UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO TECNOLGICO DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA E ENGENHARIA DE ALIMENTOS

FRACIONAMENTO DO LEO ESSENCIAL DE PATCHOULI UTILIZANDO CROMATOGRAFIA SUPERCRTICA

Mrcio Ramos Casagrande

Florianpolis, 29 de abril de 2009

SUMRIO RESUMO.....................................................................................................................................4 JUSTIFICATIVA........................................................................................................................5 OBJETIVOS................................................................................................................................7 REVISO BIBLIOGRFICA....................................................................................................8 1. leos essenciais...................................................................................................................8 2. Fracionamento de leos essenciais....................................................................................10 2.1. Cromatografia.............................................................................................................10 2.1.1. Cromatografia gasosa (GC)................................................................................11 2.1.2. Cromatografia lquida.........................................................................................11 3. Vantagens e desvantagens do SFC....................................................................................12 4. Aplicaes da SFC em leos essenciais............................................................................13 MATERIAS E MTODOS.......................................................................................................14 1. Patchouli............................................................................................................................14 2. Planta de extrao supercrtica..........................................................................................14 3. Cromatografia Gasosa (GC-FID)......................................................................................15 RESULTADOS E DISCUSSES.............................................................................................17 1. Extrao do leo essencial de patchouli utilizando CO2 supercrtico..............................17 2. Seleo da fase mvel e da fase estacionria ...................................................................20 2.1. Co-solventes...............................................................................................................20 2.2. Seleo da fase estacionria.......................................................................................20 3. Anlise do leo essencial de patchouli em Cromatografia Gasosa (GC-FID).................20 4. Anlises no Cromatgrafo Supercrtico............................................................................21 PRXIMAS ETAPAS...............................................................................................................23 CONCLUSES PRELIMINARES...........................................................................................24 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS......................................................................................25

RESUMO

O leo essencial de patchouli muito utilizado nas indstrias de perfumes, cosmticos e frmacos devido ao seu poder fixador de aromas e ao forte odor que pode mascarar cheiros e gostos indesejveis. Com uma composio complexa, constituda por mais de 24 diferentes tipos de sesquiterpenos, o leo apresenta componentes como -patchouleno, cariofileno, guaieno, -bulneseno (tambm conhecido como guaieno), seicheleno, patchouleno e patchoulol (DEGUERRY et. al., 2006; HU et. al., 2006; SINGH et. al., 2002). Separar e identificar estes componentes consiste no objetivo bsico deste trabalho. Para isto, a cromatografia de fluidos supercrticos (SFC) ser utilizada, pois esta oferece uma separao mais rpida e eficiente comparada com a cromatografia lquida em geral. Por meio de extraes com CO2 supercrtico a 32C e 100 bar foi possvel obter o leo essencial de patchouli com rendimentos de aproximadamente 2,2 %. Anlises em GC-FID determinaram os principais picos referentes ao leo. Dando continuidade ao trabalho, a partir de analises em GC-MS ser possvel determinar a composio exata da amostra, e por meio do SFC separar os principais componentes presentes no leo essencial de patchouli.

