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MICROOGANISMOS EN EL AGUA

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS NO.144

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA 4 A LABORATORISTA QUMICO ING.JOS ANTONIO BARRIONUEVO MEJAODALIS TATIANA GMEZ LPEZ DIA VIERNES 14 DE FEBRERO DIA VIERNES 24 DE FEBRERO DEL 2012.

I.

INTRODUCCIN

MICROBIOLOGA DEL AGUA:Qu es la microbiologa? La microbiologa es el campo cientfico que se ocupa del estudio de los organismos microscpicos, comnmente conocidos como microorganismos. El agua, alimento esencial para los animales incluido el hombre, frecuentemente acta como vehculo de transmisin de microorganismos entricos. La materia fecal puede accidentalmente alcanzar una fuente de abastecimiento, siendo la forma ms comn el ingreso a travs de los sistemas de pozo ciego a napas profundas. El Cdigo Alimentario Argentino (CAA), la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) en sus Guas para la calidad del agua potable, la Directiva 98/83/CE1 y otras normas internacionales, establecen o recomiendan requisitos de calidad para el agua de consumo humano. En general, la normativa establece que el agua es apta bacteriolgicamente para consumo si se encuentra exenta de microrganismos patgenos de origen entrico y parasitario intestinal. Ellos transmiten enfermedades tales como salmonelosis (Salmonella), shigelosis (Shigella), colera (Vibrio Cholerae),amebiasis (Entamoeba histolytica), alteraciones gastrointestinales (Aeromonas mesfilas, Helicobacter pylori, Campylobacter); giardiasis (Giardia lamblia), cristosporidiosis (Crystosporidium), esquistosomiasis (Schistosoma), desrdenes hepticos (virus de hepatitis), etc. La presencia de microorganismos patgenos en el agua de bebida es un riesgo que se incrementa en las reas marginales de mayor densidad poblacional o en zonas sin disponibilidad de agua potable. La seguridad que un agua contaminada puede ser causal de enfermedades, ha conducido a la necesidad de controlar rutinariamente la calidad microbiolgica de muestras de diversos orgenes. Los controles rutinarios de la totalidad de los microorganismos hdricos, potencialmente riesgosos para la salud, resultan difciles de llevar a cabo debido a la gran variedad de bacterias patgenas cultivables, a la complejidad de los ensayos de aislamientos y a la presencia en baja concentracin de varias especies altamente agresivas, sin que el orden detallado indique prioridad. Por esta razn, los anlisis bacteriolgicos apuntan a la bsqueda de microorganismos indicadores de contaminacin fecal y se centralizan en la cuantificacin de coliformes. Este grupo est integrado por enterobacterias, siendo Escherichia coli el indicador universal de contaminacin fecal. Introduccin al Mundo Microbiano: Para estudiar la relacin que existe entre calidad de agua y salud humana, es necesario introducir el concepto de microbiologa, y a partir de ello valorar la presencia de organismos microscpicos en agua potable, los efectos de competencia y/o sinrgicos de las distintas especies y la posibilidad de aplicar tecnologas de desinfeccin. La microbiologa es una rama de la biologa que estudia seres vivientes de tamao microscpico que existen como clulas aisladas o asociadas y tambin incluye el estudio de virus (microscpicos no celulares). En general, los microorganismos a diferencia de los macroorganismos, son capaces de llevar a cabo procesos de crecimiento, generacin de energa y reproduccin, independientemente de otras clulas sean del mismo tipo o diferentes. Las clulas estudiadas en microbiologa pueden pertenecer a dos grandes grupos, eucariotas y procariotas. Las eucariotas constituyen la unidad estructural de protozoarios, hongos y algas cuyo tamao las incluye en esta especialidad. Son organismos unicelulares o multicelulares que poseen en su interior estructuras limitadas por membranas llamadas organelas (ncleo, mitocondrias y cloroplastos presentes slo en clulas capaces de realizar fotosntesis). Las clulas procariotas son las bacterias, cuya estructura interna es sencilla. Etimolgicamente el trmino procariota significa ausencia de membrana nuclear. En la tabla 1 se indican algunas diferencias y similitudes entre ambas clulas. Morfologa bacteriana: Las bacterias son microorganismos unicelulares que se reproducen por fisin binaria, conocida tambin como biparticin. Su tamao, por lo general es menor que el de una clula eucariota tpica (por ej. Escherichia coli 0,5 2 m). Sin embargo, existe un amplio rango de tamaos segn las especies que puede variar desde 0,2 m de dimetro como en el caso de los micoplasmas hasta 40 m como en la Beggiatoa gigantea. La rigidez de la pared celular determina la morfologa de una clula bacteriana. Los principales tipos de formas que presentan las bacterias son: esfrica, bastn alargado o espiral (figura 1). Las bacterias de forma esfrica se denominan cocos (redondeados, ovoides o elpticos); las de forma de bastn alargado se denominan bacilos (cilndricos, fusiformes, etc.) y las de forma de bastn curvado se denominan espirilos. Aquellas bacterias cuya imagen proyectada sobre el plano tienen

