VERSIN CORREGIDA, 5 DE ENERO DE 2009.

MANUAL DE INSEMINACIN ARTIFICIAL EN BOVINOS

Joel Hernndez Cern y lvaro Ortega Len

Departamento de Reproduccin Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Universidad Nacional Autnoma de Mxico

PREFACIO

La inseminacin artificial es, sin duda, la mejor tcnica para el mejoramiento gentico de los hatos bovinos. En nuestro pas su uso est ampliamente difundido en los hatos lecheros tecnificados, y se utiliza poco en los hatos lecheros de pequeos productores y es casi nula su prctica en los hatos bovinos en sistemas de produccin de carne y doble propsito. Las causas de su uso limitado obedecen principalmente al desinters oficial en los programas de extensionismo y a la falta de organizacin de los productores. Sin embargo, cada vez ms productores en forma independiente o en nuevas organizaciones ganaderas estn demandando ms esta prctica, por lo que los egresados de la carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia deben estar en condiciones de ofrecer un servicio profesional, lo cual slo se puede lograr mediante el dominio de la tcnica. Este manual tiene como propsito ofrecer un mtodo sencillo de aprendizaje de la inseminacin artificial en bovinos. El mtodo se divide en tres partes: la primera consiste en las tcnicas para la identificacin de la vaca en estro; la segunda se refiere al manejo del semen, y la ltima parte comprende el procedimiento de introduccin del semen en el tero. Cabe sealar que el aprendizaje de la tcnica de inseminacin es mediante la prctica y la repeticin y este manual es slo una gua para comprender los procedimientos. El manual se complementa con informacin acerca de las causas de la falla en la concepcin asociadas con la tcnica de inseminacin. El presente manual apoya las materias de Prctica de Profundizacin en Reproduccin Animal y Reproduccin Animal. El texto incluye informacin bsica de la tcnica de inseminacin artificial, ya que en otros libros y manuales editados por la Facultad se profundiza en fisiologa y en el manejo reproductivo del ganado bovino. Los autores esperamos que este texto contribuya con el aprendizaje de las tcnicas reproductivas de nuestros egresados.

Manual de Inseminacin Artificial en Bovinos

CONTENIDO

I.

INTRODUCCIN.3

II.

IDENTIFICACIN DE LA VACA EN ESTRO4 Aparato reproductor de la vaca...4 El ciclo estral ....11 Cmo saber si una vaca est en estro?....................................................................16 Ayudas que facilitan la observacin de las vacas en estro....20

III.

MANEJO DEL SEMEN........27 Manejo del termo..29 Descongelacin del semen32 Preparacin de la pistola de inseminacin 34

IV.

INTRODUCCIN DEL SEMEN..38 Momento de la inseminacin....38 Depsito del semen...39

V.

FACTORES QUE AFECTAN LA FERTILIDAD...43

VI.

LITERATURA RECOMENDADA...50

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I. INTRODUCCIN

La inseminacin artificial es una tcnica que consiste en la introduccin del semen en el aparato genital de la hembra sin intervencin del toro y asistida por el hombre. Esta tcnica ofrece excelentes posibilidades para el incremento de la produccin de carne y leche, ya que es la tecnologa reproductiva ms sencilla y la que ms ventajas tiene en trminos de mejoramiento gentico. As, le permite al pequeo productor tener cras de los mejores toros de la raza deseada a un bajo costo. Por otra parte, evita la transmisin de enfermedades que se adquieren por la va sexual y se elimina el riesgo del manejo de sementales en los ranchos o establos y los costos de su mantenimiento. La fertilidad obtenida en hembras inseminadas artificialmente es similar a la que se logra cuando se emplea monta directa. Las desventajas para el productor son realmente insignificantes, comparndolas con los beneficios obtenidos. Algunas de las desventajas consisten en que se debe contar con un tcnico calificado y con el equipo de inseminacin, y se deben establecer prcticas de manejo para identificar a las vacas cuando estn sexualmente receptivas (estro o calor). El presente mtodo para aprender la tcnica de inseminacin artificial se divide en tres partes: la primera consiste en las tcnicas para la identificacin de la vaca en estro; la segunda se refiere al manejo del semen, e incluye el manejo del termo, la tcnica de descongelacin y el armado de la pistola de inseminacin; y la ltima parte comprende los procedimientos para la introduccin del semen en el tero.

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II. IDENTIFICACIN DE LA VACA EN ESTRO

Objetivo Identificar los cambios conductuales y genitales de la vaca en estro mediante la observacin y el examen ginecolgico para realizar la inseminacin artificial en el momento ptimo.

Aparato reproductor de la vaca El aparato reproductor de la vaca (Figuras 1 y 2) est constituido por los ovarios, oviductos, tero, crvix, vagina y genitales externos (vulva y cltoris). Figura 1. Anatoma del aparato reproductor de la vaca. (a) Vulva; (b) Vagina; (c) Crvix; (d) tero y (e) Ovario.

(a)

(b)

(c) (d)

(e)

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Figura 2. Esquematizacin de la posicin anatmica de las estructuras reproductivas. (a) Recto; (b) Vulva; (c) Vagina; (d) Crvix; (e) tero; (f) Cuernos uterinos y (g) Ovario.

(a) (c) (g) (d) (e) (f)

(b)

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Los ovarios son rganos pares (Figura 3) y estn suspendidos en la regin lumbar y se fijan a la pared de la cavidad plvica mediante el mesoovario. Figura 3. En la foto se observan los ovarios con diferentes estructuras ovricas. En el ovario (0) se aprecia un cuerpo lteo, mientras en el ovario (0) se observan folculos en diferente estadio de desarrollo.

