Retculo endoplasmtico

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objetivos

Ao final desta aula, voc dever ser capaz de: Conhecer a morfologia do retculo endoplasmtico, em seus domnios liso e rugoso. Entender as funes do retculo endoplasmtico, correlacionando-as com os diferentes domnios. Entender o mecanismo da sntese de protenas solveis para secreo e protenas transmembrana. Entender o mecanismo de biognese da bicamada lipdica que constitui as membranas celulares.

Pr-requisitos
Bioqumica I: conceito de aminocido, peptdeo, protena. Biologia Celular I: estrutura de membrana, transporte ativo.

Biologia Celular I | Retculo endoplasmtico INTRODUO Na aula anterior, vimos que aproximadamente metade do total de membranas totais de uma clula pertence ao retculo endoplasmtico. O retculo forma uma rede contnua de membranas que ocupa boa parte do citoplasma na maioria das clulas. Se um corante fluorescente, que no atravessa as membranas (portanto no vaza), for injetado com uma agulha bem fina no lmen do retculo, vai se espalhar por todo o espao do lmen, j que este contnuo. Na Figura 16.1 esto as fotos dessa experincia, e a a gente passa a achar que o retculo merece mesmo esse nome!

Figura 16.1: Uma clula de mamfero cujo retculo endoplasmtico teve seu lmen totalmente preenchido por um corante fluorescente. Na foto da direita, uma regio da periferia da clula mostrada em maior ampliao. Foto: Hugh Pelham

A funo mais conhecida do retculo a sntese de protenas de membrana e protenas para secreo; entretanto, esta no sua nica funo importante: a bicamada lipdica que constitui as membranas celulares tambm montada por ele. Nas regies do retculo que esto realizando sntese protica (veja o boxe), ribossomos aderem superfcie voltada para o citossol. Esta regio chamada de retculo rugoso (Figura 16.3). J a biognese (montagem a partir de molculas precursoras) de membranas ocorre em regies desprovidas de ribossomos; esta regio do retculo chamada de retculo liso. Alm dessas funes, o retculo tambm desempenha outras muito importantes, como o controle da homeostase de clcio (voc viu na Aula 14) e alguns processos de detoxificao.

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O retculo e sua sade Na membrana do retculo endoplasmtico liso de algumas clulas existem enzimas capazes de catalisar importantes processos de detoxificao. Elas modificam toxinas lipossolveis, que podem, portanto, atravessar membranas, tornando-as solveis em meio aquoso. Elas podem ser ento excretadas pelas clulas e depois filtradas no rim. As enzimas mais importantes que fazem esse trabalho so as da famlia do citocromo P450.

Apenas recordando Sabemos que todas as protenas celulares so sintetizadas a partir de informaes contidas no DNA. Para cada protena produzido, a partir do DNA, um filamento de RNA-mensageiro (RNAm), que lido pelos ribossomos (Figura 16.2). Os ribossomos tambm so formados por RNA, mas do tipo ribossomal (RNAr). Conforme a fita de RNAm passa pelo ribossomo, aminocidos trazidos por RNAt, ou transportador, so acoplados uns aos outros, formando a cadeia peptdica. A figura a seguir esquematiza as etapas do que conhecido como Dogma central da biologia molecular.

Figura 16.2: A informao contida no DNA transmitida ao RNA na transcrio, que por sua vez serve de molde para a sntese de protenas na traduo.

Morfologia e distribuio do retculo endoplasmtico

As membranas do retculo formam um labirinto de tbulos e cisternas que se distribui por todo o citoplasma (Figura16.3). A membrana externa do envoltrio nuclear tambm parte do retculo, como voc estudar em Biologia Celular II. O retculo muito dinmico e suas membranas esto constantemente se reorganizando. A rede de microtbulos do citoesqueleto (voc ver na Aula 23) contribui para o espalhamento e sustentao dessas membranas.

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Figura16.3: As membranas do domnio rugoso do retculo endoplasmtico (A) possuem ribossomos aderidos ao seu lado voltado para o citoplasma. J no domnio liso do retculo (B), as membranas so desprovidas de ribossomos. Os dois domnios formam um nico compartimento (C) com reas lisas e rugosas, de acordo com a atividade de sntese da clula. Fotos: (A) Lelio Orei, (B) Daniel Friend

Todas as protenas so sintetizadas no retculo?

