El anlisis de polimorfismo de Pro12Ala PPAR gamma y la infeccin por Helicobacter pylori en el adenocarcinoma gstrico y la lcera pptica

Helicobacter pylori ha sido clasificada como una de las principales causas de la enfermedad de lcera pptica (PUD) y un factor de riesgo para el adenocarcinoma gstrico y linfoma asociado a la mucosa del tejido linfoide. A escala mundial, el cncer gstrico es el cncer ms comn en segundo lugar en el mundo. Existe una variacin internacional considerable en la incidencia de cncer gstrico con las tasas ms altas de China, Japn y otros pases asiticos orientales. Los estudios epidemiolgicos han demostrado que el H. pylori se considera como factor de riesgo para el cncer gstrico y de la Salud Organizacin Mundial de la Agencia Internacional de Investigacin sobre el Cncer ha clasificado a esta bacteria como un cancergeno definido .Sin embargo, mientras que la mayora de las personas infectadas no desarrollan la enfermedad clnica significativa, a otros a desarrollar dos tipos de cncer de los resultados clnicos divergentes-PUD y gstrico. Las razones para el desarrollo de estos dos fenotipos extremos siguen siendo poco conocidos y no se explica por factores de virulencia bacteriana por s solas. Esto pone de relieve la necesidad de estudiar los posibles genes candidatos de la acogida que participe en el H. pylori asociada a la carcinognesis gstrica. Peroxisoma proliferador activado del receptor gamma (PPAR) es un miembro de la superfamilia de receptores nucleares que regula la diferenciacin de los adipocitos, la absorcin de cidos grasos y el almacenamiento]. La expresin de PPAR humano fue descrita por primera vez en las clulas hematopoyticas y ms tarde tambin en el bazo, hgado, testculos, msculo esqueltico y el cerebro .PPAR existe como dos isoformas, 1 y 2, generadas por los promotores alternativos y empalme diferencial de al menos tres diferentes transcripciones del gen PPAR en el cromosoma 3p25. PPAR2 es la isoforma ms importante en el tejido adiposo, donde se expresa casi exclusivamente .Varios polimorfismos en PPAR2 se han identificado hasta el momento. Slo unos pocos, sin embargo, parecan tener un efecto funcional en la transcripcin.Recientemente, Yen et al. inform de un comn C> G polimorfismo localizado en el codn 12 del exn B del gen PPAR , que codifica el polipptido aminoterminal que define la isoforma PPAR2, da como resultado una sustitucin Pro12Ala. Con los fuertes efectos de PPAR sobre el crecimiento de clulas cancerosas, el papel del polimorfismo Pro12Ala ha sido estudiado recientemente en el cncer Los individuos con el alelo Ala12 se encontr que tenan un riesgo reducido de cncer colorrectal. Una observacin similar, sin embargo, no se pudo establecer en el cncer de prstata , cncer de endometrio, el adenoma colorrectal espordico y el cncer gstrico .Hay poca informacin disponible sobre las interacciones de polimorfismo PPAR y el riesgo de cncer gstrico. El objetivo del presente estudio fue determinar el papel del polimorfismo PPAR Pro12Ala y H. pyloriinfeccin en los pacientes con adenocarcinoma gstrico y lcera pptica.

Materiales y mtodos
estudio de la poblacin

Se incluy a 348 pacientes adultos [62 adenocarcinoma gstrico, PUD 45 y 241 dispepsia no ulcerosa (DNU)] que fueron sometidos a endoscopia digestiva alta en dos centros de referencia terciarios en el norte de la India entre septiembre de 2002 y mayo de 2007. El diagnstico de las enfermedades gastroduodenales fue sobre la base de exmenes clnicos, endoscpicos e histopatolgicos. Los pacientes con DNU fueron considerados como controles en nuestro estudio. El comit de tica del instituto emisor de la homologacin para el estudio y el consentimiento se obtuvo de todos los pacientes. Los sujetos que haban recibido la terapia antimicrobiana, H2 bloqueadores de los receptores, los inhibidores de la bomba de protones y los antiinflamatorios no anti-inflamatorios en los precedentes 30 das antes de la endoscopia o anti-H. el tratamiento pylori en el pasado fueron excluidos de este estudio. deteccin de H. pylori infeccin Durante cada una endoscopia, biopsias antrales fueron obtenidos y sometidos a las pruebas siguientes: prueba de ureasa rpida, la cultura, la histopatologa y H.pylori especfica ureA PCR siguiendo el protocolo estndar como se describe anteriormente . Pro12Ala PPAR polimorfismo