Los oviductos son pequeas estructuras tubulares que tienen como funcin transportar al vulo, a los espermatozoides y al embrin. El oviducto proporciona el ambiente apropiado para que ocurra la capacitacin de los espermatozoides, la fertilizacin y el desarrollo embrionario temprano. El oviducto tiene tres porciones. El infundbulo es la parte ms cercana al ovario y por su forma de embudo captura al vulo despus de su liberacin. La parte media se conoce como el mpula, y es el sitio en donde se lleva a cabo la fertilizacin. La parte del oviducto que se une con el tero es el istmo y una de sus funciones consiste en ofrecer un microambiente a los espermatozoides para que se capaciten y posteriormente asciendan al mpula en donde esperan al vulo para fertilizarlo.
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El tero es un rgano tubular que tiene un cuerpo y dos cuernos. Los cuernos uterinos comunican con el oviducto y reciben al embrin para que contine su desarrollo. El tero posee una capa mucosa conocida como endometrio, una capa de msculo liso llamada miometrio y una capa serosa. En el endometrio hay glndulas que producen sustancias que nutren al embrin antes de que se implante. Asimismo, contiene sitios de unin (carnculas) para que se fije la placenta y se lleve a cabo el intercambio de sustancias entre el feto y la madre. El tero se une a la pared de la cavidad plvica mediante el ligamento ancho, a travs del cual llegan los vasos sanguneos y nervios. El crvix es un rgano tubular que separa al tero de la vagina. Durante el estro se abre y secreta moco (moco estral) y durante el diestro permanece cerrado. En la vaca gestante el crvix produce un tapn que evita el paso de partculas y agentes infecciosos al tero. El conducto que forma el crvix se conoce como canal cervical y est limitado por dos orificios (os interna y os externa). En el canal cervical se encuentran tres anillos, los cuales son pliegues firmes de la mucosa (Figuras 4 y 5). Figura 4. Se observa el crvix y una pipeta de plstico en el canal cervical.

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Figura 5. En la imagen se aprecia el orificio cervical externo.

A la palpacin rectal, el crvix es de consistencia firme y se palpa como un tubo, el cual puede tener un dimetro desde 2 cm en vaquillas, hasta 5 cm en vacas adultas. La longitud flucta de 7 hasta 12 cm. En el ganado europeo en crvix es recto, con pocas desviaciones (Figuras 6); sin embargo en el ganado Ceb o cruzado con Ceb el crvix es tortuoso y en algunos casos tiene forma de S (Figura 7).

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Figura 6. En vacas de razas europeas, el crvix tiende a formar un canal cervical recto y fcil de pasar con la pistola de inseminacin.

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Figura 7.

En vacas con sangre cebuna, el crvix tiene una forma tortuosa que en

ocasiones llega a dificultar la inseminacin.

La vagina es un rgano tubular que se extiende desde el cervix hasta la vulva y a la palpacin se siente como una estructura de pared gruesa. La vagina funciona como el rgano copulatorio y es el sitio de expulsin de la orina durante la miccin. La vulva es la parte externa del aparato reproductor de la vaca y est formada por los labios vulvares, izquierdo y derecho, y en la comisura ventral se encuentra el cltoris, el cual es el homologo del pene.

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El ciclo estral de la vaca El ciclo estral se define como el periodo comprendido entre dos estros. La hembra bovina presenta ciclos estrales a intervalos de 19 a 23 das (promedio de 21 das, Figura 8), los cuales slo son interrumpidos por la gestacin o por alguna patologa. Figura 8: El ciclo estral es el periodo comprendido entre dos estros, y se presenta a intervalos de 19 a 23 das (promedio de 21 das). En esta figura se muestran los principales cambios ovricos y hormonales durante las diferentes etapas.

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El ciclo estral se divide en cuatro etapas bien definidas: Estro En esta etapa la hembra acepta la cpula o la monta de una compaera. Esta conducta es determinada por un incremento significativo de las concentraciones de estradiol producido por un folculo preovulatorio y por la ausencia de un cuerpo lteo. La conducta estral tiene como fin llamar la atencin del macho para el apareamiento. Por efecto de los estrgenos la hembra est inquieta, camina ms, interacta con sus compaeras y acepta la monta de otra hembra (conducta homosexual). Tambin los estrgenos provocan turgencia del tero, edema en los genitales externos y produccin de moco cervical. La duracin del estro es de 12 a 18 h y es afectada por el tipo de ganado y por las condiciones ambientales. El inicio del estro guarda una relacin temporal con la secrecin ovulatoria de LH (pico de LH), ya que los estrgenos al mismo tiempo que provocan la conducta estral tambin desencadenan el pico de LH. Entre el inicio del estro y el pico de LH transcurren de 2 a 6 horas, y en algunos casos estos dos eventos ocurren simultneamente. La ovulacin mantiene una relacin temporal constante con el pico de LH, en general, la ovulacin ocurre de 28 a 30 h despus del pico de LH, o, visto de otra manera, de 30 a 36 h despus del inicio del estro. Para un mejor entendimiento y manejo de la nomenclatura del ciclo estral el estro se considera como el da cero del ciclo. Metaestro El metaestro es la etapa posterior al estro y tiene una duracin de 4-5 das. Durante esta etapa ocurre la ovulacin y se desarrolla el cuerpo lteo. Despus de la ovulacin se observa una depresin en el lugar ocupado por el folculo ovulatorio (depresin ovulatoria) y posteriormente aparece el cuerpo hemorrgico, el cual es el cuerpo lteo en proceso de formacin (Figura 9). Durante el metaestro, las concentraciones de progesterona comienzan a incrementarse hasta alcanzar niveles mayores de 1 ng/ml, momento a partir del cual se considera que el cuerpo lteo lleg a la madurez. Un evento hormonal que se destaca en este periodo consiste en la presentacin del pico posovulatorio de FSH que mantiene una relacin directa con el inicio de la primera onda de desarrollo folicular. Algunas vacas

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presentan un sangrado conocido como sangrado metaestral (Figura 10). Figura 9. Ovarios de una vaca en metaestro. En el ovario derecho se puede observar el cuerpo hemorrgico y en ambos ovarios se observan folculos de la primera onda de folicular.

