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2 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex
de esta edicin: Asociacin Espaola de Alrgicos al Ltex Direccin y coordinacin Asociacin Espaola de Alrgicos al Ltex Carlos Albarrn Collado Adoracin Carpintero Montoro Pilar Vicente Garca Expertos consultados M Rosa Snchez-Monge (Universidad Politcnica de Madrid) Gabriel Salcedo (Universidad Politcnica de Madrid) Timo Palosuo (Instituto Finlands de Salud Pblica) David A. Kostyal (Fundacin Guthrie) Hardi Tamm (Quattromed Ltd.) Beatriz Bellido (Instituto de Salud Carlos III) Pilar Guerra (Instituto de Salud Carlos III) Pilar Daz (Instituto de Salud Carlos III) Carlos Blanco (Hospital Universitario de Gran Canaria Dr. Negrn) Alberto Martnez (Bial Arstegui) Domingo Barber (ALK Abell) El presente informe comparativo de tecnologas ha sido realizado en colaboracin conjunta entre la Asociacin Espaola de Alrgicos al Ltex y Parque Cientfico de Madrid, entidad que gestiona el Crculo de Innovacin en Biotecnologa, perteneciente al Sistema Regional de Innovacin madrid+d. Autores Esther Garca Iglesias Cecilia Gonzlez de Ordua Cristina Rodrguez Rivera Lara Gago Cabezas Jos Manuel Gonzlez Izquierdo Jos Lus Fernndez Nuevo Javier Benito Andrs
ISBN: 978-84-612-9585-2 Depsito Legal: GU-50/2009 Diseo cubierta y maquetacin: J.J.Grfics - c/ Espgol, 14 - 08328 Alella (Barcelona) Impresin: Grafi-6, s.l.l. - Polig. n2 de Cabanillas - 19171 Cabanillas del C. (Guadalajara) Financiado por el Ministerio de Sanidad y Consumo
El copyright y otros derechos de propiedad intelectual de este documento pertenecen a la Asociacin Espaola de Alrgicos al Ltex. Se autoriza a las organizaciones de atencin sanitaria a reproducirlo total o parcialmente para uso no comercial, siempre que se cite el nombre completo del documento, ao, institucin y financiacin.
ndice de contenidos - 3
ndice de contenidos
Agradecimientos ................................................................................ 5 Resumen ejecutivo ............................................................................ 6 1. Antecedentes y objetivo del informe .............................................. 7 2. Problemtica de la alergia al ltex y la deteccin de alrgenos ..... 8 3. Mtodos analticos para alrgenos del ltex ................................ 13 3.1. Mtodo de Lowry modificado ................................................. 15 3.2. Cromatografa lquida de alta resolucin ............................... 16 3.3. Ensayos inmunoenzimticos tipo ELISA ................................ 17 3.4. Inmunoelectroforesis ............................................................. 23 3.5. Inmunodeteccin en membrana (Western Blot) .................... 24 3.6. Evaluacin y comparacin de mtodos analticos ................. 26 3.7. Propiedad industrial ............................................................... 29 4. Catlogo de empresas ............................................................... 32 4.1. Productos y servicios de deteccin ........................................ 32 4.2. Alrgenos del ltex y anticuerpos .......................................... 39 4.3. Otras empresas ..................................................................... 45 4.4. Legislacin y normalizacin ................................................... 48 5. Catlogo de grupos de investigacin .......................................... 53 5.1. Grupos de investigacin nacionales ...................................... 53 5.2. Otros grupos de investigacin ............................................... 57 5.3. Proyectos de investigacin .................................................... 65 6. Conclusiones del Informe ........................................................... 69 7. Bibliografa ................................................................................. 71 8. Glosario y abreviaturas ............................................................... 74
Agradecimientos - 5
Agradecimientos
Como consecuencia del estudio Una Aproximacin a la Situacin Real de la Alergia al Ltex en Espaa, la Asociacin Espaola de Alrgicos al Ltex crey necesaria una Evaluacin de los Mtodos Analticos Actuales para Alrgenos del Ltex. Para poder realizar este estudio, hemos contado con la colaboracin y asesoramiento de numerosos expertos, tanto nacionales como internacionales. Nuestro agradecimiento a todas estas personas, a los tcnicos del Parque Cientfico de Madrid, y a los miembros de la Asociacin Espaola de Alrgicos al Ltex que han colaborado en la realizacin del mismo. Mencin especial al Ministerio de Sanidad y Consumo ya que sin su apoyo hubiera sido imposible la realizacin de este estudio.
Resumen ejecutivo
Este informe comparativo de tecnologas consta de una primera parte en la que se recogen brevemente los antecedentes del mismo y su objetivo. A continuacin, en el punto 2 se introduce el problema de la alergia al ltex y las medidas que se aplican actualmente para su diagnstico, tratamiento y prevencin. En el siguiente epgrafe se detallan los mtodos analticos identificados para la determinacin y cuantificacin de los alrgenos del ltex. Para cada uno de ellos se incluye una representacin esquemtica del proceso de anlisis junto con sus principales ventajas e inconvenientes. Adems, en el punto 3.6 estos mtodos se evalan y comparan entre s en funcin de una serie de caractersticas como el lmite de deteccin, la especificidad, el coste, la necesidad de personal cualificado, etc. Y en el punto 3.7 se enumeran las patentes y solicitudes de patente sobre tcnicas de anlisis aplicables a los alrgenos del ltex y temas afines. En los puntos 4 y 5 se describen los catlogos de empresas y grupos de investigacin relativos a la determinacin de estos alrgenos. En el primer caso, se presentan los perfiles de diversas empresas que comercializan y/ o disponen de servicios de anlisis y que producen alrgenos y anticuerpos. En el segundo, se proporciona una relacin de algunos de los grupos de investigacin ms relevantes que trabajan en este campo adems de varios proyectos financiados con fondos pblicos. En l tambin se mencionan los aspectos ms importantes de la legislacin nacional y comunitaria con respecto a la identificacin y etiquetado de los productos con ltex junto con las iniciativas llevadas a cabo en EE.UU. en este mbito. Asimismo, se indican los mtodos de deteccin que se han estandarizado por los distintos organismos internacionales. En el punto 6 se incluyen las conclusiones extradas del anlisis de la informacin recopilada en este informe comparativo de tecnologas. Por ltimo, se presentan las referencias bibliogrficas consultadas en el epgrafe 7 y una lista de abreviaturas y un glosario de trminos en el 8.
Antecedentes - 7
1. Antecedentes y objetivo del informe
La Asociacin Espaola de Alrgicos al Ltex, tras la realizacin del estudio Una aproximacin a la situacin real de la alergia al ltex en Espaa, en el que queda patente la necesidad de conocer el contenido de ltex natural que pudiera haber en diferentes productos del mbito sanitario, as mismo consider la necesidad de realizar una Evaluacin de los Mtodos Analticos Actuales para los Alrgenos al Ltex.
2. Problemtica de la alergia al ltex y la deteccin de alrgenos
El ltex, goma natural o caucho es un producto que se obtiene de la savia del rbol del caucho Hevea brasiliensis (figura 1). Se trata de una emulsin acuosa coloidal, de aspecto lechoso, que procede del citoplasma de las clulas denominadas laticferas. Tras su recoleccin, la goma natural se somete a diversos tratamientos (coagulacin, vulcanizacin, moldeado) y se adicionan distintas sustancias como aceleradores, conservantes, antioxidantes, plastificantes, etc. con el fin de modificar y mejorar sus propiedades fsico-qumicas y mecnicas. (1) El ltex presenta un gran inters para la industria por sus caractersticas de elasticidad. Es un material ubicuo que se utiliza en la fabricacin de ms de 40.000 productos de uso cotidiano y mdico. En la siguiente tabla se recoge un listado de diversos productos que pueden contener ltex. (2)
Figura 1. Recoleccin de ltex del rbol del caucho (Hevea brasiliensis).
Problemtica de la alergia al ltex y la deteccin de alrgenos - 9
Tabla 1. Listado de productos de uso cotidiano y mdico que pueden contener ltex. (2)
Alergia al ltex
La alergia al ltex mediada por anticuerpos de la clase inmunoglobulina E (IgE) fue descrita por primera vez en el ao 1979. A finales de los aos ochenta, se produjo un incremento considerable del nmero de casos, debido a la generalizacin del uso de guantes y preservativos de ltex, como parte de las medidas recomendadas para evitar el contagio del virus de la inmunodeficiencia humana o VIH (3). Como consecuencia de esta situacin, en las ltimas dcadas la alergia al ltex ha supuesto un problema socioeconmico y sanitario importante. Actualmente las medidas preventivas y los avances realizados en su diagnstico, junto con los tratamientos basados en inmunoterapia, han reducido el nmero de casos. Sin embargo, la alergia al ltex puede considerarse todava hoy un riesgo potencial para determinados grupos como, por ejemplo, el personal sanitario y algunos pacientes aquejados de ciertas enfermedades que han sufrido repetidas operaciones quirrgicas. La prevalencia de sensibilizacin de esta patologa se establece en torno al 0,3-1% para la poblacin general. En la tabla 2 se indican algunas cifras sobre la prevalencia de la alergia al ltex en distintos tipos de poblacin. Aparte de stos, tambin se ven afectados los profesionales con una exposicin alta al ltex en su puesto de trabajo (operarios de industrias de productos de goma y trabajadores de las plantaciones de ltex); aquellos que emplean frecuentemente guantes fabricados con este material, como manipuladores
de alimentos, trabajadores de invernaderos, peluqueros, empleadas de hogar, etc.; y, personas con un historial clnico de reacciones alrgicas frente a ciertas frutas y frutos secos. (2)
Tabla 2. Prevalencia de la alergia al ltex en distintas poblaciones analizadas. (2)
Las reacciones alrgicas que puede desencadenar el ltex se clasifican en reacciones de hipersensibilidad inmediata y reacciones de hipersensibilidad retardada. Reacciones de hipersensibilidad inmediata o tipo I, mediadas por anticuerpos de la clase IgE. Estas reacciones se originan por la presencia de determinadas protenas del ltex (ver epgrafe 3). Se caracterizan porque la aparicin de los sntomas tiene lugar en un perodo de tiempo corto, desde los pocos minutos hasta una hora despus de la exposicin a las mismas. Estos sntomas pueden limitarse a la zona de contacto o ser generalizados y varan desde manifestaciones ms o menos leves (rinoconjuntivitis, urticaria, angioedema, asma bronquial) hasta algunas tan graves que pueden causar la muerte (choque anafilctico). Reacciones de hipersensibilidad retardada o tipo IV, mediadas por clulas del sistema inmune. Los principales responsables de estas reacciones son los aditivos y otros compuestos (aceleradores, conservantes, antioxidantes, plastificantes, etc.) aadidos durante el proceso de fabricacin del ltex. En este caso, los sntomas se muestran a las 12-48 horas desde la exposicin al ltex en personas sensibilizadas previamente y, en general, consisten en la aparicin de eccema en los dedos y el dorso de las manos. (3) La dermatitis irritativa es otro de los problemas asociados al contacto con objetos de ltex, en especial guantes, que se ve favorecida por otros productos irritantes como jabones, detergentes, etc. Se trata de una manifestacin cutnea no mediada por mecanismos inmunolgicos. Localizada generalmente en las manos, sus sntomas son eritema, prurito, descamacin y formacin de vesculas. El ltex tambin es uno de los agentes relacionados con mayor frecuencia con el asma ocupacional, sobre todo, entre el personal sanitario. Las partculas de ltex se
Problemtica de la alergia al ltex y la deteccin de alrgenos - 11
dispersan en el ambiente y pueden causar sensibilizacin y provocar otros sntomas no bien definidos. Una de las principales vas para su dispersin es el polvo de almidn de maz que se utiliza como lubricante en los guantes de ltex y donde quedan absorbidas. Aparte de esto, las moquetas, alfombras y tapiceras junto con los sistemas de ventilacin suelen ser reservorios importantes de estas partculas. (4) Por ltimo, la alergia al ltex se relaciona estrechamente con la alergia a ciertos alimentos, lo que se conoce como sndrome ltex-frutas. Se debe a la similitud que existe entre algunas protenas de los alimentos con determinadas protenas del ltex. En la tabla 3 se muestran los alimentos implicados en este sndrome y el tipo de asociacin existente con la alergia al ltex. (5)
Tabla 3. Alimentos implicados en el sndrome ltex-frutas y tipo de asociacin que existe entre ellos y la alergia al ltex. (5)
Diagnstico, tratamiento y prevencin de la alergia al ltex

