Anais do 2 Congresso Brasileiro de Extenso Universitria Belo Horizonte 12 a 15 de setembro de 2004

Controle de Qualidade Microbiolgico de Produtos Farmacuticos, Cosmticos e Fitoterpicos Produzidos na Zona da Mata, MG rea Temtica de Desenvolvimento Regional Resumo No processo de fabricao de medicamentos, cosmticos e fitoterpicos, constitui exigncia da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) a garantia da qualidade de produtos para sua segurana e eficcia. Envolvendo aes neste sentido, implantao das normas de boas prticas de fabricao (BPF) e controle de qualidade de produtos so requeridos para manuteno da integridade do produto e proteo do usurio. Neste projeto, iniciado em 1999, com gerenciamento financeiro e administrativo realizado pela Fundao de Desenvolvimento Regional, foram realizados consultorias para implantao das normas de BPF e do laboratrio de controle de qualidade e ensaios de avaliao da qualidade microbiana e eficcia de produtos. A prestao de servios teve como pblico-alvo as indstrias farmacuticas, cosmticas e fitoterpicas e farmcias de manipulao da regio da Zona da Mata, sendo atendidas 25 empresas. Foram analisadas 240 amostras, segundo mtodos descritos na Farmacopia Americana (2003). Dentre as amostras analisadas, 7,7% foram reprovadas por presena de microrganismos acima do limite mximo e patgenos. Os dados obtidos foram importantes no estabelecimento de medidas corretivas e preventivas do processo de fabricao, treinamento de funcionrios e constante melhoria e desenvolvimento das empresas. Para a instituio, o projeto possibilitou o treinamento de alunos e aquisio de materiais e equipamentos. Autoras Professora Doutora Clia Hitomi Yamamoto, UFJF Professora Titular Terezinha de Jesus Andreoli Pinto, USP Farmacutica Vaneida Maria Meurer, UFJF Aluna de graduao Ana Maria de Carvalho, UFJF Bolsista Patrcia Rezende, UFJF Instituio Universidade Federal de Juiz de Fora - UFJF e Universidade de So Paulo - USP Palavras-chave: controle de qualidade; microbiolgico; boas prticas de fabricao Introduo e objetivo A evoluo tecnolgica no desenvolvimento e produo de medicamentos, cosmticos e fitoterpicos exige o cumprimento de diretrizes regulamentadas para a evitar e prevenir os riscos na qualidade e segurana dos produtos. A garantia da qualidade um importante aspecto a ser considerado desde o projeto at a liberao do produto ao consumidor. A qualidade microbiolgica de produtos constitui um dos atributos essenciais para o seu desempenho adequado, principalmente em relao segurana, eficcia e aceitabilidade destes produtos. Falha nas medidas preventivas e de controle do processo de fabricao pode resultar em produtos inadequados ao consumo. A Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) exige que as empresas produtoras tenham implantado as normas de boas prticas de fabricao, conforme as normas tcnicas oficialmente estabelecidas. Dentre as exigncias presentes nas normas, est a necessidade da realizao de ensaios de controle de qualidade em

todas as fase do processo de fabricao. Estas normas so dinmicas e devem ser atualizadas para acompanhar a evoluo tecnolgica dos processos, novos equipamentos e gerenciamento da qualidade. Relatos publicados em peridicos de grande circulao e abrangncia demonstram como resultado de falha no controle do processo de fabricao de vrias empresas produtoras de medicamentos e cosmticos graves conseqncias sade do consumidor, pelo uso de produtos em desacordo com suas caractersticas de qualidade estabelecidas, ocasionando casos de morte dos pacientes. Nos ltimos anos, medicamentos administrados por via parenteral em pacientes hospitalizados foram relatados. Os processos de fabricao devem ser documentados a cada lote de produo, constando do histrico do produto todas as aes de controle de qualidade em todas as etapas do processo de fabricao consideradas crticas. Para o controle do processo e do produto terminado, padres de qualidade so estabelecidos na fase de desenvolvimento do produto e validao dos processos. Todos os lotes produzidos devem apresentar conformidade com estes padres de qualidade. A qualidade microbiolgica de medicamentos, cosmticos e fitoterpicos definida por padres microbianos descritos em compndios oficiais e normas