Componente curricular: Bioqumica

Metabolismo, enzimas e cintica enzimtica

Metabolismo (do grego significa "mudana", troca)

Conjunto de transformaes que as substncias qumicas sofrem no interior dos organismos vivos; "Metabolismo celular" - reaes qumicas que ocorrem nas clulas; Reaes responsveis pelos processos de sntese e degradao de nutrientes na clula, constituindo a base da vida (crescimento e reproduo). Vias metablicas organizao das reaes qumicas, as quais interagem para transformar diferentes reagentes em diferentes produtos; Dividido em anabolismo e catabolismo.

Catabolismo
Reaes catablicas, ou reaes de decomposio/degradao, so reaes qumicas que produzem (liberam) grandes quantidades de energia livre (sob a forma de ATP) a partir da decomposio ou degradao de molculas mais complexas (matria orgnica); Reaes que providenciam energia e componentes necessrios s reaes anablicas. Reaes que incluem a degradao e oxidao de molculas encontradas em alimentos, bem como a captao de energia luminosa para a transformao em energia qumica.

Anabolismo
Reaes anablicas, ou reaes de sntese, so reaes qumicas que produzem nova matria orgnica nos seres vivos. Sintetizam-se novos compostos (molculas mais complexas) a partir de molculas simples (com consumo de ATP); Conjunto de reaes metablicas de sntese que produzem novos compostos mais complexos a partir de molculas mais simples, com consumo de energia (adenosina trifosfato - ATP); Ex. Hipertrofia muscular.

Anabolismo
Passos: Sntese de precursores: aminocidos, monossacardeos, cidos graxos e nucleotdeos; Ativao dessem compostos com gasto de ATP; Formao de molculas complexas: protenas, polissacardeos, lipdios e cidos nuclicos.

Anabolismo
Organismos autotrficos: sntese de molculas complexas (polissacardeos e protenas) a partir de molculas simples (CO2 e H2O); Organismos heterotrficos: fontes alimentares que providenciam molculas simples (monossacardeos e aminocidos) para a produo de molculas complexas (polissacardeos e protenas).

Enzimas
Catalizam diferentes reaes das vias metablicas. Facilitam ou permitem reaes ao acopl-las em situaes mais favorveis do que na ausncia dessas enzimas, nas quais tais reaes possivelmente no ocorreriam. Regulam as vias metablicas em resposta a mudanas no ambiente ou sinalizao celular.

Catabolismo > Anabolismo = perda de peso jejum ou doena Catabolismo < Anabolismo = ganho de peso Catabolismo = Anabolismo = homeostase ou equilbrio dinmico

Enzimas

Definio: Catalisadores biolgicos; Longas cadeias de pequenas molculas chamadas aminocidos. Funo: Viabilizar a atividade das clulas, quebrando molculas ou juntando-as para formar novos compostos.

Enzimas

A atividade cataltica de enzimas tem sido utilizada pelo homem h milhares de anos Fermentao do suco de uva para obteno do vinho; Fabricao de queijo; Fabricao de po.

No entanto, estas eram apenas aplicaes prticas, uma vez que o conhecimento do modo de ao dos catalisadores biolgicos s recentemente foi elucidado.

Caractersticas enzimticas
Apresentam alto grau de especificidade; So produtos naturais biolgicos;

Reaes seguras;
So altamente eficientes, acelerando a velocidade das reaes (108 a 1011 + rpida);

So econmicas, reduzindo a energia de ativao;

No so txicas; Condies favorveis de pH, temperatura, polaridade do solvente e fora inica.

Propriedade gerais

ENZIMAS Protenas

RNA

Propriedade gerais

RNA

1989 - Canadense Sidney Altman e o norte-americano Thomas Cech: RNA Prmio Nobel de Qumica Atividade Cataltica

Como seria possvel o incio da vida, uma vez que as molculas de DNA s podem ser reproduzidas e decifradas com a ajuda de protenas? A vida comeou com uma molcula de RNA

Esquema geral da sntese protica

Esquema geral da sntese protica

Se uma enzima quebrada em seus aa constituintes, a sua atividade

cataltica sempre destruda. Assim, a estrutura protica primria, secundria, terciria e quaternria das enzimas so essenciais para sua atividade cataltica.

