbiologa, fue mejorando con los continuos aportes de la investigacin bsica, y hoy muestra una impresionante cantidad de servicios, as como una prometedora perspectiva de expansin a campos como el control de
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Apuntes de Anlisis Biolgicos (2009) Microbiologa Dr. Jos Luis Pea Manjarrez
enfermedades infecciosas (higiene, vacunacin, quimioterapia, antibioterapia) y la optimizacin econmica de los procesos en los que se hallan implicados los microorganismos (biotecnologas). En las siguientes pginas ampliaremos y concretaremos el concepto de microbiologa. Haremos un recorrido por el desarrollo de esta ciencia a lo largo de su historia, que nos permitir una visin concreta de algunas de sus formas caractersticas para abordar su objeto de estudio. Desarrollo histrico de la microbiologa La Microbiologa, considerada como una ciencia especializada, apareci hasta finales del siglo XIX, como resultado de la confluencia de una serie de progresos metodolgicos que se haban empezado a incubar lentamente en los siglos anteriores, y que obligaron a una revisin de ideas y prejuicios sobre la dinmica del mundo vivo. Se pueden distinguir cuatro etapas en el desarrollo de la Microbiologa: Primer periodo, eminentemente especulativo, que se extiende desde la antigedad hasta los primeros microscopistas. Segundo periodo, de lenta acumulacin de observaciones (desde ~ l675 hasta la mitad del siglo XIX), inici con el descubrimiento de los microorganismos por Leeuwenhoek (l675). Tercer periodo, de cultivo de microorganismos, que llega hasta finales del siglo XIX, donde Pasteur y Koch encabezan el logro de cristalizar a la Microbiologa como ciencia experimental bien asentada. Cuarto periodo (desde principios del siglo XX hasta nuestros das), los microorganismos se estudian en toda su complejidad fisiolgica, bioqumica, gentica, ecolgica, etc. Se logra un extraordinario crecimiento de la Microbiologa, surgen disciplinas microbiolgicas especializadas (Virologa e Inmunologa), estrecha ubicacin de las ciencias microbiolgicas en el marco general de las Ciencias Biolgicas. Antes del descubrimiento del microscopio El descubrimiento de seres vivos no perceptibles a simple vista debi esperar hasta el final del siglo XVII, aunque algunos procesos benficos como la fermentacin para la produccin de bebidas alcohlicas, pan y derivados lcteos, as como procesos perjudiciales, en forma de enfermedades infecciosas, se conocieron mucho tiempo antes de su descubrimiento. Diversos escritos de los griegos y romanos hablan de grmenes invisibles que transmiten enfermedades contagiosas. Lucrecio (96-55 a.C.), en su De rerum natura hace varias alusiones a semillas de enfermedad. En el Renacimiento europeo, Girolamo Frascatorius, en su libro De contagione et contagionis (1546) dice que las enfermedades contagiosas se deben a grmenes vivos que pasan de diversas maneras de un individuo a otro. Estos inicios de explicacin renunciando a invocar causas sobrenaturales fueron probablemente catalizados por la introduccin de la sfilis en Europa, una enfermedad en la que es clara la
necesidad de contacto para su contagio. Pero la cosa que se transmite en la enfermedad sigui siendo objeto de conjeturas durante mucho tiempo. Los primeros microscopistas En el siglo XIV, con el invento de las primeras lentes para corregir la visin, surgi cierta curiosidad sobre su capacidad de aumentar la apariencia en el tamao de los objetos. En el siglo XVI surgieron algunas ideas sobre aspectos de la fsica ptica de las lentes de aumento, pero no se encontr una aplicacin inmediata. Aunque se piensa que Galileo Galilei realiz algunas observaciones microscpicas invirtiendo su telescopio a partir de lentes montadas en un tubo, pero no tuvieron ninguna repercusin. La primera referencia segura sobre el microscopio (1621) se debe a Constantijn Huygens, quien relata que el ingls Cornelis Drebbel tena en su taller un instrumento magnificador, que recibi el nombre de microscopium en l625, en la Accademia dei Lincei, de Roma. El descubrimiento de los microorganismos fue obra de Antonie van Leeuwenhoek (1632-1723), quien fabric unos cuatrocientos microscopios simples, con los que lleg a obtener aumentos de casi 300 dimetros. En 1675 descubri que en una gota de agua de estanque pululaba una variedad de pequeas criaturas a las que denomin animlculos. En 1683 descubri las bacterias, por lo que se considera el padre de la Microbiologa. Leeuwenhoek fue comunicando sus descubrimientos a la Royal Society de Londres a travs de una serie de cartas que se difundieron, en traduccin inglesa, en las Philosophical Transactions. Sus cualidades de observador le llevaron a describir protozoos (como Giardia, que encontr en sus propias heces), la estructura estriada del msculo, la circulacin capilar, a descubrir los espermatozoides y los glbulos rojos (por lo que tambin se le considera el fundador de la Histologa animal), as como a detallar diversos aspectos estructurales de las semillas y embriones de plantas. Leeuwenhoek se percat de la abundancia y ubicuidad de sus animlculos, observndolos en vinagre, placa dental, etc. Aunque los descubrimientos de Leeuwenhoek despertaron inters al ser comunicados, pocos intentaron o pudieron reproducirlos seriamente. Adems, la fabricacin de lentes sencillas de gran aumento era difcil y el manejo de los microscopios simples, bastante engorroso. Microscopio simple de Leeuwenhoek
Simultneamente el ingls Robert Hooke (1635-1703) usando microscopios compuestos, describi los hongos filamentosos (1667), y descubri la estructura celular de las plantas (Micrographia, 1665), acuando el trmino clula. Sin embargo, el trabajo con microscopios compuestos aplicados al estudio de los animlculos" permaneci poco difundido durante casi 200 aos, debido a sus imperfecciones pticas, hasta que aoroximadamente en 1830 se desarrollaron las lentes acromticas. Microscopio compuesto de Hooke El debate sobre la generacin espontnea. Las ideas de Aristteles por un lado y la Biblia, por el otro, junto con las opiniones de escritores como Galeno, Plinio y Lucrecio, a quienes se haca referencia incontrovertible en la literatura mdica de la Edad Media y Renacimiento, dieron origen a la idea de que algunos seres vivos se originaban a partir de materia inanimada, o del aire o de materiales en putrefaccin. Esta doctrina de la generatio spontanea o abiognesis, fue cuestionada por los experimentos de Francesco Redi (1621-1697), quien acu la expresin Omne vivum ex ovo (1668), tras comprobar que los insectos y nemtodos procedan de huevos puestos por animales adultos de su misma especie. Demostr que si un trozo de carne era cubierto con gasa de forma que las moscas no podan depositar all sus huevos, no aparecan gusanos, que l identific como fases larvarias del insecto. Los descubrimientos de Redi desacreditaron la teora de la generacin espontnea para los animales y plantas, pero la reactivaron respecto de los animlculos, de modo que aunque se acept la continuidad de la vida en cuanto a sus formas superiores, no todos estaban dispuestos a admitir el ms amplio Omne vivum ex vivo aplicado a los microorganismos. Un siglo despus, varios naturalistas retomaron el ataque a la teora preformacionista. Lazzaro Spallanzani (1729-1799) le demostr a Needham (1713-1781) que los infusorios no aparecan en muestras de maceraciones animales o vegetales sometidas durante tiempo suficiente a ebullicin en frascos hermticamente cerrados, pero volvan a aparecer si se practicaban agujeros en el recipiente. Sin embargo, Needham, respondi que el calor haba destruido la fuerza vegetativa de las infusiones y haba cambiado la cualidad del aire dentro de los frascos.
