LABORATORIO DE QUMICA ORGANICA 502502 GUA No 9: ENSAYOS PARA RECONOCIMIENTO DE AMINOACIDOS

I. EL PROBLEMA El carcter nico de cada aminocido se debe a la estructura del grupo R. En los polipptidos los grupos R de los aminocidos a menudo se denominan cadenas laterales y pueden variar desde un tomo de hidrgeno, hasta estructuras complejas como el grupo guanidina, el propsito de esta prctica es identificar algunos aminocidos que presentan grupos caractersticos en las cadenas laterales utilizando ensayos cualitativos y especficos para cada funcin. II. FUNDAMENTO TERICO Los aminocidos tienen un papel primordial en la formacin de los seres vivos, puesto que constituyen los bloques fundamentales con que se forman las protenas.. Entre las principales reacciones de identificacin de los aminocidos se encuentran las siguientes: Reaccin con la ninhidrina El grupo alfa-amino de los aminocidos forma complejos coloreados con la ninhidrina: violeta azuloso en la mayora de los aminocidos cuyo grupo amino es primario, amarillo para la prolina e hidroxiprolina y caf para la asparagina que tiene un grupo amido en la cadena lateral. Esta reaccin tambin identifica los grupos alfa-amino libres presentes en pptidos y protenas. Reaccin de Milln El anillo fenlico tiene un comportamiento caracterstico frente a las sales de Mercurio a pH cido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenlico de la tirosina y las protenas que la contienen. Reaccin Xantoprotica Los anillos aromticos presentes en algunos aminocidos reaccionan con cido ntrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo o anaranjado por lo cual esta reaccin permite reconocer la presencia de Tirosina, Fenilalanina y Triptfano. Reaccin de Sakaguchi El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona con soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando complejos coloreados rosados o rojos. Ciencias Bsicas Pg. No 1/5

Reaccin de Ehrlich La presencia de anillos aromticos fenlicos o nitrogenados en la cadena lateral de los Aminocidos se puede identificar mediante la reaccin con cido sulfanlico y nitrito de Sodio por formacin de sales de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo as detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o formando pptidos y protenas. Reaccin de Hopkins Cole El anillo indlico presente en la cadena lateral de los alfa-aminocidos libres o haciendo parte de pptidos y protenas se puede reconocer mediante reaccin con el cido glioxlico a pH cido, puesto que forma complejos de coloracin violeta o amarillo violeta, permitiendo as identificar al triptfano. Reaccin con acetato de Plomo alcalino Los Aminocidos azufrados como Metionina, Cisteina y Cistina se reconocen por la formacin de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona con Acetato de Plomo en medio alcalino.

III. TEMAS DE CONSULTA El preinforme debe contener los siguientes aspectos: Investigar la clasificacin de los aminocidos desde los siguientes puntos de vista: Esenciales y no esenciales para el hombre, cidos y bsicos en forma molecular, polares con carga y sin carga, apolares. Estudiar las estructuras, nombres y abreviaturas para los veinte aminocidos que son usados en la biosntesis de protenas. Para cada aminocido seale la cadena lateral o el grupo R e identifique las funciones presentes. Defina protenas Estudie que aminocidos estn presentes en las siguientes protenas1: Colgeno, albmina, IV. MATERIALES Y REACTIVOS Las soluciones estn propuestas para cada grupo de trabajo en el laboratorio, por ejemplo 10 ml de ninhidrina para un grupo, si el curso es de 8 grupos se requieren mximo 80 ml de ninhidrina. Materiales 15 Tubos de ensayo 2 Pipetas graduadas de 1 ml. 2 Pipetas graduadas de 2 ml. 2 Pipetas graduadas de 5 ml. 2 Vasos de precipitados de 250 ml. 1 Vasos de precipitados de 600 ml. 1 Embudo ordinario 1 Erlenmeyer de 125 ml. 1 Gradilla para tubo de ensayo 1 Pinza metlica para tubo de ensayo 1 Placa refractaria
1

El profesor le asignar alguna protena para su experiencia en el laboratorio. Pg. No 2/5

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1 Aro con nuez Material general Soportes Para prevenir la contaminacin de los reactivos: las soluciones que no estn en frasco gotero deben tener una pipeta exclusiva y el monitor debe estar pendiente, que las pipetas no sean intercambiadas durante al prctica.

Reactivos por cada grupo de trabajo: 10 ml de cido sulfrico concentrado 12 ml de cido ntrico concentrado 10 ml de cido actico concentrado Se requiere la preparacin de los siguientes reactivos: 10 ml de Reactivo de ninhidrina : disolver 100 mg. de nilhidrina en 10 ml. de etanol a 95% y completar a 100 ml con agua destilada 10 ml de Reactivo de millon:.disolver 1 g de mercurio en 1 ml. De cido ntrico concentrado, calentar suavemente, dejar enfriar y completar a 60 ml con agua 5 ml de Reactivo de sakaguchi: cuidadosamente disolver 2 g. De bromo en 100 ml. De NaOH al 5% 10 ml de Reactivo de Hopkins cole: cido actico impurificado con trazas de cido glioxlico Soluciones 30 ml de Hidrxido de sodio 40%. 20 ml de Hidrxido de sodio 10 %. 10 ml de Hidrxido de amonio 10% 20 ml de cido clorhdrico 2%. 20 ml de Acetato de plomo 10%. 20 ml de Sulfato de cobre 0.5%. 10 ml de Nitrito de sodio 0.5% (fresco). 10 ml de cido sulfanlico 0.5% en HCl. 50 ml de Alfa-naftol 0.15%. 15 ml de Soluciones al 0.1% en agua acidulada de los siguientes aminocidos Cistena metionina. Glutamina asparragina. Lisina ornitina. Tirosina. Fenil-alanina. Prolina. Arginina. Histidina. Triptfano. Alanina. Albmina de huevo: separar la clara de un huevo y diluir en relacin 1: 10 con agua destilada Harina de trigo: dispersar 10 g. de harina de trigo en 100 ml. de agua caliente y filtrar a travs de gasa doble No olvide pedir al profesor la muestra problema que va a analizar2

