REVISTA BRASILEIRA DE HEMATOLOGIA E HEMOTERAPIA

Reviso / Review

Fisiologia e metabolismo do ferro

Iron physiology and metabolism
O conhecimento sobre a fisiologia e metabolismo do ferro foi bastante incrementado nos ltimos anos. A identificao de alguns genes e as repercusses quando de suas mutaes, principalmente as relacionadas ao acmulo de ferro, auxiliaram no entendimento dos mecanismos regulatrios responsveis pela manuteno da homeostase desse nutriente essencial para numerosos processos bioqumicos. A funo de diversas molculas j est bem estabelecida, como da transferrina e seu receptor e, nas ltimas dcadas, novas molculas tm sido identificadas, como a ferroportina, o transportador de metal divalente e hemojuvelina. Um elegante mecanismo de controle mantm o equilbrio entre os processos de absoro do ferro, reciclagem, mobilizao, utilizao e estoque. Alteraes no sincronismo desses processos podem causar tanto a deficincia como a sobrecarga de ferro, ambos com importantes repercusses clnicas para o paciente. Nessa minirreviso sero abordados aspectos relacionados ao metabolismo do ferro e participao de vrias protenas e mediadores envolvidos. Sero tambm apresentados os mecanismos regulatrios celular e sistmico responsveis pela disponibilidade do ferro em concentraes ideais para a manuteno de sua homeostase. Rev. Bras. Hematol. Hemoter. 2010;32(Supl. 2):8-17. Palavras-chave: Metabolismo do ferro; anemia ferropriva; sobrecarga de ferro; hepcidina; homeostase do ferro.

Helena Z. W. Grotto

Metabolismo do ferro O ferro um mineral vital para a homeostase celular. A sua habilidade em aceitar e doar eltrons o torna imprescindvel para diversas reaes biolgicas. componente essencial para a formao da molcula heme e participa da formao de diversas protenas. Na forma de hemoprotena, fundamental para o transporte de oxignio, gerao de energia celular e detoxificao. O heme sintetizado em todas as clulas nucleadas, sendo que a maior quantidade produzida pelo tecido eritroide. Sua sntese controlada por mecanismos enzimticos e de degradao, e esse controle tem que ser rigoroso, uma vez que o excesso de ferro ir reagir com o oxignio gerando radicais hidroxil e nions superxidos (reao de Fenton). A ao desses radicais

sobre protenas, lpides e DNA causa graves leses celulares e teciduais.1,2 O heme constitudo por um anel tetrapirrlico com um on central de ferro (Figura 1). Parte de sua sntese ocorre nas mitocndrias e parte no citosol. Diversas enzimas esto envolvidas na formao do heme, conforme esquematizado na Figura 2. Tem como primeiro estgio a formao do cido aminolevulnico a partir da condensao da glicina com a succinil Co-A, reao catalisada pela delta aminolevulnico sintetase 2 (ALAS-2) e requer a participao do piridoxal 5fosfato (vitamina B6) como cofator. Um importante mecanismo de regulao da ALAS-2 acontece no nvel de traduo da sntese proteica . O RNAm da ALAS-2 contm elementos reguladores do ferro (IRE= iron regulatory elements) na extremidade 5', que interagem com protenas reguladoras do

Hematologista. Professor Associado do Departamento de Patologia Clnica da Faculdade de Cincias Mdicas da Unicamp Campinas-SP. Departamento de Patologia Clnica. Faculdade de Cincias Mdicas Unicamp Campinas-SP. Correspondncia: Helena Z W Grotto Departamento de Patologia Clnica/FCM/Unicamp CP 6111 Cidade Universitria Zeferino Vaz Baro Geraldo, 13083-970 Campinas-SP Brasil E-mail: grotto@fcm.unicamp.br Doi:10.1590/S1516-84842010005000050

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Figura 1. Estrutura do heme, mostrando o anel tetrapirrlico ao redor do tomo de ferro

Figura 2. Esquema da biossntese do heme

ferro (IRP= iron regulatory proteins) que se encontram no citosol. A formao do complexo IRE-IRP na extremidade 5' do RNAm impede a traduo do RNAm da ALAS-2. A afinidade do IRP ao IRE depende da quantidade de ferro dentro da clula. Em situaes em que h excesso de ferro, a ligao IRP-IRE no ocorre, o que permite que a traduo prossiga. A ALAS-2, ento, expressa e inicia a biossntese do heme para aproveitamento do ferro disponvel. Quando h deprivao do ferro, a formao do complexo IRP-IRE bloqueia a traduo, abolindo a expresso e atividade da ALAS-2, diminuindo, assim, a sntese do heme (Figura 3). Esse mesmo 9