regulamentadoras. Limites mximos de presena de microrganismos no produto e dentre estes, ausncia de patgenos esto estipulados. Os produtos com composio complexa como medicamentos e cosmticos constituem fonte rica em nutrientes para o crescimento de microrganismos. Da mesma forma, produtos com maior atividade de gua comparados com amostras com baixo teor de gua tambm favorecem o crescimento. Matrias-primas, gua e pessoal so fontes importantes de contaminao microbiana e devem ser controlados. As matrias-primas de origem natural incluem grupos de produtos obtidos de plantas, partes de plantas ou mesmo extratos e leos essenciais extrados por processos qumicos bem como aqueles oriundos de minerais ou animais. Tradicionalmente, acredita-se que produtos formulados com estas matrias-primas, especialmente plantas, produzem ao desejada causando menos efeitos txicos que as de origem sinttica, levando ao emprego crescente dos mesmos como teraputicos ou cosmticos. Nas farmcias de manipulao, prescries com frmulas contendo matrias-primas de origem vegetal ou animal tm sido cada vez mais freqentes. A diferena que existe entre a farmcia de manipulao e a indstria farmacutica ou cosmtica a caracterstica de formulao magistral individualizada. Portanto, a quantidade de matria-prima a ser adquirida pela farmcia menor quando comparada produo industrial. Em funo disso, as matrias-primas so fracionadas pelas empresas fornecedoras para atender pedidos com quantidades especficas. Neste processo de fracionamento, podem ser carreados para as matrias-primas partculas viveis e no-viveis aumentando a carga microbiana contaminante. A contaminao microbiana pode levar ao comprometimento do desempenho do produto devido quebra da estabilidade da formulao, alterao das caractersticas fsicas e aparncia e levar a inativao dos princpios ativos e excipientes da formulao e ainda, causar a perda de confiana na empresa. Alm disso, a administrao de produtos contaminados pode agravar quadros clnicos de pacientes j debilitados pela doena. Ressaltase ainda, a necessidade de investigar o sistema conservante visto que muitos fabricantes utilizam-no na tentativa de manter a carga microbiana dentro do limite estipulado, contudo, desconsiderando a toxicidade decorrente do uso desse sistema. Para pequenas empresas produtoras e farmcias de manipulao, a implantao de laboratrio de controle de qualidade microbiolgico limitada pelo investimento necessrio para a infra-estrutura e pessoal requeridos. Assim, a realizao das anlises por laboratrios de prestao de servios possibilita o atendimento s exigncias da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria.

O presente projeto teve como objetivo contribuir para o desenvolvimento tecnolgico das empresas de produo e manipulao de medicamentos, cosmticos e fitoterpicos atravs da prestao de servios no controle de qualidade microbiolgico e consultoria para implementao das normas de boas prticas de fabricao e manipulao e melhoria dos servios prestados comunidade. Com a realizao das aes estabelecidas, possibilitou a integrao dos profissionais e acadmicos do curso de Farmcia e Bioqumica com a realidade do campo profissional, promovendo treinamento e atualizao dos recursos humanos. Metodologia A Fundao para o Desenvolvimento Regional (FUNDER) realizou a gesto financeira e administrativa das atividades do projeto. O desenvolvimento das atividades de prestao de servios de garantia da qualidade pelo Laboratrio de Controle de Qualidade Microbiolgico da Faculdade de Farmcia e Bioqumica foi realizado de acordo com a solicitao pelas empresas produtoras da regio mineira da Zona da Mata ou por meio de convnio firmado com a Pr-Reitoria de Extenso da Universidade Federal de Juiz de Fora. Participaram deste projeto, no perodo de 1999 2004, 25 empresas, sendo que os trabalhos envolveram atividades relacionadas com consultoria para implantao de laboratrio de controle de qualidade microbiolgico, estudo da eficcia de produtos cosmticos e normas de boas prticas de fabricao, anlises microbiolgicas de matrias-primas, produtos em processo e produtos acabados de diferentes apresentaes de medicamentos, cosmticos e fitoterpicos. As 240 amostras enviadas, nas formas de matrias-primas, cremes e