El diagnstico de la alergia al ltex se realiza mediante la historia clnica y la exploracin fsica del paciente. En la historia clnica de las personas hipersensibles al ltex se reflejan antecedentes de reacciones alrgicas como urticaria, rinitis, angioedema, anafilaxia, etc. inmediatas a la exposicin a productos de ltex y/ o a la ingestin de ciertos alimentos (pltanos, aguacates, kiwis y castaas, principalmente). Junto con la historia clnica es frecuente efectuar pruebas cutneas (prick-test) que confirmen la sensibilizacin frente al ltex. En ocasiones, tambin se llevan a cabo anlisis para la deteccin de anticuerpos IgE especficos en sangre y pruebas de provocacin controlada con ltex. (3) En la actualidad, el tratamiento de la alergia al ltex, fundamentalmente se basa en la prevencin, el manejo sintomtico y en el futuro, posiblemente la inmunoterapia. El tiempo y la frecuencia de exposicin al ltex son factores de riesgo que condicionan la aparicin de la alergia. Por tanto, la medida bsica para la prevencin de la alergia al ltex es evitar el contacto con productos de ltex en cualquier ambiente (domstico, escolar, laboral) lo que resulta muy complicado dada la ubicuidad de este material.
En concreto, en el medio hospitalario la presencia de ltex es altamente peligrosa para los pacientes y trabajadores sanitarios afectados por este tipo de alergia. En este mbito las disposiciones preventivas generales que se proponen son: La creacin de una comisin que coordine la atencin mdica del paciente alrgico y la prevencin de alergia en el personal sanitario. La formacin de los trabajadores sanitarios para evitar la alergia profesional al ltex y facilitar el diagnstico precoz de la enfermedad entre los pacientes. El desarrollo de protocolos de actuacin para atender a los pacientes alrgicos al ltex. La identificacin de los materiales y productos sanitarios que pueden contener ltex y la bsqueda de alternativas libres de este compuesto. (3)
Mtodos analticos para alrgenos del ltex - 13
3. Mtodos analticos para alrgenos del ltex
Un alrgeno es una sustancia reconocida como "extraa" por el organismo de determinadas personas, cuya presencia desencadena en el mismo una respuesta inmunolgica. Uno de los mecanismos que emplea el sistema inmune frente a los alrgenos es la liberacin de anticuerpos o inmunoglobulinas, sobre todo, inmunoglobulinas tipo E (IgE). Estos anticuerpos reconocen y se unen de forma especfica a un alrgeno concreto iniciando una serie de procesos que son los responsables de la sintomatologa clnica de la alergia. En el ltex se han identificado diversos alrgenos, todos de origen proteico. Por el momento, slo trece de ellos se han clasificado con un nombre sistemtico (tabla 4) pero existen otras molculas de mayor o menor alergenicidad como la hevamina. Se ha comprobado que algunos de estos compuestos son capaces de soportar los procesos fsico-qumicos que se llevan a cabo en el procesado del ltex. Por lo tanto, estn presentes en los productos manufacturados y pueden originar reacciones alrgicas. Asimismo, se sospecha que durante la fabricacin de los objetos y materiales de ltex se forman nuevos alrgenos que slo se encuentran en estos productos y no existen inicialmente en la goma natural. (6)
Tabla 4. Denominacin sistemtica de los alrgenos del ltex, su peso molecular y grado de alergenicidad (*EB: espina bfida). (3) (1)
Aparte del contacto con materiales y objetos que contienen ltex, otra va de exposicin difcil de controlar es la area. Las partculas de ltex se consideran aeroalrgenos muy importantes, es decir, se trata de alrgenos que se transmiten por el aire con gran facilidad.
Determinar la existencia de estos alrgenos en los productos manufacturados y en el ambiente reducira el riesgo de sensibilizacin y desarrollo posterior de un cuadro clnico de alergia al ltex. Los mtodos analticos aplicados a su deteccin y cuantificacin disponibles en la actualidad pueden clasificarse en dos categoras: Mtodos qumicos como el mtodo de Lowry modificado y el anlisis de aminocidos mediante cromatografa. La mayora de los alrgenos son compuestos de naturaleza proteica. Algunas de las tcnicas analticas utilizadas en su deteccin se basan en determinar la cantidad de protena total. En estos casos, se establece el contenido de protenas extrables de la muestra sin obtener informacin concreta sobre la proporcin de alrgenos presentes en ella. En estos ensayos se asume que la cantidad de protena detectada se correlaciona con la capacidad del producto de desencadenar una reaccin de hipersensibilidad. El mtodo de Lowry modificado y el anlisis de aminocidos mediante cromatografa se han estandarizado para algunos productos. Habitualmente, estos procedimientos se emplean en estudios comparativos de distintas marcas comerciales, por ejemplo, para conocer el contenido de protena total de los guantes de ltex existentes en el mercado. (1) Mtodos inmunolgicos como los ensayos inmunoenzimticos, la inmunoelectroforesis y la inmunodeteccin en membrana o Western Blot. Las tcnicas inmunolgicas se caracterizan por una mayor sensibilidad y especificidad. Al contrario que las anteriores, estos procedimientos detectan los alrgenos del ltex y no se limitan a la cantidad total de protena extrable. Adems, se trata de mtodos rpidos que, en general, permiten el anlisis simultneo de varias muestras.
3.1. Mtodo de Lowry modificado

Dentro de las tcnicas basadas en el contenido de protena total, una de las ms utilizadas para la cuantificacin de las protenas del ltex es el mtodo de Lowry modificado. Se trata de un mtodo qumico bastante sencillo que permite determinar la cantidad total de protenas solubles en agua, presentes en la goma natural y los productos fabricados con ella. En el mtodo de Lowry modificado las protenas se solubilizan mediante una disolucin tampn y se separan por precipitacin y centrifugacin. Estas protenas se suspenden posteriormente en un medio alcalino en presencia de iones de cobre al que se aade reactivo de Folin. La reaccin que tiene lugar origina un color azul intenso que se mide por colorimetra (figura 2). Comparando los valores obtenidos con el patrn correspondiente se halla la cantidad de protena total de la muestra. (7) (8)
Figura 2. Mtodo de Lowry modificado para determinar la cantidad total de protenas solubles de una muestra.
Puntos fuertes - Es reproducible; se trata de un mtodo estandarizado. - Es bastante sencillo. - Puede implementarse como mtodo de anlisis rutinario en los controles industriales. - Los reactivos necesarios para este anlisis se encuentran disponibles en kits. Puntos dbiles - Cuantifica el contenido total de protenas y no la cantidad de alrgenos. - Presenta algunas interferencias importantes por la falta de especificidad. No distingue entre las protenas del ltex y otras protenas de la muestra (por ejemplo, las casenas aadidas durante la fabricacin de algunos productos como los guantes). - Su fiabilidad es menor si se analizan productos con contenidos de protenas de ltex pequeos. - Es poco sensible.
3.2. Cromatografa lquida de alta resolucin

Otro mtodo qumico para la determinacin de la protena total en productos que contienen ltex es la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC en sus siglas inglesas). Las tcnicas cromatogrficas permiten la separacin de los distintos componentes de una mezcla que se distribuyen entre dos fases, una fija o estacionaria y una mvil, para su deteccin posterior. En HPLC la fase estacionaria consta de multitud de partculas, con determinadas caractersticas qumicas en su superficie, empaquetadas dentro de una columna mientras que la fase mvil es un lquido en el que se disuelven los componentes a separar. Cada uno de ellos interacciona de forma diferente con la fase estacionaria por lo que la atraviesan a distintas velocidades. A la salida de la columna un detector seala la presencia de estos componentes generando una seal que depende de la concentracin, tipo de sustancia, etc. En la figura 3 se representa de forma esquemtica la separacin de dos compuestos por cromatografa lquida de alta resolucin.
Figura 3. Separacin de los componentes A y B de una mezcla mediante cromatografa lquida de alta resolucin y su deteccin posterior.
Para los productos de ltex se extraen las protenas de la muestra y se someten a una hidrlisis completa que proporciona una mezcla de aminocidos y pptidos de pequeo tamao. Estas molculas se separan en la columna cromatogrfica y, finalmente, se cuantifican.
Puntos fuertes - Puede utilizarse para evaluar la presencia de alrgenos del ltex en distintos productos aunque slo se ha validado clnicamente para los guantes. (1) Puntos dbiles - nicamente determina la cantidad total de protenas pero no permite conocer el contenido de alrgenos de la muestra. - Esta tcnica de anlisis no puede emplearse en controles rutinarios. - El equipamiento de HPLC resulta costoso. - Requiere personal cualificado. (9)
3.3. Ensayos inmunoenzimticos tipo ELISA

El ensayo de inmunoabsorcin ligado a enzima o ELISA (del ingls Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) se basa en la deteccin del alrgeno mediante un anticuerpo determinado. Los anticuerpos utilizados reconocen de forma especfica ciertas zonas de la estructura de los alrgenos y se unen a estas molculas formando un complejo alrgenoanticuerpo. Adems, los anticuerpos tienen adherida en su superficie una enzima. Cuando se ha formado el complejo anterior y adicionando el sustrato adecuado, esta enzima cataliza una reaccin que produce modificaciones (por ejemplo, un cambio de color en el medio) a partir de las cuales pueden cuantificarse los alrgenos presentes en la muestra. Los ensayos tipo ELISA se realizan habitualmente en un soporte slido, como la placa de 96 pocillos que se muestra en la figura 4, sobre el que se inmovilizan bien los anticuerpos bien los alrgenos.
Figura 4. Fotografa de una placa ELISA de 96 pocillos.
En funcin del nmero de anticuerpos distintos que se emplean en cada ensayo y de la molcula que se detecta con la reaccin enzimtica (complejos alrgeno-anticuerpo, anticuerpos libres), se diferencian distintos test ELISA: directo, indirecto, competitivo, tipo sndwich, de inhibicin, etc. En la deteccin de alrgenos del ltex se utilizan concretamente el ELISA indirecto y el ELISA de inhibicin, adems de otros ensayos de caractersticas muy similares como el IEMA.
Puntos fuertes - Los ELISA son mucho ms sensibles que los mtodos de deteccin de la protena total como el mtodo de Lowry. - Permiten procesar un gran nmero de muestras simultneamente. - Los anlisis son rpidos y permiten tener los resultados en el mismo da. - Tiene una especificidad elevada. No se producen interferencias por otras protenas de la muestra (por ejemplo, las casenas presentes en los guantes de ltex) porque los anticuerpos slo reconocen y se unen a los alrgenos. Puntos dbiles - Los kits ELISA resultan costosos. - Slo permiten detectar aquellos alrgenos que reconozcan los anticuerpos utilizados en el ensayo. En ocasiones, los resultados del anlisis no se correlacionan directamente con el contenido real de alrgenos en una muestra.
ELISA indirecto
El ELISA indirecto se caracteriza por la participacin de dos anticuerpos diferentes en cada ensayo, uno que reconoce al posible alrgeno y otro que tiene ligada una enzima y que se une a este primer anticuerpo. En esta tcnica se inmovilizan inicialmente las protenas extradas de la muestra en los pocillos de la placa. A continuacin, se aade una cantidad conocida de anticuerpos que reconocen algunas de las protenas. Tras la formacin de los complejos entre protenas y anticuerpos se incorpora el segundo anticuerpo que tambin se une a estas estructuras. Por ltimo, con la adicin del reactivo correspondiente se produce una reaccin, catalizada por la enzima ligada al segundo anticuerpo, que origina un compuesto coloreado en el medio. En la figura 5 se indican las diferentes etapas del ELISA indirecto.
Figura 5. Esquema de las diferentes etapas que componen un ELISA indirecto.
El ELISA indirecto aplicado a la deteccin de las protenas del ltex se conoce como LEAP (Latex ELISA for Antigenic Protein) y fue diseado por la Fundacin Guthrie de Pensilvania, EE.UU, en el ao 1993. En el epgrafe "Catlogo de grupos de investigacin" se proporciona ms informacin sobre esta entidad. Adems de los puntos fuertes y dbiles generales expuestos en el epgrafe anterior para los test ELISA, el LEAP presenta las siguientes caractersticas:
Puntos fuertes - Tiene una sensibilidad elevada. Varios anticuerpos marcados con enzimas pueden unirse al mismo complejo alrgeno-anticuerpo lo que amplifica la seal para su deteccin.
Puntos dbiles - Este ensayo resulta poco especfico. Los anticuerpos empleados en l pueden unirse a algunas protenas de la muestra que no corresponden con los alrgenos del ltex. Esto se debe al proceso utilizado para la obtencin de dichos anticuerpos. - En las muestras que contienen compuestos detergentes o una alta concentracin de protenas distintas a las del ltex, estas molculas impiden que las protenas que se desea detectar se fijen en la placa. Este hecho puede producir resultados donde la cantidad de alrgenos detectada es inferior a la real. Para evitar este fenmeno se realizan diluciones seriadas de la muestra. - No se trata de un mtodo estandarizado. (7) (9)
ELISA de inhibicin
En el ELISA de inhibicin tambin se utilizan dos anticuerpos distintos como en el LEAP. En este tipo de ensayos se realiza una primera fase (fase de inhibicin) en la que las protenas de la muestra se incuban con una cantidad conocida de anticuerpos especficos frente a los alrgenos de inters. Al finalizar esta etapa se tienen, por una parte, los complejos alrgeno-anticuerpo recin formados y, por otra, un nmero determinado de anticuerpos libres y el resto de protenas de la muestra. Para la segunda fase de este anlisis (fase de reaccin) se prepara una placa ELISA donde se inmovilizan molculas estandarizadas del alrgeno correspondiente en una proporcin conocida. En sus pocillos se aade la mezcla resultante de la etapa anterior. Los anticuerpos que quedaron libres reaccionan ahora con los alrgenos fijados en el soporte. Su presencia se revela con la adicin de un segundo anticuerpo ligado a una enzima y del reactivo adecuado para la formacin de productos coloreados en el medio de reaccin. La cantidad de alrgenos en la muestra es inversamente proporcional a la intensidad de color desarrollada. La figura 6 representa las etapas descritas para el ELISA de inhibicin.
Figura 6. Fases de inhibicin y de reaccin de un test ELISA de inhibicin.
Junto con las caractersticas generales para los test ELISA, el ELISA de inhibicin presenta los siguientes puntos fuertes y dbiles:
Puntos fuertes - El ELISA de inhibicin es un mtodo estandarizado. - Se trata de un procedimiento analtico bastante sensible. (9) - Gracias a la primera fase de inhibicin que se lleva a cabo en este tipo de ELISA se obtienen resultados ms reproducibles comparados con otros test ELISA, como el LEAP.
Puntos dbiles - Este tipo de ELISA cuenta con una especificidad baja debido al mtodo de produccin de los anticuerpos utilizados en l. - En la segunda etapa del ensayo, la unin de los anticuerpos a los alrgenos inmovilizados en la placa puede inhibirse debido a la presencia de diversas sustancias procedentes del extracto del producto de ltex natural.
Ensayo inmunoenzimomtrico
A diferencia de las dos tcnicas anteriores, en el ensayo inmunoenzimomtrico o IEMA (ImmunoEnzyMetric Assay) se inmovilizan en la placa los anticuerpos frente al alrgeno que se desea detectar. Posteriormente se aade el extracto de protenas obtenido de la muestra y se mantiene en incubacin durante un tiempo para permitir la formacin de los complejos alrgeno-anticuerpo. Estos complejos se detectan mediante la adicin de un segundo anticuerpo marcado con una enzima que se une a ellos. Por ltimo, se incorporan los reactivos correspondientes lo que desencadena un cambio de color en el medio como resultado de la reaccin enzimtica (figura 7). (10)
Figura 7. Ensayo inmunoenzimomtrico para la deteccin de los alrgenos presentes en una muestra.
La empresa FIT Biotech de Finlandia ha patentado esta tcnica inmunoenzimomtrica para la deteccin de determinados alrgenos del ltex. Tambin ha desarrollado una serie de kits basados en ella que se denomina FITkit y comercializa la compaa estonia Quattromed (www.quattromed.com). En el epgrafe "Catlogo de empresas" se proporciona ms informacin sobre este producto.
Puntos fuertes - Estos kits permiten cuantificar individualmente algunos alrgenos del ltex. - Se trata de un mtodo sensible y reproducible. - Su especificidad es alta. No se producen interferencias causadas por otras protenas distintas a los alrgenos que se desean detectar. (11) - Los kits basados en el IEMA pueden emplearse para detectar los alrgenos presentes en distintos materiales y objetos. Puntos dbiles - El coste de estos kits puede resultar elevado.
3.4. Inmunoelectroforesis
La inmunoelectroforesis es una tcnica cualitativa que permite la separacin de los distintos componentes proteicos de una mezcla y su identificacin posterior gracias al uso de anticuerpos especficos. En la inmunoelectroforesis se distinguen dos etapas que se representan en la figura 8. En la primera de ellas las protenas de la muestra se cargan en un gel de agarosa. Bajo la accin de un campo elctrico estas molculas se desplazan a travs del gel de un modo diferente segn su carga elctrica. En la segunda etapa se aplica un anticuerpo especfico frente al compuesto que se desea detectar (por ejemplo, un alrgeno del ltex) en un canal del gel paralelo al eje de migracin de los componentes de la muestra. Los anticuerpos difunden por el gel y se unen a las molculas que reconocen formando los complejos alrgeno-anticuerpo. Estas interacciones son visibles por la aparicin de unas lneas de precipitacin cuya posicin y forma dependen de las caractersticas y concentracin del alrgeno.
Figura 8. Separacin de los componentes A y B de una muestra mediante inmunoelectroforesis.
Puntos fuertes - Esta tcnica tiene una alta especificidad, permitiendo diferenciar sustancias con movilidades electroforticas similares. Puntos dbiles - Es un mtodo cualitativo y no se ha estandarizado. - Con l slo se detectan aquellos alrgenos para los que se disponga de su anticuerpo correspondiente. - Es una tcnica que consume bastante tiempo, sobre todo, por los largos periodos de incubacin (24-48 horas) que requiere. - Los complejos alrgeno-anticuerpo nicamente se forman si ambas molculas se encuentran en una proporcin determinada (relacin de equivalencia) que debe hallarse en experimentos preliminares. - Cuando se analizan alrgenos con un peso molecular parecido pueden formar una nica banda lo que no permite discriminar entre unos y otros.
3.5. Inmunodeteccin en membrana (Western Blot)