mecanismo regula a expresso de outras protenas envolvidas no metabolismo do ferro, como ser visto com mais detalhe posteriormente. Por um processo aparentemente desconhecido, o cido aminolevulnico passa da mitocndria para o citosol, onde ocorre a dimerizao, e duas molculas de ALA so condensadas para formar o porfobilinognio (PBG). Essa reao catalisada pela dehidratase aminolevulinato (ALAD). Pela ao da porfobilinognio deaminase (PBGD) formado um polmero de quatro molculas de PBG, conhecido como hidroximetilbilano (HMB). O HMB serve como substrato para a uroporfirinognio sintase III (URO3S), que catalisa a converso do HMB para UPG III, primeiro elemento em anel ou cclico. Uma forma isomrica metabolicamente inerte de UPG (UPG I) formada espontaneamente e parcialmente decarboxilada, produzindo o coproporfirinognio I (Coprogen I), que eliminado, no sendo convertido em heme. O UPG III decarboxilado e quatro grupos acetato so removidos, gerando uma molcula hidrossolvel, o Coprogen III. Essa reao catalisada pela decarboxilase de uroporfirinognio (UROD). A decarboxilao oxidativa de grupos propionato dos anis pirrlicos A e B do Coprogen III leva formao do PPG IX, reao catalisada pela oxidase de corproporfirinognio (CPO). Essa enzima est localizada no espao intermembrana da mitocndria, ou seja, a reao iniciada na mitocndria e depois localizada no citosol retorna agora para a mitocndria, onde ser finalizada. A oxidase de PPG (PPGO) oxida, ento, o PPG IX e gera o Proto IX, capaz de incorporar o ferro para formar o heme, ltima etapa da reao que ocorre na superfcie interna da membrana mitocondrial, onde o ferro inserido no anel de Proto IX pela ao da ferroquelatase (FC). A FC sintetizada no citosol e alcana a mitocndria na forma de uma sequncia conduzida por um peptdeo controlador, que posteriormente clivado para produzir a forma madura da enzima. A expresso da FC regulada pelos nveis de ferro intracelular e pela hipxia. Assim, o grupo heme formado por um anel tetrapirrlico contendo um tomo de ferro no seu interior (Figura 1). A degradao do heme vai gerar um tetrapirrlico linear, que a biliverdina, que vai formar a bilirrubina, a ser excretada do fgado pela bile.3 A sntese do heme nas clulas eritroides est comprometida com a sntese de hemoglobina (Hb) nos eritroblastos. O segundo rgo que produz o heme o fgado, cuja concentrao de heme livre nos hepatcitos estimada entre 0,05 e 0,2M. Esse heme incorporado nas hemoprotenas microssomais, como a citocromo P450 e controlado pela atividade da ALAS-N e pela degradao enzimtica via hemoxigenase (revisado em 2,4). Na homeostase do ferro, os mecanismos de excreo so menos desenvolvidos e eficazes do que aqueles que regulam a absoro e distribuio, e nesses processos vrias clulas, hormnios e protenas transportadoras do ferro esto envolvidas, como ser visto a seguir.

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Figura 3. Homeostase do ferro intracelular IRP: protena reguladora do ferro; IRE: elementos responsivos ao ferro; TfR: receptor da Tf; ALA-S: 5-aminolevulinato sintase. esquerda condies com altas concentraes de ferro intracelular. A no ligao do IRP ao IRE na extremidade 5' do mRNA favorece a sntese das protenas (ferritina e ALA-S), enquanto na extremidade 3' bloqueia sua traduo (TfR), diminuindo a captao do ferro pela clula. direita: condies com baixas concentraes de ferro intracelular. A ligao do IRP ao IRE leva reduo de estoque e da utilizao do ferro para a sntese do heme e, por outro lado, estabiliza o mRNA do TfR, favorecendo uma maior captao do ferro pela clula

Aquisio do ferro O ferro utilizado pelo organismo obtido de duas fontes principais: da dieta e da reciclagem de hemcias senescentes. Absoro intestinal. O ferro da dieta encontrado sob duas formas: orgnica e inorgnica. Uma dieta normal contm de 13 mg a 18 mg de ferro, dos quais somente 1 mg a 2 mg sero absorvidos. A aquisio da forma heme corresponde a 1/3 do total e proveniente da quebra da Hb e mioglobina contidas na carne vermelha. Ovos e laticnios fornecem menor quantidade de ferro heme, que mais bem absorvido do que a forma inorgnica.5 O ferro inorgnico ou no heme proveniente de vegetais e gros e encontrado principalmente na forma frrica (Fe+++ ). Alguns fatores favorecem a absoro intestinal, como a acidez e a presena de agentes solubilizantes, como acares. A absoro acontece pelo epitlio duodenal superior, que apresenta estruturas vilosas para ampliar a superfcie de absoro. O transporte do ferro do lmen intestinal at a circulao sangunea ocorre em trs fases prin10