ADN genmico se aisl de los tejidos gstricos utilizando el QIAamp DNA mini kit (Qiagen, Hilden, Alemania) segn las instrucciones del fabricante. El anlisis de polimorfismo de Pro12Ala PPAR fue determinada por PCR basada en el polimorfismo de longitud de fragmentos de restriccin (PCR-RFLP) como se describi previamente [ 17 ]. Las secuencias de los cebadores de PCR fueron las siguientes: 5'-GCC AAT TCA AGC CCA GTC-3 'y revertir 5'-ATG TTT GCA GAT GAC AGT GTA TCA GTG AAG CTT TCC GAA TCG -3 g' (Metabion, Martinsried, Deutschland). Las condiciones de PCR fueron las siguientes: una desnaturalizacin inicial a 94 C durante 5 min, seguido por 35 ciclos de desnaturalizacin a 94 C durante 30 s, hibridacin a 51 C durante 40 s, y extensin a 72 C durante 40 s. La extensin final se continu a 72 C durante 10 minutos y enfriar a 4 C. Plantilla libre de agua se utiliz como control negativo. Despus de la amplificacin, los productos de PCR purificado se sometieron a digestin de restriccin por la endonucleasa de restriccin B de interfaz de usuario (Fermentas, Vilnius, Lituania) durante 8 horas a 60 C. Los fragmentos de ADN se separaron en electroforesis en gel de agarosa al 2%.Tamaos de los fragmentos de 227 pb y 43 indica la presencia de un genotipo GG homocigtico (Ala12Ala), un nico fragmento de 270-pb indic la presencia de tipo salvaje genotipo CC homocigtico (Pro12Pro) y tres fragmentos de 270, 227 y 43 pb indic el presencia de heterocigotos CG genotipo (Pro12Ala) . Todos los experimentos se repitieron dos veces para la confirmacin de los resultados de RFLP.

Figura 1.

Basado en la PCR de fragmentos de restriccin polimorfismo de longitud de anlisis de Pro12Ala peroxisoma activado por proliferador de polimorfismo del receptor gamma; carril 1: escalera de 100 bp de ADN, carril 2: producto de PCR (sin digerir), carril 3: control negativo, carriles 4-6: genotipo GG homocigotos, carriles 7-9: heterocigotos genotipo CG, carriles 10-12: genotipo CC homocigotos.
anlisis estadstico

El anlisis de los datos fue realizada por el software SPSS (versin 12.0, SPSS Inc., Chicago, IL). La asociacin de H. pylori en relacin con las enfermedades gastroduodenales se llev a cabo mediante la prueba de chicuadrado.Multivariante de regresin logstica se utiliza para identificar los factores de riesgo independientes para el adenocarcinoma gstrico y lcera pptica. Gnero y la edad fueron incluidos en el anlisis de regresin, y la evaluacin de la interaccin fue considerado en el modelo. Un valor de dos lados P <0,05 fue considerado significativo.

resultados
las caractersticas del paciente

Un total de 348 pacientes (edad media de 46,78 15,96 aos; 216 hombres) fueron incluidos en el estudio y su distribucin son los siguientes: adenocarcinoma gstrico 62 (edad media de 56,60 15,42 aos; 47 varones), PUD 45 (edad media de 49,47 17.22 aos, 31 hombres) y el DNU 241 (edad media de 43,75 14,76 aos; 138 hombres)
deteccin de H. pylori infeccin

