Departamento de Microbiologa

PRCTICAS DE BACTERIOLOGA

PRCTICA 1: ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUAS

INTRODUCCIN La finalidad del anlisis microbiolgico de las aguas es el control de calidad microbiolgica de las mismas, establecido en el Real Decreto 140/2003, de 7 de Febrero, de la Presidencia del Gobierno (normativa tcnica desarrollada en la Orden Ministerial del Ministerio de Sanidad y Consumo aparecida en el BOE del 21 de Febrero de 2003). En dicha Orden se establecen las normas oficiales de anlisis para la investigacin de * bacterias aerobias totales, * bacterias coliformes, * enterococos fecales y * clostridios sulfito reductores El objeto de la investigacin de estos microorganismos concretos es que, al ser todos ellos componentes habituales de la microbiota comensal del intestino del hombre y animales, sirven de indicadores de una posible contaminacin fecal del agua en estudio. Adems, al presentar diversos grados de resistencia a los factores medioambientales, su cuantificacin permite establecer tambin la evolucin de la contaminacin en el tiempo. En esta prctica vamos a realizar tambin la bsqueda especfica de vibrios en agua, auque esta se realiza slo en caso de sospecha por brotes epidmicos. DETERMINACIN DE BACTERIAS COLIFORMES En la mencionada Orden Ministerial se definen como coliformes totales aquellas bacterias de morfologa bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativas, no esporgenas, que fermentan la lactosa con produccin de cido y de gas a 37C en un tiempo mximo de 48 h. Este grupo comprende los gneros Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter. La denominacin ms especfica de coliformes fecales hace referencia a aquellas bacterias comprendidas en el grupo de coliformes totales, que adems son capaces de fermentar la lactosa con produccin de cido y de gas a 44C, en un tiempo mximo de 24 h. El BOE recomienda el Mtodo de los tubos mltiples o del nmero ms probable (NMP) o alternativamente el mtodo de filtro de membrana. En esta prctica nos vamos a centrar a determinar las bacterias coliformes en aguas mediante el mtodo de los tubos mltiples o polimetra.

FUNDAMENTO Se trata de determinar el nmero de coliformes mediante siembra de distintos volmenes del agua a analizar en series de tubos conteniendo medio de cultivo lquido lactosado y resiembra en medio de cultivo selectivo con incubacin a temperaturas adecuadas. PROCEDIMIENTO El procedimiento comprende las pruebas presuntiva, de confirmacin de coliformes totales y de confirmacin de coliformes fecales.

1. Prueba presuntiva
Es un procedimiento de criba en el que una reaccin negativa excluye la presencia del grupo coliforme y una reaccin positiva indica su posible presencia. Se dispone de un frasco con 50 ml y dos series de tubos conteniendo 10 y 1 ml respectivamente de caldo MacConkey, provistos de una campana de recogida de gases (campana Durham). Mediante pipetas estriles, sembrar el frasco y los tubos con un volumen igual de agua, ya homogeneizada. Debido a ello el medio debe prepararse a doble concentracin. Tras la siembra se homogeneizar el contenido de los tubos y se incubar a 37C durante 24 horas. Interpretacin de los resultados Se consideran tubos positivos aquellos en los que se observa viraje del indicador, debido a la acidificacin del medio, y aparicin de gas en la campana de fermentacin.

2. Prueba confirmativa
2.1 Coliformes totales Es un procedimiento mediante el cual una reaccin negativa excluye la presencia del grupo coliforme, mientras que una reaccin positiva indica su presencia inequvoca. Deben someterse a esta prueba todos los tubos que hayan resultado positivos en la prueba presuntiva. A partir de stos, y despus de homogeneizar su contenido, se sembrar, mediante asa en estra, sobre la superficie de placas de Petri conteniendo medio de agar-lactosa-eosina-azul de metileno (medio de Teague Lvine o EMB). A continuacin se incubar a 37C durante 24 h. Sobre este medio las bacterias fermentadoras de lactosa dan colonias caractersticas opacas y pigmentadas en rosa, azul violeta oscuro con o sin reflejo metlico. Las colonias distintas de las descritas corresponden a bacterias no fermentadoras de lactosa. De cada placa se selecciona una colonia de cada uno de los diferentes aspectos descritos como caractersticos y se resiembra mediante hilo o asa