cipais: 1) captao e internalizao na membrana apical do entercito; 2) deslocamento intracelular, e 3) transporte para o plasma.6 1) Captao do ferro: A Figura 4 ilustra uma clula intestinal e a localizao das protenas envolvidas no processo de absoro. A transportadora de metal divalente 1 (DMT-1), tambm conhecida como Nramp2, composta por 12 segmentos transmembrana e, alm do ferro, transporta Mn2+, Co2+, Cu2+ e Zn2+. Para exercer sua funo, a DMT-1 necessita que o ferro tenha sido convertido de Fe3+ para Fe 2+, o que mediado pela redutase citocromo b duodenal ou Dcytb8. A absoro do ferro heme menos estabelecida. Aparentemente, a internalizao feita pela protena transportadora do heme-1 (HCP1), recentemente descrita e posicionada na membrana apical das clulas do duodeno. No entanto, foi demonstrado que a HCP1 transporta o folato de maneira mais eficiente que o heme e questiona-se se a protena seria um transportador bifuncional.8 O heme liga-se membrana da borda em escova dos entercitos duodenais e a protena transportadora de 50-kDa com nove domnios transmembrana atravessa intacta a membrana plasmtica, importando o heme

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dade de ferro pelo organismo ele ser transportado para fora do entercito em direo ao plasma para ser transportado pela transferrina (Tf).10 3) transporte para o plasma: O principal exportador do ferro da clula para o plasma a ferroportina (FPN), tambm conhecida como IREG1. Possui 12 segmentos transmembrana e localiza-se na extremidade basolateral de vrios tipos celulares, incluindo sinciciotrofoblastos placentrios, entercitos duodenais, hepatcitos e macrfagos.11 A FPN crucial para a exportao do ferro celular e o nico mecanismo de efluxo do ferro. A expresso do mRNA da FPN est aumentada na deficincia de ferro e hipxia. Como a DMT-1, a FPN tambm seletiva para o ferro na forma Fe2+ 6. A FPN, alm de exportador do ferro celular tambm o receptor da hepcidina (HPN), importante regulador da aquisio do ferro, conforme ser visto nas sees seguintes.12 Como a Tf srica tem grande afinidade pelo ferro na forma frrica, o Fe2+ externalizado pela FPN deve ser oxidado para Fe3+. A hefaestina, oxidase semelhante ceruloplasmina srica, responsvel por essa converso. Mutaes que inativam a FPN ou a hefaestina levam ao prejuzo na absoro e acmulo de ferro no entercito e nos macrfagos.10 Reciclagem do ferro pelos macrfagos
Figura 4. O entercito e as protenas envolvidas na absoro do ferro. Dcyth: ferroredutase; DMT-1: transportador de metal divalente-1; HCP-1: protena transportadora do heme-1; NU: ncleo; HFE: protena da hemocromatose; TfR: receptor

extracelular. A seguir, o heme apresenta-se ligado membrana de vesculas no citoplasma da clula. A HCP1 tambm expressa em outros locais, como o fgado e rins e sua regulao feita de acordo com o nvel de ferro intracelular: havendo deficincia de ferro, a HCP1 se redistribui do citoplasma para a membrana plasmtica das clulas duodenais, enquanto em condies de excesso de ferro a redistribuio se d a partir da borda em escova da clula para o seu citoplasma. Esse mecanismo regulador ps-traduo da protena interessante porque, de um lado, aproveita o heme da dieta antes que ele seja eliminado pelo peristaltismo do intestino e, no outro extremo, evita a captao desnecessria de ferro e o seu provvel acmulo. A hipxia tambm induz a sntese da HCP1, facilitando a captao de heme quando h maior necessidade do organismo.9 2) transporte intracelular: no interior da clula, o ferro liberado da protoporfirina pela heme oxigenase (HO). Aps o ferro ser liberado, far parte do mesmo pool de ferro no heme, tendo dois possveis destinos dependendo da demanda de ferro. Se a necessidade for baixa ele permanecer no entercito sequestrado pela ferritina e ser eliminado quando da descamao do epitlio intestinal. Se houver necessi11