La prevalencia de H. pylori en la poblacin estudiada fue de 58,6%. H. pylori fue significativamente mayor en pacientes con lcera pptica que con adenocarcinoma gstrico (80% frente a 56,5%, P = 0,01) y el DNU (80% frente a 55,2%, P = 0,002) Pro12Ala PPAR polimorfismo Distribuciones genotpicas de los pacientes con adenocarcinoma gstrico, PUD y NUD de Hardy-Weinberg. La asociacin potencial de polimorfismo PPARPro12Ala en pacientes con enfermedades gastroduodenales La presencia de portadora G fue casi similar en los pacientes con adenocarcinoma gstrico y lcera pptica. La frecuencia de la portadora G fue significativamente mayor en pacientes con adenocarcinoma gstrico [37,1% versus 22,8%, P = 0,023, odds ratio (OR) = 2,14, IC 95% = 1,11-4,10] y PUD (37,8% frente a 22,8%, P = 0,028, OR = 2,17, IC 95% = 1.9 a 4.31) en comparacin con DNU.

interaccin entre H. pylori infeccin y Pro12Ala PPAR polimorfismo

Tambin se examin la interaccin potencial entre el H. pylori la infeccin y el polimorfismo Pro12Ala PPAR para el desarrollo de adenocarcinoma gstrico y lcera pptica en nuestra poblacin. Presencia de soporte G con H. pyloriaument significativamente el riesgo para el desarrollo de adenocarcinoma gstrico (p = 0,020, OR = 3,05, IC 95%: 1,21 a 7,81 =) y PUD (P <0,001, OR = 11,16, IC 95% = 3,49 a 35,64). Curiosamente, el riesgo no fue mayor en H.pylori-negativos los individuos con cncer gstrico (p = 0,682, OR = 1,23, IC 95% = 0,46 a 3,32) y PUD (p = 0,944, OR = 1,06, IC 95% = 0,19 a 5.86)