JUSTIFICATIVA O patchouli, uma planta amplamente utilizada na medicina tradicional chinesa, apresenta diversos compostos teis s indstrias, com funes distintas e importantes. Entre estes compostos destacam-se o patchoulol, o -patchouleno e o -bulneseno (HU et. al., 2005). Devido ao seu aroma caracterstico com um cheiro de terra que se torna mais doce com o passar do tempo, o patchouli muito apreciado pelas indstrias de perfumes e cosmticos. Os reguladores desse aroma so o patchoulol e o -patchouleno, lcoois sesquiterpenos tricclicos encontrados em grande quantidade no leo essencial. (DONELIAN, 2004). Como o patchouli o nico meio comercial de obteno de patchoulol, j que as rotas sintticas para obter esse produto so economicamente inviveis, o fracionamento do leo e a busca de processos mais eficientes tornam-se de vital importncia para a indstria (DEGUERRY et. al., 2006). Descobertas recentes da indstria farmacutica mostram que outro componente, o bulneseno, um composto encontrado em menor quantidade no leo, possui um efeito inibidor da agregao de plaquetas. Um efeito de grande importncia, uma vez que o desenvolvimento de vrias doenas como a asma, trombose e a inflamao do miocrdio podem estar relacionadas a esse fenmeno. Tsai et. al. (2006) estudou 110 diferentes leos essenciais e descobriu no patchouli, mais precisamente no -bulneseno um poderoso agente contra a inibio da agregao das plaquetas chamando a ateno da comunidade cientifica para a importncia desse leo. Para isolar esses diferentes compostos do leo, diversas tcnicas cromatogrficas podem ser utilizadas. Dentre elas o SFC foi selecionado por apresentar vantagens como: baixo custo do solvente; menor tempo de anlise; produto final sem resduo; menor quantidade de co-solventes no necessitando, portanto de processos de purificao e no degradao dos componentes termosensveis devido s baixas condies supercrticas (OTTIGER et. al., 2007; RAMREZ et. al., 2004; YAN & ORIHUELA, 2007). Alm disso, a cromatografia de fluidos supercrticos uma tcnica relativamente nova que obteve timos resultados no isolamento de enantimeros (DOLAK, 2004).

Assim, pretende-se com esse trabalho, estudar, isolar e identificar os principais componentes do leo essencial de patchouli, utilizando para isso, a cromatografia de fluido supercrtico que foi considerada a mais apta devido s vantagens apresentadas.

OBJETIVOS

O objetivo geral do presente trabalho consiste na realizao do fracionamento do leo essencial do patchouli utilizando cromatografia supercrtica. Para alcanar esse objetivo, foram definidos alguns objetivos especficos: Levantamento bibliogrfico que constar uma breve introduo sobre leos essenciais, em especifico o leo de patchouli e as tcnicas possveis para a sua separao, incluindo, assim, a SFC; Projeto e instalao do equipamento de cromatografia supercrtica; Seleo dos co-solventes utilizados na fase mvel junto com o dixido de carbono supercrtico; Seleo das resinas da fase estacionria considerando a eficincia; Obteno do leo essencial de patchouli atravs da extrao supercrtica com CO2 na planta piloto localizada no Laboratrio de Controle de Processos (LCP); Estudo da cintica do processo de fracionamento; Planejamento experimental visando a otimizao das condies de fracionamento do leo de patchouli; Fracionamento do leo essencial de patchouli utilizando SFC com o intuito de concentrar os seus principais componentes: patchoulol, patchouleno e bulneseno; Elaborao do relatrio final contendo todos os resultados alcanados e as concluses obtidas.

REVISO BIBLIOGRFICA 1. leos essenciais Devido a crescente procura por novos aromas e fragrncias, os leos essenciais vem apresentando um grande destaque e um alto valor comercial. Chamamos de leos essncias os lquidos oleaginosos volteis que possuem um forte odor e so retirados de vrias partes das plantas como razes, caules ou folhas. Eles so utilizados nas indstrias de perfumes, cosmticos e alimentos, e podem possuir atividades biolgicas, sendo ento utilizados nas indstrias farmacuticas e de inseticidas (DONELIAN, 2004). Os leos essenciais so complexas misturas de compostos orgnicos, principalmente lcoois, hidrocarbonetos e compostos carboxlicos. A separao dessa mistura em diferentes compostos , portanto de vital necessidade para que eles possam ser devidamente analisados e posteriormente utilizados pelas indstrias (COLLINS et al., 1993). O patchouli cujo nome cientfico Pogostemon cablin (Blanco) Benth uma planta pertencente famlia botnica Lamiaceae cujas folhas so ricas em leo essencial (DONELIAN, 2004). uma espcie originria da Malsia, das Filipinas e do sul da ndia, e atualmente o seu leo produzido principalmente na Indonsia, ndia, China, Malsia e Amrica do Sul (SINGH et. al., 2002). Devido ao seu poder fixador de aromas e ao forte odor que pode ser utilizado para mascarar cheiros e gostos indesejveis, o leo essencial de patchouli muito utilizado nas indstrias de perfumes, cosmticos e frmacos (ARAUJO, 2008; DONELIAN, 2004; HU et. al.,2006 ). Alm disso, o leo tambm se encontra aprovado pela seo 172.510 da FDA (Food and Drugs Administration) para ser utilizado como um aditivo natural em conjunto com aromas em alimentos para consumo humano (DONELIAN, 2004). Com uma composio complexa, constituda por mais de 24 diferentes tipos de sesquiterpenos, o leo de patchouli apresenta componentes como -patchouleno, cariofileno, guaieno, -bulneseno (tambm conhecido como guaieno), seicheleno, patchouleno e

