UNIVERSIDAD DE LAS AMRICAS INGENIERA EN BIOTECNOLOGA MICROBIOLOGA Nombre: Francis Daniel Moncayo Izurieta.

NUTRICIN MICROBIANA Para obtener energa y para la produccin de nuevos componentes celulares, todos los organismos deben contar con un suplemento de materia prima o nutrientes. Estos nutrientes son claves para el crecimiento microbiano. Los nutrientes necesarios por las clulas son de dos tipos: 1) Los macronutrientes: como el C, H, O, N, P y S, son requeridos por las clulas en cantidades grandes. Estos elementos componen cidos nuclicos, protenas, lpidos y carbohidratos. 2) Los micronutrientes en cambio, son elementos que la clula necesita en cantidades minsculas pero que an as son fundamentales para el crecimiento y desarrollo de la misma. Tenemos como micronutrientes al Mn, Zn, Co y Cu. Cabe sealar que los micronutrientes generalmente se utilizan como cofactores de enzimas y vitaminas. Adems de todos los elementos previamente mencionados, las clulas necesitan igualmente de otras fuentes de energa y electrones para que el crecimiento tome lugar. De esta manera, los microorganismos se pueden dividir en varias clases: a) b) c) d) Fottrofos que usan la luz como su fuente de energa. Quimitrofos que obtienen energa de la oxidacin de compuestos orgnicos e inorgnicos. Littrofos que utilizan sustancias inorgnicas reducidas como fuente de electrones. Organtrofos que extraen electrones de compuestos orgnicos. Factores de crecimiento Los microorganismos muestran crecimiento siempre y cuando sus demandas de minerales, bioelementos y energa les sean suministradas, adems poseen enzimas con las cuales pueden sintetizar biomolculas necesarias para mantenerse vivos. Sin embargo, hay muchos otros microorganismos que carecen de tales enzimas esenciales y por lo tanto no pueden producir todos los constituyentes indispensables. En lugar de ello, deben obtenerlos a ellos o a sus precursores del ambiente circundante. Aquellos componentes orgnicos de carcter esencial para el microorganismo y que no pueden ser sintetizados por el mismo se denominan factores de crecimiento. Existen tres divisiones principales de factores de crecimiento que son: a) Aminocidos, que son necesarios para la sntesis de protenas b) Purinas y pirimidinas, que son necesarias para la sntesis de cidos nuclicos. c) Vitaminas, que actan como coenzimas. Fecha: 08/05/12

Con el conocimiento del requerimiento de factores de crecimiento de varios microorganismos hace posible ensayos cuantitativos de respuesta-crecimiento para muchas sustancias. Lo que se hace es dejar crecer a determinada bacteria en una serie de recipientes, cada uno con un exceso de todos los componentes requeridos excepto el factor de crecimiento objeto de estudio. Despus una cantidad diferente de este factor de crecimiento es aadido a cada recipiente. Lo que resulta es una curva que muestra una relacin directamente proporcional entre el crecimiento y la cantidad de factor de crecimiento presente. Absorcin de nutrientes por la clula Los mecanismos de absorcin por la clula deben ser especficos, quiere decir que las sustancias necesarias, y no otras, deben obtenerse. La clula se vale de numerosos mecanismos de transporte a travs de su membrana permeable, entre ellos tenemos: Difusin pasiva: que no es ms que el proceso en el cual las molculas se mueven de una regin con mayor concentracin a una con menor concentracin gracias a la agitacin termal. En otras palabras, la tasa de difusin pasiva es dependiente del gradiente de concentracin entre el interior y el exterior de la clula. Esta tasa de difusin a travs de las membranas permeables se incrementa por el uso de protenas transportadoras llamadas permeasas. Debido a que estos transportadores ayudan en el proceso de difusin, este mecanismo se llama difusin facilitada. Las protenas transportadoras se asemejan mucho a las enzimas en cuanto a su especificidad hacia la sustancia a ser transportada. Cabe sealar que aunque las protenas transportadoras estn involucradas en este mecanismo, la difusin facilitada no requiere de energa metablica alguna debido a que la nica fuerza impulsora es el gradiente de concentracin que dirige el movimiento de las molculas. Otro mecanismo importante es el transporte activo. Bsicamente se trata del transporte de molculas hacia una solucin con concentraciones mayores o del transporte en contra del gradiente de concentracin, con el pertinente uso de energa metablica. Al igual que en la difusin facilitada, el transporte activo involucra actividad de protenas transportadoras. Existen complejos proticos que participan en la transportacin activa de solutos llamadas transportadores ABC, que consisten en dos dominios hidrfobicos que atraviesan la membrana con dos dominios de unin de nucletidos. Estos complejos utilizan protenas de unin que se unen a la molcula que ser transportada a travs del canal y despus interacciona con el complejo de protenas transportadoras para mover el soluto hacia el interior de la clula. Aqu la hidrlisis de ATP suministra la energa para que el complejo vuelva a su forma inicial y est listo para otro ciclo de transporte. Las bacterias tambin utilizan gradientes de protones generados durante el transporte de electrones para conducir el transporte activo. Las protenas de membrana responsables de este proceso carecen de protenas de unin. Estas permeasas transportan una molcula dentro de la clula a medida que protones entran en la clula. Este transporte unido de dos sustancias en una misma direccin se denomina simporte. Aqu, la energa almacenada como gradiente de protones conduce el transporte del soluto. Existe otro tipo de transporte que es contrario al simporte, llamado antiporte, el cual se da

