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FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

Unidad Temtica 6

Gentica microbiana
Benintende, S.; Pretto, G. Y Musante, C

Aspectos bsicos de la gentica microbiana El genoma bacteriano est compuesto por un nico cromosoma de ADN circular cerrado. Adems poseen estructuras denominadas plsmidos constituidas tambin por ADN, que se encuentran en nmero variable en la clula bacteriana. Las bacterias se multiplican mediante un proceso denominado fisin binaria- por el cual, previa duplicacin del cromosoma bacteriano, se produce una estrangulacin del protoplasma de modo que se originan dos clulas idnticas (o clones) con un cromosoma cada una y una cantidad similar de plsmidos. Esta forma de reproduccin asexual no produce cambios en el genoma. Como consecuencia todos los organismos de una colonia bacteriana son genticamente idnticos a la clula que les dio origen (clula progenitora). Sin embargo la variabilidad gentica tambin se presenta en las bacterias, aunque en una proporcin muy baja. El genoma bacteriano puede sufrir variaciones debido a procesos denominados mutaciones, mediante los cuales se origina un cambio heredable en la secuencia de bases del ADN. Estos cambios son pequeos pero suficientes para generar individuos genticamente diferentes a sus clulas progenitoras. La variacin en la constitucin gentica se puede dar por dos procesos: la mutacin y la recombinacin gentica. La mutacin origina un cambio heredable en la secuencia de bases del ADN bacteriano, mientras que la recombinacin gentica involucra la transferencia de ADN entre una bacteria donadora y otra receptora y la integracin del material transferido al genoma de la bacteria receptora. Mutaciones Durante la replicacin del genoma bacteriano, a veces ocurren cambios, ya sea en forma espontnea o artificial. Estos cambios heredables en la secuencia de bases del ADN, se denominan mutaciones. El organismo resultante de una mutacin tendr una constitucin gentica diferente a la de la cepa progenitora y se denomina cepa mutante. Las mutaciones pueden implicar solamente el cambio en un solo par de bases en el ADN de la clula o pueden producir un cambio que se extiende a un cierto nmero de pares de bases o hasta genes completos. El cambio en genoma bacteriano puede modificar, o no, la apariencia o funcionalidad de la cepa mutante respecto de su progenitora. En la mayora de los casos las mutaciones producen individuos que no pueden adaptarse y desaparecen. Una mutacin puede tener efectos diferentes segn cmo se produzca. Por ejemplo: La sustitucin de una base por otra en la cadena de ADN, no significa necesariamente un cambio en el aminocido que codificar dicha porcin del genoma y por lo tanto no producir ningn cambio en la apariencia o funcionalidad de la bacteria. Este tipo de mutaciones se denominan mutaciones silenciosas Las mutaciones producidas por deleciones o inserciones de fragmentos de ADN pueden afectar la capacidad de formar una protena y por lo tanto producir una alteracin en la apariencia o funcionalidad de la clula.. Las mutaciones se dan en forma espontnea con una frecuencia muy baja. Normalmente una de cada 108 clulas de una poblacin contiene una mutacin detectable
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en un gen determinado. Sin embargo esta frecuencia puede aumentar notablemente por accin de agentes denominados mutgenos o mutagnicos. Estos agentes pueden ser qumicos, fsicos o biolgicos. Los mutgenos qumicos son sustancias semejantes a las bases pricas o pirimidnicas y las reemplazan originando el cambio en la secuencia de ADN. Dentro de los mutgenos fsicos se encuentran las radiaciones ionizantes (rayos x, rayos gamma y csmicos) y las no ionizantes (radiacin ultravioleta). Intercambio y recombinacin gentica El intercambio gentico entre procariontes se realiza a travs de la transferencia de una porcin del genoma de una clula donadora a otra receptora. No es un paso obligado para completar el ciclo biolgico del organismo, sino ms bien un proceso ocasional que ocurre por tres mecanismos diferentes: transformacin, transduccin y conjugacin. En el caso de la transformacin. se libera ADN de las clulas al medio circundante y las clulas receptoras lo incorporan tomndolo de esta disolucin. En la transduccin se transfiere ADN de una clula procaritica a otra como consecuencia de la formacin de un virin defectuoso de un bacterifago, en el cual parte o todo su complemento normal de ADN se sustituye por ADN bacteriano (ADN de la clula donadora). Cuando este fago defectuoso se fija a otra clula bacteriana (clula receptora) y le introduce este ADN, se produce el intercambio gentico. La conjugacin implica un intercambio gentico entre dos clulas que se hallan en contacto directo, mediante un proceso que, en todos los casos conocidos, est codificado por genes situados en plsmidos. Habitualmente por este proceso slo es transferido el propio plsmido desde la clula donadora a la receptora, pero a veces se transfieren tambin genes del cromosoma bacteriano. Transformacin En el proceso de transformacin se libera ADN de las bacterias (clulas donadoras) al medio circundante y las clulas receptoras lo incorporan de esta disolucin. Las clulas que poseen la capacidad de ser transformadas, es decir, que pueden incorporar el ADN que se encuentra en su ambiente, se denominan clulas o bacterias competentes. En un gran nmero de bacterias, la entrada al estado competente est codificada por el cromosoma bacteriano y est marcada por ciertas condiciones ambientales. Estas bacterias son capaces de sufrir una transformacin natural. Otras bacterias slo pueden hacerse competentes mediante una serie de tratamientos artificiales (por ejemplo: exposicin a altas concentraciones de cationes divalentes). Tales mecanismos de transformacin se denominan transformacin artificial. La transformacin est mediada por alrededor de 12 protenas, que le permiten a las clulas absorber ADN bicatenario en distintos sitios de su superficie externa y cortarlo en fragmentos ms pequeos por accin de enzimas unidas a la superficie de la bacteria. Luego una cadena del fragmento es digerida por una enzima nucleasa, la otra penetra en la clula unida a una protena de unin al ADN especfica. El ADN slo se integrar al cromosoma de la bacteria receptora si es homlogo, originando un individuo genticamente diferente.