forma de coma, se llaman vibrios. Otras formas que pueden presentar las bacterias son filamentosa (ramificada o no), anillos y tambin estructuras con prolongaciones.

Si bien la mayora de las bacterias mantienen su forma, algunas pueden presentar modificaciones y se las denomina pleomrficas. El pleomorfismo est relacionado a veces a la edad del cultivo y se manifiesta en bacterias sin pared celular (micoplasmas). Las formas L son bacterias que perdieron la pared celular por una situacin de estrs (temperatura, presin osmtica, etc.) pero que son capaces de resintetizarla cuando el estrs cesa. Siendo la morfologa una caracterstica taxonmica, es importante determinar el fenmeno de pleomorfismo originado por las condiciones del cultivo, para evitar falsas identificaciones. Las clulas bacterianas, observadas al microscopio, pueden aparecer como clulas aisladas o agrupadas. Las agrupaciones de dos clulas de formas cocoides se denominan diplococos. El o los planos en los cuales tiene lugar la divisin celular, determina la disposicin caracterstica de especie. As, si existe un solo plano de divisin se originan cadenas, por ej. Streptococcus (cocos en cadena). Cuando la biparticin tiene lugar en dos planos perpendiculares, se originan ttradas, por ej. Pediococcus. La divisin en tres o ms planos ortogonales origina paquetes de 8 clulas o ms.

II.

ANTECEDENTES

Qu son los microorganismos? : Todas las criaturas vivientes estn formadas por clulas. Las clulas son unas muy pequeas unidades bsicas de la vida. Son las estructuras mas pequeas capaces de realizar los procesos bsicos de la vida, tales como absorcin de nutrientes y expulsin de desechos. Las clulas solo se pueden observar al microscopio. Los microorganismos son organismos normalmente formados por una sola clula. Debido a esto, a veces se les denomina organismos unicelulares. Son tan pequeos que los humanos no los podemos visualizar. Solo los podemos ver a travs de un microscopio, mediante el cual las clulas son agrandadas enormemente. Al principio, los microorganismos no eran vistos como un tipo diferente de organismo. Los microorganismos que realizaban fotosntesis (ver ciclo del carbono) eran incluidos en el reino vegetal, y los microorganismos que ingeran alimentos eran situados en el reino animal. Sin embargo, en el siglo XIX, los cientficos identificaron una amplia variedad de microorganismos con diversas estructuras celulares, estructuras internas muy especficas, y patrones de reproduccin muy especficos que les hicieron darse cuenta de que estos organismos no pertenecan a los reinos vegetal ni animal. Qu tipos de microorganismos existen?: Los microorganismos se clasifican segn sus caractersticas celulares, de la misma forma que los vegetales y los animales. Existen dos tipos de (micro)organismos. El primer tipo es el organismo eucarionte (protista). La mayora de los organismos son eucariontes, lo que bsicamente significa que las clulas por las que estn formados contienen ncleo y otras partes internas rodeados por membrana. El segundo tipo de microorganismos es el microorganismo procarionte (monera). Las clulas procariotas estn rodeadas de una membrana, pero no contienen ncleo ni otras partes internas (orgnulos), al contrario que las clulas eucariotas.

