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Fragilidade Osmtica

O sangue diludo em soluo salina hipotnica tamponada em pH 7,4 com fosfatos. Uma alquota de sangue colocada em contacto com diferentes concentraes de soluo de cloreto de sdio. Deixa-se em temperatura ambiente por 20 a 30 minutos. Em solues de baixa concentrao osmtica, a gua penetra nas clulas, causando tumefao e hemlise. Quando atingido um volume intracelular de 160% do normal, os poros da membrana da clula permitem a sada da hemoglobina. As clulas hemolisadas so removidas pela centrifugao e utiliza-se um espectrofotmetro para determinar o grau de hemlise de cada tubo, atravs da quantidade de hemoglobina livre na soluo. Este procedimento pode tambm ser realizado em amostra incubada a 37o C por 24 horas, potencializando a hemlise por acentuar a fragilidade osmtica da clula. Equipamentos: Centrfuga Eppendorf 5810; espectrofotmetro BioSystems BTS-310. Acompanhamento de anemias hemolticas, particularmente a esferocitose hereditria, doena hemoltica auto-imune e as talassemias. Deve-se realizar curva incubada em caso de desvio discreto a moderado da curva para uma maior fragilidade (para a direita). O exame avalia a capacidade de resistncia da membrana das hemcias entrada de gua no interior da clula, que determinada pela relao entre sua superfcie e seu volume. O resultado dado em percentagem de hemlise, atravs de clculo especfico, utilizando as densidades pticas obtidas com as leituras. Estes valores so transferidos para um grfico, formando uma curva, onde j se encontram as curvas-controle. Em pacientes normais, a curva dever apresentar-se entre as curvas-controle (incio de hemlise: 0,42 mg% a 0,50 mg% NaCl; hemlise final: 0,30 mg% a 0,35 mg% NaCl). O desvio da curva para a direita das curvas-controle (isto , hemlise ocorrendo em concentraes de NaCl menores que o normal) representa uma menor resistncia (ou maior fragilidade) globular, e o desvio p/ a esquerda (isto , hemlise ocorrendo em concentraes de NaCl maiores que o normal) representa uma maior resistncia (ou menor fragilidade). Nos casos de esferocitose discreta a moderada, em que a curva de resistncia globular no-incubada poder mostrar-se dentro da normalidade (falsonegativo), a curva incubada mostrar desvio direita, pois a incubao acentua a fragilidade osmtica da clula. Resistncia globular diminuda: esferocitose hereditria, anemia hemoltica auto-imune, anemia hemoltica por drogas, anemia hemoltica dos grandes queimados, incompatibilidade ABO e Rh, anemia perniciosa, leucemias, estados acidticos, malria. Resistncia globular aumentada: talassemias, eliptocitose (esta tambm pode apresentar curva normal), estomatocitose, anemias microcticas (ferropenia), hemoglobinopatia S, hemoglobinopatia C, ictercia obstrutiva. Srie vermelha (eritrograma), Reticulcitos, Teste de Coombs, Eletroforese de hemoglobina.

Aula Prtica: Aps o preparo da soluo de 1,5 L de NaCl 1% e da coleta do sangue com EDTA, foram preparadas 15 solues com concentraes diferentes a partir da soluo trabalho 1%. SOLUO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 % [ ] NaCl 0,1 0,2 0,25 0,30 0,35 0,40 0,45 0,50 0,55 0,60 0,65 0,70 0,75 0,80 0,85 Sol. NaCl 1% 5 10 12,5 15 17,5 20 22,5 25 27,5 30 32,5 35 37,5 40 42,5 Vol. gua mL 45 40 37,5 35 32,5 30 27,5 25 22,5 20 17,5 15 12,5 10,5 7,5

Aps feito a leituro em espectrofotmetro, conseguimos os seguintes resultados: 1 0,809 2 0,717 3 0,688 4 0,627 5 0,564 6 0,467 7 0,564 8 0,369 9 0,288 10 0,243 11 0,169 12 0,143 13 0,120 14 0,100 15 branco 100 89 85 78 70 58 46 36 30 21 18 16 14 12

http://portalmedico.danet.com.br/ISO9000/DELBONI/ConhecMedico.nsf/PCMT odos/B50F062423D9B7FE032572F0004EB1B8?OpenDocument