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Figura 10. Vaca con moco con sangre caracterstico del metaestro. Este signo lo presenta entre el 40 a 60% de las vacas. La presencia de moco con estas caractersticas indica que el estro termin y que la vaca no deber ser inseminada.

Diestro El diestro es la etapa de mayor duracin del ciclo estral (12 a 14 das). Durante esta etapa el cuerpo lteo mantiene su plena funcionalidad (Figura 11), lo que se refleja en niveles sanguneos de progesterona mayores de 1 ng/ml. Adems, en esta fase se presentan ondas de desarrollo folicular, por lo cual se pueden observar folculos de diferente tamao. Despus de 12-14 das de exposicin a progesterona el endometrio comienza a secretar

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PGF2 en un patrn pulstil, el cual termina con la vida del cuerpo lteo y con el diestro. En trminos endocrinos cuando el cuerpo lteo pierde su funcionalidad, es decir, cuando las concentraciones de progesterona disminuyen por debajo de 1 ng/ml, termina el diestro y comienza el proestro. Cabe mencionar que durante esta etapa la LH se secreta con una frecuencia muy baja, y la FSH tiene incrementos que coinciden con el inicio de las ondas de desarrollo folicular. Figura 11. El cuerpo lteo es la estructura ovrica representativa del diestro, sta glndula puede llegar a representar ms de 50% de la masa ovrica.

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Proestro El proestro se caracteriza por la ausencia de un cuerpo lteo funcional y por el desarrollo y maduracin del folculo ovulatorio. El proestro en la vaca dura en promedio de 2 a 3 das. Un evento hormonal caracterstico de esta etapa es el incremento de la frecuencia de los pulsos de secrecin de LH que conducen a la maduracin final del folculo ovulatorio, lo cual se refleja en un incremento de las concentraciones de estradiol. Cuando los niveles de estradiol alcanzan su nivel mximo provocan el estro y desencadenan el pico preovulatorio de LH, completndose as el ciclo estral.

Cmo saber si una vaca est en estro? La vaca en estro muestra una conducta muy peculiar. La conducta de estro tiene como propsito facilitar el encuentro con el macho y su apareamiento. Durante el estro la vaca se muestra inquieta, aumenta su vocalizacin, camina ms, trata de montar a otras vacas y acepta la monta del macho o de una compaera (conducta homosexual. Figura 11). Tambin los genitales muestran cambios durante el estro, as, la vulva se inflama ligeramente, a la palpacin rectal se aprecia el tero con turgencia (duro y contrado) y al realizar un masaje del crvix se observa que sale moco cristalino abundante por la vulva (Figuras 12, 13). No obstante que la vaca muestra diferentes cambios fsicos y conductuales durante el estro, el signo positivo de estro y el nico que se considera para realizar la inseminacin artificial es cuando la vaca acepta la monta.

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Figura 11. El signo positivo de estro es cuando la vaca acepta la monta de una compaera de hato.

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Figura 12. Extraccin de moco cervical durante la palpacin rectal. El moco cervical es viscoso y cristalino.

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Figura 13. La evaluacin del moco cervical permite conocer el estado de salud del tero. Para realizar la inseminacin, el moco debe ser cristalino y viscoso. La presencia de moco turbio o acuoso, o con estras de exudado purulento, indica que hay un proceso infeccioso y en consecuencia la vaca no debe inseminarse.

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Ayudas que facilitan la observacin de las vacas en estro Actualmente se cuenta con diversas herramientas que facilitan la deteccin de las vacas en estro, siendo las ms importantes las siguientes:

Podmetros El fundamento de sta herramienta radica en que la vaca durante la etapa de estro camina ms que en las otras etapas del ciclo estral. As, el podmetro (Figura 14) colocado en una pata de la vaca, registra la actividad locomotora diariamente, la cual es capturada todos los das mediante un lector instalado en la sala de ordeo. Cuando la vaca camina ms, aparece una seal en el informe impreso, para que el inseminador examine a la vaca por va rectal y determine si hay signos de estro genital y proceda a inseminarla. Figura 14. Vacas con podmetro en una sala de ordeo tipo carrusel. Un aumento en la actividad locomotora es un indicador de estro.

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Parches con cpsula de colorante (K-MAR) Estos dispositivos (Figura 15) se colocan en la grupa y contienen una cpsula de colorante, la cual se rompe cuando la vaca recibe la monta. As, en la vaca positiva el dispositivo es de color rojo mientras que en la negativa es blanco. Figura 15. Parche con cpsula de pintura (K-MAR). En la foto se observa una vaca en estro ya que la cpsula se rompi y liber la pintura roja.