Lazzaro Spallanzani (1729-1799) A principios del siglo XIX la teora de la generacin espontnea recibi un refuerzo antes de morir, debido por un lado a razones extracientficas (auge del concepto de transmutacin producido por la escuela de la filosofa de la naturaleza), y por otro al descubrimiento del oxgeno y de su importancia para la vida, de modo que los experimentos de Spallanzani se interpretaron como que al calentarse las infusiones, el oxgeno del aire se destrua, y por lo tanto desapareca la fuerza vegetativa que originaba la aparicin de microorganismos. Theodor Schwann (1810-1882) present en 1836 un mtodo para refutar la teora abiognica: calent maceraciones en frascos a los que se haba eliminado previamente el aire, pero no continu trabajando en esta lnea. Para complicar ms las cosas, la publicacin de Sobre el origen de las especies por Darwin en 1859, fue utilizada por algunos preformacionistas. El mismo Haeckel, en una fecha tan tarda como 1866, se mostraba escptico ante las pruebas aportadas por Pasteur. Louis Pasteur (1822-1895) asest el golpe definitivo a favor de la teora biognica. En un informe a la Academia de Ciencias de Pars, en 1860 (Expriences rlatives aux gnrations dites spontanes) y en escritos posteriores comunica sus experimentos: calent infusiones en matraces de vidrio a los que estiraba lateralmente el cuello, hacindolo largo, estrecho y sinuoso, y dejndolo sin cerrar, con esto demostr que el lquido no desarrollaba microorganismos, y elimin la posibilidad de que un aire alterado fuera la causa de la no aparicin de grmenes. Comprob que los grmenes del aire quedaban retenidos a su paso por el largo cuello sinuoso, en las paredes del tubo, y no alcanzaban el interior del recipiente, quedando la infusin estril indefinidamente. Slo si se rompa el cuello lateral o si se inclinaba el frasco de modo que pasara parte de lquido a la porcin de cuello, los grmenes podan contaminar la infusin y originar un rpido crecimiento. Frasco con "cuello de cisne" de Pasteur, con el que refut las ideas sobre la generacin espontnea. En 1861 Pasteur public otro informe en el que explica cmo se pueden capturar los cuerpos organizados del aire con ayuda de un tubo con un tapn de algodn como filtro, y la manera de recuperarlos para su observacin microscpica. De esta forma quedaba definitivamente aclarado el
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origen de los microorganismos, y se inicia el estudio cientfico de las formas de vida no observables a simple vista. Los ltimos escpticos quedaron callados en 1877 cuando John Tyndall (1820-1893) aplic su sistema de esterilizacin por calentamiento discontinuo (hoy conocida como tindalizacin), que evidenci las formas microbianas de reposo resistentes al calor, lo cual fue confirmado ms tarde por Ferdinand Cohn al descubrir las esporas bacterianas. Debate sobre los fermentos. Otro factor que contribuy al nacimiento de la microbiolgica fue la relacin entre ciertas transformaciones qumicas que ocurren en las infusiones y el crecimiento de los grmenes que existen en ellas. Cagniard-Latour en 1836, y Schwann y Ktzing en 1837 sugirieron que las levaduras causaban la fermentacin por la que el azcar pasa a alcohol etlico y dixido de carbono, pero se encontraron con la crtica de los qumicos de la poca (Berzelius, Wohler y Liebig). En 1840 Liebig realiz importantes contribuciones a la teora mineral sobre la nutricin de las plantas, enfrentndose a la teora del humus sostenida por Thaer, asestando un golpe a las ideas vitalistas de Leibniz. Se consideraba a las levaduras como plantas microscpicas, se supona que la fermentacin y putrefaccin se deban a fenmenos qumicos de descomposicin y muerte en el marco de la teora mineral de la fisiologa vegetal. Su convencimiento de que toda actividad vital se poda explicar en trminos de qumica y fsica retras por algn tiempo la adscripcin de estos fenmenos a clulas vivas. Teora mineral de Liebig Pasteur intervino de forma decisiva. En 1857 demostr que los agentes de la fermentacin lctica eran microorganismos, trabaj sobre un problema que haba surgido entre los destiladores de Lille cuando en sus barricas la fermentacin alcohlica fue sustituida por una indeseable fermentacin lctica. Sus estudios duraron hasta 1876, Pasteur identific distintos microorganismos responsables de diferentes procesos fermentativos. As, en 1860 adscribe la fermentacin alcohlica a ciertos tipos de levaduras, y en 1866, en sus tudes sur le vin resume sus hallazgos al respecto, inaugurando la Microbiologa Aplicada. Pasteur descubri microorganismos que se desarrollaban en ausencia de oxgeno, lo cual desminti la creencia de que todas las formas de vida necesitan aire para crecer. Acu los trminos aerobiosis y anaerobiosis para denominar, a la vida en presencia y en ausencia de oxgeno. Con el descubrimiento de la anaerobiosis, se comprendieron las implicaciones energticas subyacentes a la utilizacin de sustratos orgnicos en presencia y en ausencia de oxgeno, demostrando que, en el segundo caso el crecimiento microbiano era siempre menor, al no poder realizarse la degradacin total de las correspondientes sustancias. Estudios ms profundos sobre los procesos de fermentacin se realizaron hasta 1897 cuando Buchner obtuvo, a partir de levaduras, una preparacin enzimtica (zimasa) capaz de realizar la misma transformacin de fermentacin que las clulas vivas. Este descubrimiento, supuso la confluencia de los enfoques qumico y biolgico: las fermentaciones eran procesos qumicos catalizados por enzimas presentes dentro de clulas
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vivas, que podan ser estudiados extracelularmente. De esta forma, la Bioqumica, nacida como rama de la qumica fisiolgica, que se vena especializando en la enzimologa, encontr una alianza con la Microbiologa. Avances tcnicos El pleomorfismo, en el siglo XIX, mantena que los microorganismos adoptaban formas y funciones cambiantes dependiendo de las condiciones ambientales. A estas ideas se oponan Koch, Pasteur y Cohn, que estaban convencidos de la especificidad y constancia morfolgica y fisiolgica de cada tipo de microorganismo (monomorfismo). El pleomorfismo surgi como explicacin a la variedad de formas y actividades que aparecan en un simple frasco de infusin, pero Pasteur, se percat de que los cultivos que aparecan eran una sucesin de distintas poblaciones de microorganismos predominantes, que, determinaban la posterior composicin de la comunidad microbiana. La solucin definitiva a esta cuestin dependa, de un desarrollo tcnico, que a su vez suministr una herramienta para la nueva ciencia: los mtodos de cultivo puro. Los primeros cultivos puros fueron obtenidos por el miclogo Brefeld, quien aisl esporas de hongos y las cultiv en medios slidos a base de gelatina. Este mtodo era no viable para las bacterias debido a su menor tamao, por lo que se recurri a un mtodo basado en diluciones: Lister, en 1878 realiz diluciones secuenciales de cultivos mixtos, hasta lograr muestras en las que exista una sola clula. Pero la tcnica era tediosa y normalmente slo se lograba aislar clulas de las bacterias ms abundantes en el cultivo original. Sin embargo, el experimento sirvi para confirmar la naturaleza particulada de los agentes de las fermentaciones. Robert Koch (1843-1910) buscaba mtodos ms sencillos de cultivo puro, necesarios para sus investigaciones sobre bacterias patgenas. Primero emple rodajas de papa como sustrato slido nutritivo en el cual se desarrollaban colonias macroscpicas de bacterias con morfologa caracterstica, que Koch interpret como resultado del crecimiento de clulas individuales. Pero despus utiliz el caldo de cultivo a base de carne (diseado por Loeffler), aadindole gelatina. El medio slido logrado era transparente, y permita ver fcilmente los rasgos coloniales, contena los nutrientes adecuados para el crecimiento de una amplia gama de bacterias. stas eran inoculadas en la superficie del medio con un hilo de platino pasado previamente por la llama, por la tcnica de siembra en estra. Sin embargo, la gelatina era atacada por determinados microorganismos, y tena un bajo punto de fusin; ambos problemas se solventaron cuando en 1882 Walter Hesse, siguiendo una sugerencia de su mujer Fanny, introdujo el agar-agar (polisacrido extrado de algas rojas) como nuevo agente solidificante. El trabajo de Koch derrib las ideas pleomorfistas, y planteo la primera propuesta del concepto de especie en el mundo bacteriano. En 1887 Petri, un ayudante de Koch, sustituy las bandejas de vidrio cubiertas con campanas, por un sistema manejable de placas de cristal planas, que se conoce como cajas de Petri.
Cajas de Petri El desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento fue resultado de las investigaciones realizadas por Beijerinck y Winogradsky entre 1888 y los primeros aos del siglo XX, sobre bacterias implicadas en procesos biogeoqumicos y con caractersticas fisiolgicas distintivas (quimioauttrofas, fijadoras de nitrgeno, etc.). Estos medios, donde se aplica a pequea escala el principio de seleccin natural, se disean de forma que su composicin qumica favorezca el crecimiento de ciertos tipos de microorganismos, capaces de usar ciertos nutrientes del medio. Otra aportacin a este perodo de cultivo en el desarrollo de la Microbiologa fueron los medios diferenciales, en los que se manifiesta algn rasgo bioqumico o metablico, lo que contribuye a la identificacin microbiana. Wrtz, en 1892, incorpor el uso de indicadores de pH en los medios, lo cual permita revelar la produccin de acidificaciones por fermentacin en ciertas bacterias. En la ciudad de Jena se cre una atmsfera de progreso con naturalistas como Haeckel, Strassburger o Abb interactuando con la editorial Gustav Fischer especializada en Biologa y Medicina y la industria ptica y qumica. Estas influencias se reflejaron en una efervescencia de las ciencias naturales despus de Darwin. La industria ptica de Abb y Zeiss, se mantena en conexin con la vidriera Schott, esto facilit satisfacer la necesidad de Koch de perfeccionar el microscopio compuesto, introduciendo las lentes acromticas y la iluminacin inferior con condensador. Abb desarroll en 1878 el objetivo de inmersin en aceite. La industria qumica BASF, sumistr a Koch una serie de derivados de anilina que tean las bacterias permitiendo su visualizacin al microscopio en frotis de tejidos infectados. En 1875 Carl Weigert ti bacterias con pirocarmn, un colorante usado en zoologa. En aos sucesivos se introdujeron el azul de metileno (Koch, 1877), la fuchsina, y el violeta cristal. En 1882-1883 Ziehl y Neelsen desarrollaron el mtodo de cido-alcohol resistencia para teir Mycobacterium tuberculosis. En 1884 Christian Gram establece la tincin de contraste que distingue dos tipos bacterianos en funcin de su reaccin diferencial de tincin y que tienen rasgos estructurales distintivos. En 1890 Loeffler observ los flagelos bacterianos con su tcnica de impregnacin argntica. Iluminacin del microscopio, fruto de la colaboracin entre Koch y Abbe.
Objetivo de inmersin, fruto de la colaboracin entre Koch y la Industria ptica Carl Zeiss.
Estas innovaciones tcnicas (mtodos de cultivo, microscopa y tinciones) fueron fundamentales (junto con los sistemas de esterilizacin) para la consolidacin de la Microbiologa como ciencia, permitiendo eliminar las especulaciones que haban predominado. Los Microorganismos y las enfermedades En el siglo XIX los naturalistas centraron sus esfuerzos en las diversas formas de animales y plantas que vivan como parsitos de otros organismos. Este inters aument cuando se publicaron los libros de Darwin, estudiando las adaptaciones evolutivas de los parsitos. Sin embargo, las caractersticas de los parsitos se describieron en el campo mdico y veterinario, al retomarse las ideas sobre el origen de las enfermedades infecciosas. En 1835 Agostino Bassi (1773-1856) demostr que cierta enfermedad del gusano de seda (mal di segno), que consiste en una alergia tipo asma despus de exponerse en sitios como invernaderos u otras reas con alta humedad y gran cantidad de plantas), se deba a un hongo (Botrytis bassiana). Cuatro aos ms tarde J.L. Schnlein descubri la asociacin de un hongo con una enfermedad humana de la piel. En 1840 Henle, plante la teora de que las enfermedades infecciosas son causadas por seres vivos invisibles, pero la confirmacin de estas ideas tuvo que esperar a que Pasteur demostrara la existencia de microorganismos especficos responsables de enfermedades. A mediados del siglo XIX otra enfermedad infecciosa (pebrina) comenz a diseminarse por los criaderos de gusano de seda de toda Europa, alcanzando a China y Japn. A instancias de Jean Baptiste Dumas, Pasteur acept viajar a Provenza para investigar esta enfermedad, a pesar de que nunca se haba enfrentado con un problema de patologa. Al principio no aceptaba la idea de que la pebrina fuera una enfermedad ocasionada por un agente extrao, creyendo que se trataba de alteraciones fisiolgicas. Tras una serie de experimentos, y una intensa actividad intelectual repasando y repitiendo las experiencias, en el drama de la muerte de su padre y dos de sus hijas en corto tiempo, Pasteur finalmente en 1869, identific al protozoo Nosema bombycis como el responsable de la epidemia, y por medio de una serie de medidas de control, sta disminuy espectacularmente La intervencin de bacterias en la generacin de enfermedades se descubri a raz de investigaciones sobre el carbunco o ntrax, enfermedad que afecta al ganado y puede transmitirse al hombre. C. Davaine, entre 1863 y 1868, encontr que la sangre de vacas afectadas tena muchos microorganismos que llam bacteridios; adems, logr inducir la enfermedad en vacas sanas, inoculndoles sangre infectada. En 1872 C.J. Eberth aisl los bacilos filtrando sangre de animales carbuncosos. Pero Robert Koch (1843-1910), con su tcnica de cultivo puro logr, en 1876, el primer aislamiento y propagacin in vitro del
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bacilo del ntrax (Bacillus anthracis), consiguiendo las primeras microfotografas sobre preparaciones secas, fijadas y teidas con azul de metileno. En 1881, Koch y sus colaboradores confirmaron que las esporas son formas diferenciadas a partir de bacilos, y poseen mayor resistencia. Pero su demostracin de que la enfermedad se poda transmitir a ratones sanos inoculndoles bacilos en cultivo puro, fue fundamental. Esta estrategia para demostrar el origen bacteriano de una enfermedad fue perfeccionado en 1882, con la publicacin de Die thiologie der Tuberkulose, donde se comunic por primera vez los criterios que Henle haba postulado en 1840 y que hoy van asociados al nombre de Koch, son los siguientes: 1. El microorganismo debe de estar presente en todos los individuos enfermos. 2. El microorganismo debe poder aislarse del hospedador y ser crecido en cultivo puro. 3. La inoculacin del microorganismo en cultivo puro a animales sanos debe provocar la aparicin de sntomas especficos de la enfermedad en cuestin. 4. El microorganismo debe poder ser reaislado del hospedador infectado de forma experimental. Koch tambin demostr el principio de especificidad biolgica del agente infeccioso: cada enfermedad infecciosa especfica est causada por un tipo de bacteria diferente. Estos trabajos de Koch abren definitivamente el campo de la Microbiologa Mdica sobre firmes bases cientficas. En los 20 aos siguientes la Microbiologa experiment una autntica edad de oro, se aislaron y caracterizaron muchas bacterias patgenas. Alemania se haba convertido en una potencia poltica y militar, y decidi a apoyar los trabajos del equipo de Koch, por su importancia social y econmica, creando un Instituto de investigacin, siendo Koch su director en el Departamento de Salud. De esta forma, en la Escuela Alemana se aislaron los agentes productores del clera asitico (Koch, 1883),
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De la difteria (Loeffler, 1884),
Bacteria productora de la difteria
Del ttanos (Nicolaier, 1885 y Kitasato, 1889). La toxina tetnica, producida por la bacteria Clostridium tetanii, causa la enfermedad del Ttanos, hace exactamente lo contrario que la toxina botulnica: produce espasmos y tensin muscular de tal manera que el paciente puede llegar a quedar totalmente rgido, como muestra este cuadro de Bell de un soldado afectado por el Ttanos.