patchoulol (DEGUERRY et. al., 2006; HU et. al., 2006; SINGH et. al., 2002). Dentre esses, os principais componentes do leo so: patchoulol, patchouleno e -bulneseno, como mostra a Figura 1. O patchoulol e o -patchouleno so os responsveis por regular o aroma do leo, devido suas caractersticas fixadoras. J o -bulneseno apresenta a funo de inibir a agregao de plaquetas, reduzindo o risco de doenas cardiovasculares (DONELIAN, 2004; TSAI et. al., 2007).

Patchoulol

-patchouleno

-bulneseno

Figura 1: Patchoulol, -patchouleno e -bulneseno (DEGUERRY et al., 2006).

Os trs principais processos utilizados para a retirada dos leos essenciais a partir de uma matriz slida so a extrao com solventes orgnicos, a destilao por arraste a vapor e a extrao com fluido supercrtico. Para o leo essencial de patchouli, o processo mais utilizado a destilao por arraste a vapor, entretanto, esta gera alteraes na composio do leo, pois provoca a degradao dos seus componentes termosensveis. J a extrao supercrtica uma tcnica altamente especfica que segundo Donelian (2004) foi capaz de fornecer um leo essencial de patchouli de melhor qualidade e rendimento quando comparada a destilao por arraste a vapor. Uma extrao supercrtica com dixido de carbono (CO2) conduzida a 140 bar e 32C forneceu um rendimento de 5,14% em oposio ao 1,50% obtido com destilao por arraste a vapor. As condies timas de operao encontradas para o patchouli foram de 32C e 100 bar.

2. Fracionamento de leos essenciais O principal objetivo de fracionar os leos essenciais separar os seus compostos, eliminar os indesejveis ou concentrar os compostos mais importantes. Para obter o correto fracionamento vrias tcnicas podem ser utilizadas, entre elas, destaca-se a cromatografia. (JACQUES et. al. , 2007). 2.1. Cromatografia A cromatografia est includa entre os mtodos modernos de anlise devido a sua facilidade em realizar a separao, identificao, e quantificao das espcies qumicas. Ela pode ser utilizada isoladamente ou em conjunto com outras tcnicas instrumentais de anlise, como, por exemplo, a espectrofotometria ou a espectrometria de massas. (COLLINS et al., 1993) A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao dos componentes de uma mistura. A fase estacionria pode ser de vrios tipos, como papel, lquido, gel, e partculas slidas em geral, j a fase mvel pode ser um lquido, um gs ou um solvente supercrtico. Enquanto ocorre a passagem da fase mvel sobre a estacionria os componentes da mistura so distribudos em duas fases devido a sua maior ou menor afinidade com a fase estacionria (WESTON & BROWN, 1997). Existem vrias maneiras de classificar os tipos de cromatografia, mas a mais empregada baseia-se no estado fsico da fase mvel. Devido esse critrio a cromatografia pode ser: gasosa, lquida, ou supercrtica, em que a fase mvel respectivamente, um gs, um lquido ou um solvente em estado supercrtico (COLLINS et al., 1993). A cromatografia lquida ainda divide-se em duas: a cromatografia liquida clssica (CLC ou LC), que feita em colunas de vidro, sob presso atmosfrica, com o fluxo deslocando-se devido fora da gravidade, e a cromatografia liquida de alta eficincia, CLAE ou HPLC (High-performance liquid chromatography), que utiliza uma bomba de alta presso para ajudar no deslocamento da fase mvel. Esse tipo de cromatografia leva esse nome devido realmente elevada eficincia que atinge na separao da mistura. (COLLINS et al.1993)

