Propiedades cinticas de la glucocinasa y su funcin en la fisiologa de la glucosa. Introduccin.

La enzima glucocinasa es la enzima determinante en la utilizacin de la glucosa en hgado y en pncreas. Esta enzima fosforila a una molcula de glucosa utilizando una molcula de ATP para la formacin de glucosa-6-fosfato, la glucosa fosforilada no sale de las clulas del hgado. La glucocinasa acta como un sistema regulador de la concentracin de glucosa en la sangre manteniendo su concentracin en aproximadamente 5 mM. La glucocinasa posee una Km relativamente alta para la glucosa (~ 10 mM) y no se inhibe por el producto de su reaccin: la glucosa-6-P. La concentracin de glucosa dentro del hgado es un reflejo de la concentracin de sta en sangre, ya que la glucosa en sangre se equilibra con la del hgado pues sta puede atravesar la membrana plasmtica del de las clulas hepticas. Dado que la Km para la glucosa de la glucocinasa heptica es del doble de la concentracin de glucosa en sangre, cualquier incremento en la concentracin de glucosa en sangre lleva a un incremento proporcional en la fosforilacin de la glucosa por la enzima en las clulas hepticas. As, este sistema le permite al hgado introducir glucosa a velocidades importantes slo cuando la concentracin de glucosa en la sangre se eleva. Por lo anterior, la accin de la glucocinasa heptica permite mantener la concentracin de la glucosa en la sangre en niveles normales. Para llevar a cabo esta funcin, tanto la actividad como la afinidad de la glucocinasa por la glucosa son esenciales porque mantienen la concentracin de la glucosa en la sangre dentro de lmites estrechos. Ha sido demostrado que la disminucin los niveles de glucocinasa, puede provocar diabetes. Tambin, se puede presentar hipoglucemia (bajos niveles de azcar en sangre) si la actividad de la enzima aumenta significativamente por encima de los niveles normales.

En este ejercicio, se supone que existen 7 lneas distintas de clulas de ratones que se utilizan para estudiar las posibles anormalidades clnicas en la glucocinasa que se pueden presentar. La principal patologa observada en las distintas neas se centra en la incapacidad de los ratones para mantener los niveles de glucosa en sangre en rangos normales misma que posiblemente se deba a una alteracin en las propiedades cinticas de la glucocinasa del hgado.

El problema a resolver por usted es encontrar las causas cinticas de la patologa de cada lnea de los ratones, as como la droga adecuada que pude remediar cada situacin patolgica.

Planteamiento del problema.

La enzima glucocinasa se purifica de cada una de las lneas celulares de ratn y se determinan los parmetros cinticos Km y Vmax de las enzimas a diferentes concentraciones de glucosa. Tabla1. Se muestran los valores de la actividad de la glucocinasa purificada tanto de la lnea control como de las que presentan alteraciones en el mantenimiento de los niveles de la glucosa en sangre. Esta actividad se ensay a difrentes concentraciones de glucosa.

1) Determine los parmetros cinticos Km y Vmax de la glucocinasa proveniente de cada una de las lneas celulares. (Anexe las grficas efectuadas para tal propsito). 2) Compare los valores resultantes de los parmetros cinticos Km y Vmax de la glucocinasa de las diferentes lneas celulares con los de la lnea control y de existir alguna diferencia entre stos, infiera la posible alteracin provocada en los niveles de glucosa en sangre de los ratones. Por otra parte, se tienen 3 compuestos que actan como algn tipo de inhibidor de la glucocinasa, determine de qu clase de inhibidores se trata de acuerdo a los datos que aparecen en la Tabla 2.

Tabla 2. En esta tabla aparecen las actividades de la glucocinasa de clulas control en presencia de los compuestos C y D.

Comparando los parmetros cinticos Km y Vmax obtenidos para la glucocinasa de clulas normales en presencia de los compuestos C y D con los obtenidos en ausencia de ellos, determine cul es el mecanismo de accin de c/u de stos sobre la gucocinasa. En vista del mecanismo de accin de los compuestos C y D se podra utilizar alguno de ellos para contrarestar la anomala en la glucocinasa en las distintas lneas celulares de ratn? Indique cul se utilizara para cul lnea celular de ratn y cul es el efecto que producira en la glucocinasa en cuestin.