Aprendemos, e aceitamos sem maiores questionamentos, que as protenas que permanecero solveis no citossol e as que sero direcionadas para organelas como ncleo, mitocndrias ou cloroplastos so sintetizadas em ribossomos livres, enquanto as protenas da membrana plasmtica, do prprio retculo e do complexo de Golgi, alm daquelas que sero secretadas pela clula ou estocadas em compartimentos como os lisossomos, so sintetizadas em ribossomos aderidos ao retculo, formando o retculo rugoso. Cabe, ento, perguntar: Sero os ribossomos aderidos ao retculo diferentes daqueles livres no citossol? No! Todos os ribossomos de uma clula so idnticos e formados, como voc sabe, por duas subunidades que se unem em torno do filamento de RNAm (Figura 16.4).

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Figura 16.4: Os aminocidos que compem as protenas so adicionados de acordo com a leitura (traduo) que os ribossomos fazem ao longo de uma fita de RNA mensageiro. A uma mesma fita podem associar-se muitos ribossomos (polirribossomo ou polissomo) que vo produzindo vrias cpias da mesma protena. Ao final da leitura, as subunidades ribossomais se separam e se incorporam ao conjunto de subunidades ribossomais livres no citossol.

Quando a sntese de uma protena que precisa passar pelo retculo se inicia, os primeiros aminocidos expostos fora do ribossomo constituem uma seqncia sinal. Essa seqncia ento se liga a uma partcula reconhecedora do sinal ou SRP (do ingls Signal Recognition Particle). A membrana do retculo, por sua vez, possui um receptor para o conjunto seqncia de sinal (SRP) (Figura 16.5). A membrana do retculo possui tambm um receptor que forma uma ncora para adeso do ribossomo. A SRP interrompe a sntese das protenas endereadas ao retculo at que o ribossomo esteja acoplado sua membrana. A partir do acoplamento, a cadeia protica continuar sendo sintetizada para dentro do lmen do retculo. Como voc sabe, uma cadeia protica, mesmo ainda no enovelada, no pode atravessar diretamente uma bicamada lipdica. Quando o ribossomo vai se acoplar ao retculo, forma-se um canal hidroflico transmembrana por onde a protena nascente vai passar. Esse canal formado por protenas transmembrana que se agrupam apenas quando o ribossomo vai se acoplar. Esse canal hidroflico recebe o nome de translocon. O ribossomo se ajusta no translocon, de modo que nada mais atravesse o canal alm da cadeia protica e nada vaze do lmen do retculo para o citossol. O ribossomo permanecer aderido at terminar de sintetizar a seqncia primria de aminocidos da protena. No final da sntese, a seqncia sinal cortada por uma enzima especfica. Concluindo, o que define se um ribossomo ficar livre ou aderido ao retculo o tipo de protena (com ou sem seqncia de sinal) que ele estiver sintetizando naquele momento.

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Figura 16.5: Quando uma protena endereada ao retculo comea a ser sintetizada, ela expe uma seqncia sinal que ser reconhecida pela SRP. A SRP interrompe a sntese da protena at ligar-se a uma protena receptora na membrana do retculo. Assim, o ribossomo pode ligar-se ao complexo de translocao, por onde a cadeia polipeptdica penetrar. Ao fim da sntese da cadeia protica, as duas subunidades do ribossomo se soltam da membrana do retculo e se separam, voltando ao estoque citoplasmtico de ribossomos.

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Que tipos de protena so sintetizadas no retculo?

So sintetizadas no retculo protenas transmembrana, isto , aquelas que ficam inseridas na membrana plasmtica, na membrana do complexo de Golgi, de organelas como os lisossomos ou do prprio retculo. Protenas que ficaro solveis em compartimentos, como as enzimas lisossomais, e protenas que sero secretadas, como hormnios ou enzimas digestivas tambm so sintetizadas em ribossomos aderidos ao retculo endoplasmtico.

Como uma protena que est sendo sintetizada chega luz do retculo?
Uma das principais caractersticas da seqncia sinal ser rica em aminocidos hidrofbicos, assim como a regio da SRP qual ela se liga. Uma vez que o ribossomo esteja aderido membrana do retculo (atravs do receptor para SRP), a cadeia polipeptdica em formao se alinha ao translocon (Figura 16.6). Assim, conforme a protena vai crescendo, vai penetrando diretamente na luz do retculo. A seqncia sinal hidrofbica, j livre da ligao SRP, mantm a cadeia protica ancorada parte interna do translocon. Terminada a sntese da protena, a seqncia sinal cortada enzimaticamente e a protena fica livre no lmen do retculo, a partir de onde ter incio um processo de acabamento e endereamento ao seu destino final.