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De acordo com o tamanho da coluna podemos ainda dividir a cromatografia em preparativa (dimetro interno do tubo de 6 a 50 mm); analtica (2 a 6 mm) e com microdimetro (menores de 2mm) (COLLINS et. al., 1993). 2.1.1. Cromatografia gasosa (GC) Na cromatografia gasosa, a amostra a ser analisada injetada na entrada da coluna cromatogrfica, onde carregada pelo gs de arraste (fase mvel). Uma programao de temperatura pode alterar lentamente a temperatura da coluna possibilitando a separao de diferentes compostos por meio dos seus pontos de ebulio. No final da coluna acopla-se um detector. O detector mais utilizado o de ionizao em chama (DIC ou FID ) ou o espectrmetro de massa (MS- Mass Spectrometry). A cromatografia gasosa utilizada para anlises qualitativas e quantitativas de substncias volteis. Os tempos de reteno so utilizados para a identificao dos picos. Sendo assim, os espectros obtidos podem ser comparados com uma biblioteca de espectros e/ou referenciados a um composto padro. Contudo, dificuldades podem surgir se o composto analisado eluir no mesmo tempo que outro componente da amostra (HU et. al., 2006). O acoplamento da cromatografia gasosa e da espectrometria de massas (GC-MS) permite uma rpida identificao dos componentes presentes no leo essencial estudado, desde que esses componentes estejam disponveis na literatura ou na biblioteca de espectros (DONELIAN, 2004) 2.1.2. Cromatografia lquida Na cromatografia lquida clssica o recheio da coluna geralmente deve ser refeito para cada separao, j que parte da amostra geralmente se adsorve de forma irreversvel, gerando assim um grande desperdcio de material e de mo-de-obra. A vazo de eluente realizada apenas contando com a fora da gravidade e as fraes da amostra so coletadas manualmente ou atravs de um coletor de fraes. Sendo assim, o tempo para se realizar todo o processo muito grande. Alm disso, o nmero de fraes obtidas alto e o seu processamento tambm demorado.

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J na cromatografia liquida de alta eficincia, tambm conhecida como cromatografia liquida de alta velocidade, alta presso, alto desempenho ou alta resoluo, utilizamos uma coluna fechada e reaproveitvel que pode ser usada em vrias anlises antes de ser trocada. Esse tipo de coluna mais eficiente, mas oferece uma grande resistncia vazo da fase mvel, e por essa razo necessrio utilizar um sistema de bombas de alta presso que fazem a fase mvel se deslocar mais rapidamente, em um tempo suficiente e adequado para ser analisado. Uma injeo precisa de amostra obtida usando uma microsseringa ou uma vlvula de injeo. Na sada da coluna colocado um detector que permite identificar os componentes ao longo da separao (COLLINS et al., 1993; WESTON & BROWN, 1997). 2.1.3. Cromatografia de fluido supercrtico (SFC OU CS) O principio de funcionamento do processo semelhante ao da LC com a diferena que o solvente utilizado aqui um fluido supercrtico. Fluidos supercrticos, mais comumente o dixido de carbono supercrtico, so constantemente usados como solvente em separaes de cromatografia, principalmente nas indstrias alimentcias e farmacuticas (OTTIGER et. al., 2007). Algumas vantagens da utilizao do dixido de carbono supercrtico que este pode ser reciclado, no txico nem inflamvel, apresenta baixo custo e baixas condies supercrticas (Tc = 31,1C e Pc = 73,8 bar). Alm disso, as propriedades do CO2 como solvente variam com pequenas alteraes na temperatura e na presso utilizadas (PIZARRO et. al., 2007).

