PARA LA IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS

INTRODUCCIN

PRUEBAS

RPIDAS PRUEBAS BIOQUIMICAS

Las pruebas bioqumicas se basan en la determinacin de la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material gentico del cromosoma bacteriano.

Las pruebas bioqumicas tambin evalan: la capacidad de reducir ciertos iones (ferroso a
frrico), la presencia o ausencia de flagelos (prueba de movilidad), la produccin o no de

hemolisinas, el requerimiento o no de algunos factores especiales (protenas sricas), la

produccin o no de algunas toxinas con capacidad virulenta (toxina diftrica, toxina

botulnica, etc).
Importancia mdica

Cuando se han aislado las bacterias causantes de un proceso infeccioso, stas deben ser
identificadas hasta llegar a GENERO Y ESPECIE, para lograrlo se debe evaluar su actividad bioqumica o metablica. Del microorganismo aislado depender el tipo de tratamiento que debe ser administrado al paciente

Catalasa

Citocromooxidasa

 Fundamento:

Detecta la presencia de la enzima catalasa Procedimiento: En un portaobjetos colocar sobre una colonia unas gotas de H202 3 %. Interpretacin Liberacin de burbujas rpida y sostenida indica la produccin de oxgeno molecular = prueba (+)

Fundamento: El sistema citocromooxidasa, se halla en microorganismo aerobios, microaerfilos y anaerobios facultativos. Procedimiento: Hacer una suspensin del microorganismo con solucin fisiolgica (inculo) en un tubo de vidrio, agregar un disco (disco comercial de papel impregnado de tetrametil-para-difenilamina) se agita y antes de los 2 minutos se debe leer. Interpretacin: Un cambio de color del disco a rosado o violeta = prueba (+). Si no hay cambio de color el microorganismo es oxidasa negativo.

AGAR

HIERRO TRIPLE AZCAR

(TSI) AGAR LISINA-HIERRO (LIA) AGAR MOVILIDAD INDOL ORNITINA (MIO) AGAR CITRATO DE SIMMONS AGAR UREA AGAR O/F

Composicin
Extracto de carne, extracto de levadura, peptona, proteasa, lactosa, dextrosa, cloruro de sodio, tiosulfato de sodio, agar

Indicador
Rojo de fenol Acido: amarillo Alcalino: rojo Medio no inoculado: naranja-rojizo (ph- 7.4)

Fundamento
Determina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono especfico incorporado en un medio de crecimiento bsico de posible cido sulfhdrico.

Consistencia Inoculacin

del medio

solido en pico de flauta Picadura y estra en pico de flauta

Condiciones

de incubacin

Tiempo: 18 -24 horas Temperatura: 35- 37 C

Posibles
1.K/A

lecturas

pico rojo-alcalino, fondo amarillo-cido 2.A/A pico amarillo-cido, fondo amarillo-cido 3.K/K pico rojo.alcalino, fondo rojo.alcalino Pueden producir solo gas y gas con produccin de H2S

Interpretacin
1.(K/K)

No fermentacion de hidratos de carbono 2.(K/A) Glucosa fermentada, lactosa no fermentada 3.(K/A + H2S) Glucosa fermentada, lactosa no fermentada produccin de cido sulfhdrico. 4.(A/A) Glucosa y lactosa fermentadas

 Composicin
Peptona, extracto de carne, piridoxal, L-lisina, citrato de amonio, tiosulfato de sodio, glucosa, agua destilada agar.

Indicador
Prpura de bromocresol cido: amarillo Alcalino: color prpura Medio no inoculado: prpura intenso (pH= 6)

Fundamento
Mide la capacidad enzimtica de un organismo para descarboxilar la lisina para formar una amina, con la siguiente alcalinilidad

 Consistencia
Slido en pico de flauta

Inoculacin
Por picadura, estria y picadura

Condiciones
Temperatura: 35-37C
Tiempo: 18-24 horas

de inoculacin

Posibles
1.

lecturas

K/K - pico prpuraalcalino , fondo prpura-alcalino

2.