loes, sabonetes, xamps, condicionadores capilar, gis, extratos de plantas, cpsulas, xaropes, lquidas, emulses, suspenses e outras, foram analisadas e os certificados de anlise correspondentes encaminhados s empresas. Os ensaios analticos empregados esto descritos, como mtodos gerais de contagem em placas de microrganismos aerbios e fungos, pesquisa dos microrganismos patognicos Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp e Staphylococcus aureus e teste de eficcia do sistema conservante, na Farmacopia Americana 26ed. (2003). No procedimento de contagem adotado, alquota de 10 g ou mL de cada amostra foram transferidas para 90 mL de caldo casena de soja estril. A partir desta primeira diluio, foram realizadas mais 3 a 5 diluies 10 -1, empregando o mesmo diluente. Para as contagens de microrganismos aerbios viveis e de fungos totais foram empregados, respectivamente, meios gar casena de soja e gar Sabouraud dextrose. Das duas ltimas diluies, foi retirado 1 mL e depositado no centro de uma placa esterilizada, procedendo a anlise em duplicata. Para cada placa, foram adicionados 15 mL de gar casena de soja, esterilizado e fundido a cerca de 45 C. Aps a solidificao do meio de cultura, as placas foram incubadas por 48 a 72 horas entre 30 a 35 C. Para a contagem de fungos, seguir o procedimento empregado na contagem de bactrias aerbias totais com meio de cultura gar Sabouraud-Dextrose, incubando as placas entre 20 a 25 C por 5 a 7 dias. Pesquisa de microrganismos patognicos foi realizada com a pesagem e transferncia de 1 g do produto para meio de caldo casena de soja e meio caldo lactosado. Aps a incubao por 24 a 48 horas, com o auxlio de ala microbiolgica, foram transferidas aladas do meio caldo casena para placas de Petri contendo meio gar Vogel-Johnson e gar Manitol por estrias de esgotamento. As placas foram incubadas entre 30 a 35 C por 24 a 48 horas. Na presena de presena de colnias, aps a observao de colnias tpicas de Staphylococcus aureus, foram realizados testes de confirmao de colorao de Gram, provas de catalase e coagulase. Para a pesquisa de Pseudomonas aeruginosa o mesmo procedimento anterior foi adotado, empregando meio gar cetrimida. Para a confirmao, foram realizados o teste de colorao de Gram, prova de citocromo-oxidase e em gar inclinado de infuso de crebro e corao. A pesquisa de Escherichia coli foi realizada a partir de transferncia de

aladas do meio caldo lactosado para placas contendo gar MacConkey. A pesquisa de Salmonella spp envolveu o enriquecimento em meios de caldos selenito-cistina e tetrationato de sdio e subculturas por estrias de esgotamento em meios de cultura gar sulfito-bismuto e gar verde brilhante. No teste de desafio microbiolgico, os produtos foram propositalmente contaminados com microrganismos especficos e a carga microbiana avaliada em intervalos de tempo definidos. Os microrganismos-testes recomendados foram Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Staphylococcus aureus ATCC 6538 e Escherichia coli ATCC 8739. A suspenso microbiana padronizada foi preparada com repique do microganismo-padro para tubo de ensaio contendo o meio inclinado seguido de incubao a 35 1 C por cerca de 24 horas. Foram adicionados ao tubo inclinado, 5 mL de soluo fisiolgica estril. Foram realizadas contagem de microrganismos presente na suspenso com a tcnica de semeadura em profundidade em meio gar casena de soja. A concentrao do inculo foi ajustada para 105 a 106 UFC/g do produto. As amostras foram inoculadas com a suspenso de cada microrganismo separadamente. Quantidade de 20 g do produto foi inoculado com 0,2 mL da suspenso microbiana. Os frascos com as amostras inoculadas foram mantidos entre 22,5 2,5 C. Contagens da carga de microbiana foram realizadas at 28 dias aps a inoculao. Os resultados foram comparados com limites estabelecidos para avaliar a eficcia do sistema conservante presente no produto. Determinaes do pH e as caractersticas fsicas do produto foram realizados. As atividades laboratoriais foram desenvolvidas com a colaborao de tcnico nvel superior e, aps o treinamento, alunos do curso de graduao da Faculdade de Farmcia e Bioqumica. Neste treinamento, foram ministrados conhecimentos dos processos produtivos, considerando aspectos da qualidade