3. Vantagens e desvantagens do SFC Os fluidos supercrticos exibem baixa viscosidade comparada com a dos lquidos, e por isso, a cromatografia de fluidos supercrticos tipicamente oferece uma separao mais rpida e eficiente comparada com a cromatografia lquida em geral (OTTIGER et. al., 2007). Alm disso, a cromatografia de fluido supercrtico apresenta uma grande seletividade e uma alta transferncia de massa que permitem reduzir a quantidade de solvente utilizada e o

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tempo de operao (YAN & ORIHUELA, 2007). Dolak (2004), por exemplo, para realizar a separao de enantimeros utilizando SFC levou apenas 4 minutos. A escala preparativa do SFC consiste numa tecnologia limpa, com muitas vantagens comparadas com o preparativo LC. A recuperao dos componentes isolados fcil e ocorre por uma simples descompresso dos fluidos supercrticos, no entanto apresenta uma desvantagem na separao de componentes polares devido falta de polaridade do CO2 usado como fase mvel. Para reverter essa situao pode-se alterar a polaridade da fase estacionria usando, por exemplo, uma base de slica ou outro material, ou ainda, alterar a polaridade da fase mvel utilizando um co-solvente (RAMREZ et. al., 2004).

4. Aplicaes da SFC em leos essenciais Tradicionalmente usada em separaes analticas, SFC amadureceu para um nvel onde tem obtido sucesso em separaes preparativas tambm, e hoje realizada principalmente nas indstrias farmacuticas, de alimentos e qumicas (OTTIGER et. al., 2007). Rodrguez-Meizoso et. al. (2007) isolou um cido existente no extrato de alecrim utilizando uma extrao de fluido supercrtico seguido por um processo de purificao por SFC. Os resultados obtidos mostraram a possibilidade de separar grupos de componentes, de estrutura qumica similar, com uma forte atividade biolgica atravs do processo de purificao por SFC semipreparativa. J Ramrez et al. (2006) usou um sistema de SFC com coluna semipreparativa para fracionar os extratos de alecrim e obter fraes especficas para serem utilizadas, posteriormente, como ingredientes na industria alimentcia. O fracionamento foi realizado em diferentes presses (80 bar a 200 bar), temperaturas (40oC a 80oC) e concentraes de etanol como co-solvente (5 a 15%). A melhor condio de operao foi de 80 C, 130 bar e 10% de etanol, em que se obteve duas diferentes fraes, uma com um melhoramento de 20 a 30% das atividades antioxidantes e microbianas do leo e outra contendo o restante do leo essencial.

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MATERIAS E MTODOS

1. Patchouli O patchouli foi obtido da Colnia Penal da cidade de Palhoa- SC, sendo que este originrio da Epagri (Itaja, SC) onde recebeu o cdigo de EEI-045 no Banco de Germoplasma. As folhas de patchouli foram selecionadas manualmente e secas em estufa com circulao e renovao de ar (MA035, Marconi, Brasil) a 30C. Em seguida, elas foram modas utilizando um moedor de facas (MA580, Marconi, Brasil) acoplado a uma peneira de mesh 30 para padronizao do tamanho das partculas. 2. Planta de extrao supercrtica A extrao do leo essencial de patchouli foi realizada na planta de extrao supercrtica localizada no Laboratrio de Controle de Processos (LCP), na Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC). O patchouli modo foi adicionado ao extrator de 4,7 Litros, que foi ento, fechado e pressurizado, dando incio extrao. A temperatura foi mantida a 32C e a presso a 100 bar, pois esta foi condio tima encontrada por Donelian, 2004. A planta de extrao supercrtica possui como principais componentes: Compressor de ar: (CSL 20 BR, Schulz, Brasil); CO2 : (99,9% de pureza, AGA, Brasil); Bomba ou booster: (DLE-15, Maxpro Technologies, Alemanha);

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Extrator: construdo em ao inox 316L, encamisado, com aproximadamente 0,60 m de comprimento e 0,10 m de dimetro interno, volume interno de 4,7L;

Separador de leos: construdo em ao inox 316L, encamisado, com aproximadamente 0,15 m de comprimento e 0,075 m de dimetro interno e volume interno de 0,660 L;

Vlvula redutora de presso; Vlvulas de agulha: construdas em ao inox 316L, 344 bar de presso e 38C de temperatura (SS-1VS4, Swagelok, EUA);