discusin
Hemos investigado la posible asociacin del polimorfismo PPAR Pro12Ala y H.pylori infeccin con adenocarcinoma gstrico y lcera pptica. Nos informan de que el polimorfismo PPAR Pro12Ala en la presencia de H. pylori podra ser un marcador de susceptibilidad gentica a adenocarcinoma gstrico y lcera pptica. PPARs representan una familia de receptores nucleares que estn estrechamente relacionados con la tiroides o receptores de retinoides. Tres subtipos de PPAR (PPAR, PPAR y PPAR) han sido identificados hasta la fecha. PPAR, sin embargo, es el ms ampliamente estudiado de los tres subtipos de PPAR hasta la fecha. Tras la unin del ligando, PPAR activa la transcripcin de muchos genes de respuesta a PPAR implicados en la regulacin de la diferenciacin de los adipocitos, la mejora de los tejidos diana a la insulina, la inflamacin, el control del ciclo celular y la carcinognesis . PPAR se expres tanto en el cncer y el epitelio gstrico normal, la activacin de PPAR inhibe el crecimiento e induce la apoptosis de las clulas de cncer gstrico. Lu y col. demostraron que el tratamiento con el ligando PPAR troglitazona reduce sustancialmente el desarrollo de cncer gstrico en ratones inducidos por carcingenos. Ms interesante an, el efecto quimiopreventivo de troglitazona estuvo ausente en los heterocigotos PPAR-deficiente (+ / -) ratones, sino que sugiere la importancia de los receptores PPAR funcionales en la prevencin de la aparicin del cncer gstrico. Presencia del polimorfismo Ala12, que est asociado con la actividad PPAR reducida, puede aumentar el riesgo de adenocarcinoma gstrico. PPAR puede modular la respuesta inflamatoria de las clulas husped crnica asociadas con H. pylori infeccin. La activacin de la va PPAR atena la capacidad de H. pylori para inducir la NF-kappa B mediada por apoptosis en las clulas epiteliales gstricas . Se puede especular que H. pylori y el polimorfismo PPAR mejorar an ms la resistencia a la apoptosis que finalmente resulta en la proliferacin celular En nuestro estudio, los portadores G (Ala12) eran con frecuencia presentes en el adenocarcinoma gstrico en comparacin con los controles Hemos encontrado que los pacientes con portadores del G tena 2,14 veces (IC 95% = 1.11 a 4.10) mayor riesgo de progresin a adenocarcinoma gstrico. Tahara et al. se describe una de 2.4 veces mayor de adenocarcinoma gstrico riesgo debido a la Ala12 polimorfismo. Liao et al. inform de riesgo casi 2,5 veces mayor de progresin a adenocarcinoma gstrico. Parece que el riesgo para el desarrollo de adenocarcinoma gstrico relacionado con el polimorfismo PPARPro12Ala en nuestra poblacin es similar a los de otros estudios publicados.Cuando analizamos la combinacin de la compaa G y H. pylori en pacientes con adenocarcinoma gstrico, el riesgo se increment (P = 0,020, OR = 3,05, IC 95% = 1,21-7,81). El riesgo, sin embargo, no se increment en H. pylori-negativas (p = 0,682, OR = 1,23, IC 95%: 1,21 a 7,81 =). El presente estudio muestra claramente que los portadores G en la presencia de H. pylori son susceptibles de desarrollar adenocarcinoma gstrico. Hasta ahora, slo un estudio realizado en China haba analizado la asociacin entre el H. pylori y el polimorfismo Pro12Ala PPAR en el desarrollo de adenocarcinoma gstrico y report 12,8 veces en el riesgo . El aumento del riesgo en el estudio chino puede estar relacionado con la alta prevalencia de H. pylori en el adenocarcinoma gstrico (81,7%) en comparacin con los pacientes (56,5%). La razn de tal diferencia en H. infeccin por Helicobacter pylori entre los estudios chinos y el presente puede ser debido a diferentes mtodos utilizados para la deteccin de H. pylori infeccin. La presencia de anticuerpos anti-H. pyloriinmunoglobulina G fueron los criterios diagnsticos en el estudio realizado en China, mientras que en el presente estudio H. pylori se diagnostica sobre la base de tejido gstrico, que se considera ms especfica. Tambin se analiz la asociacin del polimorfismo PPAR Pro12Ala y H. pyloriinfeccin por el PUD. Hemos encontrado que los pacientes con portadores del G ha aumentado el riesgo de lcera pptica (P = 0,028, OR = 2,17, IC 95% = 1.9 a 4.31). Cuando analizamos la combinacin de la compaa G y H. pylori, el riesgo aument a 11,16 veces en el H. pylori positivos individuos (P <0,001, OR = 11,16, IC 95% = 3,49 a 35,64), sin embargo, el riesgo no aument en H. pylori-negativas (p = 0,944, OR = 1,06, IC 95% = 0,19-5,86) No hay datos disponibles en la literatura para comparar nuestras observaciones con. A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer estudio que muestra que los pacientes con portadores de G Pro12Ala polimorfismo de PPAR son susceptibles a desarrollar PUD en la presencia de H. pylori infeccin. En conclusin, el estudio sugiere que el polimorfismo Pro12Ala PPAR podra ser un marcador potencial de la susceptibilidad gentica a adenocarcinoma gstrico en la presencia de H. pylori infeccin. Tambin informar por

primera vez, los pacientes con H. pylori y el polimorfismo Pro12Ala PPAR han aumentado el riesgo de desarrollar PUD. Por lo tanto, el polimorfismo Pro12Ala PPAR podra ser til para predecir el riesgo de adenocarcinoma gstrico y PUD en la presencia deH. pylori infeccin. Otros estudios sobre los diferentes grupos tnicos son necesarios para confirmar la asociacin de este polimorfismo con el riesgo de adenocarcinoma gstrico y lcera pptica.

financiamiento
Consejo de Ciencia y Tecnologa del Gobierno de Uttar Pradesh, India (CST/SERPD/D-3402), Consejo Indio de Investigacin Mdica, Nueva Delhi, India (80/512/2004-ECD-I a AS). El autor, 2008. Publicado por Oxford University Press en nombre de la Sociedad Europea de Oncologa
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