sobre agar nutritivo inclinado. A continuacin, y sin recargar, se resiembra un tubo de caldo MacConkey, con campana de Durham, incubndose a 37C durante 24 h. Al trmino de la incubacin se comprueba la produccin de gas en el tubo lactosado y caso de ser positiva, se toma mediante asa o pipeta Pasteur una porcin del cultivo desarrollado sobre agar inclinado, y se le practica la prueba de la oxidasa. O bien se cultiva la bacteria en agua de peptona y se le realiza la prueba del indol. Esta prueba mide la produccin del indol a partir de triptfano debido a la accin del enzima triptofanasa. Este enzima degrada el triptfano hasta indol y pirvico, el cual es utilizado para la obtencin de energa. El indol, por el contrario se acumula en el medio y puede ser puesto de manifiesto con reactivo de Kovac, el cual va a extraer el indol, que va a reaccionar con el para-dimetilaminobenzaldehido, dando lugar en medio cido a un compuesto de color rojo, que queda concentrado en forma de un anillo en la parte superior del tubo, ya que el alcohol amlico no se mezcla con el agua y es menos denso. Lectura e interpretacin de resultados Si en la placa de medio EMB no se han desarrollado colonias o bien las que han aparecido no son fermentadoras de lactosa con produccin de gas, la prueba de confirmacin es negativa. Si la colonia aislada es fermentadora de lactosa con produccin de gas y oxidasa negativa o indol positiva, la presencia de coliformes totales se considerar confirmada. Si la reaccin de la oxidasa es positiva, o la del indol es negativa, la presencia de coliformes totales se considerar negativa aunque la colonia aislada haya fermentado la lactosa con produccin de gas. Para el clculo del NMP de coliformes totales se contabilizarn como positivos aquellos tubos de la serie elegida que hayan dado una prueba de confirmacin positiva. En los tubos en los que la prueba confirmativa de coliformes totales, que se habr realizado simultneamente, segn se expone a continuacin, haya resultado positiva, no es necesario proceder a la prueba de la oxidasa o del indol. 2.2 coliformes fecales Es un procedimiento mediante el cual una reaccin negativa excluye la presencia de coliformes fecales, mientras que una reaccin positiva indica su presencia inequvocamente. Deben someterse a esta prueba todos los tubos que hayan resultado positivos en la prueba presuntiva. A partir de stos se resiembra mediante asa o dos gotas de pipeta Pasteur, tantos tubos de caldo MacConkey como tubos positivos presuntivos, incubndose inmediatamente a 44C durante 24 h. Lectura e interpretacin Si se observa crecimiento bacteriano con produccin de gas a las 24 h o antes, la presencia de bacterias coliformes se considerar confirmada. Para el clculo del NMP de coliformes fecales se contabilizarn como positivos aquellos tubos de la serie que hayan dado prueba de confirmacin positiva.

Las aguas aptas para consumo debern contener menos de 1 coliforme por cada 100 ml.

3. Pruebas de identificacin
Se realizarn las pruebas de Tincin de Gram, Oxidasa e Indol

COMPOSICIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS Caldo MacConkey Composicin Bilis de buey Peptona Lactosa Prpura de bromocresol pH Cantidad 0.5% 2% 1% 0,001% 7,4

Agar con eosina y azul de metileno (Teague-Levine) EMB Composicin Peptona Lactosa Sacarosa Fosfato dipotsico Agar Eosina amarilla Azul de metileno pH Agua de Peptona Composicin Peptona NaCl pH Reactivo de Kovac Composicin Alcohol amlico p-dimetil aminobenzaldehido HCl concentrado Cantidad 150 ml 10 g 50 ml Cantidad 1% 0,5% 7,2 Cantidad 1% 0,5% 0,5% 0,2% 1,35% 0,04% 0,0065% 7,2