Como a maior parte do ferro no organismo est associada molcula de Hb, a fagocitose e degradao de hemcias senescentes representam uma fonte importante de ferro (de 25 mg a 30 mg/dia). Essa quantidade de ferro reciclado suficiente para manter a necessidade diria de ferro para a eritropoese.3 Macrfagos do bao e da medula ssea e, em menor extenso, clulas de Kpffer no fgado reconhecem modificaes bioqumicas na superfcie da hemcia que vo se acumulando medida que a clula torna-se senescente, como peroxidao de lipoprotenas de membrana, perda de resduos de cido silico e formao de neoantgenos, como molculas modificadas da Banda 3.13 Essas alteraes sinalizam para que o macrfago elimine essas clulas, processo conhecido como eriptose, ou morte programada caracterstica das clulas vermelhas, onde as clulas sofrem um "encolhimento" e externalizao de fosfatidilserina, que ser reconhecido pelo CD36, receptor da fosfatidilserina no macrfago. Aps a reconhecimento dessas modificaes por macrfagos da medula ssea, bao e fgado, as hemcias so internalizadas, com consequente degradao dos seus componentes.14 O catabolismo intracelular do heme feito por um complexo enzimtico ancorado na membrana do retculo endoplasmtico e compreende uma NADPH-citocromo C redutase, a HO1 e a biliverdina redutase, e ter como produtos o CO, ferro e bilirrubina. A cadeia globnica, parte proteica da molcula de Hb, ter seus aminocidos tambm reciclados e aproveitados na sntese de novas protenas. O Fe2+ pode ser retido no

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prprio macrfago dentro das molculas de ferritina ou ser exportado pela FPN. Aps a exportao pela FPN, o Fe2+ ser oxidado pela ceruloplasmina, sintetizada no fgado. O Fe3+ ser transportado pela Tf at os locais onde ser reutilizado, predominantemente medula ssea, onde participar da hemoglobinizao de novos eritrcitos.6,15 Transporte e captao do ferro pelas clulas Como foi mencionado, o ferro transportado no plasma pela Tf, uma glicoprotena de 80 KDa sintetizada e secretada pelo fgado, alm da retina, testculos e crebro.16 Possui dois stios homlogos, que em pH neutro podem transportar dois tomos de Fe3. Alm de solubilizar o ferro, a Tf atenua sua reatividade e facilita a sua liberao para as clulas. Em condies normais, a Tf plasmtica tem a capacidade de transportar at 12 mg de ferro, mas essa capacidade raramente utilizada e, em geral, 3 mg de ferro circulam ligados Tf, ou seja, 30% da Tf est saturada com o ferro. Quando a capacidade de ligao da Tf est totalmente saturada, o ferro pode circular livremente pelo soro, na forma no ligada Tf (NTBI), que acumula nos tecidos parenquimais, contribuindo para o dano celular nos casos de sobrecarga de ferro. Quando complexado Tf, a internalizao do ferro iniciada pela ligao desse complexo a um receptor especfico (TfR) presente na superfcie da maioria das clulas.17 Esse receptor um homodmero transmembrana constitudo de duas subunidades idnticas ligadas por pontes dissulfeto. Cada subunidade apresenta um domnio C-terminal extracelular, um domnio transmembrana e um pequeno domnio N-terminal citoplasmtico. No domnio extracelular encontra-se o stio de ligao para a molcula de Tf, enquanto no domnio citoplasmtico, entre os domnios 20 e 23, encontra-se a sequncia responsvel pela endocitose do Tf complexado ao ferro.18 A afinidade do TfR Tf difrrica parece ser determinada pela protena produzida pelo gene da hemocromatose, a HFE, tambm presente na membrana plasmtica dos eritroblastos. A interao Tf-TfR facilitada pelo pH extracelular de 7,4 e, a partir dessa ligao, inicia-se o mecanismo de captao de ferro pela clula. O complexo Tf-TfRHFE internalizado por endocitose. Dentro do endossoma, a bomba de prtons dependente de ATP encarrega-se de reduzir o pH, facilitando a liberao do ferro da Tf, que permanece ligado ao seu receptor, e o complexo apoTf-TfRHFE reciclado de volta superfcie celular, quando ento a apo-Tf liberada do TfR. O ferro do endossoma atravessa a membrana da vescula e alcana o citoplasma.3 A protena DMT-1 essencial para o efluxo do ferro do endossoma para o citoplasma. O ferro liberado pela Tf no endossoma est na forma frrica (Fe3+) e a DMT-1 tem grande afinidade pelo Fe2+. Uma ferriredutase recentemente identificada e denominada Steap 3 responsvel pela reduo do ferro liberado pela Tf, que ser ento transferido para o citosol pela DMT-1.19 A incorporao do ferro ao anel de protoporfirina 12