De la neumona (Fraenkel, 1886), causada por el neumococo
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De la meningitis (Weichselbaun, 1887),
De la peste (Yersin, 18 94), LaGranMortandad(oMuerteNegra).Elagentecausantees un bacilo llamado Pasturella Pestis.Se aloja en la sangre de la rata o en el estmago de la pulga. La transmisin al ser humano viene de la picadura de la pulga o de la mordedura de la rata, en su versin rattus rattus, comn en las malolientes bodegas de los barcos medievales o en los precarios sistemas cloacales de las ciudades de esa poca. El contagio genera en el hombre la manifestacin bubnica de la enfermedad o la infeccin de los pulmones, segn cmo sea transmitida la enfermedad a partir del primer contagio (es decir, de la picadura del insecto o de la mordedura del roedor). Esparcimiento de la peste en Europa, Peste en Europa del siglo XIV
De la sfilis (Schaudinn y Hoffman, 1905), es una enfermedad de transmisin sexual ocasionada por la bacteria Treponema pallidum. Esta bacteria necesita un ambiente tibio y hmedo para sobrevivir, por ejemplo, en las membranas mucosas de los genitales, la boca y el ano. Se transmite cuando se entra en contacto con las heridas abiertas de una persona con sfilis. Esta enfermedad atraviesa por cuatro etapas si no se trata a tiempo. Primera etapa: El primer sntoma es una llaga en la parte del cuerpo que entro en contacto con la bacteria. Estos sntomas son difciles de detectar por que por lo general no causan dolor, y en ocasiones ocurren en el interior del cuerpo. Una persona infectada puede contagiar a otra.
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Segunda etapa: Surge alrededor de 3 a 6 semanas despus de la primera etapa, aparece una erupcin en todo el cuerpo, otros sntomas son: fiebre, inflamacin de los ganglios linfticos, perdida del cabello. Tercera etapa (latente): Si la sfilis no es tratada en mucho tiempo, entra en una etapa latente. En esta etapa no hay sntomas notables y la persona no puede contagiar a otros, Sin embargo la tercera parte de las personas que entran en esta etapa empeora y pasan a la etapa terciara. Cuarta etapa (tarda): Esta etapa puede causar serios problemas como: Trastornos mentales, ceguera, anomalas cardiacas, trastornos neurolgicos. La persona ya no puede tra nsmitir la bacteria a otras personas, pero contina en un periodo indefinido de deterioro hasta llegar a la muerte. Tratamiento: El tratamiento ms comn y rpido de la sfilis es una infeccin de penicilina. Veinticuatro horas despus del tratamiento ya no se puede transmitir el virus. Tambin se entendieron los ciclos infectivos de enfermedades tropicales no bacterianas como la Malaria (Schaudinn, 1901-1903),
Es causada por un parsito (del gnero Plasmodium) transmitido de una persona a otra a travs de la picadura de un mosquito Anfeles infectado. Los parsitos desarrollan en las clulas del parnquima dentro del hgado, maduran y entran al torrente sanguneo, en donde rompen glbulos rojos produciendo anemia. Slo la hembra del mosquito puede transmitir el protozoo, ya que el macho no chupa sangre. La mujer embarazada infectada puede transmitir la malaria al bebe que lleva en su vientre. Las enfermedades causadas por parsitos transmitidos por insectos estn restringidas a las regiones que constituyen los hbitat naturales de sus insectos vectores.
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Enfermedad del sueo (Koch, 1906), se encuentra solamente en partes de frica, es producida por dos protozoarios, Trypanosoma brucei gambiense y el Trypanosoma brucei rhodesiense.
Esta enfermedad es una dolencia oscura y "extica" que provoca somnolencia. En 1999 la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) constat 45 mil casos, pero se estima que probablemente se hayan infectado de 300 mil a 500 mil personas. La infeccin se transmite por las moscas ts-ts, que se reproducen en reas pantanosas a lo largo de ros en las selvas y sabanas. Los habitantes estn expuestos a estos insectos cada vez que van a la selva o al ro para buscar agua, lavar ropa, cazar o pescar. Cuando la mosca ts-ts pica a un individuo le inyecta el parsito protozoario (trypanosoma) en el torrente sanguneo. El parsito se reproduce en la sangre y en el sistema linftico, e inmediatamente ataca el sistema nervioso central. Los sntomas son fiebre, dolor de cabeza y dolor en las articulaciones. En esta fase el tratamiento es relativamente fcil, pero el diagnstico es difcil. Posteriormente, cuando el parsito invade el cerebro, el estado mental del paciente se altera: evoluciona para trastornos en el sueo adems de dolor intenso, confusin mental y convulsiones. En esta fase, la enfermedad se caracteriza por sntomas neurolgicos que, si no se tratan, llevan a debilitamiento fsico, somnolencia, coma y muerte. Lamentablemente, es en esa fase que la mayora de los pacientes infectados busca tratamiento. La enfermedad de Chagas es una de las principales enfermedades parasitarias del mundo que afecta a toda Amrica. La dolencia no tratada a tiempo ataca a los rganos vitales del cuerpo infectado y provoca lesiones invalidantes y un lento deterioro que conduce a la muerte. Es transmitida en la mayora de los casos por la vinchuca. Este insecto habita en lugares precarios, donde vive gente de pocos recursos en poblaciones aisladas a las que se hace difcil llegar, se encuentra slo en ciertas regiones de Amrica Central y del Sur.
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La peste vacuna africana (debida al ingls Bruce, 1895-1897), Es la plaga ms temida del ganado, se trata de una enfermedad viral infecciosa capaz de destruir poblaciones completas de reses y de bfalos. En regiones que dependen del ganado vacuno para obtener carne, productos lcteos y traccin animal, la peste bovina ha causado hambrunas generalizadas y graves daos econmicos y polticos.
En el decenio de 1890 una epidemia elimin entre 80 y 90 por ciento del ganado en el Africa subsahariana. En fecha ms reciente, se calcula el costo de otro brote de peste bovina que asol gran parte de Africa entre 1982 y 1984 en 500 millones de dlares por lo menos. Pases en riesgo por la peste vacuna en 1983. La peste bovina se difunde sobre todo por contacto directo y por beber agua infectada por el excremento de animales enfermos. Tambin se puede trasmitir a travs del aliento y puede contagiar a animales salvajes y a los cerdos, adems de al ganado vacuno. Los sntomas clnicos comprenden: fiebre alta, manchas rojizas alrededor de los ojos, la nariz y la boca, con secrecin; espuma en la boca; estreimiento y diarrea. Pocos das despus, el animal infectado muere. Es posible prevenir la peste bovina mediante vacunas, pero se esparce fcilmente entre los rebaos que no han sido vacunados, a travs del comercio ganadero y de las migraciones pastoriles. Por otro lado, la Escuela Francesa, consolidada en el Instituto Pasteur, se concentr en los estudios sobre los procesos infectivos, la inmunidad del hospedador, y la obtencin de vacunas, sobre todo a raz de la vacuna antirrbica desarrollada por Pasteur (1885), contribuyendo al nacimiento de la Inmunologa.