Bacteria esfrica

Bacteria filamentosa

Los protistas son microorganismos eucariontes unicelulares, como hemos mencionado anteriormente. Algunos ejemplos son las amebas, las diatomeas, las algas y los protozoos. stos pueden ser un peligro para la salud humana y animal, ya que ciertos protostas pueden ocasionar enfermedades, tales como la malaria o la enfermedad del sueo. Hay una gran variedad de protistas, y habitan diferentes ambientes; agua dulce, agua salada, suelos, y el tracto intestinal de los animales, donde llevan a cabo procesos digestivos decisivos.Muchas especies de protistas son capaces de producir sus propios nutrientes mediante el proceso de la fotosntesis y muchos protistas tambin pueden moverse por s mismos. Los protistas varan enormemente en forma y tamao; el alga verde Nanochlorum mide solamente 0.001 mm de largo, pero las laminarias pueden crecer hasta los 65 m de largo o ms.

Qu microorganismos acuticos provocan enfermedades? : A veces se pueden encontrar en el agua potable microorganismos causantes de enfermedades. Sin embargo, como hoy en da el agua potable es meticulosamente desinfectada, las enfermedades provocadas por microorganismos son raramente causadas por beber agua. Las personas que nadan en las piscinas encontrarn que el agua en el que nadan est desinfectada con cloro, ozono , UV o dixido de cloro. Pero hay personas que nadan en el exterior en aguas superficiales todos los aos. Estas son las personas mas susceptibles de contraer infecciones bacterianas e infecciones causadas por otros microorganismos, porque los microorganismos a menudo acaban en las aguas superficiales a travs de vertidos industriales y excrementos animales. Los nadadores de espacios exteriores deben ser cuidadosos y leer los carteles situados en las orillas, porque el agua en la que pretenden nadar puede estar infectada, por ejemplo con el botulismo. Hay varias bacterias y protozoos que pueden provocar enfermedades cuando estn presentes en aguas superficiales. Las bacterias no solo pueden provocar enfermedades cuando entran en el cuerpo humano a travs de los alimentos, las aguas superficiales tambin pueden ser una fuente importante de infecciones bacterianas. El la siguiente tabla puede ver varias bacterias que se pueden encontrar en aguas superficiales, y las enfermedades que causan cuando son ingeridas en grandes cantidades, junto con los sntomas.
Bacteria Aeromonas Campylobacter jejuni Escherichia coli Enfermedad/infeccin Enteritis Campilobacteriosis Infecciones del tracto urinario, meningitis neonatal, enfermedades intestinales Plesiomonas-infeccin Fiebre tifoidea Salmonelosis Enfermedad (gastro) intestinal Clera (forma leve) Sntomas Diarrea muy lquida, con sangre y moco Gripe, diarres, dolor de cabeza y estmago, fiebre, calambres y nuseas Diarrea acuosa, dolores de cabeza, fiebre, uremia homiltica, daos hepticos Nuseas, dolores de estmago y diarrea acuosa, a veces fiebre, dolores de cabeza y vmitos Fiebre Mareos, calambres intestinales, vmitos, diarrea y a veces fiebre leve Dolores de estmago, diarrea y fiebre, a veces vmitos Fuerte diarrea

Plesiomonas shigelloides Salmonella typhi Salmonella sp. Streptococcus Vibrio El Tor (agua dulce)

Los protozoos se pueden acumular en ciertas partes del cuerpo, despus de haber penetrado en el cuerpo humano. Las acumulaciones se llaman cistos.Debido a su naturaleza parasitaria, los protozoos pueden provocar diferentes enfermedades. En esta tabla puede ver diversos protozoos que se pueden encontrar en aguas superficiales, y las enfermedades que causan cuando son ingeridos en grandes cantidades, junto con los sntomas.
Microorganismo Amoeba Enfermedad Disenteria ameboide Sntomas Fuerte diarrea, dolor de cabeza, dolor abdominal, escalofros, fiebre; si no se trata puede causar abscesos en el hgado, perforacin intestinal y muerte Sensacin de mareo, diarrea acuosa, vmitos, falta de apetito Diarrea, calambres abdominales, flatulencia, eruptos, fatiga Gripe, inflamacin de las glndulas linfticas

