Processo Microbiano Para a Produo de Enzimas

Professor: Olrio Ap. de Souza Ribeiro

abril 15

2012
Aluna: Nicole Ap. Amorim de Oliveira Cd. 931124

Processos microbianos Para produo de Enzimas

A produo de enzimas nativas ou recombinantes por meio microbiano um processo divido em vrias etapas: o tratamento da matria prima, o preparo de meios de propagao e produo, a esterilizao e a transformao do substrato em produto por via bioqumica, seguida de processos de separao e purificao do produto. Na figura abaixo podemos identificar e compreender melhor este processo

Esterilizao A maioria dos processos de produo de enzimas d-se em culturas puras. Desta forma, as condies asspticas no bioprocesso so imprescindveis para que no ocorram contaminaes. Os meios lquidos so esterilizados no prprio reator, j os substratos slidos so mantidos a altas temperaturas por um perodo apropriado. A esterilizao com vapor saturado sob presso, realizada em conjunto ou separadamente, em batelada ou por processo contnuo; a maneira mais utilizada para meios de cultura e equipamentos, (BAILEY e OLLIS, 1986; RAJU e COONEY,1993;SCHMIDELL et alii, 2001). comum a esterilizao de meios de cultura de forma descontnua em conjunto com o biorreator, o vapor saturado passa sob presso atravs de serpentinas ou camisas (aquecimento indireto), ou o vapor saturado introduzido pelo difusor do vaso, sob agitao mnima (aquecimento direto). Neste ltimo caso, deve-se levar em considerao a diluio do

meio de cultura causada pela condensao do vapor ao entrar em contato com a superfcie mais fria do meio. A temperatura usual de esterilizao de 121C. No processo descontnuo, o tempo total de esterilizao alto, o que pode ocasionar a decomposio dos nutrientes termo-sensveis, como as vitaminas, ou provocar reaes indesejveis entre os constituintes do meio, como reaes entre aminocidos e acares (reao de Maillard). Este processo de esterilizao est sendo substitudo pela esterilizao contnua, pois neste caso mais fcil matenter a integridade cos componente do meio uma vez que o aquecimento e o arrefecimento so praticamente instantneos. Em processos aerbicos, o ar deve ser esterilizado antes de ser fornecido cultura. Esta esterilizao normalmente efetuada por filtrao com l de vidro, material sintetizado ou membranas apropriadas Fermentao Os processos microbianos de produo de enzimas ocorrem basicamente em cultivos submersos e cultivos no estado slido, sendo os primeiros os mais utilizados industrialmente. Cultivo submerso So aqueles em que a clula produtora se desenvolve no seio do meio de cultivo, sob agitao. Para fermentaes aerbicas, o oxignio necessrio populao o cultivo suprido por borbulhamento de ar no lquido por meio de um compressor. As fermentaes so realizadas em biorreatores aerados e agitados mecanicamente(figura 5.2), em geral com volumes entre 20 e 200m, podendo chegar a 1000m.O pH, temperatura, consumo de oxignio e formao de dixido de carbono, so medidos e rigidamente controlados

Os processos submersos tem vrias vantagens, tais como: Facilidade de controle de variveis fsico-qumicas do processo. Maior eficincia de absoro de nutrientes e excreo de metablitos pela clula, levando a menores tempos de processo e conseqentemente, a ganhos em produtividade. Dentre as desvantagens podem ser citados: Elevados custos com aerao e agitao, especialmente quando do uso de meios reacionais com alta viscosidade e reologia complexa. Formao de espuma.

