Manul de Bacter

MAYRA TORRES GMEZ
Manual de bacter UACH UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Bacteriologa Mdica PRACTICA 1 CEPAS DE REFERENCIA TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
Mayra Torres Gmez 190128 7mo B
Manual de bacter UACH
RESUMEN En este anlisis se llevo acabo la identificacin de Salmonella enteritidis, S. typhi, Shigella sonnei, Yersinia enterocolitica y Vibrio parahemolyticus, donde se utiliz el agar TCBS nicamente para V. parahemolyticus, el SB para salmonellas, por el hecho de ser un agar altamente selectivo para dichas bacterias y los agares MacConkey, XLD y SS para Salmonellas, Shigella y Yersinia, el agar XLD se utilizo debido a que permite diferenciar a travs de la produccin de acido sulfhdrico (H2S) a la Salmonella de la Shigella, el MacConkey fue utilizado por ser una agar que permite el crecimiento de las bacterias Gram negativas e inhibe a las Gram positivas. Para la identificacin se inocularon las bacterias antes mencionadas a partir de cepas de referencia, despus de 24 horas de incubacin a 37C se observaron las caractersticas microscpicas y microscpicas, para posteriormente realizar las pruebas bioqumicas de cada una de las diferentes bacterias para una identificacin mas especifica, los resultados obtenidos en las pruebas bioqumicas tuvieron algunas variantes con respecto a los resultados reales. INTRODUCCION. ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES. Las enfermedades gastrointestinales ocupan una de las primeras causas de consulta mdica y son tambin una de las primeras causas de muerte en Mxico y en el mundo. No perdonan a nadie ni por edad ni por condicin social, aunque el grupo ms vulnerable a sus sntomas son los nios pequeos y los ancianos. Son ocasionadas por varios motivos que pueden ser desde orgnicos y psicolgicos, pero principalmente son causadas por bacterias, virus o parsitos que penetran al organismo por medio de alimentos y agua contaminada principalmente con materia fecal que tambin se disemina por el ambiente, sobre todo en temporada de calor. Entre los principales microorganismos que las ocasionan estn: la Salmonella, la Escherichia coli, la Shigella, las Giardias y las temibles amibas. Las principales manifestaciones son. Fiebre. Dolor estomacal o abdominal (clicos). Nuseas. Vmito. Diarrea. Constipacin o estreimiento. Una de las consecuencias y complicaciones ms graves cuando hay diarrea y vmito, es la deshidratacin. Los rganos que son afectados con mayor frecuencia son: el esfago, estmago, duodeno, ano, recto, pncreas y los intestinos, el delgado y el grueso.
Manual de bacter UACH Entre los estudios para identificar exactamente el tipo de problema, estn los de sangre, materia fecal, endoscopas, radiografas y ecografas, adems de la exploracin fsica y la historia clnica.
La fiebre tifoidea es una infeccin bacteriana caracterizada por diarrea, enfermedad sistmica y erupcin cutnea, causada ms comnmente por la bacteria Salmonella typhi. La bacteria Salmonella typhi se propaga por alimentos, agua y bebidas contaminadas. Despus de su ingestin, la bacteria se propaga desde el intestino hasta los ganglios linfticos del intestino, hgado y bazo por la sangre donde se multiplica. Puede infectar directamente la vescula biliar a travs del conducto heptico o extenderse a otras reas del cuerpo por medio del torrente sanguneo. Los sntomas iniciales son generalizados e incluyen: fiebre, malestar general y dolor abdominal. A medida que avanza la enfermedad, la fiebre aumenta (por encima de 39,5 C/103 F) y la diarrea se hace ms frecuente. Se observa debilidad, fatiga profunda, delirio, y aspecto de malestar general agudo de aparicin repentina. Algunas personas pueden convertirse en portadores de la bacteria Salmonella typhi y continuar expulsando la bacteria en sus heces por aos, diseminando la enfermedad. Salmonella enteritidis, se puede encontrar dentro de huevos en apariencia normales, pero que si se comen crudos o insuficientemente cocidos, pueden causar enfermedad. Esta bacteria infecta los ovarios de gallinas aparentemente sanas y contamina los huevos antes de que se forma la cscara. Durante la evisceracin de los animales se puede producir la contaminacin de al carne a travs de sus intestinos. Normalmente se transmite a los humanos por comer productos contaminados con excrementos animales. Los alimentos contaminados huelen y tiene una apariencia normal y son frecuentemente de origen animal, como la carne de vaca, de aves de corral, leche o huevos, pero todos los alimentos, incluyendo los vegetales pueden contaminarse. Esta bacteria tambin se puede encontrar en las heces de animales domsticos, y las personas se pueden infectar si no se lavan las manos despus de entrar en contacto con las heces de estos animales. Se debe tener mucho cuidado en la elaboracin casera de salsas, mayonesas etc. Las principales causas de salmonelosis son la recontaminacin de productos cocinados (por contacto con superficies o utensilios no lavados adecuadamente tras utilizarlos con alimentos crudos, por manipuladores infectados que no guardan correctas medidas de higiene), y cocinado insuficiente. Las shigelas tienen como nico reservorio al hombre y su dosis infectante mnima es pequea, lo que permite su transmisin no slo a travs de los alimentos, sino tambin a travs del agua y por contacto directo entre nios en las guarderas. Sin embargo, como todos los microorganismos de transmisin fecal-oral cuyo nico reservorio es humano (shigelas y Salmonella bioser typhi), pueden llegar a erradicarse con medidas de higiene personal y ambiental.
Manual de bacter UACH Y. enterocolitica es una bacteria pequea de forma redonda y Gram-negativa, la cual es aislada frecuentemente de los especmenes clnicos tales como las heridas, las heces fecales, el esputo o las glndulas linfticas mesentricas. Sin embargo, no forma parte normal de la flora humana. Por otro lado, Y. pseudotuberculosis ha sido aislada del apndice infectado en los humanos. Ambos organismos han sido aislados frecuentemente de los animales, tales como los cerdos, las aves, los castores, los gatos y los perros. Solamente la bacteria Y. enterocolitica se ha encontrado en muestras ambientales de lagunas y lagos, y en alimentos como la carne, los helados y la leche. La mayora de los organismos aislados no han sido catalogados como patgenos. Vibrio parahaemolyticus Este microorganismo es un bacilo corto, curvado, Gram negativo, mvil por un solo flagelo polar, anaerobio facultativo y algo halfilo, ya que cuando crece es en presencia de 3-6 % de NaCl, en un rango de temperatura entre 8 y 44C, siendo la ptima la de 37C; a esta temperatura la divisin celular ocurre a gran velocidad (cada 10-12 minutos). Este Vibrio prefiere condiciones alcalinas (crecimiento ptimo a pH de hasta 9,0), adems es termosensible, destruyndose fcilmente a temperaturas mayores de 50C. Los sntomas de la toxiinfeccin alimentara por V. parahaemolyticus, generalmente se presentan 10-18 horas despus de ingerido el alimento contaminado. Los sntomas principales son nuseas, vmitos, dolor abdominal y diarrea. A veces se presenta fiebre escasa, siendo breve la duracin de la enfermedad (1-4 das).
Manual de bacter UACH RESULTADO DE APRENDIZAJE. Identificar los diferentes microorganismos patgenos del tracto gastrointestinal presentes en la muestra. MATERIALES Y METODOS. MATERIAL Y EQUIPO. Bata de laboratorio, cubre boca, guantes ltex. 2 Mecheros. Microscopio ptico de campo claro. Incubadora. Asa de nicromio redonda y asa de nicromio recta. Portaobjetos. Puente de tincin. Cristal violeta. Yodo lugol. Alcohol acetona. Safranina. Solucin salina estril al 0.85%. Reactivo de FeCl3. Reactivo de Kovacs. Rojo de metilo. -Naftol KOH al 40% Cepas de referencia (Vibrio parahemolyticus, Salmonella typhi, Salmonella enteritidis, Shigella sonnei y Yersinia enterocolitica). 2 Agar McConkey. 2 Agar Salmonella-Shigella. 1 Agar sulfito de bismuto. 1 Agar TCBS. 21 Agar XLD. 5 Triple azcar hierro (TSI). 5 Medio MIO. 5 Rojo de metilo. 5 Voges-Proskauer. 5 Caldo de urea. 5 Agar LIA. 5 Fenilalanina. 5 Citrato. 5 SIM. Papel estraza. Agua destilada. Aceite de inmersin. Gradilla.
Manual de bacter UACH METODOS. Sembrado de las cepas de referencia. Vibrio parahemolyticus. Agar TCBS. Salmonella typhi. MacConkey, Salmonella-Shigella, Sulfito de bismuto, XLD. Salmonella enteritidis. MacConkey, Salmonella-Shigella, Sulfito de bismuto, XLD. Shigella sonnei. MacConkey, Salmonella-Shigella, Sulfito de bismuto, XLD. Yersinia enterocolitica. MacConkey, Salmonella-Shigella, XLD. Se sumerge el asa de nicromio redonda en el tubo de ensaye que contenga la cepa de referencia (Vibrio parahemolyticus, Salmonella typhi, Salmonella enteritidis, Shigella sonnei y Yersinia enterocolitica), se toma la caja petr que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se descarga esta en el primer cuadrante, despus se estra en los dems cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas despus del periodo de incubacin. Despus de que se hayan sembrado cada una de las sepas de referencia se colocan las cajas petr en la incubadora durante 24 horas a 37C, despus de este periodo de incubacin se revisa la estructura microscpica de cada una de las sepas. NOTA: Este procedimiento se realiza de igual forma para cada una de las cepas de referencia en cada uno de los agares correspondientes. Tincin de Gram. En un portaobjetos se coloca una gota de solucin salina al 0.85%, con el asa de nicromio se toma una colonia del cultivo y se homogeniza la muestra sobre el portaobjetos que contenga la solucin salina, se deja reposar a temperatura ambiente, y se espera a que esta seque, depuse de que esta haya secado se procede hacer lo que es la tincin de Gram: Fijar el frotis con calor. Cubrir con cristal violeta por un minuto. Lavar con agua. Cubrir con yodo lugol por un minuto. Lavar con agua. Decolorar con alcohol acetona de 10 -15 segundos. Lavar con agua. Cubrir con safranina por un minuto. Lavar con agua y secar. Observar en el microscopio con los objetivos de 10X y 100X.
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.
Manual de bacter UACH Pruebas bioqumicas. TSI (Triple azcar hierro). Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la caja petr que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estra en la parte de arriba, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C. Los resultados pueden dar de la siguiente manera: K/K Rojo arriba y abajo. K/A Rojo arriba y amarillo abajo A/A Amarillo arriba y abajo. Si se presenta un precipitado negro es que es productor de cido sulfhdrico. CITRATO. Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la caja de petr que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye que contenga el medio y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estra en la parte de arriba, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C. Despus del periodo de incubacin se lee el resultado si el medio cambia de un color verde a azul Prusia es positivo y si este queda del mismo color es negativo. FEA (Fenilalanina). Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la caja de petr que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye que contenga el medio y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estra en la superficie, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C. Despus del periodo de incubacin se revisa si hay crecimiento y se agregan de 3-4 gotas de FeCl3 y se lee el resultado si se presenta una coloracin verde oscuro es una fenilalanina positiva y se forma una coloracin amarillenta es una fenilalanina negativa. LIA (agar lisina hierro). Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la caja de petr que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye que contenga el medio y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estra en la superficie, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C. Despus del periodo de incubacin se revisan los resultados, en este se revisa: Produccin de H2S. Color negra (+). Desaminacin. (Arriba) Color roja (+) Color amarillo (-) Descarboxilacin (Abajo) Color morado (+) Color amarillo (-) MIO. Se toma una colonia con el asa de nicromio y se inocula el medio por picadura directa hasta el fondo, se cierra el tubo y se incuba por 24 horas a 37C. Pasado el tiempo de incubacin se agregan 4 gotas del reactivo de kovacs. Los resultados se pueden dar de la siguiente manera: Desaminacin: se lee en la parte de arriba del tubo, si al momento de agregar el reactivo kovacs se presenta un anillo rojo es una desaminacin (+) e indol (+) y si se presenta un anillo amarillo es una desaminacin (-) e indol (-). Descarboxilacin: Si se presenta una coloracin morado-verdoso es una Descarboxilacin (+) y si se presenta una coloracin amarillenta o blanca es una Descarboxilacin (-).
Manual de bacter UACH CALDO DE UREA. Se toma una colonia con el asa de nicromio de la cepa de referencia y se inocula por agitacin, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C. Despus del tiempo de incubacin si la ureas queda de color naranja es una ureas (-) y si cambia a color rosa es una ureasa (+). ROJO DE METILO Y VOGES PROSKAUER. Se inoculan por agitacin los tubos que contengan el rojo de metilo y el Voges Proskauer, despus de haberlos inoculado se cierran los tubos de ensaye y se incuban a 37C por 48 horas. Pasadas las 48 horas de incubacin se toman los tubos de RM y VP y se agregan los reactivos correspondientes para cada una de estas pruebas bioqumicas. Al tubo que contenga el RM se la agregan 4 gotas de rojo de metilo, sin agitar si se presenta una coloracin roja es un RM (+) y si no presenta cambio alguno es RM (-). Al tubo del VP se la agrega primeramente 12 gotas de -naftol, despus se agregan 4 gotas de KOH al 40%, se deja reposar durante 15 minutos, si se forma una anillo color salmn o rojo es un VP (+) y si no presenta cambio alguno es VP (-). SIM. Se toma una colonia con el asa de nicromio y se inocula el medio por picadura hasta el fondo, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C. Pasado el tiempo de incubacin se agregan 4 gotas del reactivo de kovacs si se presenta un anillo color rojo es un indol (+) y si se presenta un anillo color amarillo es un indol (-).
Manual de bacter UACH RESULTADOS. Morfologa Macroscpica y Microscpica.

