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Colegio Alain la Florida

Profesor Effrand Vallade

GUA DE LABORATORIO 4medio EXTRACCIN DE ADN

INTRODUCCIN. Todos los seres vivos estamos constituidos por unidades estructurales y funcionales llamadas CLULAS, las que poseen estructuras que les permiten realizar todas las funciones que explican lo que un ser vivo realiza, como respirar o alimentarse. Para explicar el funcionamiento de una clula, sabemos que existe una molcula muy importante en cada una de ellas. A esta molcula la conocemos como ADN (cido desoxirribonucleico), que en el fondo es una molcula que es capaz de llevar informacin de lo que las clulas realizan y de lo que los seres vivos somos, es decir, si poseemos ciertas caractersticas como un color determinado de ojos es por la informacin que porta nuestro propio ADN. Todos los seres vivos poseen esta molcula?, todos la poseemos y as explicamos nuestras diferencias: un len es muy diferente de un pez. Y las plantas tienen ADN ya que ellas tambin son tan diferentes?, claro que s y eso es lo que trataremos de demostrar con este procedimiento.

MATERIALES: Un trozo de coliflor crudo de unos 10 gramos aproximadamente. Este material es elegido debido a que las clulas no presentan pigmentacin que entorpezcan las observaciones que se deben realizar. Un mortero para machacar. Agua. Sal de mesa. 2 tubos de ensayo. Alcohol de 95 o 96 fro. Lava lozas. Azul de metileno. Algodn y gasa. Plastilina o gradilla.

PROCEDIMIENTO: 1- Colocar en el mortero la coliflor, con un poco de agua y una pizca de sal hasta formar una papilla muy homognea sin que se noten trozos de coliflor en ella. Esta parte del procedimiento es para tratar de separar los tejidos que forman a la coliflor y aislar clulas en lo posible. El agua y la sal permitir dejar una solucin isotnica en la que las clulas no puedan deshidratarse ni realizar una lisis celular por entrada de agua al ocurrir osmosis. 2- Poner sobre la mano el trozo de gasa de manera que cubra el espacio que se forma entre el ndice y el pulgar cuando se tocan ambas yemas de los dedos. Sobre la gasa colocar el algodn. 3- Vaciar sobre el algodn la mezcla de coliflor. 4- Filtrar la mezcla en la gasa y el algodn sobre un tubo de ensayo de manera que no pasen partculas slidas, slo lquido. Aqu estamos tratando de separar definitivamente las clulas aisladas con el homogeneizado anterior de restos de tejido entero que quedarn atrapados en el algodn y la gasa. 5- En el tubo de ensayo con la mezcla agregar una cantidad de lava loza equivalente a un tercio aproximadamente del lquido obtenido por filtracin. Las membranas de las clulas se encuentran formadas bsicamente por una doble capa de lpidos que no fue destruida en forma mecnica en el mortero, as que debemos disgregarla utilizando para ello un lquido que acte sobre estas grasas: lava lozas. 6- Mezclar muy suavemente la mezcla de manera que no se forme espuma colocando el pulgar sobre la entrada del tubo y realizando movimientos suaves para mezclar. Evitamos la presencia de espuma para hacer fcil la observacin. La espuma podra entorpecer la aparicin del ADN.

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7- Dejar reposar la mezcla por 10 minutos, colocando el tubo sobre la plastilina y evitar as tenerlo en la mano. El tiempo que se deja en reposo la mezcla es para que el lava lozas pueda actuar sobre las membranas 8- Colocar la mitad del lquido obtenido en el otro tubo de ensayo. Este paso es slo para evitar gastar materiales en exceso y para favorecer la observacin en un tubo de ensayo, de lo contrario el volumen final obtenido sera demasiado. 9- A uno de los tubos agregar el alcohol en una cantidad igual a la del lquido obtenido, en forma suave tambin. El alcohol no se mezclar con el resto del filtrado y formar una fase caracterizada por tener otra densidad y quedar sobre el filtrado. Al existir estas dos fases de diferentes densidades, el ADN deber subir desde el filtrado hasta la fase del alcohol, lo que se favorecer an ms si el alcohol est ms fro. 10- Agregar 2 gotas de azul de metileno y observar la tincin que ocurre. El azul de metileno es una sustancia caracterizada por presentar un pH alcalino o bsico, de manera que es capaz de teir las sustancias cidas como el ADN. Al final del laboratorio, cada alumno debe registrar cada suceso dado, para la elaboracin del informe, que consiste en: PORTADA. [Nombre del laboratorio, nombre del colegio, integrantes, profesor y fecha] INTRODUCCIN y MARCO TERICO. [Como y que teora de aplicaron en el laboratorio] OBJETIVOS. (3 como mnimo). MATERIALES. PROCEDIMIENTO. [Como y que realizaron en el laboratorio, con mximo de detalles] RESULTADOS. [Que incluya todas las observaciones, esquemas con nombres, tablas con los datos de mediciones tomados, etc.] DISCUSIN. [Como se comprueba la teora con el prctico]