Nomenclatura e classificao das enzimas

Sculo XIX - poucas enzimas identificadas Adio do sufixo ASE ao nome do substrato: * gorduras (lipo - grego) LIPASE * amido (amylon - grego) AMILASE Nomes arbitrrios: * Tripsina e pepsina proteases

Nomenclatura e classificao das enzimas

Sculo XX -

quantidade de enzimas descritas

Nomenclatura existente se tornou ineficaz

1955 - IUB - Unio Internacional de Bioqumica adotou um novo sistema de nomenclatura e classificao mais complexo sem ambiguidades baseado no mecanismo de reao Ex: Oxirredutases, Transferases, Hidrolases.

Outras formas de classificao

atuam no interior da clula Enzimas intracelulares sintetizam o material celular realizam reaes catablicas que suprem as necessidades energticas da clula.

atuam fora da clula

Enzimas extracelulares executando as alteraes necessrias penetrao dos nutrientes para o interior das clulas.

Outras formas de classificao

Agem dentro das molculas Endoenzimas Ex: endoamilases, que hidrolisam ligaes glicosdicas ao acaso ao longo das cadeias de amilose

Agem nas extermidades das molculas Ex: exoamilases, que hidrolisam, sucessivamente, ligaes glicosdicas a partir da extremidade no redutora das mesmas.

Exoenzimas

Outras formas de classificao

Enzimas habituais ou constitutivas

As clulas sempre as sintetizam

Enzimas indutivas

As clulas s as sintetizam quando esto na presena do substrato da enzima Enzimas que tm a mesma funo, ou seja, catalisam uma mesma reao, porm apresentam estruturas diferentes

Isoenzimas

Diferenas entre enzimas e catalisadores qumicos

Velocidade de reao mais rpida:

106 a 1012x > que as no catalisadas;

e so varias ordens de magnitude > do que as reaes catalisadas quimicamente.

Diferenas entre enzimas e catalisadores qumicos

Maior especificidade da reao: Grau de especificidade imensamente > em relao a identidade dos seus substratos (S) e dos seus produtos (P); Reaes enzimticas raramente produzem subprodutos; Estereoespecificidade: Agem em grupos funcionais especficos catalisando reaes de forma estereoepecfica.

Diferenas entre enzimas e catalisadores qumicos

Condies reacionais mais brandas:

Ph Temperatura

Comparao entre enzimas e catalisadores qumicos

Comparao entre enzimas e catalisadores qumicos

Comparao entre enzimas e catalisadores qumicos

Comparao entre enzimas e catalisadores qumicos

Mecanismo de ao
No so consumidas na reao;

Embora a enzima participe da sequncia da reao, ela no sofre nenhuma transformao.

E+S

E+P

Mecanismo de ao

Atuam em pequenas concentraes decompe 5 000 000 de molculas de H2O2 pH = 6,8 em 1 min

1 molcula de Catalase

H2O2

Catalase

H2O

O2

Modelo chave-fechadura

Emil Fischer (1894): alto grau de especificidade das enzimas originou Chave-Fechadura , que considera que a enzima possui sitio ativo complementar ao substrato.

Modelo do ajuste induzido

Koshland (1958): Ajuste Induzido - enzima e substrato sofrem conformao para o ajuste. O substrato distorcido para conformao exata do estado de transio.

Conceitos

Teoria da coliso

As reaes qumicas acontecem quando ligaes so quebradas ou formadas. Para isto tomos, ons e molculas devem colidir. Todos os tomos, ons e molculas esto em constante movimento e portanto colidindo constantemente. A energia transferida pelas partculas na coliso pode desorganizar suas estruturas eletrnicas o suficiente para que as ligaes qumicas sejam quebradas ou novas ligaes se formem.

Conceitos

Energia de ativao (EA): Quantidade de energia requerida para romper a configurao eletrnica estvel de qualquer molcula especfica para que os eltrons possam ser reorganizados.

Diferena entre a energia livre de S e P G

Energia de ativao sem enzima Energia de ativao com enzima

Caminho da Reao

Conceitos

G:

Diferena de energia entre produtos e reagentes; No depende da energia de ativao.

Conceitos

Enzima atua diminuindo a energia de ativao; No altera o equilbrio, nem o G da reao.