Salmonella typhi Vibrio parahemolyticus Salmonella enteritidis Shigella sonnei Yersinia enterocolitica
Forma Tamao Borde Elevacin Luz transferida Luz reflejada
Redonda Pequea Entero Convexa Si Si Incolora (McK) Negra (SS, XLD, sulfito de bismuto) Cremosa G (-) Bacilos -
Redonda Pequeo Entero Convexa S Incolora (TCBS)
Redonda Pequea Entero Convexa Si Si Incolora (McK) Negra (SS, XLD, sulfito de bismuto). Cremosa G (-) Bacilos -
Redonda Pequea Entero Convexa Si Si Incolora (McK) Incolora (SS, XLD, sulfito de bismuto) Cremosa G (-) Bacilos -
Redonda Pequea Entero Convexa Si Si Incolora (McK, SS) Blancas (XLD)
Color Consistencia Afinidad tintoral Forma Lactosa AGAR XLD
Cremosa G (-) Bacilos
Cremosa G (-) Bacilos -
Morfologa macroscpica.
Salmonella Typhi
Salmonella enteritidis
Shigella sonnei
Yersinia enterocolitica
Manual de bacter UACH AGAR MacConkey
Shigella sonnei
Salmonella sp AGAR SS
Shigella sonnei
Salmonella sp AGAR TCBS AGAR SB
Vibrio parahemolyticus
Salmonella typhi
Manual de bacter UACH Morfologa microscpica.
Salmonella enteritidis
Salmonella typhi
Shigella sonnei
Vibrio parahemolyticus
Pruebas Bioqumicas. Salmonella typhi TSI A/A Citrato FEA LIA MIO Caldo de urea RM/VP 37C SIM 37C + + RM +
Indol
Salmonella enteritidis gas A/A + + H2S +
Shigella sonnei gas A/A H2S -
gas -
H2S +
Indol
Movilidad
Ornitina
+ -
+
Indol
Movilidad
Ornitina
Indol Movilidad
Ornitina
VP Movilidad
RM +
Indol
VP Movilidad
RM +
Indol
VP Movilidad
Manual de bacter UACH Vibrio parahemolyticus gas H2S K/A + + MIO Caldo de urea RM/VP 37C SIM 37C
Ornitina
TSI Citrato FEA LIA
Yersinia enterocolitica gas H2S A/A Ornitina
Indol
+ + VP +
Movilidad
Indol
VP -
Movilidad
RM Indol
negativo
RM +
Indol
+ negativo
Movilidad
Movilidad
+ 25C
DICUSIN DE RESULTADOS En este anlisis se puedo observar a las diferentes cepas de referencia que se nos proporcionaron donde se puedo confirmar que se trataba de los microorganismos que efectivamente nos haban proporcionado, esto se logro gracias a las pruebas metablicas que se realizaron en donde, los resultados arrojados no variaron con respecto a los que se menciona en la referencia consultada, asi que es de dicha importancia tener en cuenta las caractersticas bioquimicas CONCLUSIN El estudio de la morfologa macroscpica y microscpica es de gran importancia debido a que a travs de este estudio se pude ir identificando que tipo de bacteria es la que se esta estudiando y as saber cuales pruebas bioqumicas son las adecuadas para poder confirmar si se trata de la bacteria que se sospecha, y as poder dar un resultado confiable el cual podr ayudar a dar un tratamiento adecuado y a tiempo. Las pruebas bioqumicas son de gran importancia ya que estas nos permiten determinar caractersticas especificas de la bacteria a estudiar, y estas caractersticas nos ayudan a determinar o identificar que tipo de bacteria es la que se esta estudiando, los resultados obtenidos en esta practica fueron los esperados ya que al compararlos con las tablas de referencia estos coincidieron en los resultados obtenidos en las pruebas realizadas. BIBLIOGRAFIA. Braude, A. (1984) Microbiologa Clnica. Captulos 31 Enterobacteriaceas,. Ed. Mdica Panamericana S.A., pgs. 394, 395, 397, 399,451.
Manual de bacter UACH Cabello, R. (1999) Manual de Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 4ta edicin. Mxico, pgs. 374-376. Forbes, Sahm, Weissfeld. (2004). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico. Ed. Panamericana. 11va edicin. Mexico. , pgs. 441-444. Koneman E. Allen S. (2004) Diagnostico Microbiolgico. Ed. Mdica Panamericana S.A., pgs. 197, 200,215. http://www.esmas.com/salud/enfermedades/infecciosas/434933.html http://docum.azti.es/RIESGOS.nsf/0/a72cd92e979db075c1256b370044bf63? OpenDocument
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Laboratorio: Bacteriologa Mdica Prctica # 2
Anlisis de Coprocultivo TITULAR:

Norma Herrera Daz
ALUMNA:
15 de Febrero de 2007
Manual de bacter UACH Resumen. Se realiz el anlisis bacteriolgico de una muestra diarreica con la finalidad de identificar al microorganismo causante de la misma. Realizando primeramente la siembra en agares propios para enterobacterias (McK, XLD), posteriormente en Sulfito de Bismuto, despus de haber sido preenrriquecida la muestra con Caldo de selenito. Posteriormente se realiz el anlisis macroscpico y microscpico, para luego realizar las pruebas bioqumicas correspondientes. Mismas que fueron incubadas 24 horas a 37C para despus del tiempo definido se procedi a su interpretacin, para confirmar o descartar la posible presencia de algn patgeno. En el anlisis realizado determin la presencia de Kluyvera ascorbata o Kluyvera georgiana, por falta de pruebas; no se pudo definir la especie. Introduccin. El grupo de las Enterobacterias, nombre comn utilizado para referirse a la Familia Enterobacteriacea, incluye a bacilos Gram (-), aerobios y anaerobios facultativos, la mayora de ellos mviles mediante flagelos pertricos, que como caracterstica microbiolgica fenotpica comn tienen la capacidad de fermentar la glucosa y reducir los nitratos a nitritos. (2) (3) Tienen como hbitat el intestino de animales inferiores y del hombre. Adems tienen una amplia distribucin en el ambiente; entre las numerosas especies que constituyen esta familia, encontramos algunos grupos que en su relacin con el hospedero humano son comensales, como es el caso de Escherichia coli constituyente importante de la microbiota intestinal normal aerobia, especialmente a nivel de la porcin distal del intestino delgado y fundamentalmente a nivel del intestino grueso. En esta localizacin la presencia de E. coli resulta en un beneficio para el hospedero, pues como parte de su metabolismo sintetiza vitaminas y esta microbiota participa en la degradacin de cidos y sales biliares. Debido a la presencia masiva de E. coli a nivel intestinal, la deteccin de E. coli se utiliza como marcador de contaminacin fecal. (3) (5) Otros integrantes de este grupo en cambio son patgenos intestinales como el gnero Salmonella, Shigella, Yersinia y un subgrupo de E. coli con factores de virulencia especficos que afectan el intestino y por ello se denominan E. coli diarreognicos. Estos grupos o Gneros bacterianos causan infecciones gastrointestinales que pueden expresarse clnicamente como diarrea acuosa, diarrea con sangre (tambin denominada diarrea enteroclica o sndrome disentrico) y en algunos casos a partir de la infeccin intestinal estas bacterias pasan al torrente sanguneo y se puede producir una infeccin sistmica o bacteremia, como por ejemplo la fiebre tifoidea. (5) En 1956, hacen la primera identificacin del gnero Kluyvera, describindolo como bacilos, gram negativos, con flagelados polares y los clasificaron dentro de la Familia Enterobacteriaceae. Producan grandes cantidades de cido alfa-cetoglutrico en la fermentacin de la glucosa. En 1962 se identific a estos grmenes como pertricos. Fermentan la mayora de azcares y son sensibles a distintos antibiticos.
Manual de bacter UACH Se han aislado tres grupos de Kluyvera: K. ascorbata, K. georgiana y K. species. Las dos primeras estn cercanas bioqumicamente aunque se diferencian, como es por la respuesta al irgasn entre otras. Inicialmente fue considerado el gnero Kluyvera un microorganismo comensal de las vas respiratorias altas y del aparato digestivo. Paulatinamente van apareciendo nuevos casos en la literatura en los que se asla este germen atribuyndosele en muchos casos un papel patgeno como en pielonefritis agudas y trastornos gastrointestinales en pacientes ancianos inmunodeprimidos. (1)
Manual de bacter UACH Material: Portaobjetos y cubreobjetos. Asa de nicromio punta recta. Asa de nicromio punta redonda. Mechero de Bunsen. Papel estraza. Puente de tincin. Gradilla y piseta. Cajas petri. Hisopo estril. Equipo de proteccin personal: Cubreboca. Guantes de ltex. Bata. Reactivos: Tincin de Gram. Cristal violeta. Yodo lugol. Alcohol acetona. Safranina. Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%. Aceite de inmersin. Cloruro Frrico al 10% Kovaks. -Naftol. KOH al 40%. Rojo de Metilo. Agares: MacConkey. XLD. Sulfito de Bismuto. Caldo de selenito. Pruebas Bioqumicas: TSI MIO SIM Citrato Caldo de Urea FeA RM-VP LIA Caldo de Malonato Equipo: Microscopio ptico de campo claro. Incubadora a 37C.
Manual de bacter UACH Metodologa: Primera sesin 1. Descargue muestra en primer cuadrante de medios de cultivos: McK y XLD. 2. Estriar en las cajas esterilizando el asa en cada cuadrante. 3. Colocar el hisopo con muestra en el caldo de selenito. 4. Incubar los medios de cultivo incluyendo el caldo de selenito a 37C durante 24 horas. Segunda sesin 1. Pasado el tiempo de incubacin, revisar los medios de cultivo, realizando el anlisis microscpico y macroscpico de las colonias. 2. Realizar pruebas bioqumicas de las diferentes colonias encontradas, seleccionar estas de acuerdo a la morfologa microscpica que se observ. 3. Tomar el hisopo del caldo de selenito y descargar en el agar de Sulfito de Bismuto, realizar el estriado con el asa de nicromio e incubar a 37C por 24 horas. Tercera sesin: 1. Leer pruebas bioqumicas. 2. Observar el medio Sulfito macroscpicas y microscpicas.
de
Bismuto,
identificar
las
caractersticas
Pruebas Bioqumicas. Se siembran con asa recta estril. Citrato. Sembrar en el pico FEA: Sembrar en pico LIA: Sembrar en fondo y pico TSI: Sembrar en fondo y pico MIO: Sembrar con el asa recta con picadura hasta el fondo de forma derecha. (despus en la lectura se le agrega 4 gotas del reactivo de kovacs) SIM: Sembrar con el asa recta con picadura hasta el fondo de forma derecha. (despus en la lectura se le agrega 4 gotas del reactivo de kovacs) Caldos: Malonato, RM-VP y Urea. Se siembran disolviendo colonias en el caldo. *en el VP se le agrega 3 gotas de KOH al 40% y una gota de alfa naftol al momento de la interpretacin de resultados. En el rojo de metilo se agrega 3 gotas del reactivo rojo de metilo. En la FeA se adicionan 3 gotas de cloruro frrico para interpretar. Observacin microscpica Colocar una gota de solucin salina en un portaobjetos. Tomar una colonia con el asa recta estril y homogenizarla en el portaobjetos, dejar secar a temperatura ambiente. Fijar a la flama del mechero pasando tres veces el portaobjetos de la punta hacia la base. Colocar el portaobjetos en el puente de tincin y aadir cristal violeta, dejar actuar por 1 minuto. Enjuagar y adicionar yodo lugol, esperar 1 minuto y enjuagar. Aadir alcohol acetona y dejar actuar de 10-15 seg., enjuagar.
Manual de bacter UACH Adicionar safranina, esperar un minuto y enjuagar y secar con papel estraza. Observar al microscopio a 10x y 100x (con aceite de inmersin).
Manual de bacter UACH Resultados. Macroscpicas: Agar XLD Agar MacConkey
Kluyvera ascorbata Agar SB
Kluyvera ascorbata
Kluyvera ascorbata Agar: Forma Tamao Borde Elevacin Consistencia Luz transmitida Luz reflejada Color XLD Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa Positiva Blancas MacConkey Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa Positiva Moradas Sulfito de Bismuto Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa Positiva Moradas
Microscpicas: Bacilos cortos, Gram negativos. Mviles, por medio de flagelos polares.
Manual de bacter UACH Kluyvera ascorbata Pruebas Bioqumicas. Kluyvera ascorbata Gas H2S A/A -
TSI Citrato FEA MIO SIM LIA
+ Movilidad Indol Ornitina
+
Movilidad
+ + +
+
Indol H2S
RM-VP Caldo de Urea Caldo de Malonato Desaminacin Descarboxilacin RM
+
VP
+ +
(4)
Manual de bacter UACH Discusin. En el anlisis de coprocultivo, se pretenda aislar las enterobacterias que causan enfermedades gastrointestinales, como pueden ser: Salmonella, Vibrio, Shigella y Yersinia. Los agares utilizados fueron: Agar XLD, MacConkey y Sulfito de bismuto, donde crecieron colonias redondas, con borde entero, cremosas, convexas, en el agar MacConkey se observaron colonias rosas por lo que indica que la bacteria aislada, es lactosa positiva, por lo que se descarta la posibilidad de haber encontrado alguna de las bacterias anteriormente mocionadas, ya que estas, a excepcin de Vibrio, no fermentan la lactosa, solo que Vibrio no crece en los agares utilizados. As que se procedi a realizar pruebas bioqumicas, en donde se pudo diferenciar a la bacteria aislada, cuyo genero es; Kluyvera, aunque por falta de pruebas su especie no se pudo definir. Kluyvera es una bacteria que tambin pertenece a la familia de enterobacterias.
Conclusin. Se llego a la conclusin de que la bacteria aislada, es proveniente de la Familia de las Enterobacterias, siendo por lo regular un microorganismo comensal de las vas respiratorias altas y del aparato digestivo. Se llego a esta por el motivo de al revisar la morfologa macroscpica y microscpica, hubo una variable la fermentacin de la Lactosa, siendo la nica que la fermenta el Vibrio cholerae, pero este ultimo no crece en este tipo de agar por ser un microorganismo que necesita alcalinidad para crecer.
Bibliografa. 1. www.actasurologicas.info/v25/n01/2501NC03.htm 2. 3. 4. www.netropica.org/Presentaciones/ENTEROBACTERIAS%20FINAL.pdf www.apuntes.rincondelvago.com/microbiologia_18.html Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico. Ed. 3ra
Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico. 5. Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. edicin. Mxico.
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Bacteriologa Mdica Practica 3 Cepas De Referencia Que Causan Enfermedades Del Tracto Urinario TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
22 de febrero de 2007
Manual de bacter UACH Resumen En esta prctica se realiz un cultivo para identificar a las bacterias que causan enfermedades del tracto urinario; estas son: E. coli, Enterobacter cloacae, Proteus, Pseudomona auriginosa y Streptococcus faecalis. Para lo cual se utilizaron los agares: sangre, MacConkey, ENDO y cetrimide, el agar cetrimide se utilizo para identificar nicamente a la Pseudomona, as como el MacConkey, solo que en este agar tambin se inocularon las bacterias de E. coli, E. cloacae y Proteus al igual que el ENDO y sangre, en este ultimo tambin se inoculo el S. feacalis, una vez que todas las cepas de referencia fueron inoculadas en los agares correspondientes se procedi a incubar a 37C por 24 horas, trascurrido dicho tiempo se hizo la identificacin macro y microscpicamente para luego realizar las pruebas bioqumicas, pruebas que permiten identificar y diferenciar a las bacterias, los resultados arrojados no variaron con las caractersticas citadas en las referencias, solo en el Enterobacter cloacae no coincidi, por lo que se cree que la cepa fue contaminada al momento de ser inoculada.
Manual de bacter UACH Introduccin Ms los de 80% de las infecciones humanas de la zona urinaria (UTI) son debido a la bacteria, Escherichia coli, pero tambin se encuentran infecciones urinarias debido a Proteus, entre otras Enterobacterias que infectan el rin las ms comnmente encontradas son E. coli y en segundo termino esta el Proteus, que tambin pertenecen a los Enterobacteriaceae y son bacterias mviles gramnegativos. Se encuentran a menudo como organismos vivos libres en suelo y agua pero son tambin parsitos en la zona urinaria superior de los seres humanos. Escherichia coli Se encuentra generalmente en los intestinos animales, incluido el humano y, por ende, en las aguas negras. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodor von Escherich, bacterilogo alemn, quin la denomin Bacterium coli. Posteriormente la taxonoma le adjudic el nombre de Escherichia coli, en honor a su descubridor. sta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo. Adems produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tincin de Gram, es anaerobio facultativo, mvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--. Pseudomonas aeruginosa (o Pseudomonas pyocyanea) es una bacteria Gramnegativa, aerbica, con motilidad unipolar. Como otros Pseudomonas, P. aeruginosa secreta una variedad de pigmentos, como piocianina (azul verdoso), fluorescena (amarillo verdoso fluorescente), y piorubina (rojo pardo). P. aeruginosa es frecuentemente y preliminarmente identificada por su apariencia perlada y olor a nixtamal. La identificacin definitiva clnica de P. aeruginosa frecuentemente incluye identificar la produccin de ambas piocianina y fluorescena como su habilidad de crecer a 42 C. Este es un patgeno oportunista de individuos immunocomprometidos, P. aeruginosa infecta el tracto pulmonar, el urinario, tejidos, heridas, y tambin causa otras infecciones de sangre. La piocianina es un factor de virulencia de la bacteria y se ha conocido que puede hasta causar muerte. Streptococcus faecalis es una bacteria Gram-positiva comensal, que habita el tracto gastrointestinal de humanos y otros mamferos. Como otras spp. Del gnero Enterococcus, E. faecalis puede causar infecciones comprometidas en humanos, especialmente en ambiente de hospital. El hbitat normal de estos es el tubo digestivo, y puede causar endocarditis, infecciones de la vejiga, prstata y epiddimo.
Enterobacter cloacae es una bacteria, gram negativa en forma de bacilo. Es responsable de varias infecciones, incluyendo infecciones ms bajas de la zona
Manual de bacter UACH respiratoria, piel e infecciones suaves del tejido fino, infecciones de la zona urinaria (UTIs). Tiene flagelos peritricos, mide 0.3-0.6 x 0.8-2.0 m, es oxidasa-negativa, catalasa-positive, y es facultativo anaerobia. Es un patgeno oportunista al igual que otras bacterias de la familia enterobacteria. El gnero Proteus pertenece a la tribu Proteae de la familia Enterobacteriaceae, junto con los gneros Morganella y Providencia. El gnero est compuesto por 8 especies: Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Proteus penneri, Proteus hauseri, Proteus myxofaciens y las genomoespecies. Las tres ltimas y P. vulgaris forman el complejo P. vulgaris. P. mirabilis y con menor frecuencia P. vulgaris y P. penneri han sido reconocidos como agentes etiolgicos de distintos procesos infecciosos, tales como infeccin urinaria, infeccin quirrgica, neumonas, bacteriemias, septicemias e infecciones ticas. Asimismo, genero se ha relacionado en infecciones nosocomiales. Resultado De Aprendizaje. Identificar los diferentes microorganismos patgenos del tracto urinario.
Material: Portaobjetos y cubreobjetos. Asa de nicromio punta recta. Asa de nicromio punta redonda. Mechero de Bunsen. Papel estraza. Puente de tincin. Gradilla y piseta. Cajas petri. Hisopo estril.
Equipo: Microscopio ptico Incubadora a 37C.
Equipo de proteccin personal: Cubre boca. Guantes de ltex. Bata. Reactivos: Tincin de Gram. Cristal violeta. Yodo lugol. Alcohol acetona. Safranina. Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%. Aceite de inmersin. Cloruro Frrico al 10% Kovaks. -Naftol. KOH al 40%. Rojo de Metilo. Agares: Bilis esculina MacConkey. ENDO. Sangre. Cetrimide. Pruebas Bioqumicas: TSI MIO SIM Citrato Caldo de Urea FeA RM-VP LIA Caldo de Malonato
Mtodos. Sembrado de las cepas de referencia. E. coli Agar sangre, MacConkey y ENDO Enterobacter cloacae. MacConkey, ENDO y Sangre Proteus. MacConkey, ENDO y Sangre Pseudomona aureginosa. MacConkey, y Cetrimide. Streptococcus feacalis. Agar Sangre. Se sumerge el asa de nicromio redonda en el tubo de ensaye que contenga la cepa de referencia (E.coli, Enterobacter cloacae, Proteus, Pseudomona aureginosa y Streptococcus feacalis), se toma la caja petr que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se descarga esta en el primer cuadrante, despus se estra en los dems cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas despus del periodo de incubacin. Despus de que se hayan sembrado cada una de las sepas de referencia se colocan las cajas petr en la incubadora durante 24 horas a 37C, despus de este periodo de incubacin se revisa la estructura microscpica de cada una de las sepas.
NOTA: Este procedimiento se realiza de igual forma para cada una de las cepas de referencia en cada uno de los agares correspondientes.
4. Pasado el tiempo de incubacin, revisar los medios de cultivo, realizando el anlisis microscpico y macroscpico de las colonias.( se realiza una tincin de Gram) 5. Realizar pruebas bioqumicas (MIO, SIM, TSI, Malonato, RM-VP, FeA, LIA, UREA y Citrato) de las diferentes colonias encontradas, seleccionar estas de acuerdo a la morfologa microscpica que se observ. 6. Incubar las pruebas bioqumicas una vez inoculadas a 35C por 24 horas 7. trascurrido el tiempo se procede a leer.
Resultados Morfologa Macroscpica