Figura 1. Esquema de la determinacin de bacterias coliformes

Tabla 1. Lectura del NMP para coliformes

ESTREPTOMETRA Es una tcnica que bsicamente consiste en la determinacin de la presencia de enterococos en aguas, considerndose sta como ndice de contaminacin fecal de las mismas. Entre las principales razones que inclinan a esta consideracin se pueden sealar : 1.- Los enterococos no se encuentran en aguas puras, suelos y lugares exentos de vida animal. Este argumento no es vlido para la mayora de las denominadas bacterias coliformes. 2.- La presencia de enterococos indica necesariamente contaminacin por heces. 3.- El enterococo tiene requerimientos nutritivos ms complejos y por ello difcilmente se multiplica en el agua. Sin embargo es un magnfico indicador de contaminacin fecal, porque resiste mejor que E.coli la cloracin de las aguas y en general la sobrevive, respecto al tiempo, en el agua. La legislacin recomienda un mtodo de prospeccin para estreptococos basado en el contaje presuntivo de enterococos por la tcnica del NMP en el medio de Rothe, cuya formulacin es la siguiente: Medio de Rothe doble concentrado Composicin Peptona Glucosa Cloruro sdico Fosfato dipotsico Azida sdica Fofato monopotsico Agua destilada pH Cantidad 40 g 10 g 10 g 5,4 g 5,4 g 0,4 g 1000 ml 7,0

Calentar suavemente hasta la total disolucin. Repartir en tubos grandes a razn de 10 ml/tubo. Esterilizar el autoclave durante 20 min a 120 C. El medio de Rothe, concentracin simple, se prepara igual que el anterior, manteniendo el mismo volumen de agua pero poniendo la mitad de los slidos. Se reparte en tubos a razn de 10 ml/tubo y se esteriliza.

1. Estreptometra presuntiva
La prueba presuntiva se lleva a cabo con la tcnica del NMP en tubos de diluciones mltiples siguiendo el siguiente esquema:

Medio de Rothe a razn de 10 ml/tubo Enturbiamiento = + Incubacin a 37 C, 48 h. Lectura Inalterado = Estima del NMP con los tubos correspondientes Figura 2. Estreptometra presuntiva

2. Estreptometra confirmativa
Se lleva a cabo transfiriendo un asa de cada uno de los tubos sospechosos a un tubo del medio de Litsky que adems de la azida contiene violeta de etilo como inhibidor de otras bacterias distintas a los enterococos. Los tubos inoculados se incuban a 37 C durante 48 h. Se consideran positivos aqullos que presentan crecimiento, que se manifiesta por la turbidez y el sedimento rojo ladrillo caracterstico. La legislacin recomienda para esta prueba el medio de Litsky cuya frmula es la siguiente:

Composicin Peptona Glucosa Cloruro sdico Fosfato dipotsico Fosfato monopotsico Azida sdica Violeta de etilo (solucin al 0.01%) Agua destilada

Cantidad 20 g 5g 5g 2,7 g 2.7 g 0.3 g 5 ml 1000 ml

Se disuelven los slidos y se reparte en tubos esterilizndose en autoclave durante 20 min. a 120 C. La estima del nmero de enterococos se expresa por 100 ml de muestra y se hace con el NMP sobre las tablas adecuadas tomando como base los tubos de la prueba presuntiva que luego se han confirmado como positivos. Sin embargo debe completarse con una identificacin definitiva, por siembra sobre medios slidos y verificacin de las caractersticas morfolgicas y fisiolgicas de los estreptococos del grupo D de Lancefield.

Caldo hipersalino para probar la tolerancia al NaCl (6.5%) de los enterococos (The Prokaryotes, pg. 1594).

Composicin Caldo de infusin de corazn NaCl Indicador (1.6 g de prpura de bromo cresol en 100 ml de Etanol de 95) Glucosa Agua destilada

Cantidad 25 g 60 g 1 ml 1g 1.000 ml

Reaccin positiva : cambio de prpura a amarillo o bien sin cambio pero con crecimiento obvio.