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Desarrollo de la asepsia, quimioterapia y antibioterapia Los avances de las tcnicas quirrgicas a mediados del siglo XIX, impulsados por la introduccin de la anestesia, trajeron gran incidencia de complicaciones post-operatorias derivadas de infecciones. Joseph Lister (1827-1912), haba ledo los trabajos de Pasteur, y crea que estas infecciones se deban a grmenes presentes en el aire, comprob que la aplicacin de compuestos como el fenol o el bicloruro de mercurio en el lavado del instrumental quirrgico, de las manos y de las heridas, disminua notablemente la frecuencia de infecciones post-quirrgicas. Paul Ehrlich (1854-1919), haba empleado distintas sustancias para teir clulas y microorganismos, y conoca la tincin selectiva de bacterias por ciertos colorantes, concibi la posibilidad de que algunos de los compuestos que la industria qumica estaba produciendo pudieran actuar como balas mgicas que fueran txicas para las bacterias pero inocuas para el hospedador. Ehrlich concibi un programa racional de sntesis de sustancias nuevas seguido de ensayo de stas en infecciones experimentales. Trabajando en el laboratorio de Koch, prob sistemticamente derivados del atoxilo (un compuesto que ya Thompson, en 1905, haba mostrado como eficaz contra la tripanosomiasis), y en 1909 inform de que el compuesto 606 (salvarsn) era efectivo contra la sfilis. Aunque el salvarsn presentaba algunos efectos colaterales, fue durante mucho tiempo el nico agente disponible contra enfermedades producidas por espiroquetas, y sirvi para ilustrar brillantemente la validez del enfoque de la llamada quimioterapia (trmino acuado por el mismo Ehrlich), de modo que encauz toda la investigacin posterior. En 1927 Gerhard Domagk, en conexin con la compaa qumica I.G. Farbenindustrie, inici un proyecto de bsqueda de nuevos agentes quimioterpicos, siguiendo el esquema de Ehrlich; en 1932-1935 descubre la accin del rojo de prontosilo frente a neumococos hemolticos dentro del hospedador, pero seala que esta droga es inactiva sobre bacterias creciendo in vitro. La explicacin la sumistra el matrimonio Trfoul, del Instituto Pasteur, al descubrir que la actividad antibacteriana depende de la conversin por el hospedador en sulfanilamida. El mecanismo de accin de las sulfamidas (inhibicin competitiva con el cido para-aminobenzoico) fue dilucidado por Donald D. Woods, cuyas investigaciones encaminaron a la industria farmacutica hacia la sntesis de anlogos de metabolitos esenciales, introduciendo un enfoque ms racional frente a la poca anterior, ms emprica. En 1874, el mdico W. Roberts describi las propiedades antibiticas de ciertos cultivos de hongos (Penicillium glaucum) contra las bacterias, e introdujo el concepto de antagonismo. Otros investigadores de finales del siglo XIX realizaron observaciones similares, pero fue Fleming quien, en 1929, logr expresar ideas claras sobre el tema, al atribuir a una sustancia qumica concreta (la penicilina) la accin inhibidora sobre bacterias producida por el hongo Penicillium notatum. Fleming desarroll un ensayo crudo para determinar la potencia de la sustancia en sus filtrados, pudiendo seguir su produccin a lo largo del tiempo de cultivo, y mostrando que no todas las especies bacterianas eran igualmente sensibles a la penicilina. Las dificultades tcnicas para su extraccin, junto al hecho de que el inters de la poca an estaba centrado sobre las sulfamidas, impidieron una pronta purificacin de la penicilina, que no lleg hasta los trabajos de Chain y Florey (1940), comprobndose entonces su gran efectividad contra infecciones bacterianas, sobre todo de Gram-positivas, y la ausencia de efectos txicos para el hospedador.
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Inmediatamente comenz la bsqueda de microorganismos del suelo con actividades antibiticas. En 1944 A. Schatz y S. Waksman descubren la estreptomicina, producida por Streptomyces griseus, siendo el primer ejemplo de antibitico de amplio espectro. Los diez aos posteriores a la segundad guerra mundial vieron la descripcin de 96 antibiticos distintos producidos por 57 especies de microorganismos, principalmente Actinomicetos. En la dcada entre 1960 y 1970 inici una nueva fase al obtenerse antibiticos semisintticos por modificacin qumica de antibiticos naturales, palindose los problemas de resistencia bacteriana a las drogas que haban empezado a aparecer, disminuyendo en muchos casos los efectos secundarios, y ampliando el espectro de accin. Aparte de la aplicacin clnica, los antibiticos han permitido avances en el desentraamiento de aspectos de arquitectura y funcin moleculares de las clulas susceptibles (paredes celulares microbianas, ribosomas, sntesis proteica, etc.).
Auge de la Microbiologa general Los avances en Microbiologa descritos hasta ahora se debieron a la necesidad de resolver problemas prcticos. Pero a finales del siglo XIX algunos investigadores desarrollaron estudios bsicos que revelaron una enorme variedad de microorganismos y sus actividades metablicas, as como su papel en los ciclos biogeoqumicos, sus relaciones con procesos de nutricin vegetal, etc. El descubrimiento de la quimioautotrofa, por Sergei Winogradsky (1856-1953), oblig a revisar los conceptos procedentes de que el crecimiento autotrfico dependa de la clorofila. Winogradsky comenz investigando las bacterias del hierro descubiertas por Cohn en 1875, observ que podan crecer en medios minerales, por lo que supuso que obtenan su energa de la oxidacin de sales ferrosas a frricas (1888). En 1889, combin tcnicas de observacin secuencial de cultivos microscpicos con ensayos microqumicos sobre bacterias del azufre (Beggiatoa, Thiothrix), infiri que estos microorganismos oxidaban sulfuro de hidrgeno hasta azufre elemental (acumulando ste como grnulos), y luego hasta cido sulfrico, obteniendo su energa. Estas observaciones fueron el inicio del concepto de litotrofa. Pero el descubrimiento de la quimioautotrofa lleg un ao despus cuando Winogradsky y Omeliansky estudiaron las bacterias nitrificantes, demostrando que la energa obtenida de la oxidacin del amonio o del nitrito era usada para fijar CO2 (1889-1890). Ms tarde el mismo Winogradsky extendi la demostracin a cultivos puros en los que el agente solidificante de los medios era el gel de slice. La explicacin del proceso de oxidacin de los compuestos de azufre no lleg hasta los estudios de Dangeard (1911) y Kiel (1912). Nuevas capacidades metablicas fueron reveladas al estudiar los procesos respiratorios de las bacterias que oxidan hidrgeno o metano (Shngen, 1906). Berthelot haba sealado (1885) que los microorganismos del suelo podan incorporar nitrgeno molecular directamente del aire. Fue Winogradsky el primero en aislar una bacteria capaz de fijar nitrgeno atmosfrico (Clostridium pasteurianum) y en explicar el ciclo del nitrgeno en la naturaleza (1890), siendo Martinus Beijerinck (1851-1931) el descubridor de Azotobacter como bacteria aerobia fijadora de vida libre (1901). Ms tarde Beijerinck demostr por mtodos qumicos que, en efecto, Azotobacter incorpora nitrgeno de la atmsfera mientras crece (1908). La importancia de la fijacin de nitrgeno para la nutricin vegetal lleg con los estudios sobre bacterias formadoras de ndulos en las races
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de las leguminosas. Los experimentos sobre plantas creciendo en recipientes, realizados por Boussingault a mediados del siglo XIX, haban indicado que las leguminosas asimilaban nitrgeno de la atmsfera. En 1866 Voronin descubri las bacterias de los ndulos radicales de esta familia de plantas. Frank, en 1879, demostr que los ndulos parecan inducirse por las mismas bacterias albergadas en ellos, y Ward (1887) us bacterias procedentes de ndulos machacados para inocular semillas, logrando la produccin de ndulos en suelo estril, y describiendo en un bello trabajo el proceso de infeccin, con su produccin de hifas (cordn de infeccin). Tras la introduccin del concepto de simbiosis por De Bary, en 1878, fue Schindler (1884) el primero en describir los ndulos radicales como resultado de una simbiosis entre planta y bacterias. Los trabajos de Hermann Hellriegel (1831-1895) y de su colaborador Hermann Willfahrt (1853-1904), fueron comunicados en un congreso en Berln, en 1886, y publicados en un artculo en 1888, asociaron la fertilidad nitrogenada natural de las leguminosas con la presencia de sus ndulos radicales, sealando que estos ndulos se inducan por microorganismos especficos; de este modo lograron una brillante sntesis de las observaciones microbiolgicas y qumicas. El mismo ao de 1888 Beijerinck logr el cultivo puro in vitro de las bacterias nodulares (a las que bautiz como Bacillus radicicola), observando que no reducan nitrgeno en vida libre; ms tarde (1890) aport la prueba definitiva de que las bacterias aisladas eran capaces de nodular especficamente ciertas especies de leguminosas, adquirindose de esta forma la facultad de fijar nitrgeno en su asociacin con la raz de la planta. Irnicamente el nombre definitivo para las bacterias de los ndulos de leguminosas (Rhizobium) fue propuesto por Frank, quien se haba negado a reconocer los resultados de Hellriegel y Willfahrt, y haba oscilado en sus opiniones, desde suponer que la fijacin de nitrgeno era un rasgo general de las plantas, hasta creer que las estructuras intranodulares observadas a microcopio (bacteroides) eran grnulos de reserva; incluso cuando se convenci de que los simbiontes eran bacterias (y no hongos o mixomicetes), pensaba que stas slo estimulaban a que las plantas fijaran nitrgeno en sus hojas; su conversin lleg hasta 1892. El aislamiento de los bacteroides intranodulares (Prazmowski, 1890), y la relacin entre su formacin y la fijacin de nitrgeno (Nobbe y Hiltner, 1893) complet esta primera oleada de investigacin sobre este tema que tanta trascendencia presentaba para la Agronoma. Estos estudios estn en la base de todos los trabajos posteriores de Microbiologa Agrcola, de modo que esta especiliadad fue incorporada tempranamente a los laboratorios cientficos y estaciones experimentales. Las obras de Winogradsky y Beijerinck abrieron un nuevo horizonte para el estudio de la diversidad microbiana. La escuela de Beijerinck, en la Universidad Tcnica de Delft, fue continuada por por A.J. Kluyver y C.B. van Niel, siendo este ltimo el padre de la escuela norteamericana desde su establecimiento en California, ya que form a figuras tan importantes como R.Y. Stanier, R.E. Hungate o M. Doudoroff. La escuela holandesa fundada por Beijerinck tuvo asimismo otra fructfera colonia en la ciudad alemana de Konstanz, donde N. Pfennig continu el trabajo emprendido junto a van Niel en Delft. Todos estos autores, y sus colaboradores, fueron realizando contribuciones esenciales sobre una amplia diversidad de bacterias, descubriendo la variedad de las bacterias fotosintticas, los tipos de organismos litotrficos, y profundizando en multitud de aspectos estructurales y fisiolgicos de las bacterias recin descubiertas. Como dice T.D. Brock en una recensin de Kluyver (1961) los hombres de la escuela de Delft de Microbiologa General fueron pioneros en una poca en la que la mayora de los investigadores estaban demasiado fascinados por problemas aplicados en medicina, agricultura o industria, como para
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preocuparse por microorganismos quimiosintticos o fotosintticos, o por aquellos que muestran fermentaciones inusuales.... Pero, como en tantas otras ocasiones, este enfoque de ciencia bsica ha sido extraordinariamente frtil, y aparte de la profundizacin en la unidad y diversidad de la vida ha dado origen a penetrantes percepciones en multitud de problemas planteados, tarde o temprano, a las ciencias biolgicas.