ir formar o heme, que, em combinao com as cadeias de globina, formaro a molcula de Hb. H indcios que alguns sistemas so capazes de captar o ferro na ausncia ou quando a Tf est saturada. Isso foi observado no corao e fgado; no entanto, os reticulcitos no so capazes de captar o ferro se o mesmo no estiver ligado Tf.20 Um produto da clivagem do TfR tecidual circula no plasma na forma solvel do TfR (sTfR). A protelise do TfR acontece prximo 2 ponte dissulfeto, na posio 100 da cadeia polipeptdica, numa ligao arginina-leucina. Ainda no est esclarecido em que momento ocorre essa protelise e qual protease estaria atuando no processo. O que j est bem documentado a correlao direta entre a quantidade de sTfR circulante e a TfR celular. A forma solvel do receptor que circula no plasma reflete a massa de TfR celular, 80% dela nas clulas da linhagem eritroctica da medula ssea. Assim, a concentrao de sTfR circulante determinada primariamente pela atividade medular eritroide. Situaes caracterizadas por hipoplasia da srie vermelha, como anemia aplsica ou insuficincia renal crnica, apresentam nveis reduzidos de sTfR, enquanto condies com hiperplasia eritroide, como anemia falciforme ou outras anemias hemolticas crnicas, esto associadas com nveis elevados de sTfR. Outro fator que regula a expresso do TfR e, consequentemente, altera as concentraes circulantes do sTfR o estado do ferro intracelular, mediado pelos IREs e as IRPs, mecanismo apresentado anteriormente (Figura 3). A deprivao de ferro favorece a formao do complexo IRE-IRP no mRNA do TfR, aumentado sua sntese. o que pode ser observado em pacientes com anemia ferropriva que apresentam concentraes sricas elevadas de sTfR.21,22 Um outro membro da famlia de TfR o TfR2, bastante semelhante ao TfR descrito anteriormente, com 66% de similaridade na sequncia de aminocidos, mas que se expressa predominantemente no fgado e em algumas linhagens celulares, como a K562 (eritroleucemia) e HepG2 (hepatoblastoma). Aparentemente, o TfR2 tem atividade de captao do ferro, mas, diferentemente do TfR, tem uma afinidade muito baixa (cerca de 25 vezes menor) pela Tf difrrica.23 Mutaes no TfR2 tm sido descritas em pacientes com hemocromatose hereditria.24 Transporte do ferro mitocondrial A mitocndria essencial para o metabolismo do ferro, j que o nico local onde ocorre a sntese do heme e a biossntese dos clusters Fe-S. Ainda no est totalmente esclarecido como ocorre a entrada do ferro na mitocndria. Um modelo sugere que a liberao poderia ser feita diretamente do endossoma para a mitocndria, desviando do citosol. Em reticulcitos, esse mecanismo estaria presente, conhecido como kiss and run entre as duas organelas. Outra possibilidade seria a presena de um transportador median-

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do essa reao, a mitoferrina (SLC25A37), que tem grande afinidade pelo ferro. Em animais, mutaes na SLC25A37 esto relacionadas com anemia hipocrmica grave, falta de ferro mitocondrial e atraso na diferenciao de eritroblastos imaturos (revisado em 25). Aps o ferro ser transportado atravs da membrana mitocondrial, a frataxina protena localizada na membrana interna e na matriz mitocondrial regula sua utilizao destinando o ferro sntese do heme ou gnese dos clusters Fe-S (Figura 5). A frataxina tem um papel importante ao formar um complexo com o ferro porque previne a formao de radicais livres na mitocndria. Assim, a falta de frataxina promove o acmulo de ferro mitocondrial, em detrimento do ferro citoslico. Pacientes com ataxia de Friedreich apresentam menor atividade de protenas mitocondriais que contm clusters Fe-S. A formao desses clusters crtica para a preveno do acmulo do ferro e do estresse oxidativo.26