Os bioprocessos submersos podem ser operados de trs modos: A batelada simples, uma suspenso celular adicionada ao meio de cultivo e o processo ocorre sem adio ou retirada de meio reacional, hoje em dia pouco empregada. Caracteriza-se por alteraes nas condies ambientais a dutante todo o processo: as concentraes de nutrientes diminuem e de clulas, produtos e subprodutos aumentam. O principal problema desta forma de operar processos microbianos decorrente de fenmenos de inibio pelo substrato, produto ou outros metablitos. Para tentar sanar estes problemas de inibio/represso, outras formas de conduo podem ser utilizadas, como a batelada alimentada e seus similares, que permitem a manuteno da concentrao dessas substncias em nveis sub inibitrios/sub-repressores, com implicaes diretas no desempenho da clula (NIELSEN e VILLADSEN, 1993; SCHMIDELL et alii, 2001). A batelada alimentada um modo de operao em que um ou mais nutrientes necessrios ao crescimento celular e/ou formao de produto so adicionados ao biorreator de forma intermitente ou continua, sem que ocorra retirada de material durante a operao. A flexibilidade de operao oferecida por esta forma de fermentao adequada a processos microbianos em que o crescimento celular e/ou formao de produtos so significativamente sensveis concentrao do substrato limitante . adequada produo de vrias enzimas extracelulares, uma vez que a formao destas biomolculas muitas vezes sujeita represso pelo substrato. Embora a cultura em batelada simples tenha sido inicialmente utilizada em muitos bioprocessos, a prtica industrial mostra que o cultivo em batelada alimentada tem efeito favorvel no acmulo de muitas enzimas extracelulares, sendo este processo hoje em dia muito utilizado na indstria de produo de enzimas tais como amilases, celulases e proteases (EUROPEANCOMISSION,2002). A cultura contnua, na qual a alimentao de nutrientes e a retirada de produtos efetuada continuamente durante o processo fermentativo, empregada em algumas situaes, como para a produo de glicose isomerase por Bacillus. A principal vantagem da cultura contnua a possibilidade de se operar o sistema por extensos perodos de tempo, resultando em aumento de produtividade. Alm disso, o agente biolgico converte substrato em condies estacionrias, que podem ser determinadas previamente para o seu melhor desempenho, a inexistncia de tempos improdutivos, levando o fermentador a permanecer muito mais tempo em servio; as operaes que antecedem e sucedem o processo podem ser realizadas continuamente; possibilidade de instrumentao e controle automtico, reduzindo os gastos com mo-de-obra; e maior uniformidade do produto, so as principais vantagens desse tipo de operao. Os principais problemas dessa forma de conduo so a baixa concentrao da enzima em comparao batelada alimentada e o alto risco de contaminao e de degenerao da linhagem microbiana (EUROPEAN COMISSION, 2002). Cultivo no estado slido A fermentao submersa hoje a tecnologia mais empregada para a produo de enzimas, existe grande interesse em utilizar a fermentao no estado slido com esta finalidade. A fermentao no estado slido um processo em que o crescimento microbiano e a formao de produto ocorrem na superfcie de substratos slidos na ausncia de gua livre. distinta da fermentao submersa, em que os substratos e outros nutrientes encontram-se na forma solvel. Os substratos utilizados so normalmente produtos agrcolas, como arroz, trigo, paino, alm de substratos no convencionais, como os resduos agroindustriais e florestais. A operao da fermentao no estado slido pode ser realizada sem agitao mecnica, com agitao ocasional ou contnua, ou em colunas recheadas com circulao de lquido. Vantagens Simplicidade dos meios de cultivo (o substrato slido pode requerer somente adio de gua, embora outros nutrientes possam ser adicionados). Ausncia de requerimentos de mquinas e equipamentos sofisticados. Possibilidade de uso de biorreatores com dimenses menores pelo fato do substrato estar concentrado.

Reduzido consumo de energia. Baixo grau de umidade, reduzindo os problemas de contaminao. Condies de crescimento do microrganismo semelhantes s encontradas em seu ambiente natural. Maiores concentraes de enzima em relao s fermentaes submersas. Estabilidade da enzima excretada e baixo nvel de represso catablica. Ausncia de formao de espuma. Possibilidade de extrao imediata do produto atravs da adio direta de solventes ou por filtrao do meio fermentado. Pequenas quantidades de guas residuais. Desvantagens: Menor acessibilidade ao substrato. Problemas de transferncia de massa (oxignio e nutrientes), calor e quantidade de movimento. Dificuldades de controle de variveis fsico-qumicas, tais como pH, temperatura, oxignio e grau de mistura. Dificuldades no aumento de escala. Diversas enzimas de importncia industrial, como proteases, amilases, glucoamilase, celulases, xilanases e pectinases so produzidas por fermentao no estado slido.

Quase todas as enzimas conhecidas e produzidas por outros processos poderiam, em teoria, ser obtidas por fermentao no estado slido. No entanto, esta tecnologia atualmente muito mais desenvolvida no mundo oriental. Controle do bioprocesso As enzimas podem sofrer desnaturao quando submetidas a determinadas condies ambientais, que variam para cada enzima. Dessa forma pH e temperatura, devem ser rigidamente controlados, de forma a garantir a manuteno das condies timas de cultivo do microrganismo produtor e a atividade biolgica da enzima. Os processos aerados podem ser conduzidos com aerao natural ou forada. Naquele o oxignio provm do ar ambiente. Grande parte dos processos conduzidos no estado slido, descritos anteriormente, aerado de forma natural. Neste,os processos microbianos com aerao forada em culturas submersas, o ar atmosfrico esterilizado borbulhado no seio do meio, onde se dissolve parte do oxignio que utilizado pelo agente microbiano. O fornecimento de oxignio a uma cultura em desenvolvimento constitui-se muitas vezes na limitao da tecnologia de produo.