Cryptosporidium parvum Giardia Toxoplasm gondii

Criptosporidiosis Giardiasis Toxoplasmosis

En mujeres embarazadas aborto e infecciones cerebrales

Cmo eliminamos del agua los microorganismos dainos? : Para eliminar del agua los microorganismos dainos solemos usar desinfectantes. Algunos ejemplos de desinfectantes son cloro, UV, ozono (O3) y dixido de cloro (ClO2). Existen unas cuantas ventajas y desventajas diferentes entre las diversas tcnicas de desinfeccin, como se muestra en nuestra pgina de desinfeccin. Los compuestos qumicos que son dainos para cierto tipo de microorganismos se utilizan a menudo para eliminarlos. Estos compuestos qumicos son conocidos como biocidas, porque son mortales para los microorganismos. Cmo se pueden utilizar los microorganismos durante el tratamiento del agua? : Los microorganismos se pueden utilizar para descomponer contaminantes en aguas residuales. Este tipo de tratamiento de agua se denomina tratamiento biolgico del agua. Durante el tratamiento biolgico del agua los microorganismos descomponen la materia orgnica del agua, nitratos y fosfatos. Esta es una breve explicacin de como funcionan esos procesos de tratamiento biolgico del agua. Eliminacin de materia orgnica: La purificacin biolgica del agua se lleva a cabo para disminuir la carga de compuestos orgnicos disueltos. Los microorganismos, principalmente las bacterias, realizan la descomposicin de estos compuestos. Hay dos categoras principales de tratamiento biolgico: tratamiento aerbico y tratamiento anaerbico. El tratamiento aerbico del agua significa la descomposicin de materia orgnica que necesita oxgeno durante su proceso de descomposicin. El tratamiento anaerbico del agua significa descomposicin de materia orgnica por medio de microorganismos que no utilizan oxgeno. En los sistemas aerbicos el agua es aireada con aire comprimido (en algunos casos con solamente oxgeno), mientras que los sistemas anaerbicos funcionan bajo condiciones libres de oxgeno. Eliminacin de amoniaco y nitratos: La eliminacin de amonio y nitratos es bastante compleja. Es un proceso de tratamiento del agua que necesita conversin tanto aerbica como anaerbica para eliminar los contaminantes. En la fase de conversin aerbica hay dos especies bacterianas implicadas. Primero, las bacterias Nitrosomonas convierten el amoniaco en nitrito. Segundo, las bacterias Nitrobacter convierten los nitritos en nitratos. Estos dos procesos juntos son comnmente conocidos como el proceso de nitrificacin. Despus de eso, las bacterias anaerbicas entran a actuar. Estas bacterias convierten los nitratos en nitrgeno gaseoso atmosfrico. Este proceso se llama desnitrificacin. La desnitrificacin es realizada por con muchas bacterias anaerbicas, tales como Achromobacter, Bacillus y Pseudomonas. La primera fase de la desnitrificacin es el proceso inverso a la nitrificacin, vuelve a transformar el nitrato en nitrito. La segunda fase de la desnitrificacin transforma el nitrito en nitrgeno gas. Este gas puede ser liberado a la atmsfera sin causar daos ambientales. Eliminacin de fosfatos: Los fosfatos pueden ser eliminados de las aguas residuales por una bacteria aerbica (oxgeno-dependiente), llamada Acinetobacter. Esta bacteria acumula polifosfatos en los tejidos celulares. Acinetobacter puede absorber una mayor cantidad de fosfatos de la que necesita para su sntesis celular. La cantidad extra de fosfatos es almacenada en las clulas en forma de polifosfatos. El almacenamiento de polifosfatos hace que las Acinetobacter sean capaces de sobrevivir temporalmente en circunstancias anaerbicas. Cuando las Acinetobacter residen en una zona anaerbica en las aguas residuales, absorbe cidos grasos y los almacena como sustancias de reserva. Durante este proceso, los polifosfatos se descomponen para obtencin de energsa, haciendo que se liberen fosfatos en la zona aerbica. Cuando las Acinetobacter entran en la zona aerbica absorven fosfatos y los almacenan en forma de polifosfatos en los tejidos celulares. Esto hace que el contenido en fosfatos del agua residual disminuya.