Vlvula micromtrica: construdas em ao inox 316L; utilizada para regular a vazo de solvente supercrtico quando ocorre a despressurizao (SS-21RS4, Swagelok,EUA);

Medidor de fluxo: (PV500LPM0CC, Key Instruments, EUA); Banho termosttico: construdo em alumnio com controle de temperatura (InControl, Brasil);

Banho termocriosttico: (MQBTC, Microqumica, Brasil); Transdutores de presso: (RTP12/BE53R, AEP, Itlia); Manmetros: (MTR, Brasil) (ARAUJO, 2008).

3. Cromatografia Gasosa (GC-FID) A anlise do leo essencial de patchouli foi realizada no GC-2010 (SHIMADZU) equipado com uma coluna apolar RTX-5 da RESTEK (30 m 0,25mm de dimetro interno, 0,25m de espessura) e um detector FID. A temperatura do injetor foi de 250C com uma taxa de split de 1:10. A temperatura do forno foi programada para se manter a 50C no primeiro minuto, aumentar 5C/min at alcanar 270C, permanecendo 10 minutos a esta

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temperatura, e ento, a uma taxa de 20C/min chegar a 300C, mantendo-se por mais 5 minutos, totalizando 61,5 minutos de anlise. A temperatura do detector FID foi mantida a 300C. O gs de arraste empregado foi o nitrognio, a um fluxo de 1,39 ml/min. Uma soluo de 10 L de leo essencial de patchouli em 1,5 mL de clorofrmio foi preparada. Desta soluo, 1 L foi injetado no cromatgrafo gasoso para a determinao dos principais componentes presentes na amostra.

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RESULTADOS E DISCUSSES 1. Extrao do leo essencial de patchouli utilizando CO2 supercrtico Para obter o leo essencial de patchouli necessrio para as anlises cromatogrficas duas extraes supercrticas foram realizadas. Uma massa inicial de 542,479 g de patchouli j seco e modo foi adicionada ao extrator. Este foi ento pressurizado at 100 bar. A temperatura de todo o sistema foi mantida constante e igual a 32C e o tempo esttico foi de 20 minutos. A partir deste tempo, amostras de leo foram sendo colhidas de 20 em 20 minutos fornecendo os dados para a construo da tabela e do grfico abaixo. A extrao durou 7 horas, pois a partir deste tempo notou-se que no havia mais extrao de leo essencial, apenas ocorria a retirada de ceras.

Grfico 1: Comportamento da primeira extrao de leo essencial de patchouli.

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Tabela 1: Extrao do leo essencial de patchouli: massa de leo e rendimento obtido por tempo de extrao.
Tempo (min) 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 Massa leo (g) 0,261 0,587 1,039 1,534 2,245 2,724 3,458 4,189 4,833 5,518 6,198 6,789 7,406 8,125 8,74 9,266 9,847 10,345 10,842 11,038 11,432 11,857 11,959 Rendimento (%) 0,04811 0,10821 0,19153 0,28278 0,41384 0,50214 0,63744 0,77220 0,89091 1,01718 1,14253 1,25148 1,36521 1,49775 1,61112 1,70808 1,81519 1,90699 1,99860 2,03473 2,10736 2,18571 2,20451

Na segunda extrao foram utilizadas 878,831 gramas de patchouli que geraram 17,114 g de leo no final das sete horas de extrao.

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Grfico 2: Comportamento da segunda extrao de leo essencial de patchouli. Tabela 2: Massa de leo e os rendimentos obtidos para a segunda extrao.
Tempo (min) 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 Massa (g) 58,018 58,344 58,796 59,291 60,002 60,481 61,215 61,946 62,59 63,275 63,955 64,546 65,163 65,882 66,497 67,023 67,604 68,102 68,599 68,795 69,189 69,614 69,716 Massa leo 0,261 0,587 1,039 1,534 2,245 2,724 3,458 4,189 4,833 5,518 6,198 6,789 7,406 8,125 8,74 9,266 9,847 10,345 10,842 11,038 11,432 11,857 11,959 Rendimento (%) 0,04811 0,10821 0,19153 0,28278 0,41384 0,50214 0,63744 0,77220 0,89091 1,01718 1,14253 1,25148 1,36521 1,49775 1,61112 1,70808 1,81519 1,90699 1,99860 2,03473 2,10736 2,18571 2,20451