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Figura 1: Proceso de transformacin bacteriana.

Transduccin En ocasiones ocurren fallos durante el desarrollo intracelular de ciertos bacterifagos y se producen viriones defectuosos denominados partculas transductoras. Estas partculas contienen ADN del genoma bacteriano reemplazando una parte o todo el complemento normal de ADN del fago, pero su cpside es la que determina la capacidad de adherirse a una clula bacteriana sensible e inyectar el ADN en su interior. De esta forma, la partcula transductora puede introducir ADN bacteriano de la clula en la que se desarroll en otra clula sensible, dando como resultado la transferencia de material gentico entre las dos clulas. Existen dos tipos de transduccin: a) Transduccin generalizada: est determinada por el intercambio de cualquier gen bacteriano. b) Transduccin especializada: solamente determina el intercambio de un nmero limitado de genes especficos. La mayora de los fagos transductores es capaz de realizar solamente uno de estos tipos de transduccin, pero un nmero limitado puede realizar ambos.

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Clula bacteriana

CICLO DE VIDA

Bacterifago (fago)
Partcula de transducci n (ADN del husped dentro de la cubierta del fago)

Clula transducida

Clula bacteriana

Transduccin

Recombinacin gentica con el ADN del husped

Figura 2: Proceso de transduccin.

Conjugacin La conjugacin es un proceso mediante el cual se transfiere material gentico desde una bacteria donadora hacia una receptora. Este mecanismo implica un contacto real entre ambas clulas, de modo que el ADN pasa de una hacia la otra sin tomar contacto con el medio circundante. La transferencia gentica por conjugacin est codificada por los genes de un plsmido, denominado plsmido F, siendo esa su nica funcin conocida hasta el momento. En otras palabras, este plsmido codifica su propia transferencia hacia clulas que carecen de l y por eso se denomina plsmido conjugativo. Las clulas que poseen el plsmido F se denominan clulas F+ y las que carecen de l clulas F-. Cuando se mezclan clulas F+ y F-, la transferencia del plsmido
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F ocurre con una frecuencia elevada. Normalmente slo se transfiere el plsmido, pero tambin pueden ser transferidos genes cromosmicos, aunque con una frecuencia considerablemente ms baja. Esto se debe en parte a la presencia en un cultivo F+ de clulas denominadas Hfr (high frecuency recombination = alta frecuencia de recombinacin) en las que el plsmido F y el cromosoma bacteriano han quedado integrados formando una gran molcula circular nica.