Figura 16.6: Mecanismo de translocao de uma protena para o lmen do retculo endoplasmtico. Para que o esquema fique mais claro, os ribossomos e o RNAm foram omitidos, mas eles esto l!

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Problemas e solues: Como obrigar a cadeia polipeptdica a passar pelo complexo translocador? A ligao da SRP seqncia sinal de transferncia leva o ribossomo a se ancorar na membrana, apontando a cadeia polipeptdica na direo do poro do complexo translocador. Certamente, isso ajuda a direcionar a cadeia para dentro do retculo, mas o que obriga a cadeia nascente a passar pelo translocon o seu prprio crescimento: medida que o peptdio vai sendo sintetizado junto ao ribossomo, a outra extremidade vai sendo translocada pelo poro.

Como as protenas transmembrana atravessam a bicamada lipdica?

As protenas que atravessam a bicamada lipdica possuem seqncias ricas em aminocidos hidrofbicos no meio da cadeia primria de aminocidos. Assim, alm da seqncia sinal inicial, que prende a protena nascente ao translocon, uma segunda seqncia hidrofbica impedir que a cadeia penetre integralmente atravs do poro aquoso, fazendo com que uma parte da protena se projete para o citossol (Figura 16.7). Da mesma forma que no caso anterior, a seqncia sinal inicial clivada enzimaticamente ao fim do processo. interessante notar que a seqncia sinal inicial atua como um marco que sinaliza a transferncia da cadeia protica nascente para o lmen do retculo, enquanto a segunda seqncia hidrofbica atua como um sinal de parada dessa transferncia. O complexo translocador, por sua vez, abre-se, permitindo que essas seqncias hidrofbicas de incio e interrupo da transferncia fiquem em contato com a bicamada lipdica. Assim se insere na membrana uma protena unipasso (Figura 16.7).

Figura 16.7: As protenas transmembrana unipasso possuem, alm da seqncia sinal, um segmento da cadeia rico em aminocidos hidrofbicos que ficar em contato com a bicapa lipdica. O restante da cadeia primria de aminocidos ficar exposto do lado da membrana voltado para o citossol. Ao final da sntese, a seqncia sinal clivada por uma enzima. 50 CEDERJ

E as protenas multipasso?
Entendido o processo de insero de uma protena unipasso, fica fcil imaginar como uma cadeia peptdica pode atravessar muitas vezes a bicamada lipdica, como fazem as protenas multipasso (veja na Aula 8). Essas possuem seqncias de incio e interrupo da transferncia que se alternam ao longo da cadeia em crescimento (Figura 16.8).

Figura 16.8: As protenas multipasso alteram seqncia de incio (start) e interrupo (stop) da transferncia que resultam em muitas passagens pela membrana.

Detalhe importante: Os processos de sntese e insero de protenas no retculo descritos at agora resultam em insero da protena pela extremidade NH2 (amino), ficando a terminao COOH (carboxila) sempre voltada para o citossol. No fique pensando que todas as protenas so assim. Muitas tm a extremidade COOH voltada para o exterior e outras possuem as duas extremidades da cadeia voltadas para o mesmo lado da membrana. Isso acontece quando a seqncia de transferncia est inserida no meio da cadeia peptdica, deixando de fora do retculo justo a extremidade NH2. A posio em que as seqncias de incio e interrupo da transferncia ocupam na cadeia em formao far toda a diferena (Figura16.9).

Figura 16.9: Formao de uma protena duplo passo. Repare que, neste exemplo, a seqncia de iniciao (sinal inicial) no est na ponta da protena, fazendo com que as duas extremidades da cadeia (amino e carboxila) fiquem voltadas para o mesmo lado da membrana, no caso, o citossol. O sinal de interromper a transferncia a segunda seqncia de ancoragem membrana. CEDERJ 51

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Biologia Celular I | Retculo endoplasmtico Terminada a sntese da cadeia polipeptdica primria, a protena ainda no pode ser considerada pronta. As seqncias sinal, por exemplo, so clivadas e eliminadas da protena final. Esse processo de finalizao da protena envolve vrias protenas auxiliares, responsveis pelo correto dobramento da cadeia, a adio de acares e outros processos que sero detalhados na prxima aula.