Conceitos

Taxa de reao: Frequncia de colises contendo energia suficiente para que a reao acontea.

taxa de reao:

de T = o calor a frequncia das colises e o n de molculas que atingem a EA. Reagentes esto + concentrados = Distncia entre as molculas menor.

Mecanismos de ao

Enzimas atuam de diversas formas: Baixando a EA: atravs da criao de um ambiente no qual o estado de transio estabilizado (ex. distorcendo a forma da molcula do S). Providenciando uma via alternativa: (ex. reagindo com o S formando um complexo ES, de existncia impossvel sem a presena da E). Reduzindo a variao da entropia (estado de desorganizao da molcula) da reao: orienta o S de forma correta para facilitar a reao. Na ausncia de E, as molculas colidem em todas as direes possveis de forma aleatria.

Fatores que influenciam a atividade enzimtica

pH;

Temperatura;
Concentrao das enzimas; Concentrao dos substratos.

pH
Variaes no estado de ionizao dos componentes do sistema medida que o pH varia. A ionizao de aa pode provocar modificaes na conformao da enzima; O substrato pode ser afetado; Alteraes no pH podem provocar desnaturao e consequente inativao da enzima.

pH
Pepsina: enzima produzida no estmago que atua sobre protenas, degradando-as em molculas menores. pH timo = 1,5 (meio cido); Tripsina: enzima produzida no pncreas e lanada no duodeno, degradando protenas que no foram digeridas no estmago. pH timo = 7,7 (meio bsico).

Temperatura
Com temperatura dois efeitos ocorrem: A taxa de reao aumenta, como se observa na maioria das reaes qumicas; A estabilidade da protena decresce devido desativao trmica; A partir de certa temperatura tima (especfica de cada enzima), ocorre desnaturao protica, o que deixa a enzima inativa.

Concentrao da enzima

A velocidade mxima da reao alcanada em funo da quantidade de enzima disponvel (existindo substrato em excesso); Efeito da [ ] da enzima sobre a velocidade inicial (V0) com substrato em excesso:

Concentrao do substrato

Inicialmente a velocidade da reao diretamente proporcional [S].

Concentrao do substrato

A quantidade de reagente o suficiente grande para saturar todos os stios catalticos enzimas.

Inibio enzimtica

Inibidores

Substncias que reduzem a atividade de uma enzima de forma a influenciar a ligao do substrato.

Grande parte do arsenal farmacutico (por ex. tratamento da AIDS feito com drogas que inibem a atividade de certas enzimas virais.

Inibio enzimtica - classificao

Irreversvel Competitiva Reversvel No Competitiva

Inibio Irreversvel

O inibidor liga-se to fortemente (ligao covalente) enzima que a dissociao muito lenta. Podem destruir grupos funcionais que so essenciais para a atividade enzimtica. A enzima no retoma a sua atividade normal. Alguns inibidores irreversveis so venenos; Ex.: Inseticidas organofosforados que inibem a acetilcolinesterase (enzima importante na transmisso dos impulsos nervosos). Essa enzima hidrolisa a acetilcolina do crebro, de acordo com o esquema a seguir:

Inibio Irreversvel

Inibio da enzima ciclo-oxigenase pelo acetilsalicilato

Ciclo-oxigenases cido araquidnico Prostaglandinas

Processos fisiolgicos, sensao de dor, processo inflamatrio

Inibio Reversvel - Competitiva

Uma substncia que compete diretamente com o substrato pelo sitio de ligao de uma enzima. Inibidor normalmente semelhante ao substrato, de modo que se liga especificamente ao sitio ativo, mas difere do substrato por no poder reagir com ele. O inibidor liga-se enzima formando o complexo EI cataliticamente inativo.

Inibio Reversvel No competitiva

O inibidor no competitivo pode ser uma molcula que no se assemelha com o substrato, mas apresenta uma grande afinidade com a enzima. Esta ligao pode distorcer a enzima tornando o processo cataltico ineficiente.

Regulao da atividade enzimtica

Um organismo deve poder regular as atividades catalticas de suas enzimas para que ele possa coordenar seus processos metablicos, responder s mudanas no meio, crescer e diferenciar-se, tudo de maneira ordenada. H duas maneiras pelas quais isso pode ocorrer: Controle da disponibilidade da enzima. Controle da atividade da enzima.