Soluciones problema sugeridas: colgeno, albmina, gelatina, y las que el profesor considere Pg. No 3/5

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V. PROCEDIMIENTO Realice todos los ensayos en tubos limpios y secos Ensayo con ninhidrina Rotule cinco tubos de ensayo identificando cada uno como: blanco, alanina, problema, albmina de huevo, y protena de trigo. A cada uno de los tubos de ensayo agregue 1 mL. de las respectivas sustancias que indica el rtulo usando agua destilada para el tubo marcado como blanco. Adicione a cada tubo 1 mL. de reactivo de Ninhidrina, caliente en bao de agua a ebullicin por 10 min. Observe los colores desarrollados y anote los resultados. Ensayo de Millon Rotule 6 tubos de ensayo identificados cada uno como: blanco, tirosina, fenil-alanina, problema, albmina de huevo y protena de trigo. A cada uno de ellos agregue 2 mL. de la solucin correspondiente y 1 mL. de reactivo de Millon. Caliente en bao de agua en ebullicin por 10 min. observe los colores desarrollados y anote los resultados. Ensayo Xantoprotico Rotule 6 tubos de ensayo de la misma manera que para el ensayo de Millon. Agregue a cada tubo 2 mL. de la solucin correspondiente y 2 mL. de cido ntrico concentrado. Caliente en bao de agua a ebullicin, la aparicin de una coloracin amarilla es una prueba positiva para aminocidos aromticos. Deje enfriar y agregue a cada tubo de ensayo 1.5 mL. de NaOH 40%, el cambio de color a anaranjado confirma la prueba. Reaccin de Sakaguchi Rotule 5 tubos de ensayo como: blanco, arginina, problema, albmina de huevo y protena de trigo. Agregue a cada uno 5 mL. de las soluciones correspondientes, enfre en bao de hielo por 10 min. y luego adicione 1 mL. de NaOH 40%, deje enfriar 10 min. ms y luego agregue 5 mL. de -naftol y 3 gotas de Reactivo de Sakaguchi, la aparicin de un color rosado o rojo es prueba positiva para el grupo guanidinio. Reaccin de Ehlrich En 5 tubos de ensayo rotulados como: blanco, triptfano, problema, albmina de huevo, protena de trigo. Agregue a cada tubo en el siguiente orden: 1 mL de cido sulfanilico 0.5% y 1 mL. de Nitrito de sodio, mezcle bien y deje en reposo durante 15 min. luego a cada tubo agregue 1 mL. de la solucin correspondiente al rtulo. Mezcle y adicione a cada tubo 0.5 mL. de NH4OH 10%. Observe y anote los resultados. Reaccin de Hopkins Cole Rotule 5 tubos de ensayo como: blanco, triptfano, problema, albmina de huevo y harina de trigo. Adicione a cada uno 2 mL. de la solucin correspondiente y 2 mL. del reactivo de Hopkins Cole. Mezcle bien el contenido y adicione a cada tubo por las paredes lenta y cuidadosamente, sin mezclar 1 mL. de cido sulfrico concentrado, la formacin de un anillo violeta en la interfase es prueba positiva para el triptfano. Reaccin con acetato de Plomo alcalino Ciencias Bsicas Pg. No 4/5

Rotule 6 tubos de ensayo como: blanco, metionina, cisterna, problema, albmina de huevo y protena de trigo. En cada uno agregue 2 mL. de la solucin correspondiente, 2 mL. de NaOH 10% y 0.5 mL. de acetato de Plomo al 10%. Caliente en bao de agua a ebullicin por 5 min. La formacin de un precipitado gris oscuro o negro es prueba positiva para aminocidos azufrados. VII. PARA EL ANLISIS DE LA PRACTICA Con base en los resultados obtenidos para la solucin problema, indique las caractersticas estructurales e identifique hasta donde sea posible el tipo de aminocidos que contienen las protenas analizadas. Con base en los resultados obtenidos para los materiales biolgicos que se ensayaron indique qu tipo de aminocidos se encuentran presentes. Escriba las estructuras de los aminocidos que analiz en cada prueba e identifique el grupo que estaba reaccionando o el responsable de la coloracin positiva del ensayo.. VIII. BIBLIOGRAFA BOHINSKI. 1991 Bioqumica. 5ed., Pearson. Mxico. Mathews Van Holde . 2004 Bioqumica. 3 Ed Pearson. Espaa Fesenden and fesenden. 2002. Qumica orgnica. Interamericana. Mxico

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