O retculo liso e a biognese da bicamada lipdica

Embora na maioria das clulas a superfcie do retculo esteja quase todo o tempo associada a ribossomos, sendo, portanto, chamada de retculo rugoso, todos os lipdeos de todas as membranas celulares so associados no retculo endoplasmtico liso (Figura 16.3 B, C). Os termos liso e rugoso se referem a estados funcionais transitrios das membranas do retculo. O compartimento delimitado por essas membranas nico. Assim, podemos dizer que um retculo no rugoso, ele est rugoso (a mesma coisa se aplica ao estado liso).

Figura 16.10: A fosfatidilcolina formada por um conjunto de reaes que rene a colina, o glicerol fosfato e dois cidos graxos numa nica molcula.

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Todas as enzimas responsveis por catalisar a sntese de fosfolipdeos se localizam na membrana do retculo do lado voltado para o citossol, onde esto as molculas precursoras colina, glicerol fosfato e cidos graxos (Figura 16.10). Com isso, todos os lipdeos sintetizados sero inicialmente adicionados ao lado da bicamada voltados para o citossol. Se lembrarmos que uma membrana uma bicamada lipdica em que as quantidades de lipdeo em cada camada equivalente, assim como as reas ocupadas por eles, no retculo liso deveria haver um desequilbrio entre as duas camadas (Figura 16.11).

Figura 16.11: Desequilbrio de rea hipottica das camadas do retculo endoplasmtico liso quando da montagem da membrana (se voc j leu O Pequeno Prncipe, de Antoine Saint-Exupry, certamente lembrou da cobra que engoliu o elefante...).

Esse desequilbrio de rea que teoricamente deveria existir nunca foi realmente observado. Assim, acredita-se que ele muito rpido, sendo imediatamente corrigido por uma enzima chamada scramblase (veja o boxe), capaz de flipar um fosfolipdeo, translocando-o para a face da membrana voltada para a luz do retculo (Figura 16.12). O fosfolipdeo sintetizado em maior quantidade a fosfatidilcolina (Figura 16.10). Essa produzida pela adio de colina a duas cadeias de cido graxo e uma molcula de glicerol fosfato.

Humor e cincia Quem acha que os cientistas so pessoas sisudas, que encaram a cincia como coisa muito sria, com a qual no se brinca, est muito enganado. Um exemplo de como se pode fazer cincia sria sem perder o senso de humor a enzima scramblase. Ao ser batizada, seus descobridores compararam sua atividade do cozinheiro que vira um ovo na chapa para que frite dos dois lados. So o que chamamos de ovos mexidos, para os pesquisadores de lngua inglesa: scrambled eggs.

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Figura 16.12: Novos lipdeos so adicionados sempre do lado da membrana do retculo voltado para o citossol. Com isso, s esse folheto tenderia a crescer. A distribuio de lipdeos entre os dois folhetos equilibrada pela enzima scramblase, que os distribui pelos dois folhetos da bicamada lipdica.

Outros lipdeos, como a fosfatidiletanolamina, a fosfatidilserina e o fosfatidilinositol, so sintetizados e acrescentados membrana dessa mesma forma. A ao da scramblase tende a equilibrar o nmero de molculas em cada folheto da bicamada e a homogeneizar os dois lados da bicamada, flipando os diversos tipos de fosfolipdeos aleatoriamente. Entretanto, conforme comentamos na Aula 7, a bicamada lipdica da membrana plasmtica assimtrica, isto , alguns tipos de lipdeos s so encontrados na face voltada para o citossol, enquanto outros s existem no folheto voltado para o meio extracelular (Figura 16.13).

Figura 16.13: Assimetria da bicamada lipdica: a fosfatidilserina (negativa) s existe no lado voltado para o citossol, e os glicolipdeos (hexgonos), s no lado externo.