desde o recebimento das matrias-primas, material de embalagem, controle do processo e do produto e a importncia da interao entre os setores de controle de qualidade e produo. Resultados e discusso A contaminao microbiana de produtos farmacuticos, cosmticos e fitoterpicos pode ser proveniente de vrias origens devido complexidade dos processos de produo. Nos ltimos anos, a Agncia de Vigilncia Sanitria (ANVISA), tem atuado mais prxima s empresas produtoras, incluindo indstrias e farmcias de manipulao, e exigido o cumprimento s regulamentaes tcnicas estabelecidas e procedimentos documentados do processo de fabricao garantindo a qualidade final do produto. As atividades desenvolvidas neste projeto incluram a consultoria relacionada com procedimentos para a garantia da qualidade dos produtos e prestao de servio para avaliao da qualidade sanitria das amostras analisadas (Tabela 1). Tabela 1 Atividades de extenso universitria desenvolvidas pelo Laboratrio de Controle de Qualidade Microbiolgico da Faculdade de Farmcia e Bioqumica da Universidade Federal de Juiz de Fora no perodo de 1999 2004. Atividade Alcance Auditoria Quatro empresas Avaliao da eficcia de produto cosmtico Uma empresa Consultoria para implantao do laboratrio de controle de Duas empresas qualidade microbiolgico Consultoria para implantao das normas de Boas Prticas de Uma empresa Fabricao Controle de qualidade microbiolgico de produtos 25 empresas Relatrio tcnico Um Treinamento de pessoal Oito alunos

As atividades de inspeo ou auditoria nas empresas possibilitou detectar falhas de procedimento e documentao de dados. Os procedimentos padronizados descritos, a documentao de cada lote de produo com controle de todas as etapas de produo constituiu em material para treinamento de pessoal efetivo pela observao da relao entre a falha do processo, aplicao de medidas corretivas e preventivas, evitando perdas de material e tempo, resultando em melhoria da qualidade de servios e produtos. O estudo da eficcia de produtos cosmticos foi realizado resultando em elaborao de documentos tcnicos para processo de pedido de registro por uma empresa de cosmtico. Em relao qualidade sanitria, vrias so as fontes de contaminao dos produtos. Nas farmcias de manipulao, a preparao de formulaes prescrita individualmente e os produtos elaborados artesanalmente, exigindo aquisio de menor quantidade de matriasprimas. Desta forma, fornecedores fracionam as matrias-primas, possibilitando neste procedimento a introduo de contaminantes microbianos. Os resultados das anlises microbiolgicas para a avaliao da qualidade sanitria das amostras em relao contaminao e pesquisa de microrganismos patognicos esto na Tabela 2. Com a realizao das atividades com empresas envolvidas no projeto, o aluno tem oportunidade para conhecer o campo profissional possibilitando sua capacitao profissional. Tabela 2 Resultados das anlises microbiolgicas de matrias-primas, produtos farmacuticos, cosmticos e fitoterpicos, de 25 empresas produtoras, realizados no Laboratrio de Controle de Qualidade Microbiolgico, no perodo de 1999 2003. Amostras Total Analisadas 260 (100%) Aprovadas 240 (92,3%) Reprovadas 20 (7,7%) Reprovadas por contagem de microrganismos aerbios acima do 13 (5%) limite estabelecido Reprovadas por contagem de fungos acima do limite estabelecido 8 (3,1%) Reprovadas por presena de Escherichia coli 2 (0,8%) Reprovada por presena de Pseudomonas aeruginosa e 1 (0,4%) Staphylococcus aureus Do total das empresas, 10 (40%) apresentaram falha no atendimento s especificaes quanto presena de contaminantes acima do limite especificado. De acordo com as especificaes quanto s contagens de microrganismos aerbios viveis e fungos totais, os valores encontrados e comparados com o padro FIP (1976) demonstraram que 7,7% das amostras analisadas estavam fora do limites aceitveis (Tabela 2). Dados da literatura correlacionam nveis de contaminao mais elevados para matrias-primas de origem natural como as plantas. No entanto, neste trabalho no foi observada esta correlao. Amostras de cpsulas contendo derivados de partes da plantas, extratos e tinturas apresentaram conformidade com a especificao. Entre produtos industrializados e manipulados, maior nmero de amostras contaminadas foi observado em indstria de cosmtico em fase de implantao do laboratrio de controle de qualidade. Em relao pesquisa de microrganismos patognicos, duas amostras na forma de creme cosmtico apresentaram presena de Escherichia coli e uma destas, presena tambm de Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus. Os ensaios microbiolgicos de vrios tipos de preparaes, a necessidade de validao de procedimentos, controle das condies de realizao dos procedimentos constituram em treinamento de