Desarrollo de la inmunologa La inmunologa es una ciencia autnoma y madura, su origen ha estado estrechamente ligado a la Microbiologa. Su objeto de estudio son las respuestas de defensa que han desarrollado los animales frente a la invasin por microorganismos o partculas extraos, aunque su inters se ha volcado especialmente sobre aquellos mecanismos altamente evolucionados e integrados, dotados de especificidad y de memoria, frente a agentes reconocidos por el cuerpo como no-propios, as como de su neutralizacin y degradacin. La Inmumologa tuvo un prolongado perodo pre-cientfico, de observaciones y aproximaciones empricas. La resistencia a ulteriores ataques de una enfermedad infecciosa fue ya recogida en escritos de la antigedad; el historiador griego Tucdides (464-404 a.C.) narra que en una epidemia acaecida durante la guerra del Peloponeso, los enfermos eran atendidos solo por aquellos que haban sobrevivido previamente a la enfermedad, en la seguridad de que stos no volveran a ser contagiados. Igualmente, en la antigua China se haba observado que las personas que en su niez haban padecido la viruela no la adquiran ms adelante en su vida. Los mismos chinos, en el siglo XI a. C., fueron los primeros en intentar una aplicacin de estas observaciones que indicaban la induccin de un estado protector por medio de una forma suave de la enfermedad: la inhalacin de polvo de escaras de viruela provocaba un ataque suave que confera resistencia ante infecciones posteriores. Una modificacin fue introducida en Occidente en el siglo XVIII por Pylarini y Timoni, y fue popularizada en Gran Bretaa por Lady Mary Wortley Montagu, esposa del embajador ingls en Constantinopla, tras una serie inicicial de pruebas sobre voluntarios (sic, en realidad prisioneros). Sin embargo, este tipo de prcticas no llegaron a arraigar ampliamente, ya que no estaban exentas de riesgos, entre los cuales figuraba la posibilidad de transmisin de otras enfermedades. El primer acercamiento a la inmunizacin con criterios racionales fue realizado por el mdico ingls Edward Jenner (1749-1823), tras su constatacin de que los vaqueros que haban adquirido la viruela vacunal (una forma benigna de enfermedad que slo produca pstulas en las manos) no eran atacados por la grave y deformante viruela humana. En mayo de 1796 inocul a un nio fluido procedente de las pstulas vacunales de Sarah Nelmes; semanas despus el nio fue inyectado con pus de una pstula de un enfermo de viruela, comprobando que no quedaba afectado por la enfermedad. Jenner public sus resultados en 1798 (An enquiry into the causes and effects of the variolae vaccinae...), pronosticando que la aplicacin de su mtodo podra llegar a erradicar la viruela. Jenner fue el primero en recalcar la importancia de realizar estudios clnicos de seguimiento de los pacientes inmunizados, consciente de la necesidad de contar con controles fiables. La falta de conocimiento, en aquella poca, de las bases microbiolgicas de las enfermedades infecciosas retras en casi un siglo la continuacin de los estudios de Jenner,
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aunque ciertos autores, como Turenne, en su libro La syphilization (1878) lograron articular propuestas tericas de cierto inters. El primer abordaje cientfico de problemas inmunolgicos se debi a Pasteur. Estudiando la bacteria responsable del clera aviar (ms tarde conocida como Pasteurella aviseptica), observ (1880) que la inoculacin en gallinas de cultivos viejos, poco virulentos, las protega de contraer la enfermedad cuando posteriormente eran inyectadas con cultivos normales virulentos. De esta forma se obtuvo la primera vacuna a base de microorganismos atenuados. Fue precisamente Pasteur quien dio nacimiento al trmino vacuna, en honor del trabajo pionero de Jenner. En los aos siguientes Pasteur abord la inmunizacin artificial para otras enfermedades; estableci de forma clara que cultivos de Bacillus anthracis atenuados por incubacin a 45C conferan inmunidad a ovejas expuestas a contagio por carbunco. Una famosa demostracin pblica de la bondad del mtodo de Pasteur tuvo lugar en Pouilly le Fort, el dos de junio de 1881, cuando ante una multitud expectante se pudo comprobar la muerte del grupo control de ovejas y vacas no inoculadas, frente a la supervivencia de los animales vacunados. Aos despus, abordara la inmunizacin contra la rabia, enfermedad de la que se desconoca el agente causal. Pasteur observ que ste perda virulencia cuando se mantenan al aire durante cierto tiempo extractos medulares de animales infectados, por lo que dichos extractos se podan emplear eficazmente como vacunas. Realiz la primera vacunacin antirrbica en humanos el 6 de julio de 1885, sobre el nio Joseph Meister, que haba sido mordido gravemente por un perro rabioso. A este caso siguieron otros muchos, lo que vali a Pasteur reconocimiento universal y supuso el apoyo definitivo a su mtodo de inmunizacin, que abra perspectivas prometedoras de profilaxis ante muchas enfermedades. Estos logros determinaron, en buena medida, la creacin del Instituto Pasteur, que muy pronto reuni a un selecto grupo de cientficos, que enfocaran sus esfuerzos en diversos aspectos de las inmunizaciones y de sus bases biolgicas. A su vez, los norteamericanos Salmon y Smith (1886) perfeccionaron los mtodos serolgicos de Pasteur, lo que les permiti producir y conservar ms fcilmente sueros tipificados contra la peste porcina. A finales del siglo XIX existan dos teoras opuestas sobre los fundamentos biolgicos de las respuestas inmunes. Por un lado, el zologo ruso Ilya Ilich Mechnikov (1845-1916), que haba realizado observaciones sobre la fagocitosis en estrellas de mar y pulgas de agua, estableci, a partir de 1883, su Teora de los fagocitos, tras estudiar fenmenos de englobamiento de partculas extraas por los leucocitos de conejo y de humanos. Inform que existan fenmenos de eliminacin de agentes patgenos por medio de clulas devoradoras (fagocitos) que actuaban en animales vacunados contra el carbunco, y explic la inmunizacin como una habituacin del husped a la fagocitosis. Ms tarde, ya integrado en el Instituto Pasteur, propugn la idea de que los fagocitos segregan enzimas especficos, anlogos a los fermentos digestivos (1900). Esta teora de los fagocitos constituy el ncleo de la teora de la inmunidad celular, de modo que la fagocitosis se consideraba como la base principal del sistema de defensa inmune del organismo. Por otro lado, la escuela alemana de Koch haca hincapi en la importancia de los mecanisnos humorales. Emil von Behring (1854-1917) y Shibasaburo Kitasato (18561931), a resultas de sus trabajos sobre las toxinas del ttanos y de la difteria, observaron que el cuerpo produce antitoxinas (ms tarde conocidas como anticuerpos) que tendan a
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neutralizar las toxinas de forma especfica, y evidenciaron que el suero que contiene antitoxinas es capaz de proteger a animales expuestos a una dosis letal de la toxina correspondiente (1890). La intervencin de Ehrlich permiti obtener sueros de caballo con niveles de anticuerpos suficientemente altos como para conferir una proteccin eficaz, e igualmente se pudo disponer de un ensayo para cuantificar la antitoxina presente en suero. Ehrlich dirigi desde 1896 el Instituto Estatal para la Investigacin y Comprobacin de Sueros, en Steglitz, cerca de Berln, y, a partir de 1899, estuvo al frente del mejor equipado Instituto de Terapia Experimental, en Frankfurt. Durante este ltimo periodo de su vida, Ehrlich produce una impresionante obra cientfica, en la que va ahondando en la comprensin de la inmunidad humoral. En 1900 da a luz su Teora de las cadenas laterales, en la que formula una explicacin de la formacin y especificidad de los anticuerpos, estableciendo una base qumica para la interaccin de stos con los antgenos. Por su lado, R. Kraus visualiza por primera vez, en 1897, una reaccin antgeno-anticuerpo, al observar el enturbiamento de un filtrado bacteriano al mezclarlo con un suero inmune especfico (antisuero). En 1898 Jules Bordet (1870-1961) descubre otro componente srico relacionado con la respuesta inmunitaria, al que bautiza como alexina, caracterizado, frente al anticuerpo, por su termolabilidad e inespecificidad. (Ms tarde se impondra el nombre de complemento, propuesto por Ehrlich). El mismo Bordet desarroll, en 1901, el primer sistema diagnstico para la deteccin de anticuerpos, basado en la fijacin del complemento, y que inici una larga andadura, que llega a nuestros das. La conciliacin de las dos teoras se debi a Almorth Wrigth y Stewart R. Douglas, quienes en 1904 descubren las opsoninas, anticuerpos presentes en los sueros de animales inmunizados y que, tras unirse a la superficie bacteriana, incrementan la capacidad fagoctica de los leucocitos. El rea de la inmunopatologa inicia su andadura con la descripcin del fenmeno de anafilaxia producido por introduccin en un animal de un suero de una especie distinta (Portier y Richet, 1902; Arthus, 1903), lo que a su vez abrira la posibilidad de mtodos de serodiagnstico, con aplicaciones mltiples en Medicina, Zoologa, y otras ciencias biolgicas. En 1905 Pirquet sugiere que la enfermedad del suero (un fenmemo de hipersensibilidad) tiene relacin directa con la produccin de anticuerpos contra el suero inyectado, introduciendo el trmino de alergia para referirse a la reactividad inmunolgica alterada. La inmunoqumica cobra un gran impulso en las primeras dcadas del siglo XX con los trabajos de Karl Landsteiner (1868-1943). Su primera contribucin de importancia haba sido la descripcin, mediante reacciones de aglutinacin, del sistema de antgenos naturales (ABC0) de los eritrocitos humanos (1901-1902), completada (en colaboracin con Von Dungern y Hirzfeld), con las subdivisiones del grupo A y el estudio de su transmsin hereditaria. Estos trabajos sirvieron de estmulo para avanzar en el desentraamiento de la especificidad qumica de los antgenos que determinan la formacin de anticuerpos. Landsteiner estudi sistemticamente las caractersticas de inmunogenicidad y especificidad de reaccin de antgenos con anticuerpos, valindose de la modificacin qumica de antgenos, denominando haptenos a aquellos grupos qumicos que por s mismos no desencadenan formacin de anticuerpos, pero s lo hacen tras ser conjugados a protenas portadoras.
