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Ejercicios Cintica Enzimtica Con y sin Inhibicin 1.

Los siguientes datos fueron obtenidos para la hidrlisis de carbobenzoxyglicil- L- triptfano catalizada por la enzima carboxipeptidasa. La reaccin en s es: Carbobenzoxyglicil-L-triptfano+H2O Carbobenzoxyglicina + Triptofano Grafique estos datos usando el mtodo de linealizacin de Lineaweaver-Burk y determine valores para KM y Vmax. La concentracin de la enzima es la misma en todos los experimentos: Concentracin Velocidad de sustrato mM/sec (mM) 2,5 0,024 5,0 0,036 10,0 0,053 15,0 0,060 20,0 0,064

2. En un estudio de cintica enzimtica llevado a cabo con la enzima L-Histidina amoniaco liasa y su sustrato natural, se obtuvieron los siguientes resultados a la temperatura de 37 C: [S] 10-3 10 12,5 16,7 25 50 M V 10-3 58,7 68,3 82 101,5 134,2 mol/l min Calcule, grficamente, la velocidad mxima y la constante de Michaelis de la enzima a esa temperatura. 3. La actividad de la Acetil CoA carboxilasa, medida con tres diferentes concentraciones de enzima y a diferentes concentraciones de sustrato fue la siguiente: Enzima (g de protena) [Acetil CoA] 0,1 0,2 0,5 ( M) Vel (mol/min) 0,05 0,275 0,546 1,373 0,14 0,482 1,001 2,502 0,23 0,580 1,185 2,891 0,32 0,642 1,385 3,463 0,50 0,755 1,494 3,656 0,59 0,766 1,497 3,810 a. Calcular para cada experimento el valor de Km y el valor de Vmax. b. Son los valores de Km y Vmax iguales o diferentes?

4. Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reaccin catalizada por un enzima hipottico son: [S] V Moles/l moles/min 0.25 5x10-2 -3 0.25 5x10 -4 0.25 5x10 -5 0.20 5x10 -6 0.071 5x10 0.0096 5x10-7 a. Cul es la velocidad mxima para esta reaccin? -4 b. Cul es la concentracin de enzima libre para una [S] de 5x10 M? c. Cul es la Km de la enzima? d. Calcular la velocidad inicial para [S]= 1x10-6 y [S]= 1x10-1 5. A partir de los siguientes datos de una reaccin enzimtica, determinar de qu manera est actuando el inhibidor. Determinar la Km para la enzima y la Ki para el complejo enzima-inhibidor. cul es la velocidad mxima? [S] g producto/h g producto/h mM (sin inhibidor) (6mM inhibidor) 2 139 88 3 179 121 4 213 149 10 313 257 15 370 313 6. Se ha conseguido aislar de Salmonella tyfpimurium una enzima que cataliza la reaccin AP, se decidi hacer un estudio estructural y cintico de dicha enzima: [A] mM 1,00 0,55 0,25 0,20 V (mmol P/min) 1,00 0,71 0,50 0,41 V (nmol P/min) con J 0,66 0,41 0,25 0,20 Donde J es un inhibidor de E, cuya influencia como tal se quiere estudiar. [J]=0,25mM. Calcular: a. Km de la enzima estudiada para A, y Vmax para la transformacin AP en presencia de E. b. Qu tipo de inhibidor es J?. Calcular Ki c. Cul sera el efecto sobre la Vmax de la enzima, de un aumento de la concentracin de J? 7. La cintica de una enzima viene determinada como funcin de la concentracin de sustrato en presencia y ausencia del inhibidor I. [S], M*10-5 0,3 0,5 1,0 3,0 9,0 V (mol/min) 10,4 14,5 22,5 33,8 40,5

sin inhibidor V (mol/min) 2,1 2,9 4,5 6,8 8,1 con inhibidor 10-4 M a. Calcular la Km y la Vmax en presencia y ausencia del inhibidor. b. Qu tipo de inhibidor es? Calcular la Ki 8. En un cultivo de bacterias, la velocidad de reaccin de una enzima fue de 20 g/min para una concentracin de sustrato de 3 mM. Si la concentracin de sustrato es igual o superior a 7 mM, la velocidad no supera los 40 g/min. Al aadir un inhibidor competitivo, la velocidad de la reaccin fue de 20 g/min para una concentracin de sustrato de 8 mM. Calculese la Km, la Vmax y la Ki para este enzima, sabiendo que la concentracin de inhibidor aadido es de 6 mM. 9. La aspartato transaminasa cataliza la reaccin: Glutamato + oxalacetato -cetoglutarato + aspartato El fofato de piridoxal (PP) acta como coenzima en el proceso cataltico. Calcular la Km para el complejo apoenzima-coenzima a partir de los siguientes datos obtenidos al variar la concentracin de PP, mientras que las condiciones de glutamato y oxalacetato se mantuvieron constantes Glutamato 0,17 0,27 0,43 0,65 0,73 0,78 0,79 0,81 que desaparece (mg/min) PP aadido 0,30 0,50 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 10,0 (M)