Estoque do ferro O ferro fica estocado nas clulas reticuloendoteliais do fgado, bao e medula ssea, nas formas de ferritina e hemossiderina. A apoferritina, a protena livre do ferro, tem uma massa molecular de 46.000 Daltons e composta de 24 subunidades que formam uma concha esfrica. Esse ncleo central pode abrigar at 4.500 tomos de ferro na forma de hidroxifosfato frrico. A apoferritina contendo o ncleo frrico constitui a ferritina, a forma solvel de armazenamento. Assim, a ferritina contm e mantm os tomos de ferro que poderiam formar agregados de precipitados txicos. De acordo com a proporo entre as subunidades de cadeias leves e pesadas, a isoferritina ser mais cida (rica em cadeias pesadas) ou mais bsica (rica em cadeias leves). Essas ltimas predominam nos tecidos comprometidos com a estocagem do ferro, como fgado e bao, enquanto a forma rica em cadeias pesadas predomina nos tecidos do corao e eritrcitos.3,5 A hemossiderina corresponde forma degradada da ferritina, em que a concha proteica foi parcialmente desintegrada, permitindo que o ferro forme agregados. Pode ser visualizada microscopia ptica aps a colorao com azul da Prssia ou reao de Perl, em que a hemossiderina cora com ferrocianeto de potssio na presena de cido clordrico.3 Homeostase do ferro A homeostase do ferro regulada por dois mecanismos principais: um deles intracelular, de acordo com a quantidade de ferro que a clula dispe, e o outro sistmico, onde a HPN tem papel crucial. Regulao intracelular (Figura 3) Para evitar excesso de ferro livre ou falta dele dentro da clula, protenas reguladoras do ferro (IRP1 e IRP2) controlam a expresso ps-transcricional dos genes moduladores da captao e estoque do ferro. Em condies de baixa quantidade de ferro intracelular, essa protenas vo se ligar a estruturas em forma de alas presentes nas regies no codificadoras do mRNA, os IREs, que so sequncias de mRNA constitudas de 30 nucleotdeos altamente conservados que podem estar localizadas nas regies no codificadoras 3' ou 5'. Quando os IREs esto localizados na extremidade 3', a ligao com o IRP protege o mRNA da degradao e prossegue a sntese proteica. A ligao do IRP com o IRE localizado na extremidade 5' inibe a traduo do mRNA em protena, diminuindo sua sntese. Por outro lado, em condies de excesso de ferro intracelular, as IRP seriam inativadas por dois mecanismos distintos: a IRP1, uma protena citoslica bifuncional que contm um cluster Fe-S. Na presena de ferro, a IRP1 age como uma aconitase (interconvertendo citrato e isocitrato), e, na ausncia de ferro, liga-se com grande afinidade aos IREs de vrios transcriptos da homeostase 13

Figura 5. Internalizao do ferro na mitocndria e a regulao exercida pela frataxina na sntese do heme e dos clusters Fe-S. Converso do ferro frrico em ferroso importante para que a ferro quelatase reconhea o ferro e o incorpore ao anel pirrlico para formar o heme

A cadeia respiratria mitocondrial, com suas diversas subunidades envolvidas no transporte de eltrons, importante na converso do ferro frrico em ferroso, nica forma qumica reconhecida pela ferroquelatase para ser incorporada ao anel pirrlico na finalizao da sntese do heme. Mutaes nas subunidades da cadeia respiratria mitocondrial tm sido reconhecidas como responsveis por alguns tipos de anemias sideroblsticas adquiridas. Os transportadores responsveis pela sada do heme da mitocndria no esto bem definidos. Transportadores de membrana conhecidos como ABCB7 localizam-se na membrana interna da mitocndria e exportam os clusters Fe-S para o citosol (revisado em 27).

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do ferro. Por outro lado, a IRP2 inativada por um mecanismo dependente de ferro, e, nas clulas repletas de ferro, no ocorre a ligao IRP2-IRE. Os elementos IRE localizados prximos regio no codificadora 3', quando no ligados ao IRP, permitem que haja a clivagem do mRNA e a sntese proteica interrompida. A no ligao do IRP aos IRE localizados prximos regio 5' permite que o complexo de inicializao da traduo seja ativado, induzindo a sntese proteica.5,28,29 A DMT-1 e a FPN apresentam estruturas "IRE-like", embora a funo dos IREs nesses transportadores de ferro parea ser mais complexa e ainda no totalmente esclarecida. Os nveis de mRNA da DMT-1 aumentam significativamente na deficincia de ferro em modelos experimentais, sugerindo que as IREs na regio 3' podem mediar a expresso da DMT-1, estabilizando seu transcripto por um mecanismo ferro-dependente, embora no de maneira uniforme, entre as diversas clulas. A presena de estruturas "IRE-like" foi confirmada na regio no traduzida 5' do mRNA da FPN. Estudos sugerem que a regulao de sua expresso ocorra em nvel ps-transcricional e mediada pelo sistema IRE-IRP, embora um mecanismo independente do IRE tambm participe da regulao da expresso da FPN em nvel proteico.30 Regulao sistmica Normalmente o ferro eliminado do organismo pelas secrees corpreas, descamao das clulas intestinais e epidermais ou sangramento menstrual. O organismo no possui um mecanismo especfico para eliminar o excesso de ferro absorvido ou acumulado aps a reciclagem do ferro pelos macrfagos. Assim, o controle do equilbrio do ferro requer uma comunicao entre os locais de absoro, utilizao e estoque. Essa comunicao feita pela HPN, um hormnio peptdeo circulante que tem um papel regulatrio fundamental na homeostase do ferro, coordenando o uso e o estoque do ferro com a sua aquisio. Trata-se de um peptdeo antimicrobiano pertencente famlia das defensinas e mediador da imunidade inata, principalmente nos vertebrados inferiores. A atividade antimicrobiana conferida pela propriedade da HPN em romper as membranas microbiais e na restrio da disponibilidade de ferro ao desenvolvimento microbiano.31,32 Nos vertebrados superiores, a sua atividade est muito mais relacionada homeostase do ferro. O papel hormonal da HPN foi descoberto em experimentos animais, em que camundongos deficientes de HPN desenvolviam sobrecarga de ferro, especialmente no fgado, pncreas e corao e, paradoxalmente, apresentavam depleo de ferro nos macrfagos. Por outro lado, animais que superexpressavam a HPN apresentavam anemia microctica-hipocrmica ao nascimento e morriam rapidamente.33 Ficou assim estabelecido que a HPN seria um regulador negativo do metabolismo do ferro. codificada pelo gene HAMP, localizado no brao longo do cromossoma 19 e possui trs exons. sintetizada pelo fgado na forma de um propeptdeo de 84 14