La inmunodeteccin en membrana (o Western Blot) se asemeja a la inmunoelectroforesis descrita en el epgrafe anterior. En este caso, se lleva a cabo el fraccionamiento de las protenas de la muestra mediante una electroforesis seguido de la transferencia de estas molculas a una membrana sinttica donde se procede a su caracterizacin con anticuerpos especficos. Inicialmente, las protenas de la muestra se someten a un tratamiento para dotarlas de carga negativa (esta carga negativa es proporcional al peso molecular de cada protena). Con la aplicacin de un campo elctrico estas protenas cargadas se desplazan a travs del gel de poliacrilamida hacia el polo positivo a velocidades distintas dependiendo de su masa. Cuando finaliza esta etapa pasan a una membrana de nitrocelulosa siguiendo el mismo patrn que presentan en el gel. La transferencia entre los dos soportes puede realizarse de distintos modos aunque lo ms habitual es el empleo de una corriente elctrica. A continuacin, se prepara una disolucin con anticuerpos frente a la protena o alrgeno que se desea detectar. Durante la fase de incubacin estos anticuerpos forman complejos con las protenas de la membrana que reconocen. En ocasiones, se emplean sueros de pacientes alrgicos al ltex donde los anticuerpos presentes son inmunoglobulinas tipo E especficas frente a los alrgenos del ltex. En una segunda incubacin se aade otro anticuerpo capaz de unirse al primero. ste ltimo tiene ligada una enzima que cataliza la formacin de determinados compuestos coloreados insolubles. En la figura 9 se muestran las principales etapas de la inmunodeteccin en membrana o Western Blot.
Figura 9. Inmunodeteccin en membrana o Western Blot para la deteccin del componente de inters (componente A) de una muestra compleja.
Puntos fuertes -Es un mtodo altamente especfico. - En la inmunodeteccin en membrana las protenas a analizar se encuentran ms accesibles porque se sitan en la superficie de la membrana sinttica y no estn embebidas en un gel como sucede en una inmunoelectroforesis. Puntos dbiles - Este mtodo no permite cuantificar los alrgenos detectados. - Su tiempo de realizacin es bastante largo, al menos se requieren 24 horas para obtener los resultados.
3.6. Evaluacin y comparacin de mtodos analticos

En este punto se establece una comparativa entre los distintos mtodos analticos descritos en este informe. Para ello se ha considerado una serie de caractersticas que se enumeran a continuacin: Tipo de anlisis: clasificacin en mtodos qumicos o inmunolgicos. Estandarizacin: tcnicas estandarizadas por alguno de los organismos nacionales o internacionales de estandarizacin. Especificidad: capacidad de un mtodo analtico para distinguir el compuesto de inters, en este caso un alrgeno del ltex, entre otros de caractersticas muy similares. Para el LEAP y el ELISA de inhibicin puede obtenerse una especificidad mayor si se emplean determinados anticuerpos (inmunoglobulinas tipo E). Coste de la instrumentacin: inversin para disponer del equipamiento necesario para cada tcnica analtica. Cualificacin del personal: grado de especializacin del grupo de trabajo requerido para efectuar los anlisis. Correlacin con la respuesta alrgica: correlacin entre las protenas detectadas por un mtodo concreto y la respuesta alergnica obtenida mediante prick test (prueba cutnea realizada al paciente para confirmar su sensibilizacin frente al ltex). Reproducibilidad: capacidad de obtener el mismo resultado en mediciones diferentes realizadas en las mismas condiciones a lo largo de periodos dilatados de tiempo. En este caso, se expresa el porcentaje de la variacin entre las mediciones. Sensibilidad o lmite de deteccin: capacidad para detectar compuestos presentes en la muestra en concentraciones muy pequeas. Para este estudio se indica la concentracin ms baja que la tcnica analtica es capaz de detectar (en g/g de producto). Tiempo de anlisis: tiempo que consume el anlisis de una muestra sin considerar el proceso de extraccin de las protenas del ltex. Coste del anlisis: coste aproximado sin IVA del anlisis de una muestra de acuerdo con los precios establecidos por los servicios de anlisis de varias entidades consultadas. Para la recopilacin de los datos necesarios en este estudio comparativo se ha solicitado la colaboracin de varios investigadores y empresas nacionales e internacionales, que son expertos en las tcnicas analticas consideradas, adems de revisar la informacin indicada en las siguientes referencias bibliogrficas: T. Palosuo, S. Makinen-Kiljunen, H. Alenius, T. Reunala, E. Yip y K. Turjanmaa (1998) Measurement of natural rubber latex allergen levels in medical gloves by allergen-specific IgE-ELISA inhibition, RAST inhibition, and skin prick test. Allergy. vol. 53 (1), pg. 59-67. T. Palosuo, H. Alenius y K. Turjanmaa (2002) Quantitation of latex allergens. Methods, vol. 27, n 1, pg. 52-58. D.H. Beezhold, D.A. Kostyal y V.J. Tomazic-Jezic (2002) Measurement of latex proteins and assessment of latex protein exposure. Methods, vol. 27, pg. 46-51.
European Commission, Directorate General XII, Science, Research and Development. Directorate C: Industrial and Material Technologies Programm Measurements and Testing. Proyecto de investigacin. N de referencia: MAT-1-CT 940060. En la tabla 5 se muestra de forma resumida la comparacin entre las distintas tcnicas analticas aplicables a los alrgenos del ltex considerando el listado de caractersticas mencionado anteriormente. Esta comparacin se realiza tomando tres valores para cada caracterstica (alto, medio o bajo) como se indica en la leyenda. Por ltimo, en la siguiente tabla se recogen algunos datos ms especficos para aquellas tcnicas analticas que permiten cuantificar los alrgenos (o protenas) del ltex:
Tabla 5. Resumen de las principales caractersticas de los mtodos analticos descritos en este informe, que pueden emplearse para la deteccin y cuantificacin de los alrgenos del ltex en productos de uso cotidiano y mdico.
Tabla 6. Datos correspondientes a varias caractersticas consideradas para la comparacin de algunas de las tcnicas analticas recogidas en este informe. (6) (7) (12) (13)
3.7. Propiedad industrial

El nmero de patentes y solicitudes de patente identificadas en relacin con el anlisis de alrgenos del ltex en productos de uso cotidiano y mdico es escaso. Se han localizado cinco invenciones que se detallan a continuacin. Tres de ellas describen la produccin de protenas alergnicas del ltex, otra trata sobre la obtencin de anticuerpos frente a los alrgenos del ltex y la restante se refiere a un mtodo inmunolgico para su deteccin.
EP1604996
Complejo proteico alergnico de la goma natural
Tipo de documento Solicitud de patente de invencin A2. Fecha de publicacin 14/12/2005 Solicitante (pas) Instituto de Investigaciones sobre el Caucho (Malasia). Contenido tcnico Produccin de la protena alergnica del ltex Hev b 4 y de anticuerpos frente a ella para su utilizacin en ensayos de cuantificacin de este alrgeno en productos fabricados con ltex.
EP1350798
Protena alergnica Hev b 3 de la goma natural, su produccin y uso en ensayos
Tipo de documento Solicitud de patente de invencin A1. Fecha de publicacin 08/10/2003 Solicitante (pas) Universiti Sains Malaysia (Malasia) Instituto de Investigaciones sobre el Caucho (Malasia). Contenido tcnico Produccin de la protena alergnica del ltex Hev b 3 y su utilizacin en ensayos de cuantificacin de este alrgeno en la goma natural y en productos fabricados con ltex.
WO2001061305
Mtodos inmunoqumicos
Tipo de documento Solicitud de patente de invencin va PCT (Tratado de Cooperacin en Materia de Patentes). Fecha de publicacin 23/08/2001 Solicitante (pas) FIT Biotech (Finlandia). Contenido tcnico Mtodo de anlisis inmunolgico que permite la deteccin de los alrgenos del ltex presentes en productos fabricados con goma natural. WO199507298 Antgenos de la goma natural asociados a alergias
Tipo de documento Solicitud de patente de invencin va PCT (Tratado de Cooperacin en Materia de Patentes). Fecha de publicacin 16/03/1995 Solicitante (pas) Ansell Inc. (EE.UU.) Contenido tcnico Obtencin de anticuerpos frente a una protena alergnica del ltex y su utilizacin en la determinacin de los alrgenos del ltex en productos fabricados con este material. US6759517 Protenas alergnicas de la goma natural, su produccin y uso en ensayos
Tipo de documento Patente de invencin. Fecha de publicacin 06/07/2004 Solicitantes (pas) Universiti Sains Malaysia (Malasia) Instituto de Investigaciones sobre el Caucho (Malasia). Contenido tcnico Produccin de protenas alergnicas del ltex y su utilizacin en ensayos de cuantificacin de alrgenos del ltex en la goma natural y en productos fabricados con ltex.
Adems, se han localizado otras seis invenciones (una de ellas correspondiente a una empresa espaola) vinculadas a la alergia al ltex que se recogen en la siguiente tabla. La mayor parte de estos casos tambin describen la obtencin de anticuerpos y protenas alergnicas del ltex. Sin embargo, a diferencia de las anteriores en estas patentes y solicitudes no se reivindica especficamente su aplicacin para detectar la presencia de alrgenos en productos de uso cotidiano y mdico.
Tabla 7. Otras patentes relacionadas con la alergia al ltex.
4. Catlogo de empresas
A continuacin, se enumeran las empresas vinculadas a la deteccin de los alrgenos del ltex que se han identificado. La informacin correspondiente a cada una de ellas se presenta en unas fichas donde se indican los datos de contacto y la pgina web de la compaa, una breve descripcin sobre ella, los productos y servicios que ofrecen relacionados con el tema de inters de este informe y las vas para adquirirlos y solicitarlos as como los distribuidores para nuestro pas. Para identificar de forma rpida el tipo de producto/ servicio de que disponen las empresas segn los mtodos analticos descritos anteriormente se utilizan los siguientes iconos:
4.1 Productos y servicios de deteccin