Regulao da atividade enzimtica

Controle da disponibilidade da enzima

A quantidade de uma enzima em uma clula depende velocidade de sntese velocidade de degradao.

Cada uma dessas velocidades diretamente controlada pela clula e esta sujeita a mudanas drsticas em perodos que vo de minutos (em bactrias) at horas (em organismos superiores).

Regulao da atividade enzimtica

Controle da atividade da enzima

A atividade pode ser regulada por meio de alteraes estruturais que influenciem a afinidade da ligao do substrato enzima.
A afinidade de ligao do S a uma E pode variar tambm com a ligao de pequenas molculas, chamadas efetores alostricos, que podem tanto aumentar como diminuir a atividade. Um modelo muito comum de regulao alostrica a inibio por "feed-back.

Regulao da atividade enzimtica

Algumas enzimas podem ter suas atividades reguladas, atuando assim como moduladoras do metabolismo celular. Esta modulao essencial na coordenao dos inmeros processos metablicos pela clula.
Substrato inicial A Enzima a1

B
Enzima b

C Enzima c

D
Enzima d

E Produto final

Mecanismos de controle
Induo: A presena do substrato A induz a sntese da enzima a

Regulao da atividade enzimtica

Algumas enzimas podem ter suas atividades reguladas, atuando assim como moduladoras do metabolismo celular. Esta modulao essencial na coordenao dos inmeros processos metablicos pela clula.
Substrato inicial A Enzima a1 B Enzima b C Enzima c D Enzima d Produto final E

Mecanismos de controle
Retroinibio: O produto final E, inibe a ao das enzimas a

Regulao da atividade enzimtica

Algumas enzimas podem ter suas atividades reguladas, atuando assim como moduladoras do metabolismo celular. Esta modulao essencial na coordenao dos inmeros processos metablicos pela clula.
Substrato inicial A Enzima a1 B Enzima b C Enzima c D Enzima d Produto final E

Mecanismos de controle
Represso catablica: Caso haja um caminho mais conveniente, a sntese de todas as enzimas reprimida

Regulao da atividade enzimtica

Algumas enzimas podem ter suas atividades reguladas, atuando assim como moduladoras do metabolismo celular. Esta modulao essencial na coordenao dos inmeros processos metablicos pela clula.
Substrato inicial A Enzima a1 Enzima a2 Enzima a3 B Enzima b C Enzima c D Enzima d Produto final E

Mecanismos de controle
Cada isoenzima pode ser regulada independentemente Controle fino do metabolismo

Aplicaes

Alimentos Raes animais Papel e celulose

Couro
Txtil

Alimentos

Indstria de azeite de oliva: - Aplicao de polygalacturonase e pectinesterase na melhoria de aspectos organolpticos e estabilidade a longo prazo.

Panificao: - Melhoria de cor, sabor e estrutural atravs de preparado enzimtico que contm alfa-amilase fngicas. Atua sobre a farinha de trigo, acelerando o processo de fermentao devido a uma maior formao de acares para o fermento.

Raes animais

Utilizao de enzimas nas raes para leites durante o perodo de lactao:

- Emprego de Xilanase, Beta-glucanase e Alpha-amylase com o objetivo de digesto de amido e, em decorrncia disso, ganho de peso e abate precoce.

Indstria de papel e celulose

Remoo de depsitos em mquinas de papel: - Substituio de lcalis e cidos fortes por enzimas com o objetivo de assegurar a integridade fsica dos funcionrios e cumprir leis ambientais.

Indstria de couro

Uma das primeiras partes do processo de transformao de uma pele em couro a eliminao dos plos que ainda venham agarrados. O processo usado at agora envolvia sulfureto de sdio, um qumico com um cheiro to intenso que impossvel passar por uma fbrica de curtumes sem perceb-la. Em alternativa, foi sugerido indstria que passe a usar enzimas o mau cheiro desaparece e a carga poluente dos efluentes eliminada.

Indstria txtil

Usa-se a amilase bacteriana (Bacillus subtilis e Bacillus lichenformis) estvel ao calor para eliminar a goma dos produtos txteis, substituindo os cidos e lcalis na hidrlise do amido.