bacterias E. coli A. Sangre Colonias redondas, chicas, borde entero, grises, cremosas, convexas y no trasmiten luz A. ENDO Colonias chicas redondas con borde entero, rojas metlicas convexa no trasmite luz A. MacConkey Colonias redondas, medianas, color rosa, con borde entero, cremosas, convexa y no trasmiten luz. A. cetrimide
E. cloacae
Colonias redondas, chicas, borde entero, grises, cremosas, convexas y no trasmiten luz Colonias redondas grises, con borde entero, convexas, cremosas, no trasmiten luz y producen efecto de suarming
Colonias redondas, medianas, trasparentes, aplanadas, con borde entero y no trasmite luz Colonias redondas chicas, trasparentes, borde irregular, aplanada, cremosa y no trasmite luz.
Colonias redondas, trasparentes, chicas, con borde entero, convexa, cremosa y no trasmite luz. Colonias redondas, medianas, con borde entero, elevacin aplanada, cremosa y trasmite luz.
Proteus
P. aureginosa
Colonias redondas, chicas, trasparentes, borde entero, convexa, no trasmite luz y tiene olor a nixtamal. Colonias redondas, pequeas, blancas, borde entero, convexa, cremosa y no trasmite luz.
Colonias redondas, chicas, color verde, borde entero, cremosa, convexa y no trasmite luz.
S. faecalis
Morfologa Microscpica
bacteria E. coli Proteus E. cloacae P. aureginosa S. faecalis morfologa microscpica Bacilos gram negativos, cortos, en arreglo simple Bacilos gram negativos, cortos, simples Bacilos gram negativos, cortos, simples Bacilos gram negativos, medianos, simples Cocos en cadena, gram positivos.
Morfologa Macroscpica Agar MacConkey
E. cloacae
E. coli
P. aureginosa Agar sangre
Proteus
S. faecalis
E. coli
Proteus
E. cloacae Agar cetrimide
P. aureginosa Morfologa Microscpica
E. coli
Proteus
E. cloacae
P. aureginosa
S. faecalis
Pruebas Bioqumicas E. coli TSI A/A Citrat o FEA LIA MIO Caldo de urea RM/VP 37C SIM 37C + + + RM +
Indol
Enterobacter cloacae H2S A/A gas + gas Movilidad
Proteus gas K/A + + H2S +
gas H2S Indol
H2S -
H2S Ornitina
gas Movilidad
H2S Ornitina
gas -
+ -
Indol
+
Indol
+ + +
Ornitina
Movilidad
VP Movilidad
RM Indol
VP +
Movilidad
RM +
Indol
VP Movilidad
TSI Citrato FEA MIO SIM LIA
Pseudomona aureginosa Gas H2S K/K -
+ +
Movilidad Indol Ornitina
+
Movilidad
+ -
+
Indol H2S
RM-VP RM
+
VP
+
Caldo de Urea Oxidasa
Discusin De Resultados En la realizacin de este cultivo de identificacin para las bacterias que causan enfermedad o infeccin en las vas urinarias, se obtuvieron resultados bastante especficos para poder diferenciar entre las enterobacterias relacionadas a las ITU ya que todos los resultados arrojados durante su anlisis coincidan con las caractersticas que en las lecturas no referan, solo cambio un poquito el resultado del Enterobacter cloacae, esto debido a una contaminacin que se propicio a la hora de inocular dicho microorganismo en las pruebas bioqumicas, esta contaminacin se debi a la falta de esterilizar o quemar el asa de nicromio utilizada, ya que la misma se haba utilizado para inocular a otra bacteria. Conclusin Para poder identificar cada una de las bacterias, es necesario utilizar las pruebas mas especificas, en este caso las pruebas bioqumicas, ya que estas permiten diferenciar, por medio de su metabolismo a las bacterias, debido a que cada bacteria utiliza sus propios nutrientes para poder desarrollarse, es por ello, que aun despus de haber realizado el cultivo se realicen estas pruebas, adems de su identificacin macro y microscpica. Es as, como se llega ala identificacin especifica de un microorganismo, logrando identificar su gnero y especie por lo menos. Se no ser as, las bacterias pueden ser confundidas; por no tener las pruebas suficientes para diferenciarlas.
Bibliografa Braude, A. (1984) Microbiologa Clnica. Captulos 31 Enterobacteriaceas,. Ed. Mdica Panamericana S.A. Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra edicin. Mxico. http://cienciasbiologicas.uniandes.edu.co/lema/nodo.php?id=37 http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S032575412006000300002&lng=en&nrm=iso&tlng=es http://es.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli http://www.scielo.org.pe/scielo.php? pid=S172646342003000300002&script=sci_arttext http://student.ccbcmd.edu/courses/bio141/labmanua/lab8/simenter.html
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Laboratorio: Bacteriologa Mdica Prctica # 4 urocultivo TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNOS:
Eloy Ricardo Borjas Senz 175211 Mayra Torres Gmez 190128 7mo B
1 de marzo de 2007
Resumen En este anlisis, se realiz un urocultivo para determinar si el paciente, presenta una infeccin urinaria, esta tcnica se realiz utilizando los mtodos cualitativo y cuantitativo, as como la identificacin de la bacteria causal de la infeccin y la resistencia que dicho microorganismo presenta ante antibiticos como: gentamicina, oxacilina, ceftriaxone, tetraciclina. Para el mtodo cuantitativo; se utiliz solucin salina, en la cual se realizaron diluciones de 1:10 hasta 1:10000, posteriormente se paso 1ml de la muestra, 1ml de la dilucin 1:100 y 1ml de 1:10000 en cajas pretri, adicionando agar plate count; luego se incubaron a 37C por 24horas.Otro mtodo utilizado fue el de asa calibrada; donde se utiliz el agar sangre y un asa de 0.01. Para el mtodo cualitativo se utiliz: el agar MacConkey y el Sal Manitol. Donde, como resultado, se obtuvo; en el anlisis cuantitativo colonias mayor de 100000 o incontable, en la identificacin; colonias redondas convexas, color rosa indicativo de que fermentan la lactosa, y de consistencia cremosa; esto en agar MacConkey y en el Sal Manitol no hubo crecimiento, microscpicamente fueron bacilos gram negativos, por lo que se procedi a realizar las pruebas bioqumicas o metablicas para determinar el tipo de microorganismo asilado. El cual resulto ser, una enterobacteria comnmente relacionada a infecciones del tracto urinario: E.coli. Resistente a todos los antibiticos probados.
Introduccin Varios miembros de las enterobacterias pueden aislarse de la orina en el curso de infecciones del aparato urinario o urogenital, como tambin en otros tipos de afecciones. La orina vesical normalmente no contiene microorganismos. Sin embargo, los primeros 10 a 15 ml. de orina emitidos por personas normales de cualquier edad o sexo, siempre presentan bacterias, las que proceden de la flora corriente de la uretra anterior, prepucio, regin vulvovaginal o de contaminacin fecal. La flora de estas localizaciones es variada y est constituida por estafilococos coagulasa-positivo y negativos, estreptococos diversos, bacilos difteromorfos, enterobacterias, lactobacilos, micoplasmas, bacterias anaerobias, levaduras y muchos microorganismos. En la presencia de esta flora influyen localizacin anatmica, sexo, edad, hbitos de higiene y factores patolgicos propios del husped. En la etiologa de las infecciones urinarias predominan los bacilos gramnegativos. Los procesos agudos y crnicos son provocados por E. coli y por especies de los gneros Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Pseudomonas, etc. De estos agentes, E. coli se asla en 80% de los casos. El examen microbiolgico de una muestra de orina se denomina Urocultivo. ste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo. Material: Portaobjetos y cubreobjetos. Asa de nicromio calibrada. Asa de nicromio punta redonda. Mechero de Bunsen. Papel estraza. Puente de tincin. Gradilla y piseta. Cajas petri. Hisopo estril. Equipo de proteccin personal: Cubreboca. Guantes de ltex. Bata. Reactivos: Tincin de Gram. Cristal violeta. Yodo lugol. Equipo: Microscopio ptico de campo claro. Incubadora a 37C.
Manual de bacter UACH Alcohol acetona. Safranina. Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%. Aceite de inmersin. Cloruro Frrico al 10% Kovaks. -Naftol. KOH al 40%. Rojo de Metilo. Agares: MacConkey. Sangre. Sal Manitol. Plate Count.
Pruebas Bioqumicas: TSI MIO SIM Citrato Caldo de Urea FeA RM-VP LIA Caldo de Malonato
Metodologa Toma De La Muestra El mtodo ms recomendado para realizar la recogida de muestra para un urocultivo es la toma, durante el periodo medio de la miccin, siempre que el paciente sea capaz de limpiarse y recogerla, ya que la muestra de orina requiere una cuidadosa limpieza de los genitales externos. Esta tcnica impone los siguientes requisitos: El paciente debe tener como mnimo de tres a cuatro horas de retencin de orina, y la muestra ms representativa es la primera orina de la maana. El paciente no debe haber recibido tratamiento antimicrobiano durante los tres das anteriores a la recoleccin, exceptuando los casos de control de tratamiento, y paciente gravemente enfermos.
Esta tcnica no es apropiada para nios que no controlan sus esfnteres, en cuyo caso se procede a hacer limpieza de los genitales y a fijar un recolector de orina estril (especial para bebs). Se deja en esta posicin hasta que el nio realice su miccin; se despeja el recolector y se sella inmediatamente. No debe dejarse colocado el recolector por tiempo prolongado. La alta probabilidad de contaminacin en muestras de orina de lactantes, obliga a realizar el estudio en tres muestras sucesivas de miccin espontnea.
Manual de bacter UACH En ciertas ocasiones se justifica el sondeo uretral o la aspiracin suprapbica. No obstante, existe un pequeo riesgo de infeccin tras sondeo uretral, el cual vara segn el tipo de paciente. Debido a la colonizacin por bacterias de la uretra, suele ser difcil definir si los microorganismos aislados a partir de orina tomada con sonda son de origen urinario o uretral. En los pacientes con sonda uretral permanente con drenaje cerrado, la orina para cultivo se recoge despus de desinfectar la pared de la sonda en su punto de unin con el tubo de drenaje. Se aspira la orina por medio de puncin en la sonda con una aguja 21. En ningn momento deber sacarse de la bolsa de drenaje material para cultivo. Conservacin y/o Transporte En lo que respecta al transporte y conservacin de muestras de orina, hay que tener en cuenta que la orina constituye un excelente medio de cultivo para casi todas las bacterias, por lo que una vez recogida, la muestra debe enviarse de inmediato al laboratorio, previa colocacin del envase en un recipiente que contenga cubos de hielo. Este procedimiento permite que el nmero de bacterias permanezca relativamente constante por un tiempo considerable. Examen cuantitativo Mtodo de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido para evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de contaminacin, se realiza de la siguiente manera:

Se homogeneiza la muestra mediante agitacin. Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de suero fisiolgico, estriles. Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilucin al 1:100. Se deposita 1 ml. de cada dilucin en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vaca un medio Plate Count, fundidos y enfriados. Mediante rotacin suave, se favorece la distribucin homognea de la siembra. Se incuban todas las siembras a 37 durante 24 a 48 horas.
Para calcular el nmero de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Contadas stas, basta multiplicar su nmero por la dilucin respectiva para obtener la cuenta total. Mtodo del asa calibrada. Esta estimacin cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar-sangre una muestra de orina, sin centrifugar, empleando asa calibrada. Despus de incubar las siembras a 37 durante 24 a 48 horas, se cuenta el nmero de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que la asada contiene 0.01 ml. de orina.
Manual de bacter UACH Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera:

No hubo desarrollo microbiano. Menos de 10 000 colonias por ml. Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml. Ms de 100 000 colonias por ml.
Examen cualitativo El estudio cualitativo, que conduce a la identificacin del agente, se realiza mediante la siembra de la muestra homogeneizada, en placas con agar-sangre, Sal manitol y MacConkey. La identificacin final de los agentes se hace mediante el estudio de sus propiedades bioqumicas y caractersticas serolgicas. Empleando un asa estril se extiende la toma de la muestra a modo de estras en el primer cuadrante. A continuacin se hace lo mismo en el segundo cuadrante pero en una direccin diferente a la anterior. En el tercer y cuarto cuadrante hacemos lo mismo.
Resultados Morfologa Macroscpica
Agar: Forma Tamao Borde Elevacin Consistencia Luz transmitida Luz reflejada Color
Sangre Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa Positiva Grises
MacConkey Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa Positiva Rosas
Morfologa microscpica Bacilos cortos, Gram negativos y en arreglo simple o par.
Pruebas Bioqumicas medio TSI A/A Citrato FEA MIO SIM LIA E. coli Gas H2S
+ Indol
Ornitina
Movilidad
+
Movilidad
+ + +
Indol H2S
RM-VP Caldo de Urea Caldo de Malonato RM
+
VP
+ -
Discusin De Resultados En nuestro estudio el agente que se identifico como agente causal de infeccin fue la E.coli uno de los principales microorganismos relacionados con las infecciones del tracto urinario, dicha identificacin se determino gracias alas caractersticas metablicas identificadas en las pruebas bioqumicas realizadas, tambin se puedo determinar con ayuda del antibiograma que esta bacteria es resistente a los antibiticos como son: gentamicina oxaxilina ceftriaxone, tetraciclina y penicilina; ya que no presento ningn alo de inhibicin donde se colocaron los cencidiscos penetrados con dichos antibiticos.
Manual de bacter UACH Conclusin Se lleg a la conclusin de que el paciente, presenta una infeccin urinaria, a causa de la bacteria E. coli, puesto que en el anlisis cuantitativo arrojo valores por encima de los 100000 UFC (unidades formadoras de colonias), el microorganismo fue identificado por medio de pruebas bioqumicas, tambin se determino que el paciente no puede ser tratado con antibiticos como son la gentamicina, oxacilina, ceftriaxone, tetracliclina o penicilina puesto que este microorganismo es resistente a estos antibiticos por lo que es recomendable realizar nuevamente un antibiograma utilizando antibiticos de mayor concentracin inhibitoria. Bibliografa http://www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulos/CLUR9797110051A.PDF http://html.rincondelvago.com/bacteriologia_2.html www.actasurologicas.info/v25/n01/2501NC03.html
Borrows William Dr. Tratado de microbiologa, Vigsima edicin. Interamericana. Mxico 1974. pp. 376,422-427. Garca Rodrguez JJ. Microbiologa Mdica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996. pp 105-117.
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Laboratorio: Bacteriologa Mdica Prctica # 5 Cepas de referencia de Candida albicans y de Streptococcus agalactiae TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
8 de marzo de 2007
Manual de bacter UACH Resumen. Esta practica estuvo dividida en tres sesiones, en la primera sesin se cultivaron las bacterias Streptococcus agalactiae y Candida albicans para despus proceder hacer la identificacin macroscpica y microscpica y las pruebas bioqumicas correspondientes,solo que no hubo crecimiento de Candida albicans tambin se realizo la prueba de CAMP la cual salio negativa debido a que no se presento crecimiento por lo que esta se repetir mas adelante par ser reportada en esta practica y por ultimo se reviso el tubo germinativo, para la identificacin del pseudomicelio. Introduccin. Las enfermedades de transmisin sexual (ETS) -tambin conocidas como infecciones de transmisin sexual (ITS) o enfermedades venreas-, son aquellas enfermedades infecciosas que (generalmente, aunque en algunos casos puede ser por otras vas) se transmiten de persona a persona por contacto ntimo (que se produce, casi exclusivamente, durante las relaciones sexuales). Los agentes productores de las enfermedades de transmisin sexual incluyen bacterias, virus (como el del herpes), hongos e incluso parsitos. Aunque casi todas tienen tratamiento, algunas de ellas, como las producidas por virus, nunca curan de manera definitiva, sino que el agente causal permanece en estado latente, sin manifestarse, dentro del organismo al que ha infectado, reapareciendo cclicamente. Este tipo de relacin entre el organismo y el agente infeccioso facilita la transmisin de ste, es decir, su infectividad. Neisseria gonorrhoeae: Es un agente etiolgico de gonococia, una enfermedad de transmisin sexual. Es un diplococo Gram negativo, oxidasa positivo. Requiere medios muy nutritivos para el crecimiento, como agar chocolate o Thayer-Martin (especfico para Neisseria). Igualmente para su cultivo requiere una atmsfera con 5% de CO2. La gonorrea se mantiene actualmente, como una de las ms importantes enfermedades de transmisin sexual. Esta enfermedad se manifiesta en una infeccin en los hombres como uretritis aguda y en las mujeres como cervicitis. Gardnerella vaginalis: Es un bacilo implicado en la produccin de una condicin clnica llamada Vaginosis Bacteriana, que esta caracterizada por un desbalance en la flora normal de la vagina habiendo una disminucin de lactobacillus spp y un aumento en Gardnerella vaginalis y otros bacterias aerobias y anaerobias. La vaginosis bacteriana es la principal causa de secrecin y mal olor vaginal aunque el 50% de las mujeres pueden ser asintomticas. An no se ha comprobado que sea una enfermedad de transmisin sexual, aunque es ms comn que se presente en mujeres sexualmente activas, siendo calificada como causa de este tipo de enfermedad. El trmino vaginosis viene dado ya que ha diferencia de la Cndida y Trichomona, la gardnerella no produce signos de inflamacin en la mucosa vaginal ni migracin linfocitaria, por consiguiente no es clasificada como una vaginitis.
Manual de bacter UACH Candida albicans: Hongo dimorfo que forma largas seudohifas, hifas y blastoconidios (clulas gemantes subesfricas de 3-8 x 2-7 m). Asimilan y fermentan azcares. Numerosas clamidosporas unicelulares, redondas u ovaladas, con gruesa pared refringente (8-16 m de dimetro), situadas al final de las hifas, seudohifas o laterales sobre blastoconidios ovalados. La candidiasis es una enfermedad causada por un hongo oportunista que puede tener expresin cutnea del gnero Candida, de los cuales Candida albicans es el ms frecuente. Se puede transmitir por ropas, objetos y tambin por contacto sexual. Estos hongos estn siempre presentes en la piel y en el tracto digestivo de la mayora de las personas, pero se encuentran controlados por otros microorganismos no patgenos. Cuando se produce un desequilibrio, el aumento desmedido de la poblacin de hongos produce esta u otras micosis. Streptococcus agalactiae o estreptococo b-hemoltico del grupo B de Landcefield (EGB), es un coco Gram positivo, catalasa y oxidasa negativo, anaerobio facultativo, que se presenta formando cadenas de longitud variable, puede crecer en medios simples, aunque los medios suplementados con sangre o suero favorecen su crecimiento e identificacin. El Streptococcus agalactiae es causa importante de sepsis neonatal y de infecciones en gestantes y adultos inmunocomprometidos. Se trata de una bacteria encapsulada cuya virulencia se atribuye a una toxina polisacrida y se caracteriza por presentar una alta concentracin inhibitoria mnima (CIM) a la penicilina. Su papel como patgeno potencial se ha reconocido ampliamente en pases industrializados donde en la actualidad se desarrollan estrategias de diagnstico y prevencin dada su alta morbimortalidad; sin embargo, en pases en desarrollo no se informa con frecuencia la infeccin por este germen, bsicamente debido a la circulacin de serotipos menos virulentos y la falta de una bsqueda y diagnstico adecuados.
Resultado de aprendizaje. Cultivar e identificar bioqumicamente las siguientes cepas Gardnerella vaginalis, Candida albicans, Streptococcus del Grupo B.
Manual de bacter UACH MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS Equipo: Microscopio ptico de campo claro Incubadora a 37C Equipo de seguridad (bata para el laboratorio, guantes de ltex, lentes de seguridad y cubre bocas) Material: Mechero de bunsen Asa de nicromio circular y recta estriles Cajas de petri Tubos de ensayo de 13x100 mm con tapa de rosca Portaobjetos Puente de tincin Pizeta Hisopos estriles Papel estraza Gradilla Vela Frasco para carboxifilia Reactivos: Agar BIGGY Agar sangre de carnero Tubo germinativo (con 1 mL De plasma) Cristal violeta Yodo lugol Alcohol-acetona Safranina Aceite de inmersin Muestras: Cepas de referencia en caldo BHI: Candida albicans Cepas de referencia en agar sangre: Streptococcus agalactiae Staphylococcus aureus 33862
Manual de bacter UACH Mtodos. Primera sesin. Sembrado de las sepas de referencia. Streptococcus agalactiae: Agar sangre. Candida albicans: Agar Biggy. Se sumerge el asa de nicromio redonda en el tubo de ensaye que contenga la cepa de referencia (Streptococcus agalactiae y Candida albicans) se toma la caja petr que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se descarga esta en el primer cuadrante, despus se estra en los dems cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas despus del periodo de incubacin. Despus de que se hayan sembrado cada una de las sepas de referencia se colocan las cajas petr en la incubadora durante 24 horas a 37C, despus de este periodo de incubacin se revisa la estructura microscpica de cada una de las sepas. Segunda sesin. 1. Anlisis macroscpico y microscpico de Streptococcus agalactiae y Candida albicans. 2. Para Streptococcus agalactiae realizar las pruebas de catalasa, hemolisinas y prueba de CAMP (pendiente). 3. Para Candida albicans realizar la prueba de tubo germinativo y leerlo en 24horas e incubar a 37OC. Prueba de CAMP: 1. Con el asa recta, estriar Staphylococcus (-hemoltico A) en una lnea recta que atraviese el centro del agar sangre. 2. Estriar el Streptococcus agalactiae (-hemoltico B) a cada lado del centro del inoculo estafiloccico en una lnea recta de 2-3 cm. de largo y perpendicular (es decir en un ngulo recto) al inoculo del estafilococo sin tocar ste ultimo. Prueba del KOH AL 3%. En un portaobjetos se coloca una gota de KOH al 3% y con el asa de nicromio se toma una colonia y se homogeniza durante un minuto, y se observa la consistencia de esta solucin. Si se forman hebras al levantar el asa de nicromio se trata de un Gram negativo y si no se observa la viscosidad es Gram positivo.
Manual de bacter UACH Resultados. Streptococcus agalactiae (agar sangre de carnero) Redonda Pequeo Plana Entero Positiva Negativa Blanquecino Cremosa hemoltico
Forma Tamao Elevacin Borde Luz reflejada Luz transmitida Color Consistencia Hemlisis
No hubo crecimiento de Candida albicans en el agar BIGGY
Morfologa microscpica.
Streptococcus agalactiae Catalasa: negativo Oxidasa: negativo
Candida albicans
Manual de bacter UACH Discusin. En el estudio realizado para las cepas de referencia se puede discutir que la falta de crecimiento de la cepa de Candida albicans se pudo deber a que no habia suficiente cepa para iniciar su crecimiento, por lo que se realizara en otra sesin su siembra. El Streptococcus agalactiae tubo un ptimo crecimiento en el agar sangre, y su identificacin se hizo evidente por medio de la Tincin de Gram.
Conclusin. Se puede concluir que en el anlisis macroscpico de Candida albicans no se pudo observar por la falta de crecimiento en el agar BIGGY; por lo tanto no se pudo efectuar el anlisis microscpico; mientras que en el Streptococcus agalactiae creci bien en el agar y en las pruebas resulto negativo como era previsto para su identificacin. La prueba de CAMP no resulto, ya que no salio nada.
Bibliografa. 6. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico. Ed. Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico. 7. 8. 9. 10. Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra Borrows. W. (1974). Tratado de microbiologa, Interamericana 20 edicin.. www.apuntes.rincondelvago.com/microbiologia_18.html www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulo/CLUR9797110051A.PDF edicin. Mxico. Mxico., pgs. 422-427.
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 6 de marzo de 2007
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Laboratorio: Bacteriologa Mdica Prctica # 6 Anlisis microbiolgico de una muestra de Exudado Cervicovaginal y Uretral
Norma Herrera Daz
TITULAR:
ALUMNOS:
15 de marzo de 2007
Manual de bacter UACH Resumen. En esta prctica se realiz un cultivo de un exudado cervicovaginal de un paciente con una posible infeccin en el aparato genital. Para su diagnostico se sembr una porcin de la muestra en agares Casman, Sangre, MacConkey, Biggy, Sal Manitol y Thayer Martin. Se efectuaron dos tipos de frotis uno con Gram y otro sin teir (fresco) tomando una porcin directamente de la muestra para su anlisis microscpico, observando bacterias Gram + representantes de la flora normal. Pasado el tiempo de incubacin se obtuvo un crecimiento colonial que marco la pauta de la investigacin. Se realizo el anlisis macroscpico y microscpico de cada una de las colonias para saber la morfologa de los posibles microorganismos, y como se obtuvo crecimiento en agar Sangre, Casman y Sal Manitol y sabiendo que era un Gram + se efectuaron las pruebas bioqumicas adecuadas para su identificacin, obtenindose que se trataba de Staphylococcus aureus. Introduccin. Las enfermedades de transmisin sexual (ETS) -tambin conocidas como infecciones de transmisin sexual (ITS) o enfermedades venreas-, son aquellas enfermedades infecciosas que (generalmente, aunque en algunos casos puede ser por otras vas) se transmiten de persona a persona por contacto ntimo (que se produce, casi exclusivamente, durante las relaciones sexuales). Los agentes productores de las enfermedades de transmisin sexual incluyen bacterias, virus (como el del herpes), hongos e incluso parsitos. Aunque casi todas tienen tratamiento, algunas de ellas, como las producidas por virus, nunca curan de manera definitiva, sino que el agente causal permanece en estado latente, sin manifestarse, dentro del organismo al que ha infectado, reapareciendo cclicamente. Este tipo de relacin entre el organismo y el agente infeccioso facilita la transmisin de ste, es decir, su infectividad. Staphylococcus aureus es una bacteria que se encuentra en la piel y fosas nasales de las personas sanas, que causa gran variedad de infecciones, desde infecciones menores de la piel (forunculos, ampollas, vejigas) y abscesos cutneos hasta enfermedades que pueden poner en peligro la vida como neumona, meningitis, endocarditis, sndrome del shock toxico (SST) y sepsis. Resultado de aprendizaje. Anlisis Microbiolgico de una muestra de Exudado cervicovaginal, para determinar Enfermedades de Transmisin Sexual (ETS).
Manual de bacter UACH Material, Equipo y Reactivos Equipo: Microscopio ptico de campo claro Incubadora a 37C Equipo de seguridad (bata para el laboratorio, guantes de ltex, lentes de seguridad y cubre bocas) Material: Mechero de bunsen. Asa de nicromio circular estril. Cajas de petri Tubos de ensayo de 13x100mm. Portaobjetos. Puente de tincin. Pizeta. Papel estraza. Frasco para anaerobios con vela. Reactivos: Agar BIGGY. Agar Casman. Agar Sal manitol. Agar Thayer Martin. Agar MacConkey. Agar Sangre. Cristal violeta. Yodo lugol. Alcohol-acetona. Safranina. Aceite de inmersin. KOH 3% Agua oxigenada. Medio de transporte (Stuart).
Muestra: Exudado Cervicovaginal. Mtodos. Primera sesin. Sembrado de la muestra de Exudado Cervicovaginal. 1. En todos los agares (Sangre, MacConkey, Casman, BIGGY, Thayer Martin, Sal Manitol), tomar el hisopo con la muestra que se encuentra en el medio de Stuart, y se descarga en una de los cuadrantes, despus se procede a estriar con el asa de nicromio con el fin de obtener colonias aisladas. Incubar a 37oC por 24horas. El agar Casman y el agar Sangre, se incuban por el mismo tiempo y temperatura, con excepcin de que deben estar en condiciones parciales de anaerobiosis. Segunda sesin. 1. Anlisis macroscpico y microscpico de las colonias crecidas en los diferentes agares. 2. En caso de haber crecimiento en el agar BIGGY; siendo indicio del crecimiento de Candida albicans realizar la prueba de tubo germinativo y leerlo en 24horas e incubar a 37OC. Realizar la Prueba del KOH AL 3%. Realizar la prueba de la catalasa. Realizar la prueba de la coagulasa. NOTA: todas estas pruebas para los agares que tengan crecimiento bacteriano.
Manual de bacter UACH Resultados. Agar Casman Forma Redondas Tamao Grandes Elevacin Aplanada Borde Irregular Luz reflejada S Luz transmitida No Color Blancas Consistencia Cremosa Hemlisis --------Agar Sangre Redondas Medianas Convexa Entero S No Grises Cremosa No present ----Agar Sal Manitol Redondas Chicas Convexa Entero No S Amarillas Cremosa ----Manitol (positivo) Agar BIGGY Redondas Chicas Convexa Entero No S Caf oscuro Cremosa ---------
No hubo crecimiento de Candida albicans en el agar BIGGY. Pero se agrego en los resultados, ya que en la prctica anterior no se pudo observar; y en la prctica de este da salio negativo el crecimiento. No hubo crecimiento en el agar Thayer-Martn. No hubo crecimiento en el agar MacConkey. Morfologa macroscpica. g r A a
Sal Manitol
Agar Casman
Agar Sangre
Staphylococcus aureus Catalasa: positiva Oxidasa: negativa Coagulasa: positiva
Candida albicans
Manual de bacter UACH Discusin. En el estudio realizado al exudado cervicovaginal se obtuvieron resultados similares en la morfologa microscpica, dando as un menor margen de error en la comprobacin del agente bacteriano que resulto; siendo este Staphylococcus aureus. Comprobandos esta hipotesis por medio de las pruebas confirmatorias para descartar otras posibilidades, entre ellas se encuentran la utilizacin del Manitol, la Coagulasa positiva esta es especial para diferenciarse del Staphylococcus epidermidis.
Conclusin. La aparicin de Staphylococcus aureus en la regin cervicovaginal no es muy frecuente pero cuando se da su aparicin, se puede deber cuando hay presencia del Sndrome de choque txico especialmente despus del uso de tampones vaginales; incluye fiebre, prurito, descamacin, vmito, diarrea; el choque toxico esta relacionado con la produccin de toxinas.
Bibliografa. 11. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico. Ed. Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico. 12. 13. 14. 15. Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra Borrows. W. (1974). Tratado de microbiologa, Interamericana 20 edicin.. www.apuntes.rincondelvago.com/microbiologia_18.html www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulo/CLUR9797110051A.PDF edicin. Mxico. Mxico., pgs. 422-427.
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 6 de marzo de 2007
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Laboratorio: Bacteriologa Mdica
Prctica # 7 cepas de referencia TITULAR:

Norma Herrera Daz
ALUMNA:
22 de marzo de 2007
Manual de bacter UACH Resumen. Esta practica se dividi en tres secciones el la primera seccin se inocularon las cepas (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Klebsiella pneumoniae y Corynebacterium difteria) proporcionadas en los diferentes medios de agar, estas se pusieron a incubar durante 24 hrs. a 37C, en la segunda seccin se hizo una revisin de la morfologa macroscpica y microscpica de las colonias obtenidas en los diferentes medios, adems se realizaron las pruebas bioqumicas de acuerdo a cada microorganismo, realizando la prueba de la coagulasa entre los dos Staphylococcus. Introduccin. El Streptococcus pyogenes da lugar a colonias blancas o grises, de 1 a 2 mm de dimetro, rodeadas de zonas de lisis completa de los eritrocitos presentes en el medio de cultivo (hemlisis tipo ), aunque es posible, en raras ocasiones, aislar cepas que no expresan la hemolisina en la superficie. Algunas cepas, las que producen en grandes cantidades cido hialurnico capsular, crecen con la apariencia de una gota de agua en la placa, pero esto ocurre tambin de forma excepcional. Por lo general, las cepas menos mucosas asumen un aspecto arrugado denominado mate, mientras que las colonias pequeas y opacas que carecen de cpsula y protena M detectable se denominan brillantes. Es incapaz de oxidar azcares y posee un metabolismo fermentativo de la glucosa y otros carbohidratos produciendo cido lctico, aunque nunca gas. Produce adems leucina-aminopeptidasa (LAP) y pirrolidonil-arilamidasa (PYR). Esta ltima caracterstica rara vez es compartida por otros miembros de su mismo gnero. Adems, es uniformemente sensible a la bacitracina. Streptococcus pneumoniae. Es una bacteria Gram positiva de 1,2-1,8 m de longitud, que presenta forma oval y la extremidad distal lanceolada, es inmvil, y no forma endosporas, alpha-hemoltico miembro del gnero Streptococcus. Es un comensal comn del tracto respiratorio superior humano, aislndose en un 5-70% de la poblacin adulta sana. El estado de portador sano vara con la edad, ambiente y poca del ao. Este porcentaje es mucho ms alto durante los meses de invierno, en los nios (30-35%) que en los adultos (18-19%) y en comunidades cerradas (50-60%) que en la poblacin general urbana (27%). A partir de la puerta de entrada respiratoria, S. pneumoniae es capaz de producir diferentes cuadros clnicos que afectan al tracto respiratorio superior, como la otitis media, mastoiditis y sinusitis, o al tracto respiratorio inferior, como la neumona. Entre los cuadros clnicos extrarrespiratorios destaca la meningitis, que puede ser debida a la entrada directa del microorganismo a travs de una fstula que comunique la nasofaringe con el espacio menngeo o bien puede ser una complicacin de la neumona bacteriemia, mastoiditis, sinusitis o endocarditis. Otras localizaciones de la enfermedad neumoccica son el empiema, la endocarditis, la artritis y la peritonitis espontnea. Staphylococcus aureus. Es un coco que crece agrupado en racimos, que responde positivamente a la tincin de Gram, es aerobio y anaerobio facultativo por lo que puede crecer tanto en una atmsfera con oxgeno y tambin sin el mismo, no presenta movilidad ni forma cpsula. Es capaz de crecer hasta con un 10 % de sal comn. Por esto puede crecer en el agua del mar. Produce la fermentacin lctica. Es catalasa positivo y coagulasa positivo.
Manual de bacter UACH Es un microorganismo muy resistente a las condiciones ambientales y extremadamente difcil de erradicar. Pese a que no es esporulado (formas de resistencia elaboradas de forma natural por algunos microorganismos), soporta bien condiciones extremas aunque se inactiva a temperatura de congelacin y puede eliminarse con una coccin correcta. Staphylococcus epidermidis. Los estafilococos coagulasa-negativo son las bacterias mas comnmente aisladas en los laboratorios microbiolgicos. Entre ellos el S. epidermidis que se caracteriza por ser coagulasa negativo y novobiacina sensible, fue considerado por mucho tiempo como un germen contaminante de cultivos. Sin embargo, ahora se le reconoce como un patgeno importante y es considerado el agente causal de diferentes entidades clnicas, entre ellas: Infecciones urinarias intrahospitalarias, osteomielitis, endocarditis de vlvula nativa, bacteriemia en pacientes inmunosuprimidos, infecciones de dispositivos mdicos o cuerpos extraos (catteres endovenosos). Otra caracterstica importante de esta bacteria es la susceptibilidad antimicrobiana que presenta, ya que el S. epidermidis ha desarrollado resistencia a la meticilina en forma paralela al desarrollo de resistencia del S. aureus, pero mostrando tasas mucho mas elevadas que esta ltima, y que se ha ido incrementando de una manera importante en los ltimos 20 aos. Corynebacterium. El gnero Corynebacterium fue creado por Lehmann y Neumann (1896) para clasificar taxonmicamente a los bacilos de la difteria. El gnero fue definido en base a caractersticas morfolgicas: Corynebacteria proviene del griego corun (bastn nudoso) y bacterion (bastoncillo). A partir de estudios de RNAr 16S se ha agrupado a las corinebacterias en la subdivisin de eubacterias Gram positivas de alto contenido en G+C, en estrecha relacin filogentica con Arthrobacter, Mycobacterium, Nocardia e incluso Streptomyces. Las caractersticas ms relevantes del gnero Corynebacterium fueron descritas por Collins y Cummins (1986). Se trata de bacterias Gram-positivas, no esporuladas, que carecen de movilidad, bacilos rectos o ligeramente curvados cuyo tamao oscila entre 2-6m de longitud y 0,5n de dimetro, a menudo con la tpica forma de V (lo que tambin se denomina forma de letras chinas), aunque tambin aparecen formas elipsoidales, son aerobias o anaerobias facultativas, catalasa positivas, quimioorganotrfos, con un contenido en G+C entre 5165%.
Resultado de aprendizaje. Cultivar e identificar bioqumicamente las siguientes cepas del tracto respiratorio: Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium spp y Klebsiella pneumoniae.
Manual de bacter UACH Material, equipo y reactivos. Equipo: Microscopio ptico de campo claro. Incubadora a 37C. Equipo de seguridad (bata para laboratorio, guantes de ltex y cubre bocas). Material: Mechero de bunsen. Frasco de vidrio con tapadera para carboxifilia con vela pequea. Asa de nicromio circular y recta estriles. Puente de tincin y pizeta. Hisopo estril. Papel estraza. Gradilla. Reactivos: Agar Sangre con Telurito de Potasio. Agar Sangre de Carnero. Agar Sal Manitol. Caldo de Urea. Caldo rojo de fenol con glucosa. Caldo rojo de fenol con xilosa. Caldo rojo de fenol con maltosa. Caldo rojo de fenol con sacarosa. Caldo de nitratos. 1ml de plasma estril. Sensidisco de Bacitracina. -Naftilamina. cido sulfanlico. Cristal violeta. Yodo lugol. Alcohol acetona. Safranina. Solucin salina fisiolgica al 0.85%. KOH 3%. -naftol. H2O2 3%. Aceite de inmersin. Bactericida para limpieza. Cepas de Referencia: Streptococcus pneumoniae. Streptococcus pyogenes. Staphylococcus aureus. Staphylococcus epidermidis. Corynebacterium difteria. Klebsiella pneumoniae.
Manual de bacter UACH Mtodo. Primera sesin. Sembrado de las diferentes cepas. Medios: Agar sangre, Agar Sal Manitol, Agar sangre + telurito de potasio. Se sumerge el asa de nicromio redonda en el tubo de ensaye que contenga la cepa de referencia (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Corynebacterium spp.), se toma la caja petr que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se descarga esta en el primer cuadrante, despus se estra en los dems cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas despus del periodo de incubacin. Despus de que se hayan sembrado cada una de las cepas de referencia se colocan las cajas petr en la incubadora durante 24 horas a 37C, despus de este periodo de incubacin se revisa la estructura microscpica de cada una de las cepas. NOTA: Esto se realiza de igual forma para cada uno de los medios. Segunda sesin. Anlisis macroscpico y microscpico de las colonias presentes en los medios inoculados en la seccin anterior, as como realizar las pruebas bioqumicas correspondientes de acuerdo al microorganismo. Tincin de Gram. Prueba de la Catalasa. Prueba de la oxidasa. Adems de las pruebas bioqumicas ya mencionas para Corynebacterium realizar las siguientes pruebas bioqumicas: Catalasa. Reduccin de nitritos a nitratos. Siembre en medios O/F con glucosa, lactosa, maltosa y sacarosa. Rojo de metilo. Ureasa. Tercera seccin. Realizar la lectura de las pruebas bioqumicas. Leer halos de inhibicin.
Manual de bacter UACH Resultados. Corynebacterium Corynebacterium Klebsiella difteria. difteria. pneumoniae (agar Chocolate) (agar Sangre c/Telurito) (agar McK) Redondas Redondas Redondas Pequeas Pequeas Medianas Convexa Convexa Convexa Entero Entero Entero Reflejada Reflejada Reflejada Blancas Gris Rosa-fuschia Cremosa Cremosa Cremosa -----No presenta ---------------Lactosa positiva Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus aureus aureus aureus (agar Sangre) (agar Sal Manitol) (agar S-110) Redondas Redondas Redondas Pequeas Pequeas Pequeas Planas Planas Planas Entero Entero Entero Reflejada Reflejada Reflejada Dorado Amarillo Negras Cremosa Cremosa Cremosa Beta hemlisis --------------Manitol positivo -----Staphylococcus epidermidis Staphylococcus (agar Sal Manitol) epidermidis (agar Sangre) Redondas Redondas Pequeas Pequeas Planas Planas Entero Entero Reflejada Reflejada Blancas Blancas Cremosa Cremosa -----No presenta Manitol negativo -----Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae (agar (agar Sangre) Sangre) Redondas Redondas Medianas Medianas Planas Planas Entero Entero Reflejada Reflejada Blancas Gris Cremosa Cremosa Beta hemlisis Alfa hemlisis
Forma Tamao Elevacin Borde Tipo de luz Color Consistencia Hemlisis Lactosa
Forma Tamao Elevacin Borde Tipo de luz Color Consistencia Hemlisis Manitol Forma Tamao Elevacin Borde Tipo de luz Color Consistencia Hemlisis Manitol Forma Tamao Elevacin Borde Tipo de luz Color Consistencia Hemlisis
Morfologa Microscpica
S. pyogenes (cocos, en cadena, gram positivos)
S. epidermidis(cocos gram positivos)
S. aureus (cocos, gram positivos en racimo)
K. pneumoniae ( bacilos, gram negativos)
Bacilos, gram positivos) C. difteria
(cocos, gram positivos en cadena) S. Pneumoniae.
Morfologa Macroscpica
S. pyogenes(vacitracina)
S. pyogenes
S. pneumoniae( optoquina)
S. pneumoniae
S. aureus (sangre)
S. aureus (sal manitol)
S. aureus (110)
K. pneumoniae
C. difteria(chocolate)
C. Difteria (sangre c/telurito)
S. epidermidis(sangre)
S. aureus y S. epidermidis (sal manitol)
Discusin. En el cultivo de las cepas de referencia de las bacterias mencionadas al inicio, solo se obtuvo dificultad para el crecimiento de S, pyogenes y S. pneuminiae, por o q ue la titular realizo un cultivo de ambos que proporciono al grupo para realizarle las pruebas necesarias para su identificacin, en donde S. pyogenes obtuvo un halo de inhibicin a la vasitracina y el S. pneumoniae un halo para optoquina lo cual confirma que efectivamente estabas tratando con dichas bacterias , en las pruebas bioqumicas de Corymebacteriun se obtuvo una discrepancia con respecto a la fermentacin y oxidacin de la xilosa debido a que esta dio un resultado negativo, locuaz con respecto a la teora esta debi ser positiva, otra discrepancia se obtuvo con la K. pneimoniae al dar el rojo de metilo positivo y vogues poskauer negativo, lo cual deba de ser a la viceversa. Por lo dems todo coincidi con las caractersticas mencionadas en las referencias. Conclusin. Se logro identificar a cada una de las bacterias de las cepas de referencia proporcionadas, debido a que no hubo gran diferencia con las caractersticas morfolgicas y metablicas de los microorganismos analizadas en la prctica, con respecto ala teora que mencionan las referencias, es por eso de suma importancia realizar cada una de las pruebas tanto microscpica, macroscpicas como metablicas a cada uno de los microorganismos para poder dar un resultado confiable, de que efectivamente, se trata de la bacteria que se sospecha, evitando la contaminacin de otros microorganismos. Bibliografa. http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/fenotm.htm http://www.esmas.com/salud/enfermedades/infecciosas/434933.html Madigan michael y Co. Brock Biologa de los microorganismos 10 edicin pearson prentice hall. Madrid 2004. Lennette Edwin H. Manual de Panamericana. Buenos Aires 1987. microbiologa clnica 4 edicin, editorial
Tay Zavala Jorge Dr. Microbiologa y Parasitologa mdicas. Segunda edicin. Mndez editores. Mxico.1994.
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Laboratorio: Bacteriologa Mdica
Prctica # 8 Mycobacterium tuberculosis TITULAR:

Norma Herrera Daz
ALUMNA:
29 de marzo del 2007
Resumen En esta practica se analizo una muestra de esputo, donde se pretenda hacer un diagnostico para Mycobacteium tuberculosis, este diagnostico se realizo, mediante la utilizacin de la basiloscopia; utilizando la tincin de Zielh-Neelsen y el cultivo en medio de Lowes-Jensen; donde como resultado obtuvimos una muestra negativa; posteriormente se analizo un frotis positivo proporcionado por la titular, donde; se obtuvo un conteo de 1 bacilo por campo. En el medio de cultivo (Lowestein-Jensen), puesto que es una bacteria de crecimiento lento; en la muestra aun no se obtiene un resultado. Introduccin La tuberculosis es causada por una bacteria acido alcohol resistente Mycobacterium tuberculosis. Este microorganismo fue aislado, descrito y responsabilizado de la tuberculosis en 1882 por el microbilogo alema Robert Koch. La propiedad de acido alcohol resistente es debida a la presencia en la superficie de la Mycobacteria de unos componentes lipiditos nicos demonizados cidos miclicos. Esta bacteria es de crecimiento lento, de modo que las colonias se observan en la placa despus de varios das o semanas. Cunado crecen en medio slido, forman colonias apretadas y arrugadas que se elevan sobre la placa en lugar de extenderse, esta formacin es debida al alto contenido lipidito y a la naturaleza hidrofobica de la superficie celular. Estos bacilos se trasmiten fcilmente a travs de las vas respiratorias, incluso en el simple acto de hablar es suficiente para la trasmisin de persona a persona. La interaccin de esta bacteria con las clulas del hospedero, es extremadamente compleja, siendo determinada en parte por la virulencia de la cepa. Es importante diferenciar entre dos tipos de infeccin de tuberculosis en humanos: primarias y post primario o reinfeccin; la primaria es cuando en individuo adquiere la infeccin como consecuencia de la inhalacin de pequeas gotitas de liquido que contiene bacterias viables. La bacteria se localiza en los pulmones donde se multiplica, luego se forman agregados de macrfagos activados, llamados tubrculos, caractersticos de los tuberculosos. La postprimaria es aquella tuberculosis que se desarrolla de fuentes exgenas o por reactivacin de bacterias que han permanecido quiescentes dentro de los macrfagos pulmonares.
Resultado de aprendizaje.- identificar a los bacilos acido alcohol resistentes; Mycobacterium tuberculosis
Material, equipo y reactivos. Equipo: Microscopio ptico de campo claro. Incubadora a 37C. Centrifuga Tubo de ensaye Equipo de seguridad (bata para laboratorio, guantes de ltex y cubre bocas). Material: Mechero de bunsen. Puente de tincin y pizeta. Papel estraza. Reactivos: Agra Lowestein-Jensen. Carbol fuschina Alcohol acido Azul de metileno Aceite de inmersin. Bactericida para limpieza Metodologa Tincin de Zielh-Neelsen Realiza un frotis con la muestra de esputo y deja secar. Fija al mechero pasndolo de arriba hacia abajo por la llama por tres veces. Cubre el frotis con carbol fushina por 5 min. Enjuaga el carbol fushina con agua destilada, permitiendo que esta corra a travs del frotis. Enjuaga el frotis con alcohol acido durante 1 min. Y enjuaga con agua. Cubre el frotis con azul de metileno durante 1min. Enjuaga el frotis con agua. Seca suavemente con papel estraza. Observar en el microscopio con el objetivo de 100X. Cultivo El esputo se trata con 1N NaOH durante 30 min. Para eliminar las bacterias de la flora normal. La muestra centrifuga y se tira el sobrenadante. Una vez neutralizada se siembra sobre el medio de aislamiento (LowesteinJensen), en una campana de extraccin con las medidas necesaria para evitar contaminacin del medio y evitar infectarse.
Resultado Muestra: Baciloscopia..Negativa Frotis: 4901 0 0 0 0 0 0 1 5 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 5 0 0 0 8 3 0 0 0 1 0 4 2 0 1 3 1 6 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 14 0 0 1 3
0 0 0 1 2 4 2 0 0 0 0 0 0 0 4 0 0 3 0 0 0 4 0 0
0 0 0 0 0 2 1 4 0 0
Morfologa Microscpica Mycobacterium tuberculosis form color a bacilo Rosa(alcohol resistente)
arreglo Simple o agrupados
Morfologa Macroscpica Mycobacterium tuberculosis colonias tamao color borde luz redondas mediano Blanca/crema entero No trasmitida
Discusin De Resultados En el anlisis de muestra de esputo, se obtuvo un resultado negativo, ya que no se encontr ningn bacilo acido alcohol resistente en la baciloscopia. En el frotis proporcionado por el titular se obtuvo como resultado mas de un bacilo por campo lo que significa que la muestra fue obtenida de un paciente tuberculoso, ya que una muestra de considera positiva cuando se encuentra aunque sea solo un bacilo en 100 campos. Conclusin Al observar los resultados obtenidos, se concluye que el paciente no tiene una infeccin causada por Mycobacterium, debido a que no se encontr un solo bacilo en el frotis analizado. En el frotis proporcionado por el titular se observo, una muestra positiva a Mycobacterium tuberculosis, esto se determina debido a la gran cantidad de bacilos acido alcohol resistentes que se observaron en el frotis por lo que la muestra se reporta como positiva BAAR (++).
Bibliografa http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/fenotm.htm http://www.esmas.com/salud/enfermedades/infecciosas/434933.html http://www.monografias.com/trabajos10. html http://es.wikipedia.org/wiki/Mycobacteium-tuerculosis http://www.escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/TemasMedicinaInterna/pdf/Enf Tr Fecha de consulta: 27-marzo-2007 Madigan michael y Co. Brock Biologa de los microorganismos 10 edicin pearson prentice hall. Madrid 2004. Lennette Edwin H. Manual de Panamericana. Buenos Aires 1987. microbiologa clnica 4 edicin, editorial
Tay Zavala Jorge Dr. Microbiologa y Parasitologa mdicas. Segunda edicin. Mndez editores. Mxico.1994. Borrows William Dr. Tratado de microbiologa, Vigsima edicin. Interamericana. Mxico 1974.
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Laboratorio: Bacteriologa Mdica Prctica # 9 Anlisis microbiolgico de una muestra de Exudado Faringeo
Norma Herrera Daz
TITULAR:
ALUMNOS: Mayra Torres Gmez