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La cuestin de las reacciones antgeno-anticuerpo se convirti en otra polmica entre escuelas hasta finales de los aos 20. Mientras Ehrlich y sus seguidores mantenan que estas reacciones tienen una base puramente qumica, Bordet y sus discpulos las explicaban como fenmenos fsicos de reacciones entre coloides. La resolucin del debate debi aguardar hasta finales de los aos 30, al incorporarse avances tcnicos como la electroforesis, la cromatografa en papel, la ultracentrifugacin y el microscopio electrnico. Heidelberg y Kendall (1936) purificaron anticuerpos a partir de sueros por disociacin de precipitados. Tiselius (1939) demostr que los anticuerpos constituyen la fraccin gamma-globulnica del suero. Veinte aos despus R.R. Porter y G.M. Edelman establecen la estructura de las inmunoglobulinas. Durante este lapso de tiempo se descubre que la sntesis de anticuerpos ocurre en las clulas plasmticas, aunque stas no son puestas en relacin an con los linfocitos; durante muchos aos se sigui creyendo que los linfocitos eran clulas pasivas, sin funcin inmune. Por aquella poca se describe, tambin, la diversidad de inmunoglobulinas, llegndose al establecimiento de una nomenclatura. Enseguida comienza la era de los mltiples experimentos sobre timectoma en ratones neonatos y sobre bursectoma en aves, as como los de reconstitucin de animales irradiados, con timocitos y clulas de la medula sea, y que permiten afirmar el papel esencial de los linfocitos, encuadrarlos en tipos funcionales T y B, y relacionarlos con las respuestas inmunes celular y humoral, respectivamente. Una importante faceta de la inmunologa de la primera mitad del siglo XX fue la obtencin de vacunas. Se lograron toxoides inmunognicos a partir de toxinas bacterianas, en muchos casos por tratamiento con formol: toxoide tetnico (Eisler y Lowenstein, 1915) y toxoide diftrico (Glenny, 1921). En 1922 se desarrolla la vacuna BCG contra la tuberculosis, haciendo uso de una cepa atenuada de Mycobacterium tuberculosis, el bacilo de CalmetteGurin. La utilizacin de coadyuvantes se inicia en 1916, por LeMoignic y Piroy. La inmunogentica nace cuando Bernstein describe en 1921 el modelo de transmisin hereditaria de los cuatro grupos sanguneos principales, basndose en el anlisis estadstico de sus proporciones relativas, y con el descubrimiento por Landsteiner y Levne (1927) de los nuevos sistemas MN y P. Los experimentos de transfusiones sanguneas interespecficas permitieron distinguir la gran complejidad de los antgenos sanguneos, explicables segn unos 300 alelos mltiples. Una contribucin esencial a las ideas sobre el mecanismo de formacin de los anticuerpos la realiz el australiano Macfarlane Burnet (1899-1985), al establecer su teora de la seleccin clonal; sta argumenta que cada linfocito B sintetiza un nico tipo de anticuerpo, especfico para cada antgeno (determinante antignico), de modo que la unin del antgeno causa la proliferacin clonal del linfocito B, con la consecuente sntesis incrementada de anticuerpos especficos. Igualmente, Burnet lanz una hiptesis sobre el mecanismo subyacente a la auto-tolerancia inmunolgica, que fue confirmada experimentalmente por Peter Medawar. Ms recientemente Niels Jerne ha realizado nuevas aportaciones y refinamientos a la teora de la seleccin clonal, proponiendo un modelo de regulacin inmune conocido como teora de las redes idiotpicas. Los avances en Inmunologa durante los ltimos aos han sido espectaculares, consolidando a sta como ciencia independiente, con su conjunto propio de paradigmas, ya
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relativamente escindida de su tronco originario microbiolgico. Entre los hitos recientes hay que citar la tcnica de produccin de anticuerpos monoclonales a partir de hibridomas, desarrollada originalmente por Csar Milstein y Georges Kohler en 1975, y que presenta una enorme gama de aplicaciones en biomedicina, o el desentraamiento de los fenmenos de reorganizacin gentica responsables de la expresin de los genes de inmunoglobulinas, por Susumu Tonegawa. Origen y desarrollo de la Virologa La Virologa ha sido la ciencia microbiolgica de origen ms tardo, naci como resultado del hallazgo de enfermedades infecciosas en las que la demostracin de implicacin de microorganismos se demostraba esquiva con los medios habituales disponibles a finales del siglo XIX. La euforia que se viva en los mbitos cientficos y mdicos, al socaire de la edad de oro de aislamiento de bacterias patgenas, se plasm en el prejuicio de que la incapacidad de hacer crecer los agentes causantes de ciertas enfermedades se deba a una tcnica inapropida o mal aplicada. Dimitri Iwanovski haba observado (1892) que la enfermedad del mosaico del tabaco poda ser reproducida experimentalmente usando el fluido que atravesaba los filtros de porcelana que normalmente retenan a las bacterias, pero siendo incapaz de aislar y crecer el supuesto microorganismo, abandon la investigacin. Pocos aos ms tarde (1898), y probablemente sin tener noticias del trabajo de Iwanovski, Beijerink realiz experimentos similares con el mismo sistema, y en otro rasgo de su genio, enfrentndose a los conceptos de la poca, avanz la idea de que el agente filtrable (un contagium vivum fluidum, segn su expresin), deba de incorporarse al protoplasma vivo del hospedador para lograr su reproduccin. Este tipo de agentes infectivos que atravesaban los filtros de porcelana fueron llamados en principio virus filtrables, quedando ms tarde su denominacin simplemente como virus. Aquel mismo ao de 1898 Loeffler y Frosch descubren los virus animales al comprobar que un virus filtrable es responsable de la glosopeda del ganado. En 1901 Reed descubre el primer virus humano, el de la fiebre amarilla, y en 1909 Landsteiner y Pope detectan el de la poliomielitis. A comienzos de siglo Copeman desarrolla su tcnica de multiplicacin de virus animales en embriones de pollo, con la que P. Rous aisla y cultiva el virus del sarcoma aviar (1911). Los virus bacterianos fueron descubiertos en 1915 por F.W. Twort, si bien su trabajo no alcanz la elegancia y claridad del desarrollado poco ms tarde por el canadiense Flix d'Hrelle (1917); fue ste quien acu el trmino bacterifago, y supuso correctamente que el fenmeno de lisis por estos agentes deba de estar ampliamente difundido entre las bacterias. Aunque su esperanza en la aplicacin de los fagos como elementos bactericidas para uso mdico no pudo satisfacerse, la contribucin de los virus bacterianos al avance de la gentica y biologa moleculares ha sido decisiva: de hecho, los primeros estudios cuantitativos sobre replicacin virsica se realizaron sobre fagos de Escherichia coli, lo que suministr modelos aplicables a otros virus, incluidos los de animales. En 1925 Bordet y Bal describen por primera vez el fenmeno de lisogenia, pero las relaciones entre los ciclos ltico y lisognico de los fagos no fueron aclaradas hasta los estudios de Andr Lwoff (1950).
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La primera visualizacin de un virus se debe a las observaciones a microscopio ultravioleta del bacterilogo ingls Barnard (1925), y en 1939 se realiza la primera fotografa de un virus a microscopio electrnico. Pero los avances ms significativos en el estudio de la composicin y estructura de los virus se inician con la purificacin y cristalizacin, por Wendell M. Stanley, del virus del mosaico del tabaco -TMV- (1935), aplicando procedimientos tpicos de la cristalizacin de enzimas. Inicialmente Stanley comprob que el TMV contena gran proporcin de protena, pero poco ms tarde detecta, adems, la presencia de cido nucleico. A partir de aqu, la Virologa entra en una fase de ciencia cuantitativa, en la que participan numerosos fsicos, bioqumicos y genetistas, en un esfuerzo interdisciplinar que da origen a la moderna Biologa Molecular. Un importante avance metodolgico para el estudio de los virus animales se debi a Enders, Weller y Robbins (1949), al desarrollar por primera vez un mtodo para la multiplicacin virsica sobre cultivos de tejidos de mamferos, tcnica que fue perfeccionada ms tarde por el equipo de Renato Dulbecco. Los recientes progresos en las numerosas tcnicas de biologa molecular han propiciado una autntica explosin de descubrimientos sobre la biologa de los virus y de sus clulas hospedadoras; baste citar la replicacin del genomio de ARN de los retrovirus por reversotranscripcin a ADN, los fenmenos de transformacin oncognica virsica y su aplicacin a los estudios generales del cncer, el diseo de vacunas recombinantes por manipulacin in vitro de genomios virsicos, la prxima aplicacin clnica de la primeras terapias gnicas en humanos recurriendo a vectores virsicos, etc. En el terreno de las necesidades urgentes, la metodologa existente ha permitido la rpida identificacin y caracterizacin del virus de la inmunodeficiencia humana, lo que se est traduciendo en una intensa y racional bsqueda de procedimientos para prevenir y eliminar la inesperada epidemia de SIDA. En aos recientes han sido descubiertos dos nuevos tipos de entidades infectivas, subvirsicas: T.O. Diener describi en 1967 la existencia de ARN desnudos infectivos en plantas, a los que llam viroides, y en 1981 Prusiner puso de manifiesto que determinadas enfermedades de mamferos se deben a partculas proteicas aparentemente desprovistas de material gentico, a las que bautiz como priones.
Relaciones entre la microbiologa y otras ciencias biolgicas El auge de la microbiologa desde finales del siglo XIX se plasm, entre otras cosas, en el aislamiento de gran variedad de cepas silvestres de microorganismos, lo que suministr un enorme volumen de nuevo material biolgico sobre el que trabajar, aplicndose una serie de enfoques que eran ya habituales en las ciencias naturales ms antiguas; as, haba que crear un marco taxonmico (con sus normas de nomenclatura) para encuadrar a los organismos recin descubiertos, era factible desarrollar trabajos sobre morfologa y fisiologa comparadas, sobre variabilidad y herencia, evolucin, ecologa, etc. De este modo la joven Microbiologa fue objeto, en pocos aos, de la utilizacin, a un ritmo acelerado, de los mtodos taxonmicos y experimentales que haban ido surgiendo y madurando desde el siglo XVIII en los mbitos de la Historia Natural clsica.