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Detectores electrnicos de la monta (Heat Watch) Estos dispositivos (Figura 16) se colocan en la grupa y contienen un sensor electrnico que se activa cuando la vaca recibe la monta. Una vez activado emite una seal, la cual es recibida por una antena colocada en el corral. La seal se registra en una computadora y las vacas positivas se presentan en un informe escrito para que el tcnico proceda a la inseminacin. Figura 16. Vaca con detector electrnico de montas (Heat Watch) colocado en la grupa.

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Chin ball Este mtodo consiste en un aditamento que contiene tinta (como un bolgrafo, Figura 17) y se coloca en la regin de la quijada del toro, al cual previamente se le ha desviado el pene quirrgicamente. Cuando el toro monta a una vaca, le pinta el lomo y no completa la cpula, ya que tiene el pene desviado. Figura 17. Toro con Chin ball. Los toros con este dispositivo deben tener el pene desviado para evitar que copulen con las vacas en estro.

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Crayn La utilizacin del crayn (crayoneo, Figura 18) es la tcnica ms comn en los hatos lecheros y consiste en pintar la grupa con crayn (regin del sacro). En las vacas que reciben montas, la pintura se borra. El tcnico todos los das revisa qu vacas ya no tienen pintura para examinarlas por va rectal y aquellas con estro genital son inseminadas. Figura 18. La marca con crayn se realiza en la grupa de la vaca con la finalidad de que cuando la vaca reciba montas la pintura desaparezca.

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Es importante sealar que las tcnicas descritas slo son ayudas que facilitan la deteccin de las vacas en estro. En todos los casos, la decisin de qu vacas se deben inseminar debe sustentarse en la presencia de signos genitales de estro, de lo contrario, la fertilidad es baja. Hoy en da existen tcnicas de sincronizacin del estro con inseminacin a tiempo fijo. En estos programas la inseminacin se realiza en un tiempo determinado despus del tratamiento hormonal, independientemente de la conducta estral. Tambin debe considerarse el estado de salud de las vacas antes de inseminarse (Figura 19), ya que cualquier enfermedad alrededor del momento de la inseminacin influye negativamente en la fertilidad. Las vacas que se inseminan no deben padecer enfermedades que afecten su estado general o les provoquen fiebre. Adems, el moco estral debe ser cristalino y con una viscosidad que le permita colgarse de la vulva. Las caractersticas del moco estral reflejan el estado de salud del tero; as, un moco turbio o con exudado purulento indica que hay un proceso infeccioso. Figura 19. Las vacas enfermas no deben inseminarse debido a que las posibilidades de gestarlas son mnimas.

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Actividades de la prctica: Reconocer el aparato reproductor de la vaca mediante palpacin rectal. Identificacin de una vaca en estro mediante la observacin de la conducta. Identificacin de una vaca en estro mediante el examen de los genitales internos. Entender el manejo de las ayudas para la deteccin de estros.

Habilidades desarrolladas El alumno podr identificar a una vaca en estro con base en la conducta y en la identificacin de los signos genitales de estro.

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III. MANEJO DEL SEMEN

Objetivo Entender el manejo del equipo de inseminacin artificial, y las tcnicas de descongelacin y manejo del semen para evitar daos en los espermatozoides. El semen que se utiliza en la inseminacin artificial se obtiene de toros mediante una vagina artificial (Figura 20) y en menor proporcin a travs de la electroeyaculacin. El semen est constituido por espermatozoides y por el plasma seminal, el cual aporta el medio que facilita la sobrevivencia de los espermatozoides, ya que tiene sustancias que nutren a las clulas y regulan el pH. Despus de la coleccin, el semen se diluye con un medio que asemeja al plasma seminal y se le adicionan sustancias que protegen a los espermatozoides de los daos causados por la congelacin y descongelacin. El semen se somete a un protocolo de congelacin hasta llevarlo a una temperatura de -196 C. Figura 20. Coleccin de semen mediante la tcnica de vagina artificial.

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El toro eyacula de 4 a 8 ml de semen con una concentracin de 800 a 1200 millones de espermatozoides por ml. La dilucin del semen permite obtener de un solo eyaculado alrededor de 200 dosis de inseminacin, con lo cual se pueden un servir nmero similar de vacas. El semen se envasa en pajillas de 0.25 o 0.5 ml, aunque la presentacin ms frecuente en nuestro medio es la de 0.5 ml (Figura 21). Una dosis de inseminacin tiene entre 20 a 30 millones de espermatozoides vivos al momento de la congelacin. A pesar del mejoramiento de las tcnicas de criopreservacin del semen, se estima que alrededor de 30 a 50% de los espermatozoides mueren durante el proceso de congelacin y descongelacin. No obstante, con las dosis de inseminacin comerciales se obtienen porcentajes de concepcin similares a los obtenidos con la monta directa. Figura 21: Pajillas de semen de 0.5 ml.

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Manejo del termo El termo para la conservacin del semen es un tanque que conserva el nitrgeno en estado lquido (-196 C). Dentro del termo hay canastillas, las cuales contienen pequeos contenedores (bastones) para 10 pajillas cada uno. Cada canastilla y bastn deben estar identificados. Hay diferentes tamaos de termos de nitrgeno y la eleccin depende del nmero de dosis que se desea conservar (200 dosis hasta 1000, Figuras 22 y 23). Figura 22. Partes de un termo criognico.

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Figura 23. Termo criognico para la conservacin del semen.