10. La penicilina es hidrolizada y con ello inactivada por la penicilasa, una enzima presente en algunas bacterias resistentes a lapenicilina. La cantidad de penicilina hidrolizada en un minuto en una disolucin de 10 ml que contiene 10-9 g de penicilasa purificada se midi como funcin de la concentracin de penicilina. [Penicilina] Moles hidrolizados/min M 0,1*10-5 0,11*10-9 0,3*10-5 0,25*10-9 -5 0,5*10 0,34*10-9 1*10-5 0,45*10-9 -5 3*10 0,58*10-9 5*10-5 0,61*10-9 sigue la penicilasa una cintica de Michaellis Menten? Si es as, cul es el valor de Km? Cul es el valor de Vmax?

11. El salicilato inhibe la accin cataltica de la glutamato deshidrogenasa. Determinar el tipo de inhibicin mediante el anlisis grfico de los siguientes datos. Suponer que la concentracin de salicilato se mantiene constante y es de 40 mM. Calcular tambin la Km para el sustrato y la Ki (constante de disociacin para el complejo enzima-inhibidor) [S]mM 1,5 2,0 3,0 4,0 8,0 16,0 Mg P/min 0,21 0,25 0,28 0,33 0,44 0,40 (sin salicilato) Mg P/min 0,08 0,10 0,12 0,13 0,16 0,18 (con salicilato)

12. A partir de los siguientes datos de una reaccin enzimtica, determinar el tipo de inhibicin, la Km del sustrato, y la Ki para el complejo enzima-inhibidor [S] 2,0 3,0 4,0 10,0 15,0 mM g P/h (sin inhibidor) 139 179 213 313 370 g P/h (con inhibidor 6 mM) 88 121 149 257 313 13. La hidrlisis de N-glutaril-L-fenilalanina-p-nitroanilida (GPNA) para dar p-nitroanilina y Nglutaril-L-fenilalanina, est catalizada por la enzima a-quimotripsina. En unas determinadas condiciones de pH y temperatura, los datos cinticos obtenidos han sido los siguientes: [GPNA] M 2,50 5,0 10,0 15,0 V mmol/l. 2,11 3,73 5,90 7,10 min

a) Asumiendo una cintica de tipo Michaelis-Menten, calclense grficamente los valores de Vmax y KM.
14. Una enzima cataliza una reaccin con una velocidad mxima de 5 umoles por minuto, siendo su Km para el sustrato de 0,5 mM. Si la ponemos en presencia de una concentracin 500 mM de sustrato, qu cantidad de sustrato se lograr transformar en 10 minutos? 15. Calcular qu velocidad se obtendr en una reaccin enzimtica si la velocidad mxima es igual a 100 y la concentracin de sustrato es igual a: a. 10 Km b. Km/3 16. Una enzima cataliza una reaccin a una velocidad de 35 umoles/min cuando la concentracin de sustrato es 0,01 M. La Km para el sustrato es 2*10-5 M. cul ser la velocidad inicial a las concentraciones de sustrato: a. 3,5*10-3 M b. 4*10-4 M c. 2*10-4 M

d. 2*10-6 M e. 1,2*10-6 17. Calcular la concentracin de un inhibidor competitivo, cuya Ki=10-7 M, necesaria para inhibir en un 80% la velocidad de una reaccin enzimtica, sabiendo que la Km de la enzima es 1,6*10-4 M y que la concentracin de sustrato es de 40 uM 18. Se estudi la actividad de la enzima ureasa, que cataliza la reaccin: CO(NH2)2+H2O CO2+2NH2 en funcin de la concentracin de urea, con los resultados siguientes: Concentracin de urea (mmoles dm-3) 30 60 -1 -1 V inicial (mmoles urea consumidos min mg enzima ) 3,37 12,04 Cules son los valores de Km y Vmx para esta reaccin? 100 150 250 400 5,53 7,42 8,94 10,70

19. Se investig el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una reaccin catalizada enzimticamente sobre un solo sustrato, obtenindose los siguientes resultados

Concentracin de sustrato (mmol L -1) 0

Concentracin del inhibidor (mmol L -1) 0.5 1.0

Velocidad de reaccin (mol L -1 min-1) 0.05 0.10 0.20 0.40 0.50 0.33 0.50 0.67 0.80 0.83 0.20 0.33 0.50 0.67 0.71 0.14 0.25 0.40 0.57 0.63

A) De que manera acta el inhibidor? B) Obtngase los valores para Vmx, y Km.

20. Una enzima se ensayo con una [S] inicial de 2.10-5 M. en 6 min la mitad del sustrato haba reaccionado. Si la Km para el sustrato es 5x10-3 M, calcular la Vmax y la cantidad de producto formado en 10 min de reaccin.