10

Tabla 1. Lectura del NMP para estreptococos

Aislamiento de Clostridium sulfito-reductores

FUNDAMENTO Son aquellas bacterias de morfologa bacilar, Gram-positivas, anaerobias estrictas capaces de formas esporas y con actividad de reduccin de los sulfitos (SO32-). La tcnica se basa en contar el nmero de colonias con capacidad sulfito reductora, desarrolladas en medio de cultivo slido glucosado conteniendo sulfito sdico y una sal de hierro. La deteccin simultnea de coliformes y de C. perfringes, o de este anaerobio y de E. coli constituye una clara evidencia del origen fecal de la contaminacin. La presencia exclusiva de clostridios debe interpretarse como indicio de contaminacin fecal remota MATERIALES La legislacin recomienda el medio de Wilson-Blair Medio de Wilson-Blair (agar glucosa sulfito hierro)

11

Medio de Wilson-Blair Peptona 1% Extracto de carne 0,3% ClNa 0,5% Glucosa 2% Agar 3% Disolver por calentamiento y repartir a razn de 15 ml/tubo en tubos con capacidad de 50 ml, y esterilizar en autoclave. Solucin acuosa de sulfito sdico puro cristalizado (SO3Na2 10H2O al 10%). Esterilizar al bao Mara durante 10 min. Esta solucin debe ser recientemente preparada. Solucin acuosa de citrato de hierro amoniacal al 5%. Preparar aspticamente sin esterilizar por calor.

Figura 4 . Clostridiometra PROCEDIMIENTO Fundir de los tubos del medio de cultivo base y mantener a 70 C Entonces aadir: 0,5 ml de solucin de citrato hierro amoniacal y1 ml de solucin de sulfito sdico. Mezclar suavemente para evitar la incorporacin de aire al medio.

12

Con objeto de destruir las formas bacterianas vegetativas, se calienta la muestra de agua a 80oC durante 5 min y se deja enfriar el agua hasta 60 oC. Adicionar 15 ml del agua calentada a los tubos ya preparados, mezclando bien (suavemente para evitar burbujas de aire) y dejando enfriar (baja grifo de agua fra para que solidifique) Incubar posteriormente a 37oC durante 24-48 h.

Enriquecimiento, aislamiento e identificacin de vibrios

En esta prctica se pretende la bsqueda e identificacin de bacterias del gnero Vibrio. CULTIVO DE ENRIQUECIMIENTO Mezclar 9 ml de agua a analizar (residual, de ro, etc.) con 1 ml de agua de peptona concentrada 10 veces (pH 8.6). Incubar a 37C durante 24 horas. Observar si se produce enturbiamiento del agua de peptona. Agua de peptona Composicin Peptona Cloruro sdico pH AISLAMIENTO DE VIBRIOS Tomar con el asa una muestra del cultivo de enriquecimiento en agua de peptona y sembrar una placa de medio TCBS. Medio TCBS El medio contiene agar-Tiosulfato-Citrato-sales Biliares-Sacarosa. Compuesto Peptona de casena Extracto de levadura Citrato sdico Tiosulfato sdico Bilis de buey Colato sdico Sacarosa Cloruro sdico Citrato de hierro (III) Azul de timol Azul de bromotimol Agar-agar pH final gramos/litro 5,0 5,0 10,0 10,0 5,0 3,0 20,0 10,0 1,0 0,04 0,04 14,0 8,6 Cantidad 1% 0,5% 8,6