cuando la protena de membrana trasporta un soluto a travs de la membrana dependiendo del transporte simultneo de otro soluto en direccin opuesta. Otro mecanismo de transporte utilizado por los microorganismos es la traslocacin de grupos, que es un proceso en el cual una molcula es transportada a travs de la membrana solamente cuando ha sido qumicamente alterada. El sistema de traslocacin ms conocido es el PTS, que transporta varios azucares hacia las clulas procariotas despus de fosforilarlas utilizando fosfoenolpiruvato como donador de grupos fosfato.

Medios de cultivo Mucho del estudio de la microbiologa depende de la habilidad de mantener microorganismos en el laboratorio, siendo esto slo posible si existen medios de cultivo disponibles. Un medio de cultivo es una preparacin slida o lquida utilizada para crecer, transportar y almacenar microorganismos. Para que sea efectivo, el medio debe contener todos los nutrientes requeridos por el microorganismo para su crecimiento. Los medios especficos son tambin tiles para aislar e identificar microorganismos. Existen variedad de medios, entre estos encontramos: a) Medios sintticos o definidos son medios cuyos componentes son todos conocidos. Estos medios son utilizados en investigacin ya que permiten conocer que est metabolizando el microorganismo experimental. b) Medios complejos son aquellos que contienen algunos ingredientes de composicin qumica desconocida. Tales medios son tiles, ya que pueden ser lo suficientemente ricos y completos para cumplir las necesidades de muchos microorganismos diferentes. Adems, son tiles porque muchas veces los requerimientos nutricionales de un microorganismo no son conocidos, de modo que un medio definido no puede proporcionrsele. Los medios complejos generalmente contienen componentes indefinidos como peptonas, extractos de levadura y de carne. Las peptonas sirven como fuentes de carbono, energa y nitrgeno. Los extractos de carne contienen aminocidos, pptidos, nucletidos y minerales. Los extractos de levaduras son excelentes fuentes de vitaminas y de compuestos nitrogenados y carbonados. Los medios complejos ms comunes son: caldo nutriente, caldo de soya trptica y agar McConkey. c) Medios selectivos son aquellos que favorecen el crecimiento de microorganismos particulares. Por ejemplo los medios endo agar, agar azul eosin metileno y agar McConkey son tres ejemplos de medios altamente utilizados para identificar a E. coli y bacterias relacionadas debido a que suprimen el crecimiento de bacterias gram positivas. d) Medios diferenciales son los medios que distinguen entre diferentes tipos de bacterias e incluso permiten identificar tentativamente a microorganismos basndose en sus caractersticas biolgicas. El agar sangre es un buen ejemplo de este tipo de medio que ayuda a distinguir entre bacterias hemolticas como estreptococos y no hemolticas.

Aislamiento de cultivos puros En su hbitat natural, los microorganismos crecen en complejos de colonias formadas por varias especies, resultando en un problema pues no se puede estudiar un slo tipo de microorganismo en un cultivo mixto. Por lo que uno necesita un cultivo puro y aqu se muestran algunas tcnicas para lograr obtenerlos: a) Placa de propagacin: es una tcnica de aislamiento que utiliza una pequea mezcla diluida con microbios de alrededor de 30 a 300 clulas. Esta mezcla es transferida al centro de una placa con agar y se esparce uniformemente con la ayuda de un tringulo de siembra estril, proceso en el que cada clula dispersa formar una colonia pura. b) Mtodo de rayadura: en este mtodo la mezcla de microbios se transfiere al medio con agar por medio de un asa de inoculacin y despus se esparce la muestra en varios patrones de zig zag. En algn momento, clulas independientes caern del asa a medida que se forma el zig zag y formarn colonias independientes. c) Placa de reparticin: en esta tcnica, la muestra se diluye varias veces para reducir la poblacin bacteriana lo suficiente como para obtener colonias separadas despus de la siembra. Las muestras ms diluidas se mezclan con agar clido y son repartidas en cajas petri. Despus de que el agar se ha endurecido, las clulas quedan fijadas in situ y forman una colonia individual.