Disciplina Bacteriologia Clnica - 2012 Procedimentos Laboratoriais: da Requisio Anlise Microbiolgica 1.

. Requisio de exames microbiolgicos A importncia do relacionamento mdico com o laboratrio deve-se ao fato de que a microbiologia envolve etapas interpretativas para muitos exames. Por exemplo aqueles que envolvem microbiota (mucosas) ou no caso de agentes especficos fundamental a escolha de meios para o isolamento primrio DOS microrganismos (meios enriquecidos, meios seletivos, de enriquecimento, etc.) 2. Preenchimento da ficha do paciente Identificao clara do paciente Informaes relevantes para o diagnstico do processo infeccioso Descrio da amostra e mtodo de coleta Natureza do exame solicitado 3. Coleta Todo resultado liberado pelo laboratrio de microbiologia conseqncia da qualidade da amostra recebida. O material coletado deve ser representativo do processo infeccioso investigado, evitando contaminao com as reas adjacentes. Sempre que possvel, colher o material antes da antibioticoterapia, Informar o paciente sobre o procedimento a ser realizado. Observar a anti-sepsia correta na coleta dos materiais clnicos onde for necessria, Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha maior probabilidade de ser isolado. Coletar quantidade suficiente para permitir uma completa anlise microbiolgica. Caso a quantidade seja pequena, priorizar os exames. 4. Transporte Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratrio para: Assegurar a o isolamento dos microrganismos, pois o laboratrio de microbiologia trabalha em funo da viabilidade (sobrevivncia); Evitar erros de interpretao nas culturas quantitativas (por exemplo: urina) Verificar a disponibilidade dos meios de transporte, quando se fizer necessrio.

5. Exame bacterioscpico Direto sem colorao: Usado para pesquisa a fresco de Trichomonas em secrees, fungos (leveduriformes ou filamentosos) em diferentes materiais. Campo escuro: Utilizado para observar a motilidade de bactrias dificilmente observadas em microscopia direta, como o caso do Treponema pallidum e Leptospira sp. Colorado pelo mtodo de Gram: Utilizado para avaliar a amostra clnica analisada. As interpretaes dos esfregaos envolvem consideraes

relacionadas s caractersticas da colorao, tamanho, forma e agrupamento das clulas bacterianas. Outras coloraes: Ziehl-Neelsen, Albert Layborn, outras. 6. Exame bacteriolgico O conhecimento dos microrganismos encontrados nos espcimes (raramente envolvido com doena, ocasionalmente envolvido com doena, comumente envolvido com doena) de extrema importncia para a seleo dos meios de cultura utilizados para o isolamento primrio. a) Meios de cultivo A escolha dos meios utilizados para cada material deve estar relacionada aos agentes esperados. Agar Sangue: 5% de sangue de carneiro so adicionados ao meio base (Columbia gar Base, Blood gar Base) a 45C. Meio no seletivo que promove o crescimento da maioria das bactrias (no fastidiosas) encontradas frequentemente na clnica mdica. O sangue permite a deteco de reaes hemolticas e fornece o fator X (heme) necessrio para o crescimento de muitas espcies patognicas. Lembrar: "stabbing" para facilitar a observao de hemlise em profundidade. gar Chocolate amplamente utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, embora cresam neste meio quase todos os tipos de

microrganismos. 5% de sangue so adicionados ao meio base (Columbia gar Base, Blood gar Base), a 80C. O sangue desnaturado por aquecimento fornece alm do fator X (hemina, encontrada no Agar sangue), o factor V (dinucleotdeo de nicotinamida-adenina, NAD). Fator X e V so fundamentais para o crescimento de microrganismos mais exigentes como algumas espcies

de Haemophilus, Neisseria, Moraxella. O crescimento de espcies que necessitam dos fatores X e V no se verificar no Agar sangue. Meio Seletivo para Bacilos Gram-Negativos (enterobactrias e no fermentadores): Agar MacConkey (recomendado pela ANVISA), Agar Eosina Azul de Metileno (EMB)/Meio de Teague.

b) Isolamento primrio A tcnica de semeadura por esgotamento (4 quadrantes da placa) recomendada, seguindo a sequncia dos mais ricos para os mais seletivo.

Agar sangue e agar chocolate devero ser incubados em microaerofilia (jarra de vela) a 35C, por 24 h. A escolha dos meios utilizados para cada material deve estar relacionada aos agentes esperados. c) Identificao O crescimento dos microrganismos nos diferentes meios de cultura fornece as primeiras informaes para a sua identificao. Observar as caractersticas das diferentes colnias crescidas em cada meio de cultura utilizado. Deve-se realizar a colorao de Gram para todas as colnias, morfologicamente distintas, crescidas em meios no seletivos. Com uma agulha microbiolgica estril, tocar na colnia isolada e passar para uma lmina limpa e identificada, homogeneizando o material com uma gota de soluo salina estril em movimentos centrfugos. Esse procedimento dever ser feito a partir de todas as colnias morfologicamente distintas. Aguardar para que seque. Fixar e corar pelo mtodo de Gram. Correlacionar os tipos morfotintoriais bacterianos e aspectos culturais s principais bactrias de importncia clnica. Dependendo do resultado da bacterioscopia, transferir a colnia (cuidado para que venha s ela) para um meio recomendado, a fim de obter cultura pura para realizao de provas para identificao. Incubar os tubos repicados em atmosfera apropriada por 24 horas. Realizar outro exame bacterioscpico do crescimento para garantir que as mesmas esto puras. A identificao dos diferentes microrganismos isolados poder ser realizada utilizando sistemas

automatizados, Kits especficos ou atravs de provas bioqumicas, conforme sistemtica do laboratrio de microbiologia.

Rotina bacteriolgica especfica para ___________________. Quando a solicitao for direcionada para um agente etiolgico especfico, avaliar o mtodos recomendado para o seu isolamento.

Teste de sensibilidade aos antimicrobianos

Interpretao dos resultados O microbiologista, na sua rotina diria, deve considerar o potencial patognico dos agentes para decidir a importncia das bactrias isoladas, Como norma, no se deve fazer antibiograma de bactrias da microbiota de pele e mucosas. Como microbiologia uma soma de evidncias (microbiolgicas, clnicas, epidemiolgicas), o que pode e deve ser feito buscar traar linhas mestras para a orientao do raciocnio, deixando que cada caso seja analisado como um exerccio constante do bom senso e cientificamente embasado.

Referncia Bibliogrfica Texto retirado e adaptado de: Deteco e Identificao de Bactrias de Importncia Mdica (mdulo 5), Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria (www.anvisa.gov.br/servicosaude/manuais/.../mod_5_2004.pdf)