En este punto se detallan las empresas que comercializan productos y/o cuentan con servicios de anlisis para la deteccin de los alrgenos del ltex en distintos objetos y materiales. Se han encontrado seis empresas en total entre las que destaca la compaa Quattromed que dispone de kits especficos para la determinacin de varios alrgenos del ltex por un mtodo inmunolgico.
Catlogo de empresas - 33
Sigma Aldrich Qumica S.A. Datos de contacto Ronda de Poniente, 3, 2 planta, apdo. de correos 278 28760 Tres Cantos (Madrid) Tel.: 900 101 376 Fax: 900 102 028 Correo electrnico: escustsv@sial.com
www.sigmaaldrich.com
Descripcin Filial espaola del grupo empresarial Sigma-Aldrich Corp. dedicado a la produccin y comercializacin de un amplio catlogo de productos qumicos y biolgicos, kits, reactivos y suministros de laboratorio para la investigacin cientfica en ciencias de la vida, biotecnologa y qumica y para el desarrollo y la fabricacin farmacutica y qumica. Productos Kits compuestos por distintos reactivos qumicos para determinar el contenido total de protena de una muestra de acuerdo con el mtodo de Lowry modificado: Total Protein Kit TP0200 Este kit tiene un precio de 71,50 a + IVA y permite realizar alrededor de 50 ensayos. Total Protein Kit TP0300 El precio de este producto es 129,50 a + IVA y con l pueden llevarse a cabo unos 200 ensayos. Persona de contacto Jos Martnez Valentn Dpto. Atencin al Cliente Tel.: 916 572 069 Fax: 914 905 783 Correo electrnico: jose.martinez@sial.com Solicitud de productos La propia empresa distribuye estos productos en nuestro pas. A travs de su pgina web puede accederse a un servicio de compras en lnea: www.sigmaaldrich.com/Area_of_Interest/Europe_Home/Spain/Pedidos.html
Pierce Biotechnology Inc. Datos de contacto 3747 N. Meridian Road, P.O. Box 117 Rockford, 61105 Illinois (EE.UU.) Tel.: +815 968 0747 Fax: +815 968 8148 Correo electrnico: cs@piercenet.com
www.piercenet.com
Descripcin Pierce Biotechnology forma parte del Grupo multinacional Thermo Fisher Scientific dedicado a la comercializacin de equipos e instrumentacin analtica y diversos suministros de laboratorio. Esta compaa se centra concretamente en el desarrollo y distribucin de productos para la investigacin en protemica. Productos Modified Lowry Protein Assay Kit Kit que contiene los reactivos necesarios para realizar ensayos de cuantificacin de la protena total de una muestra mediante el mtodo de Lowry modificado. Este kit permite realizar alrededor de 480 ensayos. Su coste es de 164,45 a + IVA y para pedidos inferiores a 180 a hay que aadir 20 a + IVA de gastos de envo. Persona de contacto Elena Torres Responsable de Atencin al Cliente, Cultek S.L. Tel.: 913 340 027 Fax: 913 581 761 Correo electrnico: etorres@cultek.com Solicitud de productos En Espaa los productos de Pierce se distribuyen a travs de la empresa: Cultek S.L. www.cultek.com Avda. Cardenal Herrera Oria, 63 Tel.: 917 290 333 Fax: 913 581 761 28034 Madrid Correo electrnico: info@cultek.com
Geno Technology Inc. Datos de contacto 92 Weldon Parkway, St. Louis, 63043-9989 Missouri (EE.UU.) Tel.: +314 991 6034 Fax: +314 991 1504 Correo electrnico: genoteca@gbiosciences.com
www.gbiosciences.com
Descripcin Geno Technology est especializada en el desarrollo de nuevos productos para la investigacin en ciencias de la vida, en concreto, en los campos de protenas y cidos nucleicos. Entre la amplia variedad de productos que ofrecen se encuentran ensayos para protenas, kits de electroforesis, purificacin de protenas, inhibidores de proteasas, kits para el aislamiento de plsmidos, ADN genmico y ARN, etc. Productos Lowry Protein Assay Kit formado por diversos reactivos para la determinacin del contenido total de protenas de una muestra basado en el mtodo de Lowry modificado. Este producto se ha diseado con fines educativos y permite el anlisis de un nmero de muestras reducido (24 muestras/ kit). Persona de contacto Sol Recober Responsable de Ventas, S.G. Servicios Hospitalarios S.L. Correo electrnico: pedidos@sgsh.es Solicitud de productos En Espaa los productos de Geno Technology los distribuye la empresa: S.G. Servicios Hospitalarios S.L. c/ Costa Brava, 25-29, local 6. 08030 Barcelona.
www.sgsh.es
Tel.: 93 284 97 77 Fax: 93 284 43 08 Correo electrnico: sgsh@sgsh.es
Bio-Rad Laboratories S.A. Datos de contacto Edificio M Miniparc II C/ Calndula, 95, Soto de la Moraleja 28109 Alcobendas (Madrid) Tel.: 915 905 200 Fax: 915 905 217
www.bio-rad.com
Descripcin Bio-Rad Laboratories es una multinacional que lleva cincuenta aos proporcionando productos y servicios para el diagnstico clnico y la investigacin en ciencias de la vida. Se dedica a la fabricacin y distribucin de productos para electroforesis, cromatografa, inmunoensayos, microbiologa, bioinformtica, etc. En nuestro pas cuenta con dos sedes, una en Barcelona y otra en Madrid. Productos Dos kits que incluyen los reactivos qumicos para llevar a cabo la determinacin del contenido total de protenas mediante el mtodo Lowry modificado: DC Protein Assay Este kit permite realizar aproximadamente 450 ensayos y tiene un precio de 208 a + IVA. RC DC Protein Assay Al igual que el anterior, este kit permite analizar alrededor de 450 muestras y su precio es 331 a + IVA. Solicitud de productos Para solicitar estos productos puede contactarse por telfono con la delegacin de Bio-Rad en Madrid o bien realizar los pedidos a travs de la pgina web.
Nelson Laboratories Inc. Datos de contacto 6280 S. Redwood Road Salt Lake City, 84123 Utah (EE.UU.) Tel.: 801 290 7500/ 800 826 2088 Fax: 801 963 2630 Correo electrnico: clientservices@nelsonlabs.com
www.nelsonlabs.com
Descripcin Desde el ao 1985 Nelson Laboratories proporciona servicios de anlisis y control de calidad de diversos productos, como equipos y dispositivos de uso mdico y farmacutico, evaluacin de materiales barrera y envases, establecimiento de buenas prcticas en bancos de tejidos, etc. Servicios Modified Lowry Protein Assay Deteccin del contenido total de protenas en guantes a partir del mtodo de Lowry modificado segn el protocolo estandarizado estadounidense ASTM D5712. Latex ELISA for Antigenic Protein (LEAP) Cuantificacin de los alrgenos del ltex mediante un test ELISA indirecto o LEAP (Latex ELISA for Antigenic Protein).
Quattromed Ltd. Datos de contacto Nooruse 9, 50411 Tartu (Estonia) Tel.: +372 737 7070 Fax: +372 737 7077 Correo electrnico: quattromed@quattromed.com
www.quattromed.com
Descripcin Creada en el ao 1999 esta empresa biotecnolgica surge como una spin-off de la Universidad de Tartu. Cuenta con unos 80 empleados y se dedica principalmente al diagnstico molecular y la investigacin farmacutica. En 2005 adquiere las reas de negocio relativas a anticuerpos monoclonales y kits de deteccin de los alrgenos del ltex de la compaa finlandesa FIT Biotech (www.fitbiotech.com). Productos FITkit Serie de kits para la determinacin de los alrgenos del ltex Hev b 1, Hev b 3, Hev b 5 y Hev b 6.02. stos son los alrgenos ms relevantes desde el punto de vista clnico en las reacciones alrgicas frente al ltex que conservan su capacidad alergnica en el producto manufacturado. Si se adquieren por separado el precio del kit es 350 a + IVA mientras que los cuatro juntos ascienden a 1.400 a + IVA. Cada kit permite analizar un total de 40 muestras. Servicios Servicio de anlisis FITkit Deteccin y cuantificacin de los alrgenos del ltex Hev b 1, Hev b 3, Hev b 5 y Hev b 6.02 en distintos productos de uso cotidiano y mdico mediante los kits FITkit. El coste de este servicio es de 120 a + IVA por muestra, con descuentos especiales en funcin del nmero de muestras a analizar y en el caso de proyectos de larga duracin. Persona de contacto Hardi Tamm Responsable de Ventas y Marketing Tel.: +372 737 7045 Mvil: +372 515 0857 Correo electrnico: hardi.tamm@quattromed.com
Solicitud de productos/ servicios La propia empresa se encarga de la distribucin internacional de estos kits y el pedido puede realizarse a travs del siguiente correo electrnico: sales@quattromed.com Las instrucciones para el envo de muestras dirigidas al Servicio de Anlisis pueden encontrarse en la pgina web: www.quattromed.com/index2.php?lang=eng&main_id=80
4.2. Alrgenos del ltex y anticuerpos

Aparte de las empresas anteriores, se han detectado otras dedicadas a la produccin de alrgenos del ltex y de anticuerpos frente a ellos. En los ltimos aos se ha recopilado gran cantidad de informacin que ha permitido caracterizar muchas protenas de inters, entre las que se encuentran los alrgenos del ltex. Gracias a estos datos sobre sus propiedades fsico-qumicas, secuencia, estructura molecular, etc. pueden sintetizarse en el laboratorio mediante ingeniera gentica. Estos alrgenos recombinantes son una alternativa a la utilizacin de los alrgenos nativos extrados de la goma natural. En comparacin con ellos, los alrgenos recombinantes son sustancias bien definidas y puras que pueden prepararse en concentraciones estandarizadas. Se emplean en el diagnstico y tratamiento de la alergia al ltex as como en la determinacin de la capacidad alergnica de determinados productos de uso cotidiano y mdico donde sirven como patrones. Su uso mejora la sensibilidad y fiabilidad de los anlisis. En las siguientes fichas se incluyen dos empresas que comercializan alrgenos del ltex. La primera proporciona alrgenos recombinantes mientras que la segunda dispone de un extracto proteico de Hevea brasiliensis:
Biomay AG Datos de contacto Viena Competente Center Lazarettgasse, 19 A-1090 Vienna (Austria) Tel.: +43 1 7966 296/ 100 Fax: +43 1 7966 296/ 111 Correo electrnico: info@biomay.com
www.biomay.com
Descripcin Creada en 1984, Biomay es una empresa biotecnolgica dedicada a la investigacin y desarrollo de nuevas tecnologas y productos para el diagnstico y tratamiento de las alergias, en especial, mediante la produccin de alrgenos recombinantes. Esta compaa colabora estrechamente con la Universidad de Medicina de Viena y la Universidad de Salzburgo. Productos Alrgenos recombinantes del ltex Esta empresa comercializa los siguientes alrgenos recombinantes para su uso en investigacin: Hev b 1, Hev b 3, Hev b 5, Hev b 6, Hev b 7, Hev b 8, Hev b 9, Hev b 10 y Hev b 11. El precio de estos compuestos oscila entre 460 a 550 a/ mg. + IVA Solicitud de productos/ servicios Los pedidos pueden realizarse a travs de su servicio en lnea, por correo electrnico (info@biomay.com) o fax (+43 / 1 / 79 66 296-111). El tiempo aproximado para su recepcin es de una semana.
ALK Abell S.A. Datos de contacto c/ Miguel Fleta, 19 - 28037 Madrid Tel: 91 327 61 01 - Fax: 91 327 61 03
www.alk-abello.com
Descripcin ALK Abell S.A. es la empresa subsidiaria en nuestro pas de la firma ALK Abell A/ S cuya sede central se encuentra ubicada en Dinamarca. Se trata de un grupo que lidera a escala internacional el mbito de la fabricacin de extractos alergnicos destinados al diagnstico y tratamiento especfico de las enfermedades alrgicas. Productos Extracto de Hevea brasiliensis Extracto glicerado al 50% presentado en viales de 2 ml con un contenido en protenas en torno a 0,5 mg/ ml cuyo precio es de 25,65 a/ vial. Persona de contacto Domingo Barber Hernndez Director de Investigacin y Desarrollo Correo electrnico: domingo.barber@alk-abello.com
Por otra parte, en los mtodos inmunolgicos se utilizan anticuerpos especficos frente a los alrgenos que se desea detectar. La produccin de estos anticuerpos puede realizarse bien mediante animales de experimentacin bien con cultivos de clulas modificadas genticamente. En el primer caso, se inyectan los alrgenos correspondientes en el animal. En respuesta a la presencia de estas molculas de origen externo su sistema inmune produce altas concentraciones de anticuerpos capaces de unirse especficamente a los alrgenos. Por ltimo, estos anticuerpos se aislan del suero sanguneo animal (anticuerpos policlonales). Otra alternativa es el empleo de lneas celulares manipuladas genticamente para que sinteticen y secreten anticuerpos (anticuerpos monoclonales) frente a los alrgenos del ltex. En este caso, los anticuerpos se recuperan del sobrenadante que cubre el cultivo de clulas. Estos anticuerpos presentan una serie de caractersticas que permite su purificacin, marcaje y deteccin de manera reproducible y predecible. Algunos ejemplos de empresas que comercializan anticuerpos frente a los alrgenos del ltex se muestran a continuacin:
United States Biological Inc. Datos de contacto P.O. Box 261 Swampscott, 01907 Massachusetts (EE.UU.) Tel.: 800 520 3011/ 781 639 5092 Fax: 781 639 1768 Correo electrnico: service@usbio.net
www.usbio.net
Descripcin United States Biological es una empresa especializada en la produccin y comercializacin de reactivos para biologa molecular, medios de cultivo, enzimas y anticuerpos, entre otros. Productos Anticuerpos policlonales de hevena Esta empresa comercializa dos anticuerpos policlonales de hevena (H2034-80 y H20334-80A) que pueden utilizarse en detecciones mediante ELISAs y Western Blots. Los precios de estos anticuerpos oscilan entre 350-425 a + IVA. Adems, disponen de un pptido de hevena (H2034-80B) que se emplea como control en distintos ensayos cuyo precio es 135 a + IVA. Persona de contacto Luis M. Jimnez Rbago (Deltaclon S.L.) Solicitud de productos Estos productos los distribuye en nuestro pas la empresa: Deltaclon S.L. www.deltaclon.com c/ Javier del Quinto, n 4 Tel.: 917 645 364 Fax: 913 814 275 28043 Madrid Correo electrnico: info@deltaclon.com
Alpha Diagnostics Inc. Datos de contacto 6203 Woodlake Center Drive, San Antonio, 78244 Texas (EE.UU.) Tel.: 210 561 9515/ 800 786 5777 Fax: 210 561 9544
www.4adi.com
Descripcin Alpha Diagnostic International (ADI) est especializada en el desarrollo, fabricacin y distribucin de gran cantidad de reactivos para ELISAs. Adems, es uno de los mayores proveedores de servicios personalizados de sntesis de pptidos y anticuerpos policlonales. Productos Anticuerpos policlonales de hevena Esta compaa dispone de dos anticuerpos policlonales de hevena (Hevin11-A y Hevin11-S) para realizar ELISAs y Western Blots. Tambin comercializan un pptido de hevena control (Hevin11-P). El precio de estos productos vara entre 62 a 201 a Servicios Disponen de un servicio para sintetizar pptidos y anticuerpos policlonales. Persona de contacto Luis M. Jimnez Rbago (Deltaclon S.L.) Solicitud de productos Estos productos los distribuye en nuestro pas la empresa: Deltaclon S.L. www.deltaclon.com c/ Javier del Quinto, n 4 Tel.: 917 645 364 Fax: 913 814 275 28043 Madrid Correo electrnico: info@deltaclon.com
VTT Technical Research Centre of Finland Datos de contacto P.O. Box 1000 FI-02044 VTT (Finlandia) Tel.: 358 20 722 111 Fax: 358 20 722 7001 Correo electrnico: kirjaamo@vtt.fi
www.vtt.fi
Descripcin VTT es una organizacin de expertos cuyo objetivo es el desarrollo de nuevas tecnologas e innovaciones de alto valor aadido que contribuyan a aumentar la competitividad de las compaas internacionales, de la sociedad y de otros usuarios en todas las etapas del proceso de innovacin. Productos Anticuerpos monoclonales de hevena Esta empresa dispone de la tecnologa para producir anticuerpos monoclonales IgE humanos para reconocer hevena. Actualmente, VTT busca socios tecnolgicos para el desarrollo comercial de este proyecto. Persona de contacto Jukka Jms Responsable de Desarrollo de Negocio Tel.: 358 20 722 4771 Mvil: 358 40 508 1531 Correo electrnico: jukka.jamsa@vtt.fi
Fax +358 20 722 7090
Tambin se ha identificado una empresa que, a diferencia de las anteriores, comercializa anticuerpos frente a los alrgenos del ltex de origen humano:
PlasmaLab Internacional Inc. Datos de contacto 3128 Norton Avenue 98201 Everett, Washington (EE.UU.) Tel: 425 258 3653 Fax: 425 259 1854 Correo electrnico: info@plasmalab.com
www.plasmalab.com
Descripcin Desde el ao 1985 PlasmaLab se ha convertido en uno de los mayores proveedores y distribuidores de productos in vitro para diagnstico humano. La compaa dispone de una licencia de la FDA para poder recolectar plasma de donantes con diversas enfermedades. Productos Anticuerpos humanos frente a los alrgenos del ltex.
4.3. Otras empresas