aminocidos (aa) e subsequentemente processada e secretada na circulao, onde detectada no plasma e na urina como um peptdeo de 25 aa. Fragmentos de 22 e 20 peptdeos so tambm encontrados, mas no so biologicamente ativos.34,35 A FPN o receptor da HPN, e a interao HPN-FPN controla os nveis de ferro nos entercitos, hepatcitos e macrfagos. O complexo HPN-FPN internalizado nos domnios da membrana basolateral dos macrfagos. Ocorre ento a fosforilao da tirosina em um dos domnios citoplasmticos da FPN, com internalizao da protena, defosforilao, ubiquitinao e degradao de ambas as protenas no componente lisossomal do endossoma. Desse modo, o ferro no externalizado, levando ao aumento dos nveis de ferro no citosol que sero estocados como ferritina. Como consequncia ocorre o acmulo de ferro nos hepatcitos e macrfagos. A reduo da passagem do ferro para o plasma resulta na baixa saturao da Tf e menos ferro liberado para o desenvolvimento do eritroblasto (Figura 6) (revisado em 16 ). Regulam a expresso da HPN o estado do ferro (a sobrecarga de ferro aumenta sua expresso, enquanto a anemia e hipoxemia reduzem-na) e o estado inflamatrio, em que a IL6 tem um papel fundamental.36 Trabalhos experimentais mostraram que a infuso de IL-6 estimula rapidamente a excreo urinria de HPN e induz hipoferremia. Foi demonstrado que a IL-6 age diretamente nos hepatcitos estimulando a produo de HPN.37 A relao entre a HPC e as doenas com acmulo de ferro, as hemocromatoses, veio do conhecimento que as hemocromatoses hereditrias (HH) primrias cursavam com produo inadequada de HPC em relao aos estoques de ferro no organismo. Bridle et al.38 observaram que nveis de RNAm de HPC em pacientes com HH estavam inapropriadamente baixos para os estoques de ferro. Outros estudos mostraram que indivduos com hemocromatose juvenil apresentavam nveis de HPC urinria muito baixos, a despeito do acmulo do ferro.39 As molculas HFE, hemojuvelina (HJL) e TfR2 regulam a expresso da HPC de acordo com os nveis de ferro circulantes. Havendo aumento dos nveis de ferro elas estimulam a sntese de HPC pelo fgado, que vai inibir a absoro do ferro intestinal e a liberao do ferro dos macrfagos, restabelecendo o equilbrio do ferro. Mutaes nessas protenas causam alteraes nesses mecanismos regulatrios, levando reduo na expresso da HPN 1. Assim, a deficincia de HPC e, consequentemente, o excesso de FPN levariam a uma liberao exagerada de ferro dos entercitos e macrfagos, com contnua absoro intestinal e acmulo de ferro nos tecidos parenquimais. Aparentemente a HJV um correceptor das BMPs (bone morphogenetic protein), citocinas com importantes funes na regulao da proliferao, diferenciao, apoptose e migrao tecidual. A BMP e seu receptor fosforilam protenas intracelulares conhecidas como RSmad. O complexo HJV-BMP2 BMPReceptor (BMPR) deslocado para dentro do ncleo