K/A - pico prpura-alcalino, fondo amarillo-cido

Pueden producir gas y cido sulfhdrico

Interpretacin
1.

(K/K) desaminacin oxidativa/descaboxilacin

2.
3.

(K/A) no desaminacin
Produccin de H2S- ennegrecimiento del medio

4.

Produccin de gas burbujas o medio desplazado

 Composicin
Extracto de levadura, peptona, L-ornitina.dextrosa,agar agua

Indicador
Prpura de bromocresol cido: amarillo Alcalino:prpura Medio no inoculado: prpura intenso (ph=6)

Fundamento
El medio MIO se utiliza para la identificacin de enterobacterias sobre la base de movilidad, la produccin de ornitina y de indol DESCARBOXILACIN DE ORNITINA Mide la capacidad enzimtica de un organismo para descarboxilar la ornitina para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad. PRUEBA DE INDOL El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacteria para formar tres metabolitos prinipales: indol, escatol e indolactico. MOVILIDAD Determina si un organismo es mvil o inmvl.las bacterias tienen movilidadpor medio de sus flagelos que se encuentran principalmente entre los bacilos

 Consistencia
Semislido en forma vertical

Inoculacin
Por picadura en forma vertical

Condiciones
Tiempo: 24-48 horas

de inoculacin

Temperatura: 35-37 C

Interpretacin
Ornitina descarboxilasa Positivo:color prpura del medio Negativo: color amarillo en el fondo del tubo Movilidad:

Positiva si existe turbuedad en el medio

Negativa: crecimiento bacteriano acentuado siguendo la linea de siembra

Prueba del indol-Reactivo de Kovacs

Positivo: anillo rojo en la superficie del medio

Negativo: no se produce color o color naranja en la superficie del medio

 Composicin
Citrato de sodio, glucosa, extracto de levadura, monoclorhidrato de cistena, citrato frrico de amonio, cloruro de sodio tiosulfato de sodio rojo de fenol agar agua destilada

Indicador
Azul de bromotimol cido: amarillo Alcalino: azul de Prusia intenso

Medio sin inocular: verde (pH=6.9)

Fundamento
Determina la capacidad de un microorganismo de emplearel citrato como nica fuente de carbono en ausencia de fermentacin de azcares o de produccin de cido lctico

 Consistencia
Slido en pico de flauta

Inoculacin
Estra en pico

Condiciones
Tiempo: 24-48 horas
Temperatura: 35C

de inoculacin

Interpretacin
Prueba positiva: crecimiento con un color azul intenso en pico de flauta

Prueba negativa: no se observa crecimiento ni cambio de color

 Composicin

Peptona, cloruro de sodio, fosfato monopotsico, glucosa, urea, agar, agua destilada

Indicador
Rojo de fenol cido: amarillo Alcalino: Rojo rosado Medio no inoculado: amarillo (pH=8.4)

Fundamento
Determina la capacidad de un microorganismo de desdoblar la urea formando dos molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio

 Consistencia
Slodo en pico de flauta

Inoculacin
Estra en pico de flauta

Condiciones
Tiempo: 18-24 horas
Temperatura: 35-37C

de inoculacin

Interpretacin
Positivo: rojo rosado intenso en pico de flauta Negativo: amarillo

 Composicin
Peptona, cloruro de sodio, fosfato de potasio, hidratos de carbono (glucosa lactosa, sacarosa, maltosa), agar agua destilada

Indicador Azul

de bromotimol

cido: amarillo
Alcalino: azul Prusia intenso

Medio no inoculado: verde (pH= 7.1)

Fundamento
Determina el metabolismos oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono

 Consistencia
Semislido

Inoculacin
Picadura

Condiciones
Tiempo: 18-24 horas

de inoculacin

Temperatura: 35-37 C

Interpretacin
Parte superior amarilla: oxidativo Todo el medio amarillo: fermentativo Sin cambio en el medio: no fermentador no oxidativo