Aparte de las anteriores, se han encontrado otras dos empresas que ofrecen distintos productos y servicios de los expuestos anteriormente:
Bial Aristegui S.A. Datos de contacto c/ Alameda de Urquijo, 27 - 48008 Bilbao Tel.: 34 94 443 8000 - Fax: 34 94 443 8016 Correo electrnico: bilbao@bial.es
www.bial.com
Descripcin Bial Industrial Farmacutica es una empresa del grupo Bial, grupo farmacutico internacional cuyo objetivo principal es el desarrollo y suministro de soluciones teraputicas en diversas reas de la salud. En concreto, en las instalaciones de nuestro pas se centraliza la produccin de vacunas antialrgicas y diagnsticos para pruebas de alergia. Productos Extracto de ltex Esta constituido por las protenas extradas de la goma ltex y las presentes en el suero de ltex, fracciones ambas obtenidas a partir de muestras de ltex natural con baja concentracin de amoniaco. Se presenta como producto liofilizado en viales (0,40 a/mg IVA inc.) o recompuesto en diluyente de prick para prueba cutnea (24,65 a/vial de 2 ml, IVA inc.). Hev b 1 recombinante Alrgeno recombinante expresado en E. coli. Se presenta en viales con 0,5 mg (386 a/u, IVA inc.) o con 1 mg (448 a/u, IVA inc.) ELISA para cuantificacin del alrgeno mayor Hev b 1 Sistema de enzimoinmunoensayo, basado en anticuerpos monoclonales, para la determinacin cuantitativa del contenido del alrgeno mayor Hev b 1 en extractos proteicos de diverso origen. Presentacin y precio de acuerdo a cada solicitud expresa. Servicios Cuantificacin de Hev b 1 en extractos proteicos de diverso origen (10,4 a/determinacin, IVA inc.) o en muestras de productos como guantes, globos, tapones, etc. (31,2 a/extraccin + determinacin, IVA inc.). Persona de contacto Alberto Martnez Grate Director de Investigacin y Desarrollo Correo electrnico: alberto.martinez@bial.com Solicitud de productos/ servicios A travs del telfono, fax o correo electrnico consignados en la direccin de contacto.
Akron Rubber Development Laboratory Inc. - ARDL Datos de contacto 2887 Gilchrist Rd. - Akron, Ohio 44305 (EE.UU.) Tel.: (330) 794-6600 - Fax: (330) 794-6610 Correo electrnico: answers@ardl.com
www.ardl.com
Descripcin ARDL se fund en 1962 por Robert Simples. Durante los ltimos 45 aos ARDL se ha dedicado a ofrecer servicios relacionados con las industrias del caucho, plstico y ltex, establecido como laboratorio internacional independiente. Productos Protenas antignicas de ltex amoniacal IRM-913 Estas protenas son utilizadas para realizar test ELISA de inhibicin segn el estndar ASTM D6499. El coste de 15 viales es de 508 a y permite analizar unas 7500 muestras mediante el ELISA de inhibicin, empleando la cantidad adecuada de suero (IRM 914). Suero IRM-914 De la Industria de Materiales de Referencia (IRM) 914, es como se designa el suero de caucho natural amoniacal, que es utilizado como suero de referencia segn los procedimientos de la norma ASTM D6499 para el ELISA de inhibicin. El suero se obtiene a partir de protenas del caucho natural purificadas parcialmente para que provoquen una respuesta inmune en conejos. El coste de un vial de suero es de 124 a y permite analizar 7500 muestras mediante el ELISA de inhibicin, empleando la cantidad adecuada de protenas de ltex (IRM 913). Servicios Servicio de anlisis de guantes de ltex Anlisis de protenas en guantes de ltex, mediante el mtodo Lowry modificado siguiendo la norma ASTM 5712. Solicitud de productos/ servicios Debbie S. Coffee Responsable de ventas Tel.: (330) 794-6600 Correo electrnico: answers@ardl.com
4.4. Legislacin y normalizacin
Legislacin
En la sociedad actual el empleo del ltex es cada vez mayor, estando presente en muchos productos de uso cotidiano y, especialmente, en productos del medio sanitario. Esto puede suponer un riesgo para las personas alrgicas al ltex que pueden sufrir exposiciones a este alrgeno sin tener conocimiento de ello. Este problema se agrava por la falta de informacin sobre los componentes de los distintos objetos y materiales. En Espaa la legislacin actual no establece requisitos especficos en materia de etiquetado que obliguen a indicar el contenido de ltex en un producto. La normativa desarrollada sobre la informacin que debe suministrarse al consumidor es ms general. Por ejemplo, en el mbito sanitario se aplican el Real Decreto 414/1996 sobre productos sanitarios (14) y el Real Decreto 1468/1988 sobre el reglamento de etiquetado, presentacin y publicidad de los productos (15), sin mencionar los alrgenos del ltex. No obstante, una de las excepciones existentes es el caso de los guantes de ltex. La Orden 1990/04367, de 15 de febrero (16), regula el etiquetado de los guantes, entre los que se incluyen los obtenidos de ltex natural, con la obligatoriedad de identificar los componentes de estos productos. La Ley y Reales Decretos de los que procede esta Orden junto con el resto de disposiciones de la legislacin espaola en esta materia se recogen en la tabla 8. A pesar de la escasa regulacin sobre este mbito, en los ltimos aos se han llevado a cabo algunas iniciativas, como las recomendaciones de la Comisin Tcnica de Seguridad del Instituto Nacional de Consumo para que los productos que contengan ltex incorporen una indicacin en su etiquetado. Tambin se ha presentado en el ao 2007 ante las Cortes Generales una proposicin no de ley para mejorar la situacin de las personas que padecen alergias alimentarias y al ltex. En ella se pretende la actuacin conjunta del Gobierno y las comunidades autnomas para garantizar el correcto y completo etiquetado de los productos alimenticios y el establecimiento de normas relativas a su manipulacin teniendo en cuenta este tipo de afecciones. Adems, esta proposicin contempla compensar desde un punto de vista econmico el mayor volumen de gastos al que hacen frente las personas alrgicas como consecuencia de su patologa. Asimismo, se menciona que la Agencia Espaola de Seguridad Alimentaria y Nutricin, en el marco de su comit cientfico, propiciar el estudio de la evaluacin del riesgo de exposicin al ltex por va alimentaria (17). El resultado ha sido la publicacin en Noviembre del 2007 de una Recomendacin para limitar el uso de guantes de ltex en la industria alimentaria. La Agencia Espaola de Medicamentos y Productos Sanitarios, ha emitido en 2008 la Circular nmero 2 sobre excipientes, que dicta las normas para que, aunque el ltex no es un excipiente propiamente dicho, en la informacin de medicamentos se especifique si lo contienen. La tabla que se muestra a continuacin indica las disposiciones legales ms importantes realizadas en Espaa con relacin al etiquetado de los productos que contienen ltex.
Tabla 8. Marco legislativo espaol que puede afectar a los productos fabricados o que contienen ltex.
En otros pases como EE.UU. se han desarrollado polticas que regulan el etiquetado de los productos sanitarios que contienen ltex. En la tabla 12 se resumen las iniciativas que la FDA (Administracin Americana de Alimentos y Frmacos) ha seguido hasta llegar, en 1998, a la aprobacin de una norma sobre el etiquetado de estos productos. Esta norma obliga a etiquetar todos los productos sanitarios que presenten ltex natural y prohbe el uso del trmino hipoalergnico. Entre las iniciativas realizadas en EE.UU. para la obtencin de esta norma se incluye la elaboracin de guas de recomendaciones. De la misma manera, en Europa un grupo de expertos en productos sanitarios de la Comisin Europea ha redactado una gua sobre dispositivos mdicos para proponer el etiquetado de todos los objetos y materiales mdicos de ltex (19). En Espaa tambin se han realizado guas de recomendaciones para incorporar una indicacin en la etiqueta de los productos con ltex de caucho natural. Sera deseable que en nuestro pas o en Europa se alcanzara una regulacin similar a la estadounidense e, incluso, que sta abarcara productos fuera del mbito sanitario. De este modo se garantizara la seguridad en el uso de ciertos productos para los pacientes alrgicos al ltex.
Tabla 9. Evolucin de las iniciativas desarrolladas por la FDA en materia de etiquetado de productos que pueden contener ltex. (20)
Normalizacin
La normalizacin o estandarizacin es la redaccin y aprobacin de normas que se establecen para simplificar, unificar y especificar distintas actividades cientficas, industriales o econmicas con el fin de ordenarlas y mejorarlas. De este modo, se persigue evitar errores de identificacin y se permiten los intercambios internacionales. Una norma es un documento de aplicacin voluntaria que contiene especificaciones tcnicas basadas en los resultados de la experiencia y del desarrollo tecnolgico. Existen diversos criterios para clasificarlas: Por mbito de aplicacin, pueden ser normas nacionales o internacionales. Por contenido, pueden ser normas cientficas, que indiquen por ejemplo definiciones de magnitud, unidades y smbolos, pero tambin pueden ser normas industriales que se refieran a las caractersticas de un producto o proceso. Hay diversos organismos nacionales e internacionales que se dedican a la elaboracin y aprobacin de estas normas. As, en Espaa la Asociacin Espaola de Normalizacin y Certificacin (AENOR) es la encargada de elaborar las normas espaolas (Normas UNE). En Europa esta labor la desempea el Comit Europeo de Normalizacin (CEN). De esta institucin forman parte 30 estados miembros de la Unin Europea y varios miembros asociados relacionados con asociaciones industriales, de consumidores, etc., que trabajan juntos para desarrollar los estndares europeos (ENs).
En el mbito internacional uno de los organismos ms importantes es la Organizacin Internacional para la Estandarizacin (ISO) que est compuesta por representantes de los organismos de normalizacin de diferentes pases. Esta organizacin produce normas internacionales industriales y comerciales que se conocen como normas ISO. La denominada originariamente Sociedad Americana para Ensayos y Materiales (ASTM) tambin elabora normas internacionales. La ASTM Internacional se dedica al desarrollo voluntario de normas tcnicas para materiales, productos, sistemas y servicios. En la siguiente tabla se indican los datos de las organizaciones que han estandarizado alguno de los mtodos de deteccin de los alrgenos del ltex descritos en este informe y la va para la adquisicin de las normas correspondientes.
Tabla 10. Principales organismos de normalizacin nacionales, europeos e internacionales.
Entre las tcnicas aplicables a la determinacin de los alrgenos del ltex se han elaborado normas para el mtodo de Lowry modificado, el anlisis de aminocidos por HPLC y el ELISA de inhibicin. En el primer caso, distintos organismos han desarrollado varias normas: normas ASTM D5712-05e1, ISO 10993-17 e ISO 12243:2003 a escala internacional, norma CEN/TC205 WG3 para Europa y norma UNE-EN455-3:2007 para nuestro pas. En concreto, esta ltima norma (UNE-EN455-3:2007) engloba tambin los estndares para el anlisis de aminocidos por HPLC en materiales que pueden contener ltex. Asimismo, los fabricantes de productos mdicos pueden adecuarse a ella de forma voluntaria puesto que recoge las indicaciones para guantes mdicos de un solo uso. En ella se hace referencia a la prohibicin de etiquetar estos productos como hipoalergnicos (21). Adems de los dos mtodos qumicos se ha estandarizado el ELISA de inhibicin por la Sociedad Americana para Ensayos y Materiales (ASTM D6499-03). En la siguiente tabla se resumen las normas activas hasta el momento sobre los mtodos de deteccin de alrgenos del ltex en productos y el coste de las mismas.
Tabla 11. Principales mtodos de deteccin de alrgenos del ltex estandarizados y coste de cada norma.
En este momento, la ASTM Internacional elabora una nueva norma para la estandarizacin de la medida de las protenas alergnicas del caucho natural mediante un mtodo inmunoenzimomtrico (WK16334). Con este mtodo podran cuantificarse determinadas protenas de Hevea brasiliensis como Hev b 1, Hev b 3, Hev b 5 y Hev b 6.02. Aparte de los estndares para las tcnicas de deteccin de los alrgenos del ltex existen otros relacionados con el control de calidad de los guantes de ltex que pueden ser de inters: ASTM D6124-06, mtodo analtico gravimtrico para medir los niveles de polvo residual en los guantes de uso mdico. ASTM D3577-06, especificaciones para guantes quirrgicos estriles. ASTM D3578-05, especificaciones para guantes de exploracin.
Catlogo de grupos de investigacin - 53
5. Catlogo de grupos de investigacin
En este epgrafe se indican los grupos de investigacin detectados en Espaa y en otros pases cuyas lneas de trabajo se relacionan con la deteccin de los alrgenos del ltex en productos de uso cotidiano y mdico. Aparte de estos grupos especializados, hay otros centros de investigacin con la experiencia y el equipamiento necesarios para desarrollar protocolos de anlisis siguiendo alguno de los mtodos de deteccin descritos en este informe. Para ello, sera preciso proporcionarles los patrones adecuados y los alrgenos y anticuerpos correspondientes.
5.1. Grupos de investigacin nacionales