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Essa assimetria resulta de uma outra classe de enzimas, as flipases. As flipases atuam na membrana plasmtica e, seletivamente, viram fosfatidilserina e fosfatidiletanolamina do folheto externo para o folheto voltado para o citossol. Enquanto as flipases gastam energia para realizar a transferncia de fosfolipdeos entre os folhetos da bicamada, as scramblases se valem da prpria energia da sntese. A incorporao de colesterol membrana tambm ocorre no retculo liso. A maioria do colesterol vem pronto na dieta e s precisa ser disponibilizado (aguarde a Aula 20). Ele sintetizado em apenas algumas clulas animais, principalmente hepatcitos. Apenas uma pequena parte inserida na membrana do retculo liso. A maior parte secretada em associao com molculas hidroflicas, servindo de precursor para vrios outros esteris. Nessas clulas, o domnio liso do retculo muito mais abundante. O retculo tambm responsvel pela sntese de outros lipdeos. Entre os mais importantes temos as ceramidas, que so depois enviadas para o complexo de Golgi (prxima aula), onde servem de precursoras de glicoesfingolipdeos e a esfingomielina. A membrana plasmtica, a dos lisossomos, do complexo de Golgi, dos endossomas e a prpria membrana do retculo so todas sintetizadas por ele. Alm disso, mitocndrias e peroxissomos tambm dependem de lipdeos que so inicialmente sintetizados no retculo e transferidos por protenas transportadoras especficas para as membranas dessas organelas (Figura 16.14). A partir dessa incorporao essas organelas crescem, podendo depois se dividir.

Figura 16.14: Mecanismo de importao de fosfolipdeos para a membrana mitocondrial.

Como o material sintetizado sai do retculo endoplasmtico?

As novas protenas, solveis no lmen do retculo ou as transmembrana, inseridas na membrana do retculo, saem dessa organela em vesculas. Essas vesculas no partem de qualquer lugar do retculo. Parece haver uma regio de sada, os elementos transicionais, uma rea do retculo onde se misturam os domnios liso e rugoso, capaz de fazer brotamento de vesculas, que se dirigem ento ao complexo de Golgi e da para outros compartimentos. Ns vamos junto com elas!
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RESUMO
O retculo endoplasmtico uma rede contnua de membranas, ocupando a maior parte do citoplasma, e tem domnios liso e rugoso. Dentre as mais importantes funes do retculo endoplasmtico esto a sntese de protenas de membrana e para secreo, no domnio rugoso; a biognese da membrana, no domnio liso, e a manuteno da homeostase de clcio. Os ribossomos que fazem a sntese de protenas no citoplasma e os que fazem a sntese associados ao retculo so os mesmos, o que muda so as caractersticas da cadeia protica que est sendo sintetizada. Os primeiros aminocidos da cadeia peptdica das protenas que devem ser sintetizadas para dentro do retculo formam uma seqncia sinal que reconhecida por um receptor citoplasmtico (SRP) que dirige o ribossomo para o retculo. No final da sntese, a seqncia sinal cortada da cadeia protica, que fica solta no lmen do retculo. Protenas transmembrana, alm da seqncia de sinal que as dirige ao retculo, tm uma seqncia hidrofbica de ancoragem que as prende bicamada lipdica. As membranas plasmtica e dos compartimentos que se comunicam, como retculo, complexo de Golgi, endossomos e lisossomos, so montadas no retculo endoplasmtico liso. Nesse processo, a membrana preexistente aumenta de extenso porque a elas so acrescentados novos fosfolipdeos, sintetizados a partir de precur-sores citoplasmticos. Como os novos fosfolipdeos so todos acrescentados ao lado citoslico da membrana do retculo liso, metade dos fosfolipdeos translocada para o outro lado por scramblases. J na membrana plasmtica, enzimas mais especficas, as flipases, translocam seletivamente fosfatidilserina e fosfatidiletanolamina para o folheto citoslico. Os fosfolipdeos das membranas de mitocndrias e peroxissomos so transportados um a um, a partir do retculo liso para a organela a que se destinam.

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EXERCCIOS
1. Quais as funes do retculo endoplasmtico? 2. Por que dizemos que o retculo no rugoso e, sim, que est rugoso? 3. Qual a diferena entre ribossomos aderidos ao retculo e livres no citoplasma? 4. Como a seqncia de endereamento reconhecida? 5. Se os ribossomos aderem ao lado citoplasmtico da membrana do retculo como a protena vai separar dele? 6. Como as protenas transmembrana atravessam a bicamada lipdica? 7. Qual o destino da seqncia sinal que direciona a protena para o retculo? 8. Como se formam as protenas multipasso? 9. Como so sintetizadas as bicamadas lipdicas? 10. Como feita a importao de lipdeos para a membrana mitocondrial?

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