alunos de graduao da instituio. As anlises realizadas possibilitaram obteno de recurso para a manuteno dos servios prestados pelo laboratrio. Para a Universidade Federal de Juiz de Fora, Faculdade de Farmcia, Prefeitura do Campus Universitrio e Fundao gestora, recursos so adquiridos com a execuo do projeto, auxiliando no desenvolvimento e manuteno das atividades desenvolvidas. Concluses importante ressaltar que existe no mercado grande diversidade de matrias-primas e produtos em vrias formas de apresentao evidenciando, a necessidade de um controle de qualidade rigoroso, principalmente quando ocorre a dificuldade na identificao ou conhecimento da procedncia dos mesmos. Para as empresas produtoras de medicamentos, cosmticos e fitoterpicos, as atividades desenvolvidas no presente projeto permitiram o atendimento s exigncias da Vigilncia Sanitria presente no Regulamento Tcnico de Boas Prticas de Fabricao e Manipulao relacionadas com o controle de qualidade de produtos. Os resultados das anlises possibilitaram detectar falha no processo de fabricao, avaliar os procedimentos operacionais padronizados, analisar a ficha de fabricao e estabelecer medidas corretivas e preventivas adequando e melhorando os procedimentos atravs de treinamento de pessoal. Com isto, obtendo melhoria da qualidade, maior produtividade e desenvolvimento da empresa e de seus funcionrios. A implantao das normas de boas prticas possibilitou a padronizao dos procedimentos nos setores produtivos, organizao e otimizao de processos. No estudo de eficcia de produtos cosmticos, relatrios tcnicos foram elaborados com a documentao dos resultados, possibilitando empresa cosmtica obter o registro de seus produtos junto ao Ministrio da Sade para a autorizao de sua produo e comercializao. Os recursos financeiros obtidos possibilitaram a aquisio de equipamentos como contador de colnias, agitador Vortex, materiais de consumo como meios de cultura, vidraria, reagentes, gaiolas e animais de laboratrio. Referncias bibliogrficas ARAJO, A.L.A. Qualidade microbiolgica de drogas vegetais comercializadas em feira do municpio de So Paulo e de infusos derivados. 1998. 83 f. Dissertao (Mestrado em Frmaco e Medicamentos) Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade de So Paulo, So Paulo, 1998 BRASIL. Resoluo RDC n. 33, de 19 de Abril de 2000. Aprova o regulamento tcnico sobre boas prticas de manipulao de medicamentos em farmcias. Disponvel em: <http//:elegis.bvs.br/leisref/public/show> acesso em: 15 de abril de 2004. UNITED STATES OF PHARMACOPEIA. 26 ed. Rockville: United States Pharmacopeial Convention, 2003 BRASIL. Resoluo RDC n. 33, de 19 de Abril de 2000. Aprova o regulamento tcnico sobre boas prticas de manipulao de medicamentos em farmcias. Disponvel em: <http//:elegis.bvs.br/leisref/public/show> acesso em: 15 de abril de 2004. BRASIL. Resoluo RDC n. 210, de 04 de agosto de 2003. Dispe o regulamento tcnico das boas prticas de fabricao de medicamentos. Disponvel em: <http//:elegis.bvs.br/leisref/public/show> acesso em: 15 de abril de 2004. FRES, L. Xampus irritam olhos e couro cabeludo. O Globo, Rio de Janeiro, 4 de agosto de 1996. Jornal da famlia, p. 2. LABORATRIO culpa soro por morte de 23. Folha de So Paulo, So Paulo. 1 de novembro de 1997. cad. So Paulo 3. p. 6 LAUDO culpa laboratrio por morte de bebs. Folha de So Paulo, So Paulo. 15 de outubro de 1997. cad. So Paulo 3. p. 3

PINTO, Terezinha de Jesus Andreoli; KANEKO, Telma Mary; OHARA, Mitsuko Taba. Controle biolgico de qualidade de produtos farmacuticos, correlatos e cosmticos. So Paulo: Atheneu, 2000. 309p. YAMAMOTO, C.H. et al. Contaminao microbiana em matrias-primas de origem natural empregadas em farmcia de manipulao. Farmcia e Qumica, So Paulo, v. 33, n. 1, p. 4247, 2000.