Para identificar los grupos de investigacin espaoles relacionados con la determinacin de alrgenos del ltex se han realizado ms de una treintena de contactos entre aquellos que cuentan con publicaciones cientficas sobre esta cuestin. En la actualidad, prcticamente todos estos grupos han abandonado estas lneas de investigacin y se centran en otros temas ms o menos vinculados con la alergia al ltex. Se ha detectado un grupo de investigacin del Hospital Universitario de Gran Canaria Dr. Negrn que, en estos momentos, colabora en estudios sobre alergia al ltex con otros centros. ste cuenta con experiencia previa en mtodos de anlisis de alrgenos del ltex y podra estar interesado en el desarrollo de proyectos de investigacin en esta rea si recibiera financiacin para ello. Asimismo, se ha localizado otro grupo en el Instituto de Salud Carlos III ubicado en Madrid que ha trabajado con el mtodo Lowry. Al igual que el anterior, podra estar interesado en colaborar en proyectos sobre deteccin de alrgenos del ltex con apoyo externo para su financiacin. Los datos correspondientes a ambos grupos se describen a continuacin. Estos datos se han obtenido mediante un cuestionario que han cumplimentado los propios investigadores. En ellos se incluyen los recursos humanos destinados a la investigacin y la experiencia del equipo as como sus principales lneas de trabajo, proyectos ms recientes y oferta de servicios. Adems, se enumeran las lneas futuras de inters junto con las tendencias ms importantes, en opinin de estos expertos, en la deteccin y cuantificacin de los alrgenos del ltex en productos de uso cotidiano y mdico.
INSTITUCIN
Hospital Universitario de Gran Canaria Dr. Negrn
Servicio de Alergologa www.gobcan.es/sanidad/scs/hdn/salergia.html Barranco de la Ballena, s/n. 35010 Las Palmas de Gran Canaria Tel.: 928 45 01 22 Fax: 928 44 90 85 Correo electrnico: hospitaldrnegrin@gobiernodecanarias.org Responsable Carlos Blanco Guerra Subdirector mdico del Hospital Universitario de G.C. Dr. Negrn Correo electrnico: cblague@gobiernodecanarias.org 1. Grupo de investigacin Actualmente el grupo de investigacin, como tal, carece de personal. Por lo tanto, nos referimos a una Seccin de Alergologa con carcter asistencial, que consta de una Jefa de Seccin y cinco Facultativos Especialistas en Alergologa, adems de Mdicos Internos Residentes, con el correspondiente personal auxiliar sanitario (enfermeras, auxiliares) y administrativo, en cuyo seno se han realizado diversos estudios de investigacin, algunos de los cuales relacionados con la alergia al ltex. Quien ha dirigido esta lnea de investigacin sobre alergia al ltex, mencionado arriba como responsable de la misma, no es ms que uno de los cinco Alerglogos de dicha Seccin, dndose la circunstancia de que en el ltimo ao se encuentra fuera de la unidad, por lo tanto ajeno al trabajo asistencial y sin llevar directamente la investigacin, por encontrarse en situacin de reserva de plaza por desempeo de funciones superiores, en concreto, ejerciendo de Subdirector Mdico del Hospital. 2. Principales lneas de investigacin relacionadas con la deteccin de los alrgenos del ltex
Diagnstico de la alergia al ltex. Clnica del sndrome de alergia ltex-frutas. Identificacin de los alrgenos responsables del sndrome ltex-frutas. Caracterizacin de alrgenos del ltex. Estudio de la base gentica de la alergia al ltex. Prevalencia de sensibilizacin a los alrgenos de ltex.
3. Otras lneas de investigacin
Alergia a alimentos. Reactividad cruzada entre alrgenos y su repercusin clnica. Reacciones por caros. Alergia a medicamentos (intolerancia a anti-inflamatorios no esteroideos). Diagnstico etiolgico de alergia ocupacional.
4. Proyectos de investigacin
5. Servicios tcnicos
Laboratorio de Alergologa del Hospital: laboratorio pequeo en el que se realizan a demanda determinadas pruebas de inmunodeteccin o elaboracin de extractos alergnicos, normalmente en el contexto de proyectos de investigacin, pero que carece de personal propio y cartera de servicios. 6. Lneas futuras de inters para su grupo de investigacin
Alrgenos implicados en el sndrome ltex-frutas. Colaboracin con el grupo del Dr. Salcedo,
de la E.T.S. de Ingenieros Agrnomos de la Universidad Politcnica de Madrid.
Prevalencia de sensibilizacin a alrgenos de ltex. Colaboracin con el Dr. Timo Palosuo

del Instituto Nacional de Salud de Finlandia. 7. Barreras y limitaciones en la investigacin
Actualmente inactivo en cuanto a labor asistencial e investigacin (salvo colaboraciones mencionadas arriba), por ocupar desde hace un ao cargo de gestin sanitaria. Es posible que esta situacin cambie a corto plazo, pero en el momento actual el futuro inmediato es incierto. Carece en este momento de financiacin y de personal de investigacin.
8. Tendencias en la investigacin en la alergia al ltex
Desarrollo y evaluacin de mtodos diagnsticos en la alergia al ltex. Estudio de prevalencia de sensibilizacin a diferentes alrgenos del ltex. Deteccin y cuantificacin de alrgenos de ltex. Diagnstico separado por componentes de la alergia al ltex.
INSTITUCIN
Instituto de Salud Carlos III
Subdireccin General de Servicios Aplicados, Formacin e Investigacin Servicio de Productos Sanitarios www.isciii.es/htdocs/servicios/laboratorio/presentacion.jsp Ctra. Majadahonda-Pozuelo, km 2 28220 Majadahonda (Madrid) Tel.: 915 097 900 Fax: 915 097 044 Correo electrnico: psanitarios@isciii.es Responsable Pilar Daz del Valle Jefa de la Seccin de Biomateriales Correo electrnico: pilar.diaz@isciii.es 1. Grupo de investigacin El Laboratorio de Productos Sanitarios es un laboratorio de control de calidad de producto terminado. Ocasionalmente participa en proyectos de investigacin aplicada, bien evaluando los mtodos de ensayo de productos sanitarios que ya figuran en normas o que en un futuro van a formar parte de las normas bien estudiando el comportamiento de los productos simulando su utilizacin real.
2. Principales lneas de investigacin relacionadas con la deteccin de los alrgenos del ltex En el Laboratorio de Productos Sanitarios se pretende, con vistas a un futuro, poner a punto la tcnica de determinacin de protenas extrables en los guantes terminados que contengan ltex de caucho natural mediante la tcnica de HPLC. 3. Servicios tcnicos Determinacin de protenas extrables en disolucin acuosa (ensayo de Lowry modificado) en guantes mdicos de ltex natural.
4. Tendencias en la investigacin en la alergia al ltex Determinacin de protenas extrables en los guantes terminados que contengan ltex de caucho natural mediante la tcnica de HPLC.
5.2 Otros grupos de investigacin