Plsmidos Son elementos genticos constituidos por ADN (circular, cerrado, de doble cadena) que se reproducen en forma autnoma y no estn unidos al cromosoma bacteriano. Pueden ser transferidos de clula a clula por el mecanismo de conjugacin o se pueden integrar al cromosoma y replicarse en forma conjunta. Los plsmidos pueden contener una variedad de genes como por ejemplo: genes que controlan la produccin de toxinas o que dan resistencia antibiticos, metales pesados y otros compuestos inhibidores, genes capaces de metabolizar herbicidas, etc.. Tambin poseen genes que permiten el contacto clula a clula, alterando la superficie celular y facilitando la transferencia. Si la transferencia es la del propio plsmido, ste se denomina plsmido conjugativo.

Mecanismo de transferencia de ADN durante la conjugacin: Primero se realiza la sntesis de ADN: una de las cadenas de ADN del plsmido se deriva de la clula donadora y la otra es recin sintetizada en la receptora (por complementariedad de bases) durante el proceso de transferencia. Cuando el factor F no est integrado al cromosoma, se comporta como un plsmido conjugativo, las clulas que poseen este factor no integrado se llaman F+ (o clulas macho) y las clulas que pueden actuar como receptores de F+ se llaman F- (o clulas hembra). Estas F- no poseen el plsmido del factor F. Concluida la conjugacin, el resultado son dos clulas F+, por lo que la receptora se ha convertido en una futura donadora (de F+ a F-) y podr transferir el plsmido F a otras receptoras.

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Figura 3: Transferencia de ADN por conjugacin. El plsmido F de una clula F+ est siendo transferido a una clula receptora F-. Mecanismo de replicacin del ADN por crculo rodante.

Implicancias agronmicas Los mecanismos explicados anteriormente tienen implicancias en el rea de la investigacin y adems tienen aplicaciones agronmicas. La resistencia a antibiticos se puede originar como una mutacin de algunas bacterias que sobrevivieron al agregado de estas sustancias, pero la transferencia de esa resistencia a las dems bacterias se da muy rpidamente, cmo es que pasa sto? La forma en la que se transfieren estas resistencias es a travs de los plsmidos, por conjugacin, y no es que todas las bacterias resistentes hayan experimentado la misma mutacin (que las transform en resistentes). Otro ejemplo se ve en los rizobios utilizados para la inoculacin de Leguminosas. Se pueden dar, por el proceso de mutacin, cambios en su estructura gentica teniendo como resultado por ejemplo la prdida de la capacidad de fijacin de Nitrgeno (N) atmosfrico: ha ocurrido en Estados Unidos el caso de que al inocular semillas del cultivo de soja con cepas muy agresivas de rizobios (es decir que tienen alta capacidad de nodular), llegado determinado momento las mismas perdieron la capacidad de fijar N pero no la de nodular, por lo que estos ndulos se volvieron parsitos del cultivo de soja, ya que estaban recibiendo nutrientes provenientes del cultivo, pero a cambio no estaban aportando N.
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Glosario bacterifago: virus que infecta a alguna bacteria. clon: poblacin de individuos derivados por reproduccin asexual de un solo antecesor. delecin: tipo de mutacin que implica la eliminacin de un segmento de ADN. fisin binaria: tipo de reproduccin asexual de la que resultan descendientes genticamente idnticos a su nico progenitor. gen: unidad de herencia en un cromosoma; secuencia de nucletidos en la molcula de ADN que desempea una funcin especfica, tal como codificar una molcula de ARN o un polipptido. herencia: transmisin de caractersticas del o de los progenitores a los hijos. insercin: tipo de mutacin en la cual ocurre la introduccin de un nuevo segmento de ADN dentro de una secuencia ya existente. virus temperado: virus que al infectar al husped no necesariamente causa lisis (ruptura), sino que puede llegar a integrarse en el material gentico del husped.

Bibliografa BROCK, T. D. Y MADIGAN, M.T. 1991. Microbiologa Sexta Edicin Ed. Prentice Hall Hispanoamericana S.A. Mxico. CURTIS, H; SUE BARNES, N. 1999. Biologa. 5 ed. Ed. Mdica Panamericana S.A. Colombia. STANIER, R.; INGRAHAM, J.; WHEELIS, M. & PAINTER, P. 1996. Microbiologa. 2 Edicin (The microbial world. Fifth Edition). Ed. Revert. Barcelona.