El cuidado ms importante al manejar el termo consiste en la revisin frecuente del nivel de nitrgeno. Lo termos se debe recargar cuando tienen 30% de su capacidad de nitrgeno. Para la revisin del nivel se utiliza una regla que viene con el equipo, la cual se introduce durante 20 segundos; despus se retira y se espera a que aparezca la marca blanca del nitrgeno. Cabe sealar que la causa ms frecuente de los fracasos en programas de inseminacin es el mal manejo del termo. Es un error comn que disminuya el nivel de nitrgeno por debajo del lmite de seguridad, lo cual ocasiona que cambie la temperatura del semen y se afecte la viabilidad de los espermatozoides. En casos extremos, y no poco frecuentes, los termos se vacan totalmente y son recargados cuando los espermatozoides ya estn muertos. Siempre que se comienza un programa de inseminacin y se dude del correcto manejo del termo, se

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debe hacer una evaluacin del semen, la cual consiste en descongelar una dosis y observarla al microscopio para medir la proporcin de espermatozoides que tienen un movimiento progresivo; un semen bien manejado debe tener arriba de 30 % de espermatozoides con dicho movimiento, y un semen con menos de 20% se considera no apto. Otro de los errores frecuentes es la mala identificacin de las canastillas y bastones, lo que ocasiona que el semen sea sobreexpuesto a cambios de temperatura cuando se trata de encontrar la dosis deseada (Figura 24). Figura 24. El termo criognico conserva el semen a -196 C, la temperatura se incrementa conforme se acerca a la boca del termo.

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Descongelacin del semen El semen est a -196 C cuando est en el termo de nitrgeno y se debe descongelar antes de depositarlo en el tero. El proceso de descongelacin debe ser rpido para evitar daos en los espermatozoides. La tcnica recomendada consiste en retirar la pajilla del termo e introducirla en agua a 35-37 C durante 20 a 30 segundos (Figura 25). De ninguna manera se recomienda la descongelacin en la axila, overol o entre las manos. Se aconseja tener un termo que mantenga el agua con pocas variaciones de temperatura. Existen en el mercado termos que en forma automtica regulan la temperatura del agua (Figura 26). Figura 25. Descongelacin de semen en agua a 35-37 C utilizando un termo de

regulacin manual de la temperatura con un termmetro de tarjeta.

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Figura 26.

Descongelacin de semen en agua a 35-37 C utilizando un termo de

regulacin automtica de la temperatura.

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Preparacin de la pistola de inseminacin La pistola de inseminacin (pistola de Cassou) es una funda de acero inoxidable y una varilla que funciona como mbolo (Figura 27 y 28). Adems, tiene una rondana de plstico que sirve para fijar la funda desechable (funda con adaptador verde), la cual se cambia entre cada vaca. Figuras 27 y 28. Pistolas de inseminacin o de Cassou.

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Despus de la descongelacin, la pajilla se debe secar perfectamente y se corta en el extremo sellado por ultrasonido o calor (del lado contrario del tapn de algodn). Para realizar el corte se cuenta con una guillotina especialmente diseada para cortar la porcin justa (Figura 29). La pajilla se coloca dentro de la pistola de inseminacin, quedando fuera el extremo a cortar, posteriormente se utiliza la guillotina o, en su defecto, unas tijeras, cabe sealar que si se usan tijeras el extremo a cortar debe ser de 1 cm. Tambin se puede cortar el extremo de la pajilla antes de ponerla en la pistola de inseminacin (Figura 30). Figuras 29 y 30. Para cortar la pajilla -lado contrario del tapn de algodn- se puede utilizar un cortador de pajillas o tijeras.

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Durante todo el procedimiento de armado de la pistola, se debe tener especial cuidado en evitar que los rayos solares incidan en la pajilla de inseminacin, y, en climas fros, es necesario disminuir el cambio de temperatura que pueden sufrir los espermatozoides cuando la pajilla es introducida en la funda metlica, la cual puede estar a una temperatura inferior. Una medida prctica consiste en calentar la funda entre las manos o ponindola en contacto con el cuerpo (dentro del overol). Por otra parte, se debe evitar que el aire fro modifique la temperatura del semen; con tal propsito, una vez armada la pistola de inseminacin, se introduce a un guante de palpacin y se mantiene a la temperatura corporal debajo del brazo. Tambin se llega a utilizar una cubierta de nylon (camisa sanitaria o chemisse) encima de la funda desechable, la cual se jala y se rompe una vez que la punta de la pistola est en la abertura externa del crvix. Este mtodo tiene como propsito evitar el arrastre de agentes

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infecciosos de la vagina al tero. El tiempo que transcurre desde la descongelacin hasta el depsito del semen en los genitales de la vaca no debe ser mayor de 2 minutos; por tal razn se aconseja realizar la descongelacin cerca de donde se encuentre la vaca.

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Actividades de la prctica: Identificar el equipo y los materiales para la inseminacin artificial Manejo del termo y del equipo de inseminacin. Descongelacin del semen Manejo de la pistola de inseminacin Evaluacin del semen

Habilidades desarrolladas El alumno podr descongelar una dosis de semen y armar la pistola de inseminacin sin afectar la viabilidad de los espermatozoides.

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IV. INTRODUCCIN DEL SEMEN

Objetivo Entender el procedimiento de introduccin del semen en el tero mediante la prctica con teros y con vacas.