Adems, se han localizado otros nueve grupos de investigacin extranjeros caracterizados por su larga trayectoria en la determinacin de alrgenos del ltex en distintos objetos y materiales. Cinco son europeos, tres estadounidenses y uno malayo. Varios de estos grupos ofrecen servicios de anlisis de productos de ltex. La informacin de cada uno de ellos se recoge en las siguientes fichas en las que se indican los datos y persona de contacto, una pequea descripcin del centro de investigacin, las lneas de investigacin relativas al anlisis de alrgenos del ltex y los servicios disponibles. Instituto de Investigacin de Medicina Ocupacional de la Seguridad Social Alemana (BGFA) www.bgfa.ruhr-uni-bochum.de/e Datos de contacto Centro de Alergologa e Inmunologa Ruhr-Universitt Bochum Brkle-de-la-Camp Platz 1 D 44789 Bochum (Alemania) Tel.: 49 234 3024 501 Fax.: 49 234 3024 505 Correo electrnico: bgfa@bgfa.ruhr-uni-bochum.de Descripcin El BGFA alemn es una institucin de la Ruhr Universitt Bochum cuyo objetivo es el desarrollo de medidas preventivas frente a las enfermedades ocupacionales as como mejorar su diagnstico y terapia. Esta institucin se compone de cinco centros que trabajan en medicina, epidemiologa, alergologa e inmunologa y toxicologa. Lneas de investigacin Deteccin y caracterizacin de los alrgenos presentes en el ltex natural. Mtodos analticos para la determinacin de los alrgenos y protenas del ltex. Alrgenos recombinantes del ltex. Alrgenos del ltex empleados en diagnstico e inmunoterapia. Servicios Ofrecen un servicio de deteccin del contenido de alrgenos del ltex en el aire as como en otros productos. Determinan la cantidad total de alrgenos recomendada por la ASTM. Persona de contacto Centro de Alergologa e Inmunologa Monika Raulf-Heimsoth
Responsable del centro Tel.: 49 234 302 4582 Correo electrnico: raulf@bgfa.ruhr-uni-bochum.de Universidad de Mnster Facultad de Medicina
derma.klinikum.uni-muenster.de
Datos de contacto Alergologa Clnica y Policlnica de Hautkrankheiten Von Esmarch Str., 58 D 48149 Mnster (Alemania) Tel.: 49 251 83 56506 Fax.: 49 251 83 58534 Correo electrnico: allergologie@mednet.uni-muenster.de Descripcin El Hospital Universitario de Mnster (UKM) es uno de los complejos hospitalarios ms grandes para la asistencia mdica especializada en el norte de Alemania. El UKM cuenta con el reconocimiento internacional gracias a su actividad investigadora que se realiza en treinta y dos institutos independientes y que abarca desde la investigacin bsica hasta la clnica. Lneas de investigacin Caracterizacin inmunolgica y molecular de nuevas isoformas del alrgeno del ltex Hev b 7. Inmunoterapia. Anlisis de la concentracin de protenas del ltex mediante diferentes mtodos en distintos laboratorios. Persona de contacto Randolf Brehler Responsable de la Unidad de Alergologa Correo electrnico: r.brehler@uni-muenster.de Hospital Universitario de Erlangen Departamento de Dermatologa
www.derma.med.uni-erlangen.de
Datos de contacto Hartmannstr, 14 - 91052 Erlangen (Alemania) Tel.: +49 913 185 32 799 - Fax: +49 913 185 33 854
Descripcin El Hospital Universitario de Erlangen es puntero en el mbito de investigacin y juega un papel esencial para la atencin mdica de la regin. La multitud de fundaciones y donaciones, entre las que se cuentan la financiacin de ocho ctedras, puede presentarse como evidencia de la confianza puesta en la Universidad por parte de entidades pblicas y privadas. Servicios Servicio de anlisis de guantes de ltex Extraccin y cuantificacin de protenas en guantes de ltex, mediante el mtodo Lowry modificado y anlisis de aminocidos siguiendo la norma EN 455-3. Para un anlisis completo son necesarios ocho pares de guantes. El coste del servicio vara en funcin del mtodo de anlisis empleado y de si se incluye o no el proceso de extraccin, variando entre 88-286 a + IVA. Servicio de anlisis de otros productos fabricados con ltex natural Realizan el proceso de extraccin y medidas de cuantificacin de protenas en productos que hayan sido fabricados con ltex natural, siguiendo la norma EN 4553. El precio de estos servicios oscila entre 66-242 a + IVA. Persona de contacto Dr. H.U. Koch Correo electrnico: koch@derma.imed.uni-erlangen.de Solicitud de servicios Las instrucciones para el envo de muestras y recepcin de resultados se pueden acordar con el servicio directamente a travs de correo electrnico. Los resultados del anlisis mediante el mtodo de Lowry modificado tardan unas dos semanas y cuatro semanas en el caso del anlisis de aminocidos (HPLC). Adems, puede solicitarse un certificado del anlisis.
Instituto Finlands de Salud Pblica Datos de contacto Laboratorio de Inmunobiologa Dpto. de Enfermedades Virales e Inmunologa Mannerheimintie 166 00300 Helsinki (Finlandia) Tel.: +358 0947 441 Correo electrnico: info@ktl.fi
www.ktl.fi/portal/english
Descripcin El Instituto Finlands de Salud Pblica perteneciente al Ministerio de Asuntos Sociales y Salud tiene como funciones principales proporcionar servicios de salud pblica y asistencia sanitaria, informar a travs programas de educacin sobre salud destinados a la poblacin, coordinar la investigacin mdica, etc. Colabora estrechamente con la Universidad de Tampere en temas de alergia al ltex. Lneas de investigacin Deteccin y caracterizacin de los alrgenos del ltex. Inmunologa celular y modelos animales para la alergia al ltex y otros tipos de alergia. Persona de contacto Timo Palosuo Profesor emrito Correo electrnico: timo.palosuo@ktl.fi Universidad de Tampere Datos de contacto Facultad de Medicina Dpto. de Dermatologa Teiskontie 35 33014 Tampereen Yliopisto (Finlandia) Tel.: 03 3551 7341 Fax: 03 3551 6164 Descripcin La Universidad de Tampere cuenta actualmente con cinco facultades: Ciencias Sociales, Humanidades, Ciencias Pedaggicas, Ciencias Econmicas y Empresariales y Medicina. A sta ltima pertenece el Dpto. de Dermatologa en el que se trabaja en alergia al ltex, departamento que colabora estrechamente con el Instituto Finlands de Salud Pblica en este mbito. Lneas de investigacin Investigacin clnica e inmunolgica de las reacciones de hipersensibilidad inmediata a las protenas de ltex natural. Persona de contacto Timo Reunala Correo electrnico: timo.reunala@uta.fi www.uta.fi/english
Fundacin Guthrie Datos de contacto LEAP Testing Service 1 Guthrie Square Sayre, 18840 Pensilvania (EE.UU.) Tel.: 570 8824645 Fax: 570 882 4666 Correo electrnico: LTS@guthrie.org
www.guthrie.org
Descripcin La Fundacin Guthrie es una organizacin sin nimo de lucro que proporciona acceso a asistencia sanitaria de calidad. sta incluye atencin primaria, especialidades mdicas, asistencia a domicilio, hospitales comunitarios, etc. Adems cuenta con un instituto dedicado a la investigacin en procesos celulares compuesto por varios laboratorios independientes. El LEAP Testing Service forma parte del Laboratorio de Inmunologa establecido en 1993 por Donald Beezhold, especializado en el anlisis de los niveles de protena de productos que contienen ltex. Lneas de investigacin Determinacin de los fragmentos de las protenas del ltex responsables de las reacciones alrgicas. Identificacin y caracterizacin de los alrgenos del ltex mediante tcnicas de biologa molecular e inmunolgicas. Hev b 7 y su homologa con la protena de la patata denominada patatina. Servicios Servicio de anlisis especializado en la deteccin y cuantificacin de alrgenos del ltex en distintos productos. Se ofrecen diferentes tcnicas analticas para la realizacin de los anlisis: LEAP Se trata de un test ELISA indirecto denominado LEAP (Latex ELISA for Antigenic Protein) que fue desarrollado por Donald Beezhold. Aunque este grupo fue pionero en el desarrollo de esta tcnica actualmente no la ofertan. ELISA de inhibicin Este ensayo se realiza para la deteccin de alrgenos del ltex en distintos productos siguiendo un protocolo estandarizado de la ASTM (ASTM D6499-03). El coste de este servicio es de 123 a/muestra para una sola muestra y de 88 /muestra si se trata de diez o ms muestras.
Lowry Mediante este mtodo miden la cantidad total de protena en extractos de ltex tras un proceso de precipitacin que disminuye las interferencias del ensayo. Tambin se realiza siguiendo un estndar de la ASTM (ASTM D5712-05). El anlisis tiene un coste de 106 a para una muestra y de 70 a si se trata de diez o ms muestras. Inmunodeteccin en membrana (Western Blot) Se trata de una tcnica cualitativa que permite identificar protenas en los extractos de ltex. En este caso, el anlisis de cuatro muestras tiene un coste de 141 a Persona de contacto David A. Kostyal Director de Calidad del LEAP Testing Service Correo electrnico: kostyal_david@guthrie.org Solicitud de productos/ servicios La solicitud de los servicios de anlisis puede realizarse cumplimentando un formulario disponible en su pgina web. Los resultados de estos anlisis se tienen de tres a cuatro das laborables despus de la recepcin de las muestras.
Universidad Johns Hopkins Facultad de Medicinawww.hopkinsmedicine.org Datos de contacto Alergia e Inmunologa Clnica Dpto. de Medicina 5501 Hopkins Bayview Circle 21224 Baltimore (EE.UU.) Tel.: 603 6156 1121 Fax: 603 6156 3299 Correo electrnico: basri@lgm.gov.my Descripcin La Facultad de Medicina de la Universidad Johns Hopkins tiene como objetivo fundamental la formacin de personal mdico as como la investigacin de los mecanismos, prevencin y tratamiento de las enfermedades, la asistencia sanitaria y la ciencia bsica. Lneas de investigacin Alergia al ltex.
Deteccin de alrgenos en productos mdicos y en el ambiente (mediante el test LEAP desarrollado por la Fundacin Guthrie). Diagnstico y respuesta inmune frente a la alergia.
Persona de contacto Robert G. Hamilton Director del Laboratorio de Referencia Correo electrnico: rhamilto@jhmi.edu
Centro de Equipamiento y Salud Radiolgica (CDRH) Datos de contacto Division of Biologics Office of Science and Engineering Laboratories 10903 New Hampshire Ave WO64-4011 Life Sciences Bldg 20993 Silver Spring, Maryland (EE.UU.)
www.fda.gov/cdrh
Descripcin El CDRH es uno de los centros dependientes de la Food and Drug Administration (FDA) encargado de la seguridad y efectividad de los equipamientos mdicos as como de controlar la exposicin humana a la radiacin de productos de consumo, de uso mdico y otros. Lneas de investigacin El trabajo de la Division of Biologics se centra principalmente en la colaboracin con la ASTM en el desarrollo y validacin de mtodos estandarizados para detectar alrgenos del ltex en distintos productos. Servicios Esta institucin no dispone de un servicio de anlisis para la deteccin de alrgenos del ltex; sin embargo, estara interesada en colaborar con centros de nuestro pas en el desarrollo de algn proyecto de investigacin. Persona de contacto Anne D. Lucas Correo electrnico: anne.lucas@fda.hhs.gov
Instituto de Investigaciones sobre el Caucho de Malasia (RRIM) Datos de contacto Research Station, Malaysian Rubber Board (MRB) 47000 Sungai Buloh Selangor Darul Ehsan (Malaysia) Tel.: 603 6156 1121 Fax: 603 6156 3299 Correo electrnico: basri@lgm.gov.my
www.lgm.gov.my
Descripcin El RRIM es una de las mltiples agencias y centros de investigacin que conforman el Malaysian Rubber Board (MRB). Establecido en enero de 1998, el principal objetivo del MRB es contribuir al desarrollo y modernizacin de la industria del ltex en Malasia. Lneas de investigacin Alergenicidad y citotoxicidad del ltex y endotoxinas presentes en l. Mejora de las propiedades de los productos fabricados con ltex. Desarrollo de nuevos materiales con ltex. Servicios Latex Science & Technology Unit Ofrecen asesora tcnica sobre varios aspectos relacionados con el ltex como protenas alergnicas en guantes, ciencia y tecnologa del ltex y procesos de fabricacin. Tambin disponen de un servicio de anlisis que ofrece, entre otras cosas, la determinacin y medida del contenido de alrgenos en productos de ltex. El coste de este anlisis es de 52,8 a por muestra. Persona de contacto Amir-Hashim Md Yatim Correo electrnico: amir@lgm.gov.my
5.3 Proyectos de investigacin Se ha localizado un nmero muy reducido de proyectos de investigacin relacionados con la deteccin y cuantificacin de alrgenos del ltex. De los seis proyectos identificados nicamente uno de ellos fue coordinado por un centro espaol. El resto se han realizado en instituciones alemanas e inglesas. La informacin detallada de estos proyectos se muestra en las siguientes fichas:
Alergia al ltex: estudio clnico-inmunolgico Centro de investigacin Hospital Dr. Negrn (Las Palmas de Gran Canaria) Investigador principal Carlos Blanco Guerra Duracin Tres aos Entidad financiadora Ministerio de Sanidad y Consumo (Fondo de Investigacin Sanitaria) Importe 71.070 a Objetivos Profundizar en el estudio de la alergia mediada por IgE al ltex y del sndrome ltex-frutas, lo que incluye: Determinar la utilidad diagnstica de las quitinasas tipo I y del alergeno mayor del ltex hevena. Investigar la diferente expresin de las quitinasas en funcin de estmulos fsicos y qumicos. Estudiar la posible asociacin de marcadores genticos HLA clase I y clase II con la sensibilizacin al ltex, a las quitinasas tipo I y a la hervena. Caracterizar los polimorfismos de los genes que codifican la IL-4 y la FCeRI- en pacientes alrgicos al ltex. Establecer un protocolo estandarizado para evaluar la alergenicidad de los productos que contienen ltex, clasificndolos segn su potencia. Definir unas pautas de actuacin especficas para pacientes y trabajadores alrgicos al ltex.
Determinacin de los componentes relevantes desde el punto de vista alergolgico en guantes desechables. Correlacin entre la informacin qumica, alergolgica e inmunolgica Coordinador del proyecto Universidad de Erlangen (Alemania) Investigador principal Gerold Schuler Duracin De 01/01/1995 a 30/06/1997 (2,5 aos) Entidad financiadora Unin Europea (MAT 1-CT 940060) Objetivos Determinacin de protenas extrables de guantes de ltex. Evaluacin de los mtodos qumicos e inmunolgicos elegidos para la determinacin de protenas de guantes de ltex y su relevancia en fenmenos de alergias. Determinacin de aceleradores extrables de guantes de ltex y compuestos relacionados. Evaluacin de los mtodos elegidos para la determinacin de aceleradores extrables de guantes de ltex y su relevancia en fenmenos de alergias. Otros participantes Dpto. de Dermatologa, Hospital de Gentofte, Universidad de Kbenhavns (Dinamarca). Instituto de Biomedicina (Austria). Produccin de anticuerpos monoclonales frente a alrgenos ocupacionales definidos Centro de investigacin Instituto de Investigacin de Medicina Ocupacional de la Seguridad Social Alemana (BGFA) Duracin Finalizado en diciembre de 1996 Entidad financiadora Federacin Alemana de Instituciones Aseguradoras o HVBG (Proyecto n BGFAIMM005) Objetivo Produccin de anticuerpos monoclonales in vitro frente a distintas molculas entre las que se encuentra el alrgeno del ltex Hev b 1.
Alergia al ltex estandarizacin de los alrgenos cuantificados en productos y muestras de aire obtenidas en el lugar de trabajo y prevencin de las reacciones de hipersensibilidad debidas al ltex Centro de investigacin Instituto de Investigacin de Medicina Ocupacional de la Seguridad Social Alemana (BGFA) Duracin Finalizado en diciembre de 2001 Entidad financiadora Federacin Alemana de Instituciones Aseguradoras o HVBG (Proyecto n BGFAALL007) Objetivo Desarrollo de mtodos estandarizados para la deteccin de los alrgenos del ltex ms importantes en diagnstico, en productos fabricados con este material y en muestras tomadas en los lugares de trabajo.
Mejoras del ensayo ELISA de anticuerpos de alta afinidad IgE especficos de ltex Coordinador del proyecto Central Manchester & Hospital Universitario Infantil de Manchester Investigador principal Philip Wilson Duracin De 01/04/2003 a 07/07/2003 Entidad financiadora Trust Research Grant Importe 5.124,89 a
Estudio de los niveles de exposicin al ltex Coordinador del proyecto Laboratorio de Salud y Seguridad (Inglaterra) Investigador principal J. Elms Duracin De 01/10/2003 a 01/04/2004 Objetivos Determinar la viabilidad de utilizar un ensayo comercial para medir los niveles de ltex en el aire. Proporcionar informacin sobre los niveles de exposicin de alrgenos del ltex en el sector hospitalario derivados del uso de guantes de ltex.
Conclusiones del informe - 69
6. Conclusiones del Informe