13

Suspender 88 g en 1 litro de agua destilada y llevar a ebullicin; hervir durante 1 minuto. Enfriar a 45-50C y repartir en placas de Petri. No autoclavar. La composicin del medio TCBS permite un abundante crecimiento de V. cholerae y V. parahaemolyticus. Tambin crecen V. alginolyticus y los vibrios NAG. Igualmente se producen reacciones diferenciales en el agar TCBS tiles para la identificacin presuntiva de los vibrios. As, V. cholerae forma colonias planas amarillas lisas de 2 a 4 mm de dimetro. V. alginolyticus tambin fermenta la sacarosa y da lugar a colonias amarillas, grandes. V. parahaemolyticus como no utiliza la sacarosa produce colonias verde azuladas. Las enterobacterias quedan fuertemente reprimidas por las elevadas concentraciones de citrato, tiosulfato, bilis y cloruro sdico, as como el pH del medio fuertemente alcalino (8.6). Aunque pueden aparecer algunas colonias entricas, su tamao y aspecto son fcilmente diferenciables de los vibrios. Solamente algunas razas de Proteus, Aeromonas y Pseudomonas, sacarosa positivas, forman colonias amarillas semejantes a algunos vibrios. La bilis de buey y el colato inhiben especficamente a los enterococos. Pero excepcionalmente pueden aparecer colonias muy pequeas y amarillas que corresponden a los enterococos. El indicador mixto Azul de timol-Azul de bromotimol presenta un claro viraje a amarillo por la formacin de cido, incluso en medio fuertemente alcalino. INTERPRETACIN. Tras incubacin de 18-24 horas a 37C Microorganismo Bacillus subtilis Staphylococcus aureus Proteus mirabilis Vibrio cholerea Vibrio parahaemolyticus Vibrio alginoyiticus Enterobacterias y otras E. coli Enterococcus faecalis IDENTIFICACIN Kligler L SH2 Gas Crecimiento Negativo Negativo Negativo Bueno Bueno Bueno Puede crecer Negativo Puede crecer Apariencia de las colonias Colonias amarillas diminutas a las 48 h Colonias gris oscuras a las 48 horas Colonias planas de 2-3 mm , amarillas Colonias azul verdoso Colonias amarillas Colonias diminutas y transparentes Colonias amarillas diminutas a las 24 h

Oxidasa +

Indol +

G +

Aglutinacin -

14

PRCTICA 2: MICROBIOTA COMENSAL HUMANA

MICROBIOTA DE PIEL Y MUCOSAS

TOMA DE MUESTRAS Y SIEMBRA Se lleva a cabo mediante una torunda de algodn estril frotando sobre la zona deseada, bien orofaringe, bien piel u otra cualesquiera. A continuacin se disemina en la superficie de un medio slido adecuado. En este caso se har sobre medio de tripticasena soja (TSA), tripticasena soja-sangre (TSA-Sangre) y medio de Baird Parker. Finalmente las placas se incuban a 37 C durante 24-48 h hasta aparicin de las colonias bacterianas. MEDIOS DE CULTIVO Medio de TSA (en gramos por litro de agua destilada) Peptona de casena Peptona de soja Cloruro sdico Agar pH final = 7.3 15 5 5 15

Preparacin : Se mezclan los slidos con el agua, agitando para obtener una suspensin homognea. Ajustar, si es necesario, el pH a 7.3. Esterilizar en autoclave a 120 C, durante 15 minutos. Medio de TSA-Sangre Se prepara medio TSA siguiendo las indicaciones anteriormente dichas. Una vez estril se mantiene en sobrefusin en bao a 50 C, adicionndole, en cuanto el medio haya alcanzado esta temperatura, un 5% de sangre de carnero desfibrinada. Se mezcla bien y se distribuye en placas de Petri. Medio de Baird Parker Es un medio selectivo que permite el aislamiento de cepas de Staphylococcus aureus

15

Base para agar de Baird Parker (en gramos por litro de agua destilada): Composicin Peptona Extracto de carne Extracto de levadura Piruvato sdico Glicocola Cloruro de litio Agar g/l 10 5 2 10 12 5 14