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Los primeros esfuerzos para lograr un clasificacin bacteriana por parte de Cohn (1875) y Migula (1894), que sustentaban su concepto de especie predominantemente sobre caracteres morfolgicos. Pero hacia 1900 era evidente la arbitrariedad e insuficiencia de este tipo de clasificaciones, de modo que los intentos posteriores hicieron uso de caracteres bioqumicos (Orma Jensen, 1909), o de una mezcla de rasgos morfolgicos, bioqumicos, patognicos y de tincin (Buchanan, 1915). El sistema de taxonoma bacteriana adquiri un nuevo impulso a partir de la 1 edicin del Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (1923), y de las propuestas de Kluyver y van Niel (Prospects for a natural system of classification of bacteria, 1936). En cuanto a la nomenclatura, no fue hasta 1958 en que cuaj un Cdigo Internacional de Nomenclatura Bacteriolgica, aunque ya se vena aplicando desde haca tiempo el procedimiento tipolgico para los microorganismos, con criterios similares a los de la Zoologa y la Botnica. El establecimiento de relaciones taxonmicas precis el recurso a mtodos cada vez ms amplios y afinados de anlisis gentico, estructural o fisiolgico. En un apartado anterior ya vimos las conexiones tempranas entre la Bioqumica y la Microbiologa a propsito del descubrimiento de la base enzimtica de las fermentaciones, lo cual abri el camino para dilucidar el metabolismo energtico microbiano, y para demostrar su similitud qumica con rutas metablicas de organismos superiores. Otro paso importante en la percepcin de la unidad bioqumica del mundo vivo deriva del descubrimiento de las vitaminas (trmino acuado por Funk en 1911), al establecerse que determinados factores de crecimiento requeridos por algunos microorganismos eran qumicamente similares a las vitaminas necesarias en la dieta de los animales, y que este tipo de compuestos representa precursores biosintticos de coenzimas del metabolismo celular. As pues, este tipo de investigaciones sent claramente la idea de la unidad qumica de los seres vivos, independientemente de su encuadre taxonmico, y encauz una buena parte de los trabajos bioqumicos hacia los microorganismos, dadas sus cualidades de facilidad de manejo y cultivo en laboratorio. En cuanto a las conexiones de la Microbiologa con la Gentica, ya Beijerink, en 1900, tras analizar la teora de la mutacin de De Vries, haba predicho que los microoganismos podran convertirse en objetos de investigacin ms adecuados que los sistemas animales o vegetales. Pero las primeras conexiones entre ambas ciencias arrancan de la necesidad que hubo, a principios del siglo XX, de determinar la sexualidad de los hongos con fines taxonmicos. En 1905 Maire demostr la existencia de meiosis en la formacin de ascosporas, y Claussen (1907) evidenci fusin de ncleos en Ascomicetos, mientras que Kniepp, hacia finales de los aos 30 haba recogido un gran volumen de informacin sobre procesos sexuales en Basidiomicetos. El sueco Lindegren (1936) realiza las primeras cartografas genticas en cromosomas de Neurospora, durante su estancia en el laboratorio californiano de Morgan; este ltimo, propugnador de la teora de los genes (1926), confiaba desde haca aos en ampliar sus xitos, logrados en Drosophila, hacia el estudio de la gentica microbiana. En 1941, otros dos discpulos de Morgan, Beadle y Tatum, aislan mutantes auxotrficos de Neurospora, con lo que se inicia el estudio de la base bioqumica de la herencia, y convierten a este hongo en una valiosa herramienta de trabajo en esta lnea de investigacin. Las estrategias diseadas por Beadle y Tatum fueron aplicadas por Luria y Delbrck (1943) a cultivos bacterianos, investigando la aparicin de mutaciones espontneas resitentes a
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fagos o estreptomicina. La conexin de estos experimentos con las observaciones previas de Griffith (1928) sobre la transformacin del neumococo, llev a Avery y colaboradores (1944) a demostrar que el principio transformante portador de la informacin gentica es el ADN. En 1949 Erwin Chargaff demuestra bioqumicamente la transmisin gentica mediante ADN en Escherichia coli , y en 1952 Alfred Hershey y Martha Chase, en experimentos con componentes marcados de fagos, ponen un elegante colofn a la confirmacin de la funcin del ADN, con lo que se derribaba el antiguo y asentado paradigma de las protenas que hasta mediados de siglo intentaba explicar la base de la herencia. De esta forma, la Microbiologa experimental se sita en pleno centro del nacimiento de la Gentica molecular, de la mano de los avances paralelos en Bioqumica (anlisis por rayos X de la estructura del ADN debido a Maurice Wilkins y Rosalind Franklin, modelo de Watson y Crick de la doble hlice del ADN, etc.), dando origen esta confluencia a lo que se ha llamado la Edad de Oro de la Biologa Molecular. OBJETO DE ESTUDIO DE LA MICROBIOLOGA Objeto material del estudio de la microbiologa La Microbiologa es la ciencia que se ocupa del estudio de los microorganismos, es decir, de aquellos organismos demasiado pequeos para poder ser observados a simple vista, y cuya visualizacin requiere el empleo del microscopio. Esta definicin implica que el objeto material de la Microbiologa viene delimitado por el tamao de los seres que investiga, lo que supone que abarca una enorme heterogeneidad de tipos estructurales, funcionales y taxonmicos: desde partculas no celulares como los virus, viroides y priones, hasta organismos celulares tan diferentes como las bacterias, los protozoos y parte de las algas y de los hongos. De esta manera la Microbiologa se distingue de otras disciplinas organsmicas (como la Zoologa y la Botnica) que se centran en grupos de seres vivos definidos por conceptos biolgicos homogneos, ya que su objeto de indagacin se asienta sobre un criterio artificial que obliga a incluir entidades sin ms relacin en comn que su pequeo tamao, y a excluir a diversos organismos macroscpicos muy emparentados con otros microscpicos. A pesar de esto, la Microbiologa permanece como una disciplina perfectamente asentada y diferenciada, que deriva su coherencia interna del tipo de metodologas ajustadas al estudio de los organismos cuyo tamao se sita por debajo del lmite de resolucin del ojo humano, aportando un conjunto especfico de conceptos que han enriquecido la moderna Biologa. Podemos definir, pues, a los microorganismos como seres de tamao microscpico dotados de individualidad, con una organizacin biolgica sencilla, bien sea acelular o celular, y en este ltimo caso pudiendo presentarse como unicelulares, cenocticos, coloniales o pluricelulares, pero sin diferenciancin en tejidos u rganos, y que necesitan para su estudio una metodologa propia y adecuada a sus pequeas dimensiones. Bajo esta denominacin se engloban tanto microorganismos celulares como las entidades subcelulares. Microorganismos celulares Comprenden todos los procariotas y los microorganismos eucariticos (los protozoos, los mohos mucosos, los hongos y las algas microscpicas). El encuadre de todos estos grupos heterogneos ser abordado en el prximo captulo.
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Virus y partculas subvirsicas Otro tipo de objetos de estudio de la microbiologa son las entidades no celulares, que a pesar de no poseer ciertos rasgos atribuibles a lo que se entiende por vida, cuentan con individualidad y entidad biolgica, y caen de lleno en el dominio de esta ciencia. Los virus son entidades no celulares de muy pequeo tamao (normalmente inferior al del ms pequeo procariota), por lo que debe de recurrirse al microscopio electrnico para su visualizacin. Son agentes infectivos de naturaleza obligadamente parasitaria intracelular, que necesitan su incorporacin al protoplasma vivo para que su material gentico sea replicado por medio de su asociacin ms o menos completa con las actividades celulares normales, y que pueden transmitirse de una clula a otra. Cada tipo de virus consta de una sola clase de cido nucleico (ADN o ARN, nunca ambos), con capacidad para codificar varias protenas, algunas de las cuales pueden tener funciones enzimticas, mientras que otras son estructurales, disponindose stas en cada partcula virsica (virin) alrededor del material gentico formando una estructura regular (cpsida); en algunos virus existe, adems, una envuelta externa de tipo membranoso, derivada en parte de la clula en la que se desarroll el virin (bicapa lipdica procedente de membranas celulares) y en parte de origen virsico (protenas). En su estado extracelular o durmiente, son totalmente inertes, al carecer de la maquinaria de biosntesis de protenas, de replicacin de su cido nucleico y de obtencin de energa. Esto les obliga a un modo de vida (sic) parasitario intracelular estricto o fase vegetativa, durante la que el virin pierde su integridad, y normalmente queda reducido a su material gentico, que al superponer su informacin a la de la clula hospedadora, logra ser expresado y replicado, producindose eventualmente la formacin de nuevos viriones que pueden reiniciar el ciclo. Los viroides son un grupo de nuevas entidades infectivas, subvirsicas, descubiertas en 1967 por T.O. Diener en plantas. Estn constituidos exclusivamente por una pequea molcula circular de ARN de una sola hebra, que adopta una peculiar estructura secundaria alargada debido a un extenso, pero no total, emparejamiento intracatenario de bases por zonas de homologa interna. Carecen de capacidad codificadora y muestran cierta semejanza con los intrones autocatalticos de clase I, por lo que podran representar secuencias intercaladas que escaparon de sus genes en el transcurso evolutivo. Se desconocen detalles de su modo de multiplicacin, aunque algunos se localizan en el nucleoplasma, existiendo pruebas de la implicacin de la ARN polimerasa II en su replicacin, por un modelo de crculo rodante que genera concatmeros lineares. Esta replicacin parece requerir secuencias conservadas hacia la porcin central del viroide. Los viroides aislados de plantas originan una gran variedad de malformaciones patolgicas. El mecanismo de patogenia no est aclarado, pero se sabe que muchos de ellos se asocian con el nucleolo, donde quiz podran interferir; sin embargo, no existen indicios de que alteren la expresin gnica (una de las hiptesis sugeridas); cada molcula de viroide contiene uno o dos dominios conservados que modulan la virulencia. En 1986 se descubri que el agente de la hepatitis delta humana posee un genomio de ARN de tipo viroide, aunque requiere para su transmisin (pero no para su replicacin) la colaboracin del virus de la hepatitis B, empaquetndose en partculas similares a las de