Momento de la inseminacin Para que ocurra la fertilizacin del vulo es necesario que los espermatozoides se depositen antes de la ovulacin, para que tengan tiempo de adquirir la capacidad fertilizante (capacitacin espermtica) y esperen al vulo en la parte media del oviducto (mpula). La inseminacin debe hacerse antes de la ovulacin, es decir, en cualquier momento del estro (Figura 31). Desde hace ms de 50 aos se ha aplicado el sistema de inseminacin AM-PM y PM-AM, lo que significa que las vacas que presentan el estro en la maana son inseminadas en la tarde y las de la tarde se inseminan en la maana siguiente (12 horas despus del inicio del estro). Este sistema brinda buenos resultados, pero se debe tener cuidado en la deteccin de los estros, ya que es necesario identificar a la vaca cuando el estro inicia. Si lo anterior no se puede asegurar, entonces se aconseja inseminar cuando la vaca es detectada en estro.

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Figura 31.

Para que ocurra la fertilizacin del vulo es necesario que los

espermatozoides se depositen antes de la ovulacin y tengan tiempo de adquirir la capacidad fertilizante (capacitacin espermtica).

Depsito del semen La tcnica de inseminacin se denomina tcnica recto-vaginal, debido a que con una mano manipulamos el crvix a travs del recto y con la otra introducimos la pistola por la vagina. Antes de introducir la pistola de inseminacin por la vulva, esta se debe lavar con agua y secar con una toalla de papel. En ocasiones la rutina no permite lavar la vulva, en estos casos no se debe olvidar limpiarla con una tolla de papel. Para introducir la pistola, se deben abrir los labios vulvares, para evitar que la pistola de inseminacin entre en contacto con ellos y as impedir la introduccin de agentes infecciosos. La introduccin de la pistola de inseminacin en la abertura externa del crvix se facilita cuando los dedos dirigen la pistola a la abertura externa. Una vez dentro del crvix, ste se manipula para que la pistola

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vaya pasando los tres anillos cervicales (Figura 32). Se debe evitar mover la pistola y empujarla, ya que el crvix es el que se debe manipular para que el dispositivo vaya pasando los anillos; cuando se empuja o se mueve en exceso se puede lastimar la mucosa, y en casos extremos se llegan a producir perforaciones con la subsiguiente formacin de abscesos. Figura 32. Tcnica de inseminacin artificial rectovaginal.

Una vez que se ha pasado el ltimo anillo cervical, ya se puede depositar el semen. Una forma de saber que ya estamos en el cuerpo del tero, es sintiendo con la mano la punta de la pistola de inseminacin inmediatamente despus del crvix (Figura 33).

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Figura 33. El sitio correcto para depositar el semen es pasando el ltimo anillo cervical.

El semen se debe depositar en el tero. Uno de los errores ms frecuentes es el depsito del semen en la vagina o en el crvix. Estos errores los cometen tcnicos inexpertos o cansados y son ms comunes en el ganado que tiene sangre Ceb, ya que tienen el crvix tortuoso. Actualmente se cuenta con semen que contiene una mayor proporcin de espermatozoides con el cromosoma X, los cuales dan origen a cras hembras. Esta tecnologa ya est disponible y hay empresas genticas que tienen el equipo para la separacin espermtica y comercializan este tipo de semen. La eficiencia de la tcnica de separacin de los espermatozoides es baja, por lo cual las dosis de semen que se ofrecen al mercado tienen de 2 a 3 millones de espermatozoides mientras que las dosis normales (no sexado) tienen entre 20 y 30 millones. Lo anterior obliga a depositar el semen en la regin ms anterior del cuerno uterino, del lado en donde est el folculo ovulatorio, para aumentar las probabilidades de fertilizacin.

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Actividades de la prctica: Procedimiento para la introduccin del semen en teros en mesas de trabajo. Procedimiento para la introduccin del semen en el tero en vacas.

Habilidades desarrolladas El alumno podr introducir el semen en el tero de la vaca y depositarlo en el sitio correcto.

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V. FACTORES QUE AFECTAN LA FERTILIDAD

Condicin corporal al momento de la inseminacin Las vacas lecheras despus del parto caen en un balance energtico negativo (BEN), lo cual significa que la suma de la energa necesaria para su propio mantenimiento y la que requieren para la produccin es mayor que la energa consumida, por lo que se ven obligadas a utilizar sus reservas corporales. El BEN se refleja en una prdida de peso y de condicin corporal. El BEN afecta el control neuroendocrino de la reproduccin, lo cual se ha asociado con un retraso en la primera ovulacin posparto y con concentraciones menores de progesterona en los primeros ciclos posparto, lo que resulta en menores porcentajes de concepcin. Por otra parte, el BEN tambin afecta la calidad de los ovocitos, lo cual se refleja en disminucin del potencial para desarrollar embriones viables. As, la inseminacin en los primeros ciclos posparto tiene bajos porcentajes de concepcin. Alteraciones hormonales La funcin ltea se ha asociado con la baja fertilidad, algunos estudios muestran que las vacas subfrtiles tienen afectada la funcin del cuerpo lteo. Se ha observado que las vacas altas productoras tienen menores concentraciones sricas de progesterona, lo cual se asocia con la baja fertilidad. Estudios recientes demuestran que las vacas en lactacin tienen un flujo sanguneo heptico mayor que las vacas no lactantes, lo cual se asocia directamente con mayor capacidad heptica para metabolizar las hormonas esteroides. As, tasas altas de flujo sanguneo heptico determinadas por alto consumo de nutrimentos (20 a 25 kg de materia seca al da), puede causar bajos niveles de progesterona, lo cual puede afectar el establecimiento y mantenimiento de la gestacin. Por otra parte, tambin se ha observado que las vacas altas productoras tienen menores concentraciones sricas de estradiol, lo que se ha asociado con una disminucin en la intensidad de la conducta estral.