Preparacin: Disolver los slidos en el agua hasta conseguir una suspensin homognea. Ajustar, si es necesario el pH a 7.2. Esterilizar en autoclave a 120 C, durante 20 min. A continuacin colocar en bao de agua a 50 C, para mantener en sobrefusin y aadir de forma estril 5 % de emulsin de yema de huevo y 1% de una solucin de telurito potsico (1%). Preparacin de la emulsin de yema de huevo : Colocar el huevo en una solucin de HgCl2 al 1/1000 (lmite de solubilidad) y mantenerlo en ella durante 1 minuto. Romper suavemente la cscara y permitir que salga la clara, que se desecha. Recoger la yema en un matraz estril y adicionar solucin salina estril en proporcin 3 partes de huevo/ 7 partes de sol salina. Emulsionar agitando durante 2 minutos y finalmente adicionar al medio base o bien guardar en fro hasta su uso (una semana como mximo). IDENTIFICACIN DE RAZAS DE Staphylococcus aureus Las tres pruebas ms comnmente empleadas son la fermentacin del manitol, la coagulacin del plasma de conejo y la produccin de DNasa. 1. FERMENTACIN DEL MANITOL Se lleva a cabo inoculando en picadura la bacteria problema en el medio de HughLeifson en manitol, cuya composicin es la siguiente, en gramos/100 ml de agua :

16

Composicin Peptona Cloruro sdico Fosfato dipotsico Manitol Prpura de bromocresol, Solucin en etanol al 1% Agar pH

g/l 0,2 0,5 0,03 1 0,3 0,3 7,1

Preparacin: Se disuelven los slidos agitando la suspensin hasta homogeneidad y finalmente se calienta para fundir el agar. El medio fundido se reparte en tubos a razn de 2 ml/tubo y se esteriliza a 117 C durante 15 min. Una vez inoculado el medio se vierte sobre la superficie del mismo una pequea capa de parafina lquida estril y se lleva a incubar a 37 C. La prueba ser positiva si el indicador, violeta a pH neutro, vira a amarillo por acumulacin de cidos. 2. PRUEBA DE LA COAGULASA En esta prueba se investiga la produccin de enzimas tipo coagulasa, ya que entre los cocos G+, son nicamente las razas de Staphylococcus aureus, la que dan lugar a la coagulacin de los plasmas humano o de conejo en un plazo de 24 horas. Procedimiento: A partir de un cultivo puro de la cepa a estudiar, se siembra un caldo nutritivo que se incuba a 37 C durante 18 horas. Mezclar en un tubo de hemlisis 0.5 ml de plasma de conejo convenientemente diluido y 0.5 ml del cultivo de la bacteria problema. Incubar la mezcla en la estufa a 37 C durante 24 horas. Las cepas coagulasa + producirn solidificacin del plasma pudiendo incluso invertirse el tubo en la mayora de los casos. 3. PRUEBA DE LA DNasa Se investiga la capacidad de produccin de enzimas desoxirribonucleasas por parte de razas Stapyhylococcus aureus como prueba confirmativa de ser razas patgenas. Se lleva a cabo inoculando las placas con el medio de la DNasa mediante una estra o una cruz, aspa, o un botn de la bacterias problema. Para la lectura de los resultados se inundan las placas con cido clorhdrico 1N y se observa si se forman zonas transparentes alrededor de la estra. Si la placa queda totalmente turbia tras el tratamiento con el clorhdrico se considera que la prueba es negativa. Si por el contrario aparece una zona transparente alrededor del crecimiento, la prueba se considera positiva.

17

El HCl reacciona con el ADN dando lugar a un precipitado blanco que enturbia el medio. Sin embargo, el HCl no reacciona con fragmentos de nucletidos resultantes de la despolimedrizacin del ADN, porque dar lugar a un halo claro alrededor del crecimiento y el resto quedar turbio. Medio de cultivo para prueba de la DNasa Composicin Triptosa Cloruro sdico ADN Agar pH g/l 20 5 2 15 7,3