Outras aplicaes

Indstria de Cosmticos Produtos de Limpeza Inativao Enzimtica (frmacos)

Consideraes finais

Ampla aplicabilidade da atividade enzimtica; Vantagens frente aos catalisadores qumicos;

Importncia de fatores externos;

Necessidade de maiores estudos para viabilizar o uso de diversas enzimas.

Exerccios
1.

As protenas so compostos:

a) formados por carboidratos e lipdios unidos por pontes de hidrognio. b) de tamanho muito pequeno (micromolculas) e que ocorrem em baixa concentrao dentro da clula. c) que no fazem parte da constituio qumica dos cromossomos. d) formados por aminocidos unidos por ligaes peptdicas. e) responsveis pela transmisso da informao gentica.

Exerccios
2.

Podemos considerar as enzimas como:

a) carboidratos que tm a funo de regular o nvel de glicose (acar) no sangue dos animais superiores. b) protenas com a funo de catalisar reaes qumicas nos seres vivos. c) protenas com funo estrutural que entram na composio da parede celular dos vegetais. d) lipdios que tm a funo de fornecer energia para as reaes celulares. e) mucopolissacardeos que tm a funo estrutural nos exoesqueletos dos artrpodes.

Exerccios
3.

A respeito das enzimas, podem-se fazer todas as afirmaes a seguir, exceto:

a) so compostos proticos. b) agem sobre substncias especificas denominadas substratos. c) so insensveis s mudanas de temperatura.

d) so produzidas por clulas.

e) so catalisadores biolgicos.

Exerccios
4.

Considerando a definio de enzimas, observe as afirmativas e assinale a alternativa correta. I. So catalisadores orgnicos, de natureza protica, sensveis s variaes de temperatura. II. So substncias qumicas, de natureza lipdica, sendo consumidas durante o processo qumico. III. Apresentam uma regio chamada rea ativa ou stio ativo, o qual se encaixa na molcula do substrato, modelo "chave - fechadura".

a) Apenas a afirmativa I correta. b) Apenas as afirmativas I e III so corretas. c) Apenas as afirmativas II e III so corretas. d) Todas as afirmativas so corretas. e) Nenhuma afirmativa correta.

Exerccios
5.

As enzimas, biocatalisadores que atuam acelerando as reaes qumicas, reconhecem seus substratos atravs da:

a) temperatura do meio. b) forma tridimensional das molculas. c) energia de ativao.

d) concentrao de minerais.
e) reversibilidade da reao.

Exerccios
6.

Em relao s enzimas, podemos afirmar:

Quando a temperatura e a concentrao da enzima so constantes, e aumenta-se gradativamente a concentrao do substrato, observa-se um aumento da velocidade da reao at o mximo, independente do pH; Um aumento da concentrao do substrato causa uma diminuio da velocidade da reao, pois o substrato passa a inibir a ao da enzima; O aumento da temperatura provoca um aumento na velocidade de reao enzimtica at uma temperatura crtica, quando ocorre uma queda na atividade da enzima em consequncia de sua desnaturao; A atividade de uma enzima inibida irreversivelmente por um mecanismo chamado de inibio competitiva, na qual o inibidor tem a forma semelhante ao substrato.

a)
b) c)

d)

Exerccios
As reaes de sntese e degradao de biomolculas, que compem o metabolismo celular, so catalisadas por um grupo de molculas denominadas enzimas. Esses importantes catalisadores biolgicos podem possuir algumas das seguintes caractersticas: I. Enzimas so a maior e mais especializada classe de lipdios; II. Enzimas possuem grande especificidade para seus substratos; III. Enzimas aceleram as reaes qumicas, sem serem modificadas durante o processo; IV. Substratos so substncias sobre as quais as enzimas agem, convertendo-os em um ou mais produtos. Quais esto corretas?
7.

Exerccios
8.

a) b)

c)
d) e)

Para inibir a ao de uma enzima, pode-se fornecer clula uma substncia que ocupe o stio ativo dessa enzima. Para isso, essa substncia deve: Estar na mesma concentrao da enzima. Ter a mesma estrutura espacial do substrato da enzima. Recobrir toda a molcula da enzima. Ter a mesma funo biolgica do substrato da enzima. Promover a desnaturao dessa enzima.