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Nutricin Independientemente del efecto de los cambios metablicos provocados por el balance energtico negativo, las dietas ofrecidas a las vacas altas productoras tambin pueden afectar su fertilidad. Este efecto se puede ver cuando se administran dietas con alto contenido de protena en relacin con el consumo de energa. Las dietas con contenidos de protena cruda de 17 a 19 % llegan a ocasionar una disminucin de la fertilidad; se ha demostrado que las vacas alimentadas de esta forma tienen altas concentraciones de urea en sangre y en los fluidos uterinos, lo cual afecta la viabilidad de los espermatozoides, vulo y embrin. En condiciones de campo es frecuente la medicin de las concentraciones de urea en sangre o en leche, lo que permite evaluar las dietas. Las concentraciones de urea mayores de 20 mg/dl en sangre se asocian con baja fertilidad. Proveer todos los nutrimentos a las vacas con niveles altos de produccin obliga a ofrecer dietas altas en energa, basadas en proporciones altas de granos. Es frecuente que se presenten alteraciones subclnicas en el pH ruminal, lo cual se ha asociado con la baja fertilidad. Un factor de riesgo en la prdida de gestaciones tempranas es la acidosis ruminal. Estrs calrico El ganado lechero es altamente susceptible a las altas temperaturas, prueba de ello est en la reduccin de la fertilidad cuando este ganado se encuentra en climas clidos o durante la poca del ao con mayor temperatura. As, el porcentaje de concepcin llega a caer de 40%, obtenido en los meses templados o fros del ao, hasta 15% durante el verano. Los efectos del estrs calrico en la reproduccin del ganado lechero se han incrementado en los ltimos aos, lo que ha coincidido con el incremento en la produccin de leche. Se ha observado que el aumento en la produccin de leche se refleja en un incremento de la generacin de calor metablico. Esta generacin de calor se ha asociado con el incremento del peso vivo de las vacas lecheras. De esta forma, vacas ms grandes tienen un mayor aparato digestivo, lo que les permite consumir y digerir ms alimento. Durante el
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metabolismo de los nutrimentos se genera calor, el cual contribuye con el mantenimiento de la temperatura corporal, condicin favorable en climas fros. Sin embargo, en climas clidos el calor se debe eliminar para mantener la temperatura corporal dentro de los rangos normales. La capacidad de termorregulacin de la vaca lechera es insuficiente, lo cual ocasiona un incremento de la temperatura rectal. En vacas en estrs calrico es comn que la temperatura corporal alcance valores entre 39.5 a 41 C. En condiciones in vivo, el estrs calrico durante los das 1 al 7 despus del estro afecta el desarrollo embrionario y, en condiciones in vitro, la exposicin de los embriones a temperaturas equivalentes a la temperatura rectal de las vacas bajo estrs calrico (41 C), disminuye la proporcin de embriones que llegan a la etapa de blastocisto. La susceptibilidad de los embriones al estrs calrico disminuye conforme los embriones avanzan en su desarrollo. As, los embriones de dos clulas son ms susceptibles que los embriones en la etapa de mrula. Independientemente de la etapa del desarrollo en que los embriones son susceptibles al estrs trmico, el resultado final es un aumento de la muerte embrionaria. Por otro lado, el estrs calrico puede afectar el mecanismo de reconocimiento materno de la gestacin. Las altas temperaturas comprometen la capacidad de los embriones para producir cantidades suficientes de interfern-. Por otra parte, el efecto del estrs calrico no solo se observa durante los meses ms calurosos, sino que tambin es evidente un efecto a largo plazo (efecto residual) ya que las vacas sometidas a estrs calrico mantienen afectada su funcin reproductiva aun despus que termin el periodo ms caliente del ao. Este efecto se puede explicar por el efecto negativo de las altas temperaturas en los ovocitos durante las diferentes etapas del desarrollo folicular. Estrs oxidativo Las vacas lecheras altas productoras tienen un metabolismo intenso; bajo estas condiciones, aproximadamente 1-2% del oxgeno metabolizado se convierte en especies reactivas de oxigeno, las cuales daan el ADN y a las protenas. Las especies reactivas de oxigeno son removidas por sistemas bioqumicos presentes en las clulas y en los fluidos extracelulares,

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estos mecanismos se conocen como sistemas antioxidantes. Estos sistemas incluyen molculas como el -caroteno y la vitamina E, las cuales actan a nivel de la membrana celular hidrolizando perxidos para mantener la integridad de los fosfolpidos. En este mecanismo tambin participan enzimas como la glutatin peroxidasa, la cual es dependiente del selenio. Un incremento en la generacin de radicales libres puede superar a los mecanismos antioxidantes y comprometer a la funcin celular; este problema es ms drstico cuando existe una deficiencia en el consumo de sustancias antioxidantes. La produccin excesiva de radicales libres puede afectar la fertilidad debido a que los tejidos esteroidognicos del ovario, los espermatozoides y los embriones en etapas tempranas de desarrollo, son muy sensibles al dao causado por ellos. La suplementacin con antioxidantes es una forma de enfrentar el problema de la baja fertilidad y en varios estudios, en los cuales se han administrado -caroteno o vitamina E y selenio, se ha mejorado la fertilidad.