7mo B
19 de abril de 2007
Manual de bacter UACH Resumen. En esta prctica se realiz un cultivo de un exudado fraringeo. Para su diagnostico se sembr una porcin de la muestra en agares: Sangre, MacConkey, Chocolate y Sal Manitol. Se efectuo un frotis con tincion Gram, para su anlisis microscpico, observando bacterias Gram + representantes de la flora normal. Pasado el tiempo de incubacin se obtuvo un crecimiento colonial que marco la pauta de la investigacin. Se realizo el anlisis macroscpico y microscpico de cada una de las colonias para saber la morfologa de los posibles microorganismos, y como se obtuvo crecimiento en agar Sangre, Chocolate y Sal Manitol y sabiendo que era un Gram + se efectuaron las pruebas bioqumicas adecuadas para su identificacin, obtenindose que se trataba de Staphylococcus aureus. El manitol positivo demostrado en la caja de agra sal manitol es una prueba de identificacion que ayudo para determinar que era dicho mocroorgamismo. Introduccin. Las infecciones respiratorias son estados anormales en los cuales un germen o agente infeccioso invade el cuerpo y permanece en l provocndole algn tipo de dao. Los agentes infecciosos pueden ser de diferentes clases: virus, bacterias u hongos. Su entrada al cuerpo es por alguna de las "puertas" o superficies de contacto externas del aparato respiratorio. Pueden penetrar en ocasiones estando stas superficies intactas, aunque es ms fcil si se encuentran previamente daadas inflamadas a travs de heridas.7 Los dos factores ms importantes que hacen posible una infeccin son: la habilidad natural del agente infectante para pasar las barreras naturales y los tejidos, lo que se conoce como virulencia, y por otro lado el grado de labilidad eficiencia del sistema general de defensa del individuo durante las diversas fases del ataque del germen (susceptibilidad).7 Los staphylococos son miembros de la flora microbiana normal en humanos. Constituyen un genero de bacterias esfricas, sin movimiento y no esporuladas. Son catalasa-positivo y capaces de crecer y producir cido a partir de la glucosa por va anaerobia, se tien fcilmente en tinciones bsicas comunes y son intensamente grampositivos. Su crecimiento es abundante, y las colonias sobre la superficie de agar son medianas, redondas, lisas y brillantes. En forma caracterstica, se divide en ms de un plano y pertenece en conjuntos irregulares que asemejan racimos de uvas. 5 y 6 Staphylococcus aureus es una bacteria que se encuentra en la piel y fosas nasales de las personas sanas, que causa gran variedad de infecciones, desde infecciones menores de la piel (forunculos, ampollas, vejigas) y abscesos cutneos hasta enfermedades que pueden poner en peligro la vida como neumona, meningitis, endocarditis, sndrome del shock toxico (SST) y sepsis.1,2,3. Resultado de aprendizaje. Anlisis Microbiolgico de una muestra de Exudado faringeo, para determinar Enfermedades del tracto respiratorio.
Manual de bacter UACH Material, Equipo y Reactivos Equipo: Microscopio ptico de campo claro Incubadora a 37C Equipo de seguridad (bata para el laboratorio, guantes de ltex, lentes de seguridad y cubre bocas) Material: Mechero de bunsen. Asa de nicromio circular estril. Cajas de petri Tubo de ensayo de 13x100mm. Portaobjetos. Puente de tincin. Pizeta. Papel estraza. Frasco para anaerobios con vela. Reactivos: Agar Chocolate. Agar Sal manitol. Agar MacConkey Agar Sangre. Cristal violeta. Yodo lugol. Alcohol-acetona. Safranina. Aceite de inmersin. Agua oxigenada. Medio de transporte (Stuart).
Muestra: Exudado Faringeo. Mtodos. Toma de muestra Toma de muestra: Se pide al paciente que se siente y coloque su cabeza hacia atrs. Se ilumina bien la cavidad orofarngea y con un abatelenguas se empuja la lengua hacia abajo para facilitar el acceso a la parte posterior de la faringe. Con un hisopo de algodn se hace un raspado de las reas hipermicas, purulentas o necrticas, as como de las membranas o manchas de Koplic, si es que las presenta. Medio de transporte:
Agentes virales: El hisopo con la muestra se introduce en un tubo de tapn de rosca con 1 a 2 mL de solucin salina isotnica estril. Se rompe la varilla de madera a la altura del tapn y se tapa hermticamente. Agentes bacterianos: El hisopo con la muestra se introduce en un tubo de tapn de rosca con medio de Amies o de Stuart. Se rompe la varilla de madera a la altura del tapn y se tapa hermticamente.
Primera sesin. Sembrado de la muestra de Exudado Faringeo. 2. En todos los agares (Sangre, MacConkey, Chocolate, Sal Manitol), tomar el hisopo con la muestra que se encuentra en el medio de Stuart, y se descarga en una de los cuadrantes, despus se procede a estriar con el asa de nicromio con el fin de obtener colonias aisladas. Incubar a 37oC por 24horas. El agar chocolate y sangre se incuban en condiciones de carboxifilia. Segunda sesin. 1. Anlisis macroscpico y microscpico de las colonias crecidas en los diferentes agares. Realizar la prueba de la catalasa. Realizar la prueba de la coagulasa. NOTA: todas estas pruebas para los agares que tengan crecimiento bacteriano.
Manual de bacter UACH Resultados. Agar Sangre Forma Tamao Elevacin Borde Luz transmitida Color Consistencia Hemlisis Redondas Medianas Convexa Entero No Blanca Cremosa No present ----Agar Sal Manitol Redondas Medianas Convexa Entero no Doradas Cremosa ----Manitol (positivo) Agar Chocolate Redondas Medianas Convexa Entero no Blancas Cremosa ---------
No hubo crecimiento en el agar MacConkey.
agar sangre
Agar sal agar chocolate
manitol
Staphylo
coccus aureus
Catalasa: positiva Oxidasa: negativa Coagulasa: positiva
Manual de bacter UACH Discusin. En el estudio realizado al exudado faringeo se obtuvieron resultados con un menor margen de error en la comprobacin del agente bacteriano que resulto; siendo este Staphylococcus aureus. Comprobandos esta hipotesis por medio de las pruebas confirmatorias para descartar otras posibilidades, entre ellas se encuentran la utilizacin del Manitol, la Coagulasa positiva.
Conclusin. El aislamiento de S. aureus a partir del exudado farngeo no tiene importancia diagnstica, ya que se considera parte de la flora normal de la faringe y nasofaringe, por lo que no tiene significado clnico.
Bibliografa. 16. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico. Ed. Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico. 17. 18. 19. 20. 21. 22. Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra Borrows. W. (1974). Tratado de microbiologa, Interamericana 20 edicin.. http://www.salud.gob.mx/indre/mues.htm#M3.%20EXUDADO%20FARINGEO http://html.rincondelvago.com/bacteria-staphilococcus-aureus.html http://html.rincondelvago.com/flora-bucal. http://www.alergia.ws/ot_infecciones.htm edicin. Mxico. Mxico., pgs. 422-427.
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 18 de abril de 2007
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Laboratorio: Bacteriologa Mdica Prctica # 10 Infecciones De La Piel TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
26 de abril de 2007
Manual de bacter UACH Resumen En este anlisis, se realiz un hisopado de la herida para determinar si el paciente, presenta una infeccin, esta tcnica se realiz utilizando cultivos de la muestra en agares; sangre, MacConkey y en un medio para anaerobios en agar Liver Veal, as como la identificacin de la bacteria causal de la infeccin. Donde, como resultado, se obtuvo; en el anlisis; colonias redondas convexas, color trasparentes, y de consistencia cremosa; esto en agar MacConkey y en el Sal Manitol no hubo crecimiento, en sangre se observo el efecto de swarming y en agar Liver Veal fueron colonias pequeas de color gris. Microscpicamente fueron bacilos gram negativos, por lo que se procedi a realizar las pruebas bioqumicas o metablicas para determinar el tipo de microorganismo asilado. El cual resulto ser, Proteus, comnmente relacionada a infecciones de la piel en pacientes tratados con antibiticos. La muestra fue proporcionada por el laboratorio clnico Universidad. Introduccin
La piel representa una barrera notablemente eficaz contra las infecciones bacterianas. A pesar de que muchas bacterias viven sobre la piel, normalmente son incapaces de provocar una infeccin. Las infecciones bacterianas de la piel pueden afectar a una sola zona y tener el aspecto de un grano o bien propagarse en unas horas y afectar a un rea mucho ms extensa. Las infecciones cutneas pueden presentar un grado de gravedad variable, desde una acn sin importancia hasta una enfermedad potencialmente mortal, como el sndrome de la piel escaldada producido por estafilococos.
Muchos tipos de bacterias pueden infectar la piel. Los ms frecuentes son los Staphylococcus y los Streptococcus. En los hospitales o las residencias pueden producirse infecciones causadas por bacterias menos comunes, al igual que cuando se realizan trabajos de jardinera o se nada en un estanque, un lago o en el mar. Algunas personas presentan un riesgo especfico de contraer infecciones de piel; por ejemplo, los diabticos, que poseen una irrigacin cutnea disminuida, en especial la de las manos y de los pies, y los enfermos de SIDA, que presentan un sistema inmunolgico deprimido. La piel daada por los rayos del sol, las rascaduras u otra irritacin tambin tiene ms posibilidades de infectarse. De hecho, cualquier lesin en la piel predispone a una persona a sufrir una infeccin. Por lo general, mantener la piel intacta y limpia evita las infecciones. Resultado De Aprendizaje Cultivar e identificar al microorganismo causal de una infeccin de la piel.
Manual de bacter UACH Material: Equipo: Portaobjetos y cubreobjetos. Microscopio ptico de campo claro. Asa de nicromio calibrada. Incubadora a 37C. Asa de nicromio punta redonda. Mechero de Bunsen. Papel estraza. Puente de tincin. Gradilla y piseta. Cajas petri. Hisopo estril. Equipo de proteccin personal: Cubreboca. Guantes de ltex. Bata. Reactivos: Tincin de Gram. Cristal violeta. Yodo lugol. Alcohol acetona. Safranina. Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%. Aceite de inmersin. Cloruro Frrico al 10% Kovaks. -Naftol. KOH al 40%. Rojo de Metilo. Verde de malaquita Agares: Pruebas Bioqumicas: MacConkey. TSI Sangre. MIO Sal Manitol. SIM Nutritivo Citrato Liver veal. Caldo de Urea FeA RM-VP LIA Caldo de Malonato o Nitratos o Maltosa o Sacarosa o Glucosa o Xilosa o Manitol
Metodologa Toma De La Muestra HERIDAS SUPERFICIALES Y ABSCESOS ABIERTOS. A. MATERIAL NECESARIO. - Suero fisiolgico. -Jeringa y aguja estriles. -Recipientes estriles con tapa de rosca. -Hisopos con medio de transporte tipo Stuart-Amies. B. TECNICA. - Lavar con suero fisiolgico estril cuidadosamente la superficie de la herida para retirar la flora colonizante. - Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas profundas. - Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero o solucin de Ringer lactato y aspirarlo nuevamente en la jeringa. - Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podr efectuarse un frotis de los bordes de la herida con un hisopo. C. NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN. Para muestras lquidas se intentara obtener 1-10 ml. En el resto de las ocasiones se enviar la mxima cantidad posible. D. TRANSPORTE Y CONSERVACIN. El envo al laboratorio debe ser inmediato. Se utilizar para el envo tubos estriles con tapa rosca. La jeringa de la extraccin ser evacuada en el recipiente en que se har el envo. La prctica de colocar un tapn de goma en la aguja (usando la jeringa como recipiente de transporte) debe desecharse por el riesgo para el personal de sufrir un pinchazo con una aguja contaminada con lquidos orgnicos. No olvidar identificar la muestra adecuadamente y si no puede procesarse antes de 2 horas usar medio de transporte. E. OBSERVACIONES. Las muestras recibidas en hisopo son de escasa rentabilidad y deben obtenerse slo en circunstancias muy excepcionales, cuando no se pueda recoger la muestra por otros mtodos. Es importante especificar sitio anatmico de donde se realiz la toma de muestra. ABSCESOS CERRADOS. Es un procedimiento mdico A. MATERIAL NECESARIO. - Gasas estriles. - Alcohol etlico o isoproplico al 70%. - Yodo povidona al 10%. - Jeringa estril. - Aguja IM.
Manual de bacter UACH - Medio de transporte para anaerobios. B. TECNICA. - Realizar antisepsia de la zona a puncionar con alcohol al 70%, de forma concntrica comenzando por el centro. Abarcar una zona de unos 10 cm. - Repetir la operacin con Yodo povidona. En pacientes con hipersensibilidad al yodo, se utilizar alcohol 70 % dos veces consecutivas. - Dejar secar al menos 1 minuto para que el antisptico ejerza su accin. - Realizar una puncin-aspiracin del absceso con jeringa y aguja, la muestra ms til es la obtenida contra la pared del absceso y puncionando en el lado superior para evitar la fistulizacin espontnea. - Traspasar la muestra a un contenedor estril. Si se requiere bsqueda de anaerobios introducir en un medio de transporte para anaerobios. C. NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN. Deber enviarse un volumen de muestra entre 1-5 ml. D. TRANSPORTE Y CONSERVACION. Las muestras deben enviarse al laboratorio tan pronto como sea posible. Hasta que esto suceda, mantener las muestras y el medio de transporte a temperatura ambiente. E. OBSERVACIONES. Es muy importante especificar en la solicitud la localizacin del absceso con vistas a la interpretacin de los resultados. Si se carece de recipiente para transporte de muestra para anaerobios consultar al laboratorio. HERIDA QUIRRGICA La toma de muestra se realizar con tcnica asptica luego de limpieza de la zona con suero fisiolgico para eliminar la contaminacin superficial. Se realizar por puncin y se colocar la muestra en recipiente estril con tapa de rosca, si se sospecha presencia de anaerobios comunicarse con el laboratorio para solicitar medio de transporte. S la muestra es obtenida con hisopo realizar primero la limpieza de la zona y luego embeber en el pus el mismo. QUEMADURAS El tipo de toma de muestra es controvertido, pero los mejores resultados se han logrado con punch de tejido de 3 o 4 mm para realizar cultivos cuantitativos. Se transportan en tubos con tapa rosca estriles. Primera sesin. Medios: Agar sangre, Agar Sal Manitol, chocolate y Agar Liver Veal. Con el hisopo se descarga l muestra en el primer cuadrante, despus se estra en los dems cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas despus del periodo de incubacin. Despus de que se hayan sembrado cada una de las cepas de referencia se colocan las cajas petr en la incubadora durante 24 horas a 37C, despus de este periodo de incubacin se revisa la estructura microscpica de cada una de las cepas. NOTA: Esto se realiza de igual forma para cada uno de los medios. Segunda sesin. Anlisis macroscpico y microscpico de las colonias presentes en los medios inoculados en la seccin anterior, as como realizar las pruebas bioqumicas correspondientes de acuerdo al microorganismo. Tincin de Gram.
Manual de bacter UACH Adems de las pruebas bioqumicas Tercera seccin. Realizar la lectura de las pruebas bioqumicas. Resultados Morfologa Macroscpica Proteus mirabilis Agar: Forma Tamao Borde Elevacin Consistencia Luz transmitida Luz reflejada Color Sangre Efecto swarming ----------------Cremosa Negativa Positiva Grises Liver veal Redonda Pequeas Entero Convexa Cremosa Negativa Positiva Grises MacConkey Redonda pequeas Entero Convexa Cremosa positiva negativa trasparentes
Bacillus cereus
Agar: Forma Tamao Borde Elevacin Consistencia Luz transmitida Luz reflejada Color
Sangre irregular Grandes Irregular Aplanadas Cremosa Negativa Positiva Grises
nutritivo irregular Grande Irregular Aplanada Cremosa Negativa Positiva Blanca
Morfologa microscpica Proteus mirabilis Bacilos cortos, Gram negativos y en arreglo simple o par.
Agar sangre
Agar Mc Conkey
Agar Liver Veal
Bacillus cereus Bacilos gram positivos, en cadena.
Agar Nutritivo
Agar sangre
Pruebas Bioqumicas medio TSI A/A Citrato FEA MIO SIM LIA Proteus mirabilis Gas H2S
+
Indol
+
Ornitina
Movilidad
+
Movilidad
+ -
Indol H2S
+
VP
+ + -
Bacillus cereus *Los resultados obtenidos todos fueron negativos, los que se presentan a continuacin son los valores de la referencia. medio Nitrato Maltosa Sacaros a Glucosa Xilosa Manitol Negativo Positivo Positivo Positivo Negativo negativo
Discusin De Resultados En nuestro estudio el agente que se identifico como agente causal de infeccin fue la Proteus, dicha identificacin se determino gracias alas caractersticas metablicas identificadas en las pruebas bioqumicas realizadas. Proteus vulgaris es indol positivo mientras que Proteus mirabilis es indol negativo. Por lo tanto mediante esta prueba podemos hacer la identificacin presuntiva de Proteus mirabilis. Proteus penneri y P. myxofaciens tambin son indol negativo pero raramente se encuentran en infecciones de heridas. Por lo tanto para este anlisis, la recuperacin de una especie de Proteus, indol negativo en una muestra de hisopado de la piel puede identificarse como Proteus mirabilis. Podra confundirse con Proteus penneri solo que este se diferencia por que no produce sulfuro de hidrogeno en el TSI, a diferencia de P. mirabilis Conclusin Se lleg a la conclusin de que el paciente, presenta una infeccin, a causa de la bacteria Proteus, puesto que en el anlisis microbiolgico fue el microorganismo que se pudo recuperar, este microorganismo es comn encontrarlo en personas que estn tratados con antibiticos. El microorganismo fue identificado por medio de pruebas bioqumicas.
Bibliografa
http://html.rincondelvago.com/bacteriologia_2.html http://www.eprodig.com/dermlink/Paginas/consejos_enfermedades_bacteriana.htm http://www.msd.es/publicaciones/mmerck_hogar/seccion_18/seccion_18_201.html Koneman. W Elmer y Co. Diagnostico microbiolgico texto y atlas. 5 edicin. Panamericana. Buenos Aires. 2004 Borrows William Dr. Tratado de microbiologa, Vigsima edicin. Interamericana. Mxico 1974. Garca Rodrguez JJ. Microbiologa Mdica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996.
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Laboratorio: Bacteriologa Mdica Prctica # 11 Hemocultivo TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNOS:
Eloy Ricardo Borjas Senz 175211 Mayra Torres Gmez 190128 7mo B
3 de mayo de 2007
Resumen Se realiz un hemocultivo, el cual se estuvo revisando por tres das para observar como se presenta un cultivo negativo, despus de esto se le inoculo una bacteria problema, esta tcnica se realiz utilizando cultivos de la muestra en agares; sangre, MacConkey y Chocolate. Donde, como resultado, se obtuvo; en el anlisis; colonias redondas convexas, y de consistencia cremosa con una pigmento verde; esto en agar MacConkey y, en sangre se observo colonias redondas, presentando una hemlisis beta, y colonias blancas, redondas y convexa en chocolate. Microscpicamente fueron bacilos gram negativos, por lo que se procedi a realizar las pruebas bioqumicas o metablicas para determinar el tipo de microorganismo asilado. El cual resulto ser, Pseudomona, comnmente relacionada a bacteriemias. Introduccin Un hemocultivo es un examen para determinar si microorganismos como bacterias, micobacterias u hongos estn presentes en la sangre. Se coloca una muestra de sangre en una preparacin especial de laboratorio y se incuba en un ambiente controlado por 1 a 7 das. En este examen es importante que la muestra sangunea no se contamine con organismos de la piel o del equipo utilizado para preparar el examen. Se debe seguir una tcnica estricta con antispticos para obtener y preparar la muestra. La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte anterior del codo o del dorso de la mano. El sitio de puncin se limpia con un antisptico y luego se coloca una banda elstica alrededor del antebrazo con el fin de aplicar presin y hacer que la vena se llene de sangre. Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco hermtico o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira la banda para restablecer la circulacin y, una vez que se ha recogido la sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado. Se examina el cultivo por varios das en bsqueda de la presencia de microorganismos y, si stos estn presentes, se pueden realizar otros cultivos para identificarlos. Tambin se puede realizar una tincin de gram para clasificar el organismo de forma que se pueda iniciar la terapia con antibiticos antes de que los resultados del cultivo final estn disponibles. Un hemocultivo se realiza cuando hay sospecha de infeccin en la sangre (bacteriemia o septicemia) debido a sntomas tales como fiebre, escalofros o presin sangunea. Pseudomonas aeruginosa El trmino Pseudomona significa 'falsa unidad', procede del griego pseudo, que significa 'falso', y monas, que significa unidad simple. El nombre fue usado inicialmente en la historia de la microbiologa como sinnimo de grmenes. Aeruginosa es el nombre latino para el cardenillo u 'xido de cobre'. Esto
Manual de bacter UACH describe el pigmento azul verdoso bacteriano, visto en los cultivos de laboratorio " de P. aeruginosa.Es una bacteria Gram-negativa, aerbica, con motilidad unipolar. Es un patgeno oportunista para los humanos. Resultado De Aprendizaje Cultivar e identificar al microorganismo causal de una bacteriemia. Material: Equipo: Portaobjetos y cubreobjetos. Microscopio ptico de campo claro Asa de nicromio punta redonda. Incubadora a 37C Mechero de Bunsen. Papel estraza. Puente de tincin. Gradilla y piseta. Cajas petri . Equipo de proteccin personal: Cubreboca. Guantes de ltex. Bata. Reactivos: Tincin de Gram. Cristal violeta. Yodo lugol. Alcohol acetona. Safranina. Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%. Aceite de inmersin. Cloruro Frrico al 10% Kovaks. -Naftol. KOH al 40%. Rojo de Metilo. Agares: Pruebas Bioqumicas: MacConkey. TSI Sangre. MIO Chocolate. SIM Citrato Caldo de Urea FeA RM-VP LIA Caldo de Malonato
Metodologa Toma De La Muestra La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte anterior del codo o del dorso de la mano. El sitio de puncin se limpia con un antisptico y luego se coloca una banda elstica alrededor del antebrazo con el fin de aplicar presin y hacer que la vena se llene de sangre. Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco hermtico o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira la banda para restablecer la circulacin y, una vez que se ha recogido la sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado. Inoculacin De Las Botellas Se debe descontaminar el tapn de goma antes de puncionar la botella con alcohol y esperar que se seque, ya que el fabricante no garantiza la esterilidad de ste. Existen controversias respecto al cambio de aguja antes de inocular la muestra en la botella, sin embargo un meta-anlisis reciente demuestra que el cambio de aguja disminuye el porcentaje de contaminacin se debe tener mxima precaucin en no tocar las paredes exteriores de la botella con la aguja.
Medios: Agar sangre, chocolate y Agar Mac Conkey. Con la jeringa se descarga la muestra en el primer cuadrante, despus se estra en los dems cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas despus del periodo de incubacin. Despus de que se hayan sembrado cada una de las cepas de referencia se colocan las cajas petr en la incubadora durante 24 horas a 37C, despus de este periodo de incubacin se revisa la estructura microscpica de cada una de las cepas. NOTA: Esto se realiza de igual forma para cada uno de los medios. Anlisis macroscpico y microscpico de las colonias presentes en los medios inoculados en la seccin anterior, as como realizar las pruebas bioqumicas correspondientes de acuerdo al microorganismo. Tincin de Gram. Adems de las pruebas bioqumicas Realizar la lectura de las pruebas bioqumicas.
Resultados Morfologa Macroscpica Pseudomona aeruginosa Agar: Forma Tamao Borde Elevacin Consistencia Luz transmitida Luz reflejada Color Hemlisis Sangre Redondas Grande Entero Planas Cremosa Negativa Positiva Blancas Beta Chocolate Redonda Mediana Entero Convexa Cremosa Negativa Positiva Blancas -------MacConkey Redonda Mediana Entero Planas Cremosa positiva negativa Pigmento verde ---------
Morfologa Bacilos cortos, Gram negativos y en arreglo simple o par.
Agar Mc Conkey
Agar Sangre
Agar chocolate
Pruebas Bioqumicas medio TSI k/k Citrato FEA MIO SIM LIA pseudomona Gas H2S
+ Indol
Ornitina
Movilidad
+
Movilidad
+ -
+
Indol H2S
RM-VP Caldo de Urea Caldo de Malonato Oxidasa: positiva Discusin De Resultados RM
+
VP
+ +
Con las pruebas realizadas en este anlisis se pudo identificar a la bacteria que fue inoculada en el hemocultivo; gracias al pigmento que produjo la bacteria en agar Mac Conkey y a el caracterstico olor a maz se hace un diagnostico presuntivo de que es Peudomona, este diagnostico se confirma con el montaje de pruebas bioqumicas en donde se observa que no fermenta carbohidratos y con la prueba de oxidasa que arroja un resultado positivo. Conclusin Gracias a las pruebas y medios de cultivo utilizadas en este anlisis se determina al microorganismo capaz de crecer en un hemocultivo, el cual se identifico como una bacteria gram negativa, no fermentadora de carbohidratos, conocida como Pseudomona aeuruginisa
Bibliografa
http://html.rincondelvago.com/bacteriologia_2.html http://www.eprodig.com/dermlink/Paginas/consejos_enfermedades_bacteriana.htm http://www.msd.es/publicaciones/mmerck_hogar/seccion_18/seccion_18_201.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Pseudomonas_aeruginosa#Patog.C3.A9nesis
Koneman. W Elmer y Co. Diagnostico microbiolgico texto y atlas. 5 edicin. Panamericana. Buenos Aires. 2004 Borrows William Dr. Tratado de microbiologa, Vigsima edicin. Interamericana. Mxico 1974. Garca Rodrguez JJ. Microbiologa Mdica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996.
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Laboratorio: Bacteriologa Mdica Prctica # 12 Lquido Cefalorraquideo
Norma Herrera Daz
TITULAR:
ALUMNA:
Mayra Torres Gomez 190128 7mo B
11 de Mayo de 2007
Manual de bacter UACH Resumen. En esta prctica se realiz un cultivo de una muestra de Lquido Cefalorraquideo. Para su diagnostico se sembr una porcin de la muestra en agares: Sangre, MacConkey y Chocolate. Se efectuo un frotis con tincion Gram, para su anlisis microscpico, observando bacterias Gram negativas. Pasado el tiempo de incubacin se obtuvo un crecimiento colonial que marco la pauta de la investigacin. Se realizo el anlisis macroscpico y microscpico de cada una de las colonias para saber la morfologa del posible microorganismo, y como se obtuvo crecimiento en agar Sangre, Chocolate y MacConkey; y sabiendo que era un Gram (-) se efectuaron las pruebas bioqumicas adecuadas para su identificacin, obtenindose que se trataba de Proteus mirabilis. Introduccin. El lquido cefalorraqudeo, conocido como LCR, es un lquido claro como cristal de roca que baa al cerebro y a la mdula espinal que circula por los ventrculos cerebrales y el canal medular y se almacena en las cisternas cerebrales. (1) Presenta una presin de 10-20 cm de agua, un volumen total de 150 ml, un volumen intra ventricular de 20-30 ml, est compuesto mayoritariamente por agua, por protenas 15-45 mg/100 ml, glucosa 50-75 mg/100 ml, cloruros 120-130 nmol/l y leucocitos < 4-5 clulas por milmetro cbico. (2) El lquido cefalorraqudeo puede enturbiarse por la presencia de leucocitos o la presencia de pigmentos biliares. Numerosas enfermedades alteran su composicin y su estudio es importante y con frecuencia determinante en las infecciones menngeas, carcinomatosis y hemorragias. Tambin es til en el estudio de las enfermedades desmielinizantes del sistema nervioso central o perifrico. El lquido cefalorraqudeo tiene tres funciones vitales importantes: 1. Mantener flotante el tejido cerebral, actuando como colchn o amortiguador, dentro de la slida bveda craneal. Por lo tanto, un golpe en la cabeza moviliza en forma simultnea todo el encfalo, lo que hace que ninguna porcin de ste, sea contorsionada momentneamente por el golpe. 2. Servir de vehculo para transportar los nutrientes al cerebro y eliminar los desechos. 3. Fluir entre el crneo y la medula espinal para compensar los cambios en el volumen de sangre intracraneal, manteniendo una presion. (la cantidad de sangre dentro del cerebro) (5) Existen diferentes formas de obtener una muestra de lquido cefalorraqudeo. Una puncin lumbar, comnmente llamada puncin espinal, es el medio ms comn para recolectar una muestra de LCR y generalmente se realiza de la siguiente manera:
El paciente debe acostarse de lado con las rodillas encogidas hacia el abdomen y la barbilla pegada al trax. Algunas veces, este procedimiento se realiza con la persona sentada y doblada hacia adelante. Despus de limpiar la espalda, el mdico inyecta anestsico local en la parte inferior de la columna. Se inserta la aguja espinal, generalmente entre la tercera y cuarta vrtebra lumbar. Una vez que se ha insertado la aguja adecuadamente, se mide la presin del lquido espinal y se recoge la muestra. Luego, se retira la aguja, se limpia el rea y se aplica un vendaje sobre el sitio. El paciente debe permanecer acostado por un perodo de 20 minutos a 1 hora despus del examen. (4)
Resultado de aprendizaje. Anlisis Microbiolgico de una muestra de Lquido Cefalorraquideo, para la determinacin de algunas enfermedades, debidas al causas de un dao en el . lquido cefalorraquideo. Material, Equipo y Reactivos Equipo: Microscopio ptico de campo claro Incubadora a 37C Equipo de seguridad (bata para el laboratorio, guantes de ltex, lentes de seguridad y cubre bocas) Material: Mechero de bunsen. Asa de nicromio circular estril. Cajas de petri Tubo de ensayo de 13x100mm. Portaobjetos. Puente de tincin. Pizeta. Papel estraza. Frasco para anaerobios con vela. Reactivos: . Agar Chocolate Agar MacConkey Agar Sangre. Cristal violeta. Yodo lugol. Alcohol-acetona. Safranina. Aceite de inmersin. Agua oxigenada.
Muestra: Lquido Cefalorraquideo
Manual de bacter UACH Mtodos. Toma de muestra.
El paciente debe acostarse de lado con las rodillas encogidas hacia el abdomen y la barbilla pegada al trax. Algunas veces, este procedimiento se realiza con la persona sentada y doblada hacia adelante. Despus de limpiar la espalda, el mdico inyecta anestsico local en la parte inferior de la columna. Se inserta la aguja espinal, generalmente entre la tercera y cuarta vrtebra lumbar. Una vez que se ha insertado la aguja adecuadamente, se mide la presin del lquido espinal y se recoge la muestra. Luego, se retira la aguja, se limpia el rea y se aplica un vendaje sobre el sitio. El paciente debe permanecer acostado por un perodo de 20 minutos a 1 hora despus del examen. Proceder con el anlisis microbiolgico. Reportar los resultados.
Primera sesin. Sembrado de la muestra de Lquido Cefalorraquideo. 3. En todos los agares (Sangre, MacConkey, Chocolate), tomar el asa de nicromio con la muestra que se encuentra en eltubo de ensaye, y se descarga en una de los cuadrantes, despus se procede a estriar con el asa de nicromio con el fin de obtener colonias aisladas. Incubar a 37oC por 24horas. El agar chocolate y sangre se incuban en condiciones de carboxifilia. Segunda sesin. 1. Anlisis macroscpico y microscpico de las colonias crecidas en los diferentes agares. 2. Realizar las pruebas bioqumicas, dependiendo del resultado obtenido en la Tincin de Gram. Incubar las pruebas y leer a las 24horas. 3. Reportar los resultados obtenidos, para la determinacin de la cepa problema. NOTA: todas estas pruebas para los agares que tengan crecimiento bacteriano.
Manual de bacter UACH Resultados. Agar Sangre Redondas Medianas Convexa Entero No Blanca Cremosa No present Agar MacConkey Redondas Medianas Convexa Entero no Grises Cremosa ----Agar Chocolate Redondas Medianas Convexa Entero no Blancas Cremosa -----
Forma Tamao Elevacin Borde Luz transmitida Color Consistencia Hemlisis
Pruebas Bioqumicas medio TSI A/A Citrato FEA MIO SIM LIA Proteus mirabilis Gas H2S
+
Indol
+
Ornitina
Movilidad
+
Movilidad
+ -
Indol H2S
+
VP
+ + -
Manual de bacter UACH Morfologa macroscpica.
Agar MacConkey Morfologa microscpica.
Agar Sangre
Agar Chocolate
Proteus mirabilis Catalasa: positiva
Manual de bacter UACH Discusin. En el estudio realizado a la muestra de Lquido Cefalorraquideo se obtuvieron resultados con un menor margen de error en la comprobacin del agente bacteriano que resulto; siendo este Proteus mirabilis. Comprobandos esta hipotesis por medio de las pruebas confirmatorias para descartar otras posibilidades, entre ellas se encuentran la utilizacin de la urea, ya que este microorganismo tiene la capacidad de la reduccin de nitritos muy efectiva.
Conclusin. El aislamiento de Proteus mirabilis, a partir de la muestra de Lquido Cefalorraqudeo tiene importancia diagnstica, ya que no es considerada como parte de la flora normal de esta porcin de cercana de la columna vertebral,
Bibliografa. 23. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico. Ed. Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico. 24. 25. 26. 27. Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra Borrows. W. (1974). Tratado de microbiologa, Interamericana 20 edicin.. http://www.umm.edu/esp_ency/article/003428.htm http://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%ADquido_cefalorraqu%C3%ADdeo edicin. Mxico. Mxico., pgs. 422-427.
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 9 de Mayo de 2007