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2. Seleo da fase mvel e da fase estacionria 2.1. Co-solventes Inmeros co-solventes podem ser utilizados na SFC em conjunto com o CO2 para aumentar a sua polaridade. Yan & Orihuela (2007) e Ottiger et. al. (2007) utilizaram o metanol como co-solvente, nas concentraes de 20% e 5%, respectivamente. Contudo, devido alta toxicidade do metanol, o mesmo no ser utilizado nesse estudo, uma vez que estamos buscando desenvolver uma tecnologia limpa de fracionamento do leo. J Ramrez et. al. (2006) utilizou o etanol como co-solvente, em diferentes porcentagens entre 5 a 15%. O melhor resultado alcanado foi com 10% j que com outros valores o tempo de reteno foi longo ou curto demais. Levando em considerao que um equipamento de SFC comercial suporta at 50% de co-solvente, neste trabalho ser utilizado apenas etanol nas porcentagens de 5, 10, 15 e 30%. 2.2. Seleo da fase estacionria As colunas selecionadas foram a betasil-diol (C18) e a betasil slica 100, pois estas segundo a literatura e os fabricantes teriam capacidade para separar os compostos presentes no leo essencial de patchouli. Coluna para Cromatografia Lquida Betasil Diol

(USP L20), 250 x 4,6 mm, 5 m, Thermo Hypersil. Caractersticas: 100A, 310 m2/g, 6% carbono. Coluna 100 para (USP L3), Cromatografia 250 x 4,6 Lquida mm, 5 Betasil m, Thermo Silica Hypersil.

Caractersticas: 100A, 310 m2/g.

3. Anlise do leo essencial de patchouli em Cromatografia Gasosa (GC-FID)

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O cromatograma obtido para o leo essencial de patchouli est demonstrado na figura 2. Assim como todos os produtos naturais, o leo apresentou diversos picos durante toda a anlise. Isto demonstra como a composio de um leo essencial complexa e como a sua analise um processo longo e demorado.

Figura 2: Cromatograma do leo essencial de patchouli com os seus principais picos. 4. Anlises no Cromatgrafo Supercrtico

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Devido a problemas com a importao do equipamento e a sua instalao no pas, ainda no foram realizadas anlises no Cromatgrafo Supercrtico. O banho termocriosttico apresentou uma srie de problemas de fabricao e precisou ser trocado, o que atrasou ainda mais o processo de instalao. Entretanto, agora o SFC j est corretamente instalado e funcionando no LCP, como mostra a figura 3.

Figura 3: Cromatgrafo Supercrtico (JASCO).

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PRXIMAS ETAPAS

Dando continuidade a este trabalho, sero realizadas as anlises no cromatgrafo supercrtico para determinar as melhores condies de fracionamento do leo essencial de patchouli. Alm disso, ser realizada uma anlise em Cromatgrafo Gasoso com Espectro de Massas (GC-MS) e com a comparao dos cromatogramas obtidos pelo GC-FID (Figura 2) e pelo GC-MS os principais componentes do leo podero ser determinados, juntamente com as suas concentraes.

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CONCLUSES PRELIMINARES At o momento foi possvel determinar as fases mveis e estacionrias que sero utilizadas no SFC. Devido elevada toxicidade do metanol, apenas etanol ser utilizado como co-solvente no processo. Alm disso, por meio de extraes com CO2 supercrtico foram obtidas quantidades suficientes de leo essencial de patchouli para realizar os prximos testes no cromatgrafo supercrtico. Sendo assim, ser necessrio agora, realizar as anlises no SFC alterando as presses, temperatura e quantidade de co-solvente na fase mvel para definir a melhor condio de fracionamento do leo essencial de patchouli.

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