Identificación Haemophilus

A. Frotis de líquido cefalorraquídeo coloreado con

Gram. que muestra leucocitos polimorfonucleares
y bacilos gramnegativos dispersos,
correspondientes a Haemophilus influenzae.
Estos microorganismos tienen un aspecto
característico de cocobacilos pequeños, que
toman mal la coloración de Gram. en las muestras
clínicas. En forma ocasional, pueden verse bacilos
más largos, filamentosos, como los que se
muestran aquí.

B. Desarrollo de colonias húmedas, lisas y

grises de H. influenzae tipo b en agar
chocolate. Este medio contiene hematina
(factor X) y está enriquecida con otros
cofactores, como el NAD (factor V), que
permiten el desarrollo de Haemophilus y otros
microorganismos con requerimientos
especiales de cultivo.

C. Desarrollo satélite de colonias de una

especie de Haemophilus, alrededor de estrías
de Staphylococcus aureus, en agar sangre de
carnero. El factor X o hemina es
proporcionado por eritrocitos de carnero
lisados que rodean las estrías de
Staphylococcus, en tanto que éstos
proporcionan el factor V o NAD. Estos
factores permiten que las minúsculas
colonias en gota de rocío de Haemophilus se
desarrollen junto a la estría de
Staphylococcus.
D. Prueba de factores de desarrollo para la
identificación de H. influenzae. El microorganismo
se siembra sobre una placa de triticasa soja o agar
infusión de cerebro-corazón, y se colocan discos
con facto X y factor V, cercanos una de otra sobre el
inóculo. Después de la incubación en medio rico de
CO2. Los factores se determinan observando el
desarrollo del microorganismo en relación con
ambos discos. En esta fotografía se observa
desarrollo entre los discos de factor X y V, lo que
indica que este microorganismo requiere tanto
factor X como factor V exógenos para su
desarrollo.

E Prueba de ALA-porfirina en agar. Es un método

alternativo para determinar los requerimientos de
factor X de aislamientos de Haemophilus. El medio
agar contiene ácido δ−aminolevulínico (ALA). Los
microorganismos se siembran sobre el medio y
después de una incubación durante la noche, se
observa con luz de lámpara de Wood (ultravioleta);
si el desarrollo fluoresce con un color “rojo ladrillo”,
el microorganismo es capaz de sintetizar factor X
(hemina), y no necesita de factor X exógeno. Esta
diapositiva muestra el desarrollo de H. influenzae
(izquierda), que es un negativo a la prueba ALA-
porfirina, es decir, requiere hemina exógena y de H.
parainfluenzae que es un positivo a la prueba ALA-
porfirina, es decir, sintetiza factor X en presencia del
ALA.