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Figura 6. Ao da HPN no metabolismo do ferro. Ao formar um complexo com a FPN leva sua degradao. No entercito, o ferro no transportado para o exterior da clula, e a absoro inibida (figura esquerda). Nos macrfagos, o ferro fica acumulado no seu interior, diminuindo o ferro disponvel para a eritropoese(figura direita)

onde ativa a cascata de sinalizao intracelular para aumentar a transcrio dos genes-alvo, estimulando a sntese da HPN (revisado em 40). O caminho de ativao da HFE e da TfR2 no est ainda totalmente esclarecido (Figura 7). As citocinas inflamatrias, em especial a IL-6, induzem a transcrio do gene HAMP pela ativao do Stat3 e da ligao do Stat3 ao elemento regulatrio no gene promotor do HAMP.41,42 A sntese de HCN fisiologicamente suprimida pela matriptase-2, uma protease de membrana ligada serina e codificada pelo gene TMPRSS6. H evidncias que sugerem que, na ausncia do TMPRSS6, h um aumento na concentrao de HPC, com consequente degradao da FPN e interferncia na absoro normal de ferro. Camundongos com erro de splicing no TMPRSS6 apresentam anemia ferropriva grave devido reduzida Figura 7. Regulao da transcrio da hepcidina nos hepatcitos absoro de ferro acompanhada de altos nveis de HPN. 43 Mutaes nesse gene em humanos esto relaponsvel pela clivagem da HJL de membrana, originando cionadas com casos de anemia ferropriva refratria ao vrios fragmentos, interferindo assim com a ao da HJL tratamento com ferro (IRIDA), que apresentam nveis de como correceptora das BMPs, posicionando-os a reagirem HPN inapropriadamente altos.44 Como a matriptase-2 exerce com seus receptores e darem incio cascata de sinalizao sua ao supressora no est ainda totalmente esclarecido, que aumenta a transcrio da HPN. Outro fator repressor mas proposto um modelo em que a matriptase-2 seria resda HPN representado pela sHJL, forma de HJL detectada 15

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no plasma, produto da clivagem da HJL de membrana intracelular pela furina. A sHJL age competindo com a HJL pela BMP. Situaes como deficincia de ferro e hipxia cursam com altos nveis de furina, situaes em que interessante que a HPN no atue para que mais ferro possa ser absorvido pelos entercitos ou mais exportado do sistema reticuloendotelial aumentando a disponibilidade de ferro para a eritropoese (revisado por 45). Embora o conhecimento dos fatores bsicos relacionados s doenas genticas com sobrecarga de ferro date de mais de 50 anos, foi somente nas ltimas dcadas que houve um grande avano nas investigaes a nvel gentico e molecular dos aspectos envolvidos com os processos de aquisio, estoque e regulao do ferro. Esses estudos tm possibilitado um melhor entendimento sobre a fisiopatologia de diversas doenas que cursam tanto com a sobrecarga como com a deficincia de ferro. No entanto, muito ainda h para ser esclarecido e, com o relato constante de novas informaes, espera-se que esses conhecimentos, alm de auxiliarem no entendimento dos mecanismos envolvidos no metabolismo do ferro, possam ser revertidos em novas propostas teraputicas.
Abstract Knowledge of the iron physiology and metabolism has increased greatly over the last few years. The identification of genes and the consequences of mutations, especially those related to the accumulation of iron, have improved the understanding of the regulatory mechanisms responsible for maintaining homeostasis of this essential nutrient in many biochemical processes. The function of several molecules is well established, as in the case of transferrin and its receptor and, in recent decades, new molecules have been identified such as ferroportin, divalent metal transporter, hemojuvelin and hepcidin. An elegant control mechanism maintains the balance between the processes of iron absorption, recycling, mobilization, utilization and storage. Disturbances in the synchronism among those processes may lead either to iron deficiency or to iron overload, both of which have important clinical consequences. This mini-review attempts to describe aspects related to iron metabolism and the participation of several proteins and mediators involved in these mechanisms. Moreover, intracellular and systemic regulation mechanisms responsible for providing the most suitable iron concentration for iron homeostasis maintenance will be presented. Rev. Bras. Hematol. Hemoter. 2010; 32(Supl. 2):8-17. Key words: Iron metabolism; iron deficiency anemia; iron overload; hepcidin; iron homeostasis.

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Agradecimento
Ao Prof. Dr. Ronei Mamoni, brilhante pesquisador e artista, pelas ilustraes dessa reviso.

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O tema foi sugerido e avaliado pelo coeditor deste fascculo educativo, Rodolfo Delfini Canado, e pelo board interno da RBHH, e publicado aps a concordncia do editor, Milton Artur Ruiz. Conflito de interesse: sem conflito de interesse Recebido: 15/12/2009 Aceito: 15/01/2010

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