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MAYRA TORRES GMEZ

Manual de bacter UACH UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA

Norma Herrera Daz

Manual de bacter UACH

Manual de bacter UACH RESULTADOS. Morfologa Macroscpica y Microscpica.

Forma Tamao Borde Elevacin Luz transferida Luz reflejada

Redonda Pequeo Entero Convexa S Incolora (TCBS)

Redonda Pequea Entero Convexa Si Si Incolora (McK, SS) Blancas (XLD)

Color Consistencia Afinidad tintoral Forma Lactosa AGAR XLD

Cremosa G (-) Bacilos

Cremosa G (-) Bacilos -

Manual de bacter UACH AGAR MacConkey

Salmonella sp AGAR TCBS AGAR SB

Manual de bacter UACH Morfologa microscpica.

Salmonella enteritidis gas A/A + + H2S +

Shigella sonnei gas A/A H2S -

TSI Citrato FEA LIA

Yersinia enterocolitica gas H2S A/A Ornitina

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Anlisis de Coprocultivo TITULAR:

Manual de bacter UACH Resultados. Macroscpicas: Agar XLD Agar MacConkey

Kluyvera ascorbata Agar SB

TSI Citrato FEA MIO SIM LIA

+ Movilidad Indol Ornitina

RM-VP Caldo de Urea Caldo de Malonato Desaminacin Descarboxilacin RM

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Norma Herrera Daz

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Equipo: Microscopio ptico Incubadora a 37C.

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Resultados Morfologa Macroscpica

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Morfologa Macroscpica Agar MacConkey

P. aureginosa Agar sangre

E. cloacae Agar cetrimide

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P. aureginosa Morfologa Microscpica

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Enterobacter cloacae H2S A/A gas + gas Movilidad

Proteus gas K/A + + H2S +

gas H2S Indol

TSI Citrato FEA MIO SIM LIA

Pseudomona aureginosa Gas H2S K/K -

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Resultados Morfologa Macroscpica

Sangre Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa Positiva Grises

MacConkey Redonda Mediano Entero Convexa Cremosa Negativa Positiva Rosas

Morfologa microscpica Bacilos cortos, Gram negativos y en arreglo simple o par.

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RM-VP Caldo de Urea Caldo de Malonato RM

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No hubo crecimiento de Candida albicans en el agar BIGGY

Streptococcus agalactiae Catalasa: negativo Oxidasa: negativo

Fecha de consulta de las pginas de Internet: 6 de marzo de 2007

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