En el presente informe comparativo de tecnologas se han identificado siete tcnicas analticas, clasificadas en qumicas e inmunolgicas, para la determinacin de los alrgenos del ltex en productos de uso cotidiano y mdico. Entre los mtodos qumicos estn el mtodo de Lowry y el anlisis de aminocidos por HPLC. En el caso de los inmunolgicos se tienen los ensayos inmunoenzimticos (LEAP, ELISA de inhibicin e IEMA), la inmunoelectroforesis y la inmunodeteccin en membrana o Western Blot. Los dos mtodos qumicos descritos se encuentran estandarizados. Presentan una especificidad menor ya que no indican la cantidad de alrgenos de la muestra sino su contenido total de protenas. A pesar de ello, el mtodo de Lowry se utiliza habitualmente en anlisis rutinarios para el control de productos manufacturados, como los guantes de ltex, por su sencillez, bajo coste y correlacin aceptable con la respuesta alergnica. Los mtodos inmunolgicos son ms especficos que los anteriores porque proporcionan datos sobre los alrgenos existentes en la muestra. Algunas de estas tcnicas tienen una sensibilidad alta puesto que pueden detectar concentraciones muy pequeas de dichos alrgenos (hasta nanogramos). Aunque permiten el anlisis simultneo de muchas muestras de forma rpida, los reactivos que utilizan pueden resultar costosos. La normalizacin de estos ensayos inmunolgicos es uno de sus mayores retos. Por el momento, slo se ha estandarizado el ELISA de inhibicin y est en fase de desarrollo la norma correspondiente al IEMA. Dentro de estas siete la eleccin de la tcnica ms adecuada dependera, en primer lugar, del tipo de estudio a realizar (si se requieren unos resultados rigurosos sobre el poder alergnico del material evaluado; si estos datos deben tenerse en un tiempo corto; si se trata de un ensayo puntual para un objeto concreto o de un nmero de muestras elevado en un control industrial; etc.) En segundo lugar, deberan considerarse las caractersticas de la entidad interesada en llevar a cabo estos anlisis. sta puede efectuar los anlisis directamente cuando disponga del personal y equipamientos necesarios o, por el contrario, solicitar este servicio a otro organismo. En cuanto al catlogo de grupos de investigacin relacionado con el anlisis de alrgenos en productos de uso cotidiano y mdico se ha contactado con ms de una treintena de grupos de investigacin nacionales vinculados en el pasado con esta rea. Actualmente, la prctica totalidad de los mismos no trabaja ya en esta lnea y slo dos de ellos han expresado su inters en colaborar puntualmente en proyectos de investigacin en este mbito: el grupo del Hospital de Gran Canaria Dr. Negrn y el del Servicio de Productos Sanitarios del Instituto de Salud Carlos III. Tambin se han recopilado numerosos grupos de investigacin extranjeros con una amplia experiencia en la determinacin de alrgenos del ltex, algunos de los cuales disponen de servicios de anlisis ya consolidados. De todos ellos destacan el grupo del
Hospital Universitario de Erlangen (Alemania) y el de la Fundacin Guthrie (EE.UU.), pionero en el desarrollo de la tcnica LEAP, por su oferta de servicios. Asimismo, en el catlogo de empresas se han recogido catorce empresas que cuentan con servicios de anlisis siguiendo distintas metodologas y/o comercializan los kits y reactivos necesarios para que estos ensayos se realicen en los propios hospitales u otros laboratorios. En resumen, existe una necesidad clara de las personas alrgicas al ltex de acceder a una informacin veraz sobre la composicin real de muchos productos de uso cotidiano y mdico. A lo largo de este informe se han presentado varias tcnicas que permitiran detectar y, en algunos casos, cuantificar los alrgenos del ltex en dichos productos as como los organismos y empresas que pueden llevar a cabo estos anlisis. La Asociacin Espaola de Alrgicos al Ltex considera la posibilidad de continuar la presente lnea de trabajo con un estudio de Deteccin y Cuantificacin de los Alrgenos del Ltex en diferentes productos de uso sanitario.
Bibliografa - 71
7. Bibliografa
(1) C. Blanco Guerra, S. Quirce Gancedo (2002). Alergia al ltex. Editorial mra, Ediciones Barcelona y col. AstraZeneca. (2) M.P. Hernndez Surez (2002) La enfermera y la prevencin de la enfermedad alrgica. VI Encuentro de Enfermera en Alergia, 1 ponencia. Alergologa e Inmunologa Clnica, vol. 17, n 2 extraordinario, pg. 350-361. (3) M.A. Navarrete, A. Salas, L. Palacios, J.F. Marn, J. Quiralte y J.F. Florido (2006) Alergia al ltex. Revisin. Farmacia Hospitalaria, vol. 30, n 3, pg. 177-186. (4) S. Quirce, J.M. Olagubel, M.J. lvarez y A.I. Tabar (2003) El ltex. Un importante aeroalrgeno implicado en el asma ocupacional. Anales del Sistema Sanitario de Navarra, vol. 26, S2. [Consulta: 19/06/07] Disponible en Internet: www.cfnavarra.es/salud/anales/textos/vol26/sup2/suple11a.html (5) M. Anda, B. Gmez, E. Lasa, E. Arroabarren, S. Garrido y S. Echechipa (2003) Alergia al ltex. Manifestaciones clnicas en la poblacin general y reactividad cruzada con alimentos. Anales del Sistema Sanitario de Navarra, vol. 26, suplemento 2. [Consulta: 19/06/07] Disponible en Internet: www.cfnavarra.es/salud/anales/textos/vol26/sup2/suple10a.html (6) T. Palosuo, H. Alenius y K. Turjanmaa (2002) Quantitation of latex allergens. Methods, vol. 27, n 1, pg. 52-58. (7) D.H. Beezhold, D.A. Kostyal y V.J. Tomazic-Jezic (2002) Measurement of latex proteins and assessment of latex protein exposure. Methods, vol. 27, pg. 46-51. (8) Mtodo de ensayo estandarizado D5712-05e1 para el anlisis de la protena soluble en agua de la goma natural y sus productos utilizando el Mtodo de Lowry Modificado. American Society for Testing and Materials. [Consulta: 8/05/07] Disponible en Internet: www.astm.org/cgi-bin/SoftCart.exe/DATABASE.CART/REDLINE_PAGES/ D5712.htm?L+mystore+pxwy8665
(9) V.J. Tomazic-Jezic, A.D. Lucas (2002) Protein and allergen assays for natural rubber latex products. Journal of Allergy and Clinical Immunology, vol. 110, n 2, pg. S41S46. (10) H.Y. Yeang, S.A.M. Arif, M. Raulf-Heimsoth, Y.H. Loke, I. Sander, S.H. Sulong, C.H. Lau y R.G. Hamilton (2004) Hev b 5 and Hev b 13 as allergen markers to estimate the allergenic potency of latex gloves. Journal of Allergy and Clinical Immunology, vol. 114, n 3, pg. 593-598. (11) T. Palosuo, H. Rinikka-Railo, H. Kautiainen, H. Alenius, N. Kalkkinen, M. Kulomaa, T. Reunala y K. Turjanmaa (2007) Latex allergy: the sum quantity of four major allergens shows the allergenic potential of medical gloves. Allergy, 62, pg. 781-786. (12) T. Palosuo, S. Makinen-Kiljunen, H. Alenius, T. Reunala, E. Yip y K. Turjanmaa (1998) Measurement of natural rubber latex allergen levels in medical gloves by allergenspecific IgE-ELISA inhibition, RAST inhibition, and skin prick test. Allergy. vol. 53 (1), pg. 59-67. (Slo resumen) (13) European Commission, Directorate General XII, Science, Research and Development. Directorate C: Industrial and Amterial Technologies Programm Measurements and Testing. Proyecto de investigacin. N de referencia: MAT-1-CT 940060. (14) Real Decreto 414/1996, de 1 de marzo, por el que se regula los productos sanitarios. (15) Real Decreto 1468/1988, de 2 de diciembre, por el que se aprueba el reglamento de etiquetado, presentacin y publicidad de los productos industriales destinados a su venta directa a los consumidores y usuarios. (16) Orden 1990/04367, de 15 de febrero, por la que se establece la normativa para el etiquetado informativo de los guantes. (17) Ao 2007 VIII Legislatura N 837. Cortes generales. Sesin del Congreso de los Diputados n 42 celebrada el martes, 29 de mayo de 2007. Proposicin no de ley para mejorar la situacin de las personas que padecen alergias alimentarias y al ltex. Presentada por el grupo parlamentario cataln Convergencia i Uni. N de expediente 161/000448. (18) Ley 26/1984, de 19 de Julio, general para la defensa de los consumidores y usuarios. (19) Implications of the medical devices directives (93/42/EEC) in relation to medical devices containing natural rubber latex: A guide for manufacturers and notified bodies. MEDDEV.2.5/9 rev.1 febrero 2004.
Bibliografa - 73
(20) J.J. Farnham, V.J. Tomazic-Jezic y M.E. Stratmeyer (2002) Regulatory initiatives for natural latex allergy: US perspectives. Methods, vol. 27, pg. 87-92. (21) W.H. de Jong, R.E. Geertsma, J.J.B. Tinkler (2002) Medical devices manufactured from latex: European regulatory initiatives. Methods, vol. 27, pg. 93-98.
8. Glosario y abreviaturas
Glosario
Aeroalrgeno Sustancia que se encuentra en suspensin en el medio areo y es capaz de provocar una reaccin alrgica. Alergenicidad Potencial de una sustancia para causar reacciones alrgicas. Alrgeno Sustancia que desencadena una respuesta inmune en el organismo. Alrgeno recombinante Protena sintetizada mediante tcnicas de ingeniera gentica que se emplea con distintos fines en sustitucin de los alrgenos extrados de sus fuentes naturales. Alergia Estado de hipersensibilidad adquirida por la exposicin a una sustancia que es inocua en las mismas condiciones para la mayora de los individuos de la misma especie. Aminocido Molcula caracterizada porque contiene los grupos amino (-NH2) y carboxilo (-COOH) que constituye la unidad bsica de las protenas. Anticuerpo Protena producida por el sistema inmune como respuesta frente a sustancias extraas al organismo a las que se une de manera selectiva. Anticuerpos monoclonales Anticuerpos idnticos producidos por un solo tipo de clula del sistema inmune que reconocen un determinado lugar del alrgeno o protena identificada como extraa por el organismo.
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Anticuerpos policlonales Anticuerpos no idnticos que reconocen diferentes lugares del alrgeno o protena extraa para el organismo. Atpico (Paciente atpico). Individuo propenso a sufrir alergia debido a una respuesta anmala de hipersensibilidad de su sistema inmune frente a un alrgeno ambiental. Citotoxicidad Cualidad de resultar txico a las clulas. Disolucin tampn Disolucin que contiene sustancias que amortiguan las variaciones de pH. Endotoxina Componente de la pared celular de algunos microorganismos, especialmente bacterias gramnegativas, que se libera cuando este microorganismo muere y se degrada. Esta liberacin en el organismo desencadena distintas respuestas del sistema inmune. Enzima Protena que cataliza o incrementa la velocidad de las reacciones qumicas en los seres vivos. Hevena Nombre que designa a una de las protenas presentes en la planta Hevea brasiliensis de la que procede el ltex natural. Hevea brasiliensis Denominacin botnica del rbol del caucho del que se extrae el ltex. Hidrlisis Reaccin qumica en la que se descomponen sustancias complejas en otras ms sencillas por accin del agua. Hipersensibilidad Situacin en la que el organismo reacciona con una respuesta inmunolgica exagerada frente a una sustancia extraa. Hipoalergnico Cualidad de aquellos compuestos que presentan un riesgo bajo o nulo de provocar una reaccin alrgica.
Inmunoglobulina Protena que acta como anticuerpo, es decir, que reconoce a una sustancia extraa al organismo y se una a ella de forma especfica. Inmunoterapia Tratamiento en alergologa basado en el empleo de vacunas antialrgicas. Isoalrgeno Alrgeno con una gran similitud con otros alrgenos que se diferencia de ellos nicamente en pequeas variaciones de su estructura proteica. Ltex Producto de aspecto lechoso, producido por las clulas laticferas, que se obtiene de la savia del rbol del caucho Hevea brasilliensis. Pptido Molcula compuesta por unos pocos aminocidos, elemento estructural de las protenas. Peso molecular Valor resultante de la suma de los pesos de cada uno de los tomos que conforman una molcula. Prevalencia Parmetro que cuantifica la proporcin de individuos de una poblacin que padece una enfermedad en un momento o periodo de tiempo determinado. Protena Polmero constituido por un nmero elevado de aminocidos que desempea mltiples funciones en los organismos vivos. Sensibilizacin Exposicin inicial de un individuo a una sustancia extraa especfica a partir de la cual se origina, ante sucesivos contactos con dicha sustancia, una reaccin inmune en el organismo. Sistema inmune Conjunto de mecanismos de defensa altamente complejos que permite al organismo protegerse frente a distintos agentes infecciosos y otros compuestos extraos.
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Vulcanizacin Proceso que consiste en la adicin de sulfuros, xido de zinc y algn acelerante a la goma natural de ltex a altas temperaturas (alrededor de los 120 C) para lograr que este material sea resistente al agua sin alterar sus propiedades de elasticidad.
Abreviaturas
ASTM Sociedad Americana para Ensayos y Materiales (American Society for Testing and Materials) Espina Bfida Ensayo de inmunoabsorcin ligado a enzima (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) Gua Frmaco-Teraputica Cromatografa lquida de alta resolucin (High Performance Liquid Cromatography) Ensayo inmunoenzimomtrico (ImmunoEnzyMetric Assay) Inmunoglobulina E Impuesto sobre el Valor Aadido ELISA indirecto para deteccin de protenas del ltex (Latex ELISA for Antigenic Protein) Microgramo Tratado de cooperacin en materia de patentes (Patent Cooperation Treaty) Virus de la Inmunodeficiencia Humana
EB ELISA
GFT HPLC
IEMA IgE IVA LEAP
g PCT VIH
Este libro se termin de imprimir en Guadalajara, el mes de febrero de 2009.

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2 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

4 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

6 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

1. Antecedentes y objetivo del informe

8 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

2. Problemtica de la alergia al ltex y la deteccin de alrgenos

Figura 1. Recoleccin de ltex del rbol del caucho (Hevea brasiliensis).

Problemtica de la alergia al ltex y la deteccin de alrgenos - 9

10 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

Tabla 2. Prevalencia de la alergia al ltex en distintas poblaciones analizadas. (2)

Problemtica de la alergia al ltex y la deteccin de alrgenos - 11

Diagnstico, tratamiento y prevencin de la alergia al ltex

12 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

Mtodos analticos para alrgenos del ltex - 13

3. Mtodos analticos para alrgenos del ltex

14 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

Mtodos analticos para alrgenos del ltex - 15

3.1. Mtodo de Lowry modificado

16 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

3.2. Cromatografa lquida de alta resolucin

Mtodos analticos para alrgenos del ltex - 17

3.3. Ensayos inmunoenzimticos tipo ELISA

Figura 4. Fotografa de una placa ELISA de 96 pocillos.

18 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

Figura 5. Esquema de las diferentes etapas que componen un ELISA indirecto.

Mtodos analticos para alrgenos del ltex - 19

20 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

Figura 6. Fases de inhibicin y de reaccin de un test ELISA de inhibicin.

Mtodos analticos para alrgenos del ltex - 21

22 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

Mtodos analticos para alrgenos del ltex - 23

Figura 8. Separacin de los componentes A y B de una muestra mediante inmunoelectroforesis.

24 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

3.5. Inmunodeteccin en membrana (Western Blot)

Mtodos analticos para alrgenos del ltex - 25

26 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

3.6. Evaluacin y comparacin de mtodos analticos

Mtodos analticos para alrgenos del ltex - 27

28 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

Mtodos analticos para alrgenos del ltex - 29

3.7. Propiedad industrial

Complejo proteico alergnico de la goma natural

Protena alergnica Hev b 3 de la goma natural, su produccin y uso en ensayos

30 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

Mtodos analticos para alrgenos del ltex - 31

Tabla 7. Otras patentes relacionadas con la alergia al ltex.

32 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

4.1 Productos y servicios de deteccin

34 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

Tel.: 93 284 97 77 Fax: 93 284 43 08 Correo electrnico: sgsh@sgsh.es

36 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

38 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

4.2. Alrgenos del ltex y anticuerpos

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42 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

44 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

Fax +358 20 722 7090

4.3. Otras empresas

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4.4. Legislacin y normalizacin

50 - Evaluacin de los mtodos analticos actuales para alrgenos del ltex

Tabla 10. Principales organismos de normalizacin nacionales, europeos e internacionales.