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III.

MATERIALES Y EQUIPOS

MATERIAL: 6 cajas Petri 10 tubos de ensayo 2 matraz Erlenmeyer 2 pipetas de tamao diferente 1 vaso de precipitado de 250 ml 1 matraz Erlenmeyer de 250 ml con aga destilada

EQUIPO: Balanza granataria Autoclave Horno Refrigerador Incubadora

IV.

TCNICAS Y PROCEDIMIENTO

1. Portar la bata al entra al laboratorio de microbiologa. 2. Esterilizar el rea de trabajo con BENZAL. 3. Leer la informacin del medio de cultivo. Medio de cultivo BIOXON:-Para identificacin y diferenciacin. AGAR SIM:-Mtodo de preparacin: suspender 30 gr. De polvo en un litro de agua purificad. Mezclar perfectamente, calentar con agitacin frecuente y hervir durante un minuto hasta dilucin. Distribuir y esterilizar a 121c. 4. Llenar el vale y pedir los materiales, lavar y secar los materiales que lo requieran con jabn axin y esponja. 5. Tomar apuntes y pesar el vidrio de reloj en la balanza granataria,(cerciorase de que este equilibrada y que el platillo este limpio) y realizar los clculos para 55 ml de medio de cultivo y proceder a pesar. 30 gr---1000 ml. x= (30 gr) (50 ml)/1000 ml X=1.65+42.9=44.55 x---55 ml. Peso vidrio de reloj= 42.9 gr 6. Seguir las indicaciones del medio de cultivo antes mencionada. 7. Esterilizar los tubos de ensayo en la autoclave a 121c a 15 libras de presin por 15 minutos teniendo el cuidado de asegurarlos para que no se quiebren. (Esterilizar con la tcnica de esterilizacin por autoclave.Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de Chamberland. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos. Equipo: Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metlica, que en la parte inferior recibe calor por combustin de gas o por una resistencia elctrica. La caldera se cierra en la parte superior por una tapa de bronce sujetada por bulones, mariposas o charnelas. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manmetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete (tambin llamado espita) y el tercero, para una vlvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte. Funcionamiento y mtodo para esterilizar adecuadamente en Autoclave: Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se disponen sobre una rejilla o canasta de metal. Se cierra asegurando la tapa, ajustando los bulones y se da calor, dejando abierta la vlvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida de vapor en forma de chorro continuo y abundante. Se cierra la espita de vapor y se espera hasta que llegue a la temperatura adecuada. A partir de all se cuenta el tiempo de esterilizacin, luego del cual se debe esperar al descenso de la temperatura para abrir la espita de purga y la tapa del autoclave nuevamente.). 8. Llevar las dos pipetas al horno a 60c por 20 minutos. (Esterilizar con la tcnica en horno Para esterilizar por intermedio del aire caliente es necesario colocar los objetosen aparatos especiales llamados ESTUFAS. Y llevar el aire interior a una temperatura entre 150 y 190 C. Uno de los primeros aparatos utilizados para este fin fu el horno de Pasteur, que luego se sustituy por estufas de aire caliente. Estas constan de una doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia elctrica circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperaturas vatriables, siendo la ms aconsejadas 170 C para el instrumental metlico y a 140

C para el contenido de los tambores. Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal denominados de par bimetlico, consistente en dos metales de distinto coeficiente de dilatacin. Cuando uno se dilata, el otro no lo hace y se arquea. Uno de los extremos de ste dispositivo se halla en contacto con un interruptor que corta la alimentacin de la resistencia calefactora.) 9. 10.