Suspender 42 g en 1 litro de agua destilada y llevar a ebullicin con agitacin constante para fundir el agar. Se reparte y se esteriliza a 121C, 15 minutos. Repartir en placas. MICROBIOTA COMENSAL DE LA BOCA Recuentos salivares de Lactobacillus Los Lactobacillus, al igual que muchos estreptococos (S. mutans), son microorganismos que se encuentran en la cavidad oral y estrechamente relacionados con la caries dental. Especficamente, muchas especies de Lactobacillus se encuentran vinculados con la progresin de la caries en dentina. El medio MRS es un medio de cultivo slido para lactobacilos segn Man, Rogosa y Sharpe (MRS) y con la siguiente composicin. Composicin Peptona Extracto de carne Extracto de levadura Glucosa Acetato sdico Citrato triamnico Sulfato magnsico Sulfato de manganeso Fosfato dipotsico Polisorbato 80 Agar pH g/l 10 8 4 20 5 2 0,2 0.05 2 1 17 6,2

La adicin de magnesio, manganeso y acetato, junto con el polisorbato facilitan en gran forma el crecimiento de los lactobacilos, incluso las especies ms exigentes,

18

como Lactobacillus brevis y L. fermenti. La selectividad del medio MRS es escasa y con frecuencia se suelen presentar contaminantes. El fundamento de esta prctica consiste en hacer un recuento de especies de Lactobacillus a partir del sarro dental o de la saliva. Para ello se toma la muestra mediante una torunda estril y se inocula placas de medio MRS. Las placas se incuban a 37C. Al cabo de dos das comienzan a aparecer unas colonias pequeas correspondientes a los lactobacilos. Segn el nmero de colonias aparecidas nos dar idea de la densidad de estas bacterias en la cavidad oral.

19

PRCTICA 3: OBSERVACIN DE BACTERIAS AL MICROSCOPIO

Se observarn al microscopio ptico las siguientes bacterias Referencia

Bacteria
Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis (intracelular) Streptococcus pyogenes (frotis de pus) Corynebacterium difteriae Lactobacillus bulgaricus Mycobacterium tuberculosis (seccin de un tejido infectado) Mycobacterium leprae Brucella abortus Erwinia caratovora Pseudomonas solonacearum Rhizobium radicicola (seccin de un ndulo de raz) Shigella dysenteriae Xhanthomonas phaseoli Bacillus anthracis Bacillus subtilis Clostridium perfringens

Comentario
Agente causal de la neumona Agente causal de la meningitis Infecciones piognicas

Anotaciones del alumno

COCOS
Ba117e Ba 1113e Ba 115e

BACILOS NO ESPORULADOS GRAM POSITIVOS

Ba 137f Ba 127d Ba 133g Agente causal de la difteria Bacterias del Yogurt Agente causal de la tuberculosis Agente causal de la lepra Produce abortos en algunos animales Podredumbre blanda en vegetales Agente causal de la wilt en el tabaco Fijadores de nitrgeno Agente causal de disentera Patgeno vegetal Agente causal del carbunco Bacilo esporulado Agente causal de enfermedades citotxicas (gangrena ycelulitis anaerobia ), intoxicaciones aliemntarias y enteritis necrotizante. Agente causal del ttanos Agente causal del clera asitico Bacteria espirilada Bacteria fototrfica anoxignica Agente causal de fiebres recurrentes Agente causal de la sfilis

Ba 135h Ba 1502 d Ba 1418e Ba 1427e Ba 140d

BACILOS NO ESPORULADOS GRAM NEGATIVOS

Ba 149d Ba 1428e Ba 125f Ba 121d

BACILOS ESPORULADOS

Ba 130f Ba 164f Ba 165d

Clostridium tetani Vibrio comma Spirillum serpens Rhodospirillum rubrum Borrelia duttoni Treponema pallidum

BACTERIAS ESPIRILADAS Y ESPIROQUETAS

Ba 167g Ba 170h

20

ACTINOMICETOS Y OTRAS BACTERIAS

Ba 1528 Ba 152d Ba 1526f Ba 157e Ba 193d Ba 190d Frankia alni (seccin de ndulos de raz) Stretopmyces griseus Actinomyces bovis Caulobacter Gallionella Sphaerotilus natans Actinomiceto fijador de nitrgeno Productor de Estreptomicina Lesiones piognicas en el ganado Bacterias con pednculo Bacterias con pednculo Bacteria con vaina. Llamado hongo de las cloacas

21