Falla en la concepcin asociada con el momento de inseminacin La mala deteccin de estros no slo afecta la fertilidad a travs de disminucin del nmero de vacas inseminadas, sino que tambin lo hace mediante la alteracin de la relacin temporal entre el momento de la inseminacin y el momento de la ovulacin. Como ya se coment, desde hace ms de 50 aos se ha aplicado el esquema de inseminacin A.M.-P.M. y P.M.-A.M. Este esquema da buenos resultados en fertilidad, siempre y cuando se cuente con una eficiente y precisa deteccin de estros. En condiciones deficientes en la observacin de estros, no se sabe si la vaca detectada en estro se encuentra en las primeras o en las ltimas horas del periodo de aceptacin. De tal forma que si se programa la inseminacin 12 h despus, es probable que se realice cuando ya ocurri la ovulacin (inseminacin tarda). Esta situacin aumenta la probabilidad de encontrar vulos viejos, ya que la viabilidad de estos es de 10 h. De esta forma, el vulo es fertilizado, pero da origen a un embrin que muere en los siguientes das. Otro error consiste en inseminar a las vacas

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cuando no estn en estro; este problema es bastante frecuente y contribuye en forma significativa con la baja fertilidad en los hatos lecheros.

Alteraciones anatmicas del aparto reproductor En la vaca lechera son frecuentes las anormalidades adquiridas del aparato reproductor. As, en las vacas infrtiles se pueden encontrar adherencias ovricas y salpingitis (inflamacin del oviducto), condiciones que afectan el transporte de los gametos (vulo y espermatozoides). Cuando el problema es unilateral, es posible que la vaca quede gestante despus de varios servicios, mientras que si es bilateral, es causa de esterilidad. No hay tratamientos efectivos pata eliminar las adherencias o para desinflamar el oviducto.

Tratamientos hormonales para mejorar la fertilidad Progesterona Existe evidencia de que las vacas infrtiles tienen la funcin ltea anormal, lo cual se refleja en concentraciones subnormales de progesterona. El tratamiento lgico consiste en administrar progesterona; sin embargo, cuando se ha suplementado con progesterona los resultados han sido variables, lo cual desalienta su uso. GnRH o hCG al momento de la inseminacin Son muy populares los tratamientos con la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH) o con la gonadotropina corinica humana (hCG) al momento de inseminar. Esta forma de enfrentar la falta de xito en la concepcin se fundamenta en el concepto de que estas hormonas sincronizan la ovulacin con el momento de la inseminacin, previenen problemas de ovulacin retardada y mejoran el desarrollo del cuerpo lteo. Sin embargo, la fertilidad obtenida es variable entre estudios.

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hCG en el da 5 6 posinseminacin El propsito de este tratamiento es provocar la ovulacin del folculo dominante de la primera onda folicular y, con ello, desarrollar un cuerpo lteo accesorio. El tratamiento con hCG en los das 5 y 6 ha demostrado efectividad para incrementar los niveles de progesterona y mejorar en porcentaje de concepcin. GnRH o hCG en los das 12 a 14 posinseminacin Para que la gestacin se establezca, se debe establecer un dilogo estrecho entre el embrin y el ambiente materno. De esta forma, el embrin debe promover los mecanismos que evitan la regresin del cuerpo lteo los das 16-18 posinseminacin, lo cual consigue secretando interfern-, para bloquear la sntesis de PGF2. Se ha propuesto que uno de los factores que contribuye con la falla en la concepcin es la incapacidad del embrin para evitar la regresin del cuerpo lteo. De esta forma, la inhibicin de la cascada de la secrecin de la PGF2 podra mejorar los porcentajes de concepcin, ya que al embrin se le dara ms tiempo para alcanzar el estado ptimo de desarrollo, que le permita establecer eficientemente el mecanismo de reconocimiento materno de la gestacin. Este es el principio de los tratamientos con GnRH o hCG durante los das 12-14 posinseminacin, con los cuales se intenta disminuir los niveles de estradiol circulante mediante la ovulacin, luteinizacin o atresia de los folculos. En la prctica, se han evaluado tratamientos con GnRH o hCG los das 12-14 con resultados en fertilidad variables. Hormona del crecimiento bovina (bST) En el ganado lechero es comn el uso de la bST para incrementar la produccin de leche. La utilizacin de esta hormona en forma peridica aumenta 10 a 20% la produccin lctea. Algunos de los efectos de la bST en la produccin de leche obedecen a la accin de esta hormona; sin embargo, el mayor efecto es provocado por el factor de crecimiento similar a la insulina tipo I (IGF-I), el cual se incrementa en respuesta al tratamiento con bST. La bST y el IGF-I tambin desempean funciones importantes en el control de la

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reproduccin. Las dos hormonas, participan en la regulacin del desarrollo folicular, en la funcin del cuerpo lteo y, especialmente, en las primeras etapas del desarrollo embrionario. Estudios in vitro e in vivo muestran efectos favorables del IGF-I en el desarrollo embrionario. El IGF-I evita el efecto negativo de algunas sustancias, presentes en el medio uterino, txicas para los embriones. La aplicacin de 500 mg de bST el da de la inseminacin ha demostrado eficacia para incrementar el porcentaje de concepcin en las vacas repetidoras.

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VI. LITERATURA RECOMENDADA

Galina CS y Valencia MJ, editores. Reproduccin de los animales domsticos. 2a ed. Mxico (DF): Limusa, 2007. Joel Hernndez Cern y Jess Zavala Rayas, Editores. Reproduccin bovina. Divisin Sistema de Universidad Abierta y Educacin a Distancia. Universidad Nacional Autnoma de Mxico 2007. 1ra ed. Mxico, D.F. Senger PL. Pathways to pregnancy and parturition. 2nd ed. Ephrata, PA. Current Conceptions, Inc., 2003. Robert S. Youngquist and Walter R. Threlfall, Editors. Current Therapy in Large Animal Theriogenology. 2nd Edition. Elsevier Health Sciences. USA. 2007.

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