Universidad Arturo Michelena. Escuela de Patologa Mdica. Histotecnologa.

Reactivo de Shiff

Integrantes: Ros Rosangel

Siraak Yonny Izaguirre Nelvic Silva Alejandra

San Diego, 25 de Marzo de 2011.

Reacciones histoqumicas basadas en la demostracin de grupos carbonilo formados sobre los hidratos de carbono por oxidacin previa: Reaccin de PAS (periodic acid schiff). Es la reaccin ms comnmente utilizada en histoqumica debido a que: Es de amplia aplicacin en el diagnostico histopatologico rutinario. Puede colorear numerosos componentes bioqumicos (hidratos de carbono o sustancias relacionadas con ellos) Siendo una reaccin poco especifica, puede convertirse en enormemente selectiva mediante los correspondientes controles. Esta tcnica fue descubierta, de forma independiente y prcticamente simultnea, por Hotchkiss, Mcmanus y Lillie.

Fundamentos de la reaccin del PAS:

Consiste en oxidar los tejidos mediante el acido peridico para incrementar el numero de grupos carbonilos (aldehdos o cetonas) presentes en ellos, de forma que puedan ser demostrados posteriormente mediante el reactivo de schiff. Los hidratos de carbono contienen grupos carbonilos relativamente aislados, en una proporcin aproximada de uno por molcula de monosacridos. Precisamente por ello es necesario oxidarlos con el fin de incrementar dichos grupos, que solo pueden ser detectados por el reactivo de schiff si se encuentran situados en carbono contiguos y delimitados por grupos alcoholicos o amino. Para los grupos aldehdos que aparecen en posicin 1,2 glicol estas condiciones se cumplen exclusivamente tras la oxidacin de los correspondientes radicales hidroxilo. El agente oxidante en generalmente al acido peridico, aunque en alguna variante puede utilizarse el acido crmico.

Reactivo de Shiff:
Se obtiene a partir de la fucsina bsica, la cual es tratada con acido sulfuroso, que hace desaparecer un doble enlace existente en el centro de la molecula, transformndose en una sustancia incolora, acido sulfofucsinico o reactivo de Shiff.

Cuando el reactivo de Shiff reacciona con dos grupos aldehidicos contiguos flanqueados por sus respectivos radicales OH aparece de nuevo el doble enlace (grupo cromoforo) y con el, la coloracin rojo fucsina caracterstica. Mediante estudios de espectrofotometra se ha podido concluir que, para un correcto desarrollo de la reaccin, es necesario que ambos grupos aldehicos se encuentren a una distancia cifrada entre 1 y 1.1 nm, similar a la que separa a los radicales bencnicos de la fucsina.

Procedimiento tcnico
Fijacin: formol tamponado al 10 por 100, lquido de Carnoy, liquido de Bouin Soluciones:

Acido peridico al 0.5 por 100 Reactivo Schiff:

Puede adquirirse comercialmente o fabricarse segn el siguiente procedimiento: Fucsina bsica (C.I. 42510) ..1g Agua destilada ..200ml

Llevar hasta ebullicin el agua destilada y aadir la fucsina. Disolver y enfriar a 50 C, filtrar y aadir: Metabisulfito sdico anhidro.1g Acido clorihidrico 1N.20ml

Dejar en reposo 24 horas (la solucin debe tomar un color rosa palido ) y filtrar a travs de carbn activado , lo cual debe decolorarla. Almacenar en el refrigerador.

Bao de acido sulfuroso:

Acido clorihidrico 1 N5ml Meta bisulfico sdico al 10 por 1006ml Agua destilada .100ml

Hematoxilina de Harris

Modo de operar:
1. Desparafinar e hidratar. 2. Acido peryodico al 0.5 por 100, 5 minutos3. Lavado en agua destilada. 4. Reactivo de Schiff, 15 a 30 minutos. 5. Aclarar en tres cambios de bao sulfuroso, 2 minutos en cada uno. 6. Lavar en agua corriente durante 5 minutos. 7. Hematoxilina de Harris, 30 a 50 segundos. 8. Lavar en agua corriente durante 5 minutos. 9. Deshidratar, aclarar y montar.

Resultados
Ncleos.. .Azul Material PASS positivo Rojo oscuro a Magenta (Fucsina)

Compuestos PAS (+)

1. Polisacridos simples: Glucgeno, celosa. 2. Mucopolisacridos neutros: Presentes sobre todo en glndulas de brunner del duodeno, epitelio gstrico y cpsulas bacterianas. 3. Mucoprotenas, que incluyen: Ciertas mucinas del tubo digestivo y del rbol respiratorio o bronquial, tiroglobulina, hormona TSH, gonadotrofinas, cuerpos de Russel de las clulas plasmticas y megacariocitos. 4. Glucoprotenas del suero, membrana basal y fibras de reticulina. 5. Glucolpidos como ganglisidos y cerebrsidos. 6. Determinados pigmentos, como pigmento ceroide y ciertas lipofucsinas.

Compuestos PAS (-) Que, sin embargo, son Hidratos de Carbono.

Mucopolisacridos cidos: Que tienen bloqueados los enlaces 1 y 2 glicol por grupos SO3h0 COOH y no pueden ser oxidados por el cido peridico.