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este virus. A diferencia de los viroides vegetales, posee capacidad codificadora de algunas protenas. Los ARNs satlites son pequeas molculas de tamao similar al de los viroides de plantas (330-400 bases), que son empaquetados en cpsidas de determinadas cepas de virus (con cuyos genomios no muestran homologas). Se replican slo en presencia del virus colaborador especfico, modificando (aumentando o disminuyendo) los efectos patgenos de ste. Los virusoides constituyen un grupo de ARNs satlites no infectivos, presentes en el interior de la cpsida de ciertos virus, con semejanzas estructurales con los viroides, replicndose exclusivamente junto a su virus colaborador. Los priones son entidades infectivas de un tipo totalmente nuevo y original, descubiertas por Stanley Prusiner en 1981, responsables de ciertas enfermedades degenerativas del sistema nervioso central de mamferos (por ejemplo, el scrapie o prurito de ovejas y cabras), incluyendo los humanos (kuru, sndrome de Gerstmann-Strassler, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob). Se definen como pequeas partculas proteicas infectivas que resisten la inactivacin por agentes que modifican cidos nucleicos, y que contienen como componente mayoritario (si no nico) una isoforma anmala de una proteina celular. Tanto la versin celular normal (PrPC) como la patgena (PrPSc en el caso del scrapie) son glicoprotenas codificadas por el mismo gen cromosmico, teniendo la misma secuencia primaria. Se desconoce si las caractersticas distintivas de ambas isoformas estriban en diferencias entre los respectivos oligosacridos que adquieren por procesamiento posttraduccional. A diferencia de los virus, los priones no contienen cido nucleico y estn codificados por un gen celular. Aunque se multiplican, los priones de nueva sntesis poseen molculas de PrP que reflejan el gen del hospedador y no necesariamente la secuencia de la molcula del PrP que caus la infeccin previa. Se desconoce su mecanismo de multiplicacin, y para discernir entre las diversas hiptesis propuestas quiz haya que dilucidar la funcin del producto normal y su posible conversin a la isoforma patgena infectiva. Recientemente se ha comprobado que, al menos algunas de la enfermedades por priones son simultneamente infectivas y genticas, una situacin inslita en la Patologa humana, habindose demostrado una relacin entre un alelo dominante del PrP y la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob. El gen del prin (Prn-p) est ligado genticamente a un gen autosmico (Prn-i) que condiciona en parte los largos tiempos de incubacin hasta el desarrollo del sndrome. Objeto de estudio formal de la Microbiolog{ia Todos los aspectos y enfoques desde los que se pueden estudiar los microorganismos conforman lo que denominamos objeto formal de la Microbiologa: caractersticas estructurales, fisiolgicas, bioqumicas, genticas, taxonmicas, ecolgicas, etc., que conforman el ncleo general o cuerpo bsico de conocimientos de esta ciencia. Por otro lado, la Microbiologa tambin se ocupa de las distintas actividades microbianas en relacin con los intereses humanos, tanto las que pueden acarrear consecuencias
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perjudiciales (y en este caso estudia los nichos ecolgicos de los correspondientes agentes, sus modos de transmisin, los diversos aspectos de la microbiota patgena en sus interacciones con el hospedador, los mecanismos de defensa de ste, as como los mtodos desarrollados para combatirlos y controlarlos), como de las que reportan beneficios (ocupdose del estudio de los procesos microbianos que suponen la obtencin de materias primas o elaboradas, y de su modificacin y mejora racional con vistas a su imbricacin en los flujos productivos de las sociedades). Finalmente, la Microbiologa se ocupa de todas las tcnicas y metodologas destinadas al estudio experimental, manejo y control de los microorganismos, es decir, de todos los aspectos relacionados con el modo de trabajo de una ciencia emprica. IMPORTANCIA DE LA MICROBIOLOGA La Microbiologa es una ciencia biolgica extraordinariamente relevante para la humanidad, dado que los microorganismos estn presentes en todos los hbitats y ecosistemas de la Tierra y sus actividades presentan una gran incidencia en numerossimos mbitos de inters: Los microorganismos han sido los primeros en aparecer en la evolucin, y constituyen seguramente la mayor parte de la biomasa de nuestro planeta. Se calcula que slo hemos descrito menos del 10% de los microorganismos existentes, por lo que los bilogos tienen una gran tarea por delante para estudiar esta parte de la biodiversidad. Las actividades microbianas sustentan los ciclos biogeoqumicos de la Tierra: los ciclos del carbono, del nitrgeno, del azufre o del fsforo dependen de modo fundamental de los microorganismos. Las actividades metablicas microbianas son excepcionalmente variadas, siendo algunas de ellas exclusivas del mundo procaritico. La biolologa bsica tiene aqu un gran campo de estudio. El aspecto aplicado y la incidencia econmica y social de los microorganismos es ingente, y aqu daremos unas breves pinceladas: Aspectos beneficiosos: Todas las culturas desarrollaron de modo emprico multitud de bebibas y alimentos derivados de fermentaciones microbianas: vino, cerveza, pan, verduras fermentadas, etc. Produccin de multitud de productos industriales: alcoholes, cidos orgnicos, antibiticos, enzimas, polmeros, etc. La ingeniera gentica empez con los microorganismos, que siguen desempeando un papel fundamental en la nueva generacin de medicamentos recombinantes y de terapias novedosas En su aspecto perjudicial, la Microbiologa dedica una especial atencin a los microorganismos patgenos, sobre todo a los que afectan a la humanidad Las enfermedades microbianas han sido causa de grandes males a nuestra especie. Baste recordar que la peste (muerte negra) caus a mediados del siglo XIV la muerte de la tercera parte de la poblacin europea, y ya en la primera mitad del siglo XV lleg a afectar a ms del 75%. Basta leer la literatura o ver las pinturas de la poca para darse cuenta del impacto terrorfico que supuso, lo que a su vez
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supuso un factor esencial en el surgimiento de las ideas del Renacimiento. Desde la poca del descubrimiento de Amrica, las exploraciones han conllevado el intenso trasiego de agentes patgenos de un lugar a otro. La desaparicin de buena parte de la poblacin indgena se debi en buena parte a no tener defensas frente a la viruela europea, pero a su vez los descubridores importaron la sfilis a Europa. No hace falta resaltar el papel que ha tenido la microbiologa mdica, desde la poca de Pasteur y Koch, en la lucha contra las enfermedades infecciosas (antisepsia, desinfeccin, esterilizacin, quimioterapia). Y aunque ahora tengamos nuevos retos (SIDA, fiebres hemorrgicas, etc.), no cabe duda de que la Microbiologa est contribuyendo a no perder esta permanente batalla contra los grmenes patgenos. Aparte de todas estas actividades de los microorganismos sobre los humanos, hay que tener en cuenta que existen grmenes que afectan a animales, plantas, instalaciones industriales, que afectan a alimentos, etc., representando otras tantas reas de atencin para la Microbiologa.
Ubicacin de los microorganismos en el mundo vivo Tras el descubrimiento de los microorganismos, a los naturalistas de la poca les pareci normal intentar encuadralos dentro de los dos grandes reinos de seres vivos conocidos entonces: animales y plantas. De este modo, a finales del siglo XVIII las algas y los hongos quedaron en el reino Plantae, mientras que los llamados infusorios se encuadraron en el reino Animalia. A mediados del siglo XIX se empez a ver que esa clasificacin era demasiado sencilla, y que el grupo de los infusorios era muy heterogneo. En 1866 Haeckel, seguidor de Darwin, propone un famoso rbol filogentico con tres reinos: Animalia Plantae Protista: todos los seres vivos sencillos, sean o no fotosintticos o mviles. Dentro de l consideraba los siguientes grupos: Protozoos Algas Hongo Moneras (=bacterias) Pero esta clasificacin fue cuestionada a mediados del siglo XX, cuando las tcnicas de microscopa electrnica y bioqumicas demuestran la gran diferencia de las bacterias respecto del resto de organismos. De hecho, ya en los aos 60 se reconoce que esta diferencia representa la mayor discontinuidad evolutiva del mundo vivo. En 1974, el Manual Bergeys (la biblia oficiosa de la clasificacin bacteriana) considera que la clasificacin al mximo nivel del mundo vivo debe reconocer la existencia de dos Reinos: Procaryotae (material gentico no rodeado de membrana nuclear) Eucaryotae (ncleo verdadero).
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Pero en los aos recientes, la incorporacin a la taxonoma de los mtodos de biologa molecular, especialmente la secuenciacin de ARN ribosmico y la genmica, estobligando a nuevos planteamientos. Para resumir, hoy se asume lo siguiente: Existen dos tipos de organizacin celular, la procaritica y la eucaritica. Dentro de los seres vivos con organizacin procaritica, existen dos grandes dominios o imperios: Bacteria (las eubacterias o bacterias clsicas) y Archaea (antes llamadas arqueobacterias) A su vez, el dominio eucaritico comprende numerosas lneas filogenticas, muchas de ellas de microorganismos. Los mismos Protozoos es un grupo muy heterogneo, que comprende lneas filogenticas diversas y a veces muy separadas en el tiempo evolutivo. Caracteres distintivos de los procariotas y eucariotas Procariotas Genforo Un solo cromosoma ADN c.d., c.c.c. (cadena doble, circular cerrado covalentemente) No existe membrana nuclear No histonas Replicacin del material gentico: no mitosis Organizacin del citoplasma No orgnulos de tipo eucariticos Eucariotas Nucleoplasma Varios cromosomas ADN c.d. lineal, terminado en telmeros Existe membrana nuclear Histonas Replicacin del material gentico: mitosis
Organizacin del citoplasma Orgnulos (mitocondrias, cloroplastos, retculo endoplsmico, Golgi, lisosomas, etc) No citosqueleto (no corrientes Citosqueleto y corrientes citoplsmicas) citoplsmicas Ribosomas 70S Ribosomas 80S
Aparte de estos, existen otros rasgos que, aunque no universales, caracterizan a numerosos procariotas: Sus membrana plasmticas carecen de esteroles, salvo los micoplasmas (pero en este caso los esteroles proceden del hospedador eucaritico al que parasitan), algunas especies de cianobacterias y de bacterias melitotrofas. La movilidad no es universal, pero muchas bacterias se mueven en medios acuticos debido a unas estructuras llamadas flagelos, que nada tienen que ver con los flagelos eucariticos. Las eubacterias (dominio Bacteria) poseen, salvo los micoplasmas, una pared celular a base de una peptidoglucano (una macromolcula que no existe en eucariotas). Muchas arqueas (dominio Archaea) poseen pared celular, diferente a las del dominio Bacteria.
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Composicin qumica bsica de la clula procariota El contenido en agua de una clula vegetativa bacteriana tpica es de un 70%, mucho menor que el de los eucariotas (que ronda el 90%). Una clula de Escherichia coli, creciendo de forma equilibrada en un medio a base de glucosa y sales minerales, a 371C, tiene la composicin: tipo de componente Porcentaje sobre peso seco protena 55.0 ARN 20.5 ADN 3.1 Lpidos 9.1 Lipopolisacrido 3.4 Peptidoglucano 2.5 Glucgeno 2.5 total macromolculas: 96.1 Pequeas molculas 2.9 orgnicas: Iones inorgnicos: 1.0 Obsrvese que: las macromolculas constituyen la porcin mayoritaria de la masa celular (96%); las protenas representan ms de la mitad de esta cantidad; las bacterias poseen una proporcin de ARN superior a la de los eucariotas; la mayor parte de los compuestos son semejantes a los de eucariotas, pero dentro de las macromolculas encontramos dos que son exclusivas de los procariotas (concretamente, de eubacterias, aunque no de todas): lipopolisacrido (exclusivo de Gram-negativas); peptidoglucano (presente en eubacterias Gram-positivas y Gramnegativas).
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Apuntes de Anlisis Biolgicos (2009) Microbiologa Dr.

Jos Luis Pea Manjarrez

De la difteria (Loeffler, 1884),

Bacteria productora de la difteria

De la neumona (Fraenkel, 1886), causada por el neumococo

De la meningitis (Weichselbaun, 1887),

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