MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL: EMPLEO DE MICROORGANISMOS COMO UNIDADES DE

PRODUCCIN, DE CONTROL O DE DIAGNOSTICO

VENTAJAS DE LOS MICROORGANISMOS COMO UNIDADES DE PRODUCCIN Rapido crecimiento debido a la favorable relacin rea/ volumen Diversidad metablica Estabilidad genetica Crecimiento en gran escala y separacion facil de productos y sustratos * Adaptabilidad a distintos ambientes y condiciones de crecimiento (sustratos slidos, lquidos, frascos, fermentadores) Incrementar la productividad * Facilidad de manipulacin gentica Modificar los productos finales * Habilidad para sintetizar enantimeros especficos. * Tecnologias limpias

Los microorganismos pueden emplearse como :

Productores de metabolitos primarios y secundarios

Productores de biomasa y sus constituyentes (Protenas y aminoacidos,

Vitaminas, Acidos Nucleicos, Polmeros de H de C y esteres, Biomasa)

Huespedes para la expresion de genes homologos y heterologos

Unidades de Biotransformacion

METABOLITOS PRIMARIOS
1- Componentes esenciales y productos formados por los microorganismos: proteinas, acidos nucleicos, polisacaridos (dextranos, alginatos, gelanos, xantanos) y poliesteres (PHB y plasticos), acidos grasos (saturados e insaturados), esteroles (ergosterol) 2- Derivados del metabolismo intermedio: azucares (fructosa, ribosa, sorbosa), cidos organicos (gluconico, cido lctico, ctrico, acetico, propionico, succinico, fumarico), alcoholes (xilitol, etanol, glicerol, sorbitol, butanol), aminoacidos (Lys, Thr, Glu, Trp, Phe), vitaminas (carotenos, B2, B12), nucleotidos saborizantes (acidos inocinico y guanilico), polisacaridos y poliesteres de reserva. Microorganismos productores: bacterias, levaduras y hongos.

Etanol
Producido por : 1- Levaduras * Saccharomyces (a partir de hexosas) * Kluyveromyces fragilis (a partir de lactosa) * Cndida o Pichia (a partir de pentosas) 2- Bacterias* Clostridium (a partir de celulosa) (termfilos, anaerobios) * Zymomonas

3- RecombinantesE.coli recombinante: Introduccin de los genes Alcohol deshidrogenasa y piruvato decarboxilasa de Zymomonas.

Pir

acetaldehido

etanol

Aminocidos
Principales productores: Bacterias de los gneros Corynebacterium y Brevibacterium * Mutantes auxotrofas y regulatorias * Mutantes alteradas en la secrecion * Cepas recombinantes

Principales productos: Acido glutmico 600,000

U$S 915 milliones Lisina U$S 500 milliones Fenilalanina U$S 200 millones Aspartato U$S 43 milliones

Toneladas/ ao

Vitaminas
Vitamina B12Microorganismos productores: Bacterias de los generos Propionibacterium shermani y Pseudomonas denitrificans. Produccin: 150 mg/ L. BiotinaMicroorganismo productor: cepas modificadas (mutantes) de Serratia marcescens.Produccin: 150-600 mg/ L. Vitamina B2 (Riboflavina)Microorganismos productores: -hongos (Eremothecium ashby y Ashbya gossypii) Candida sp Bacillus subtilis recombinante Produccin: 20 -30 g/ L

PRODUCCION DE METABOLITOS SECUNDARIOS

Los metabolitos secundarios funcionan en los organismos que los producen como: Reguladores del crecimiento Ionoforos Defensa frente a otros microorganismos (antibiticos, toxinas, pesticidas) Agentes de simbiosis Efectores de diferenciacin Respuesta a Stress

ANTIBIOTICOS
Desde 1940 se han introducido una gran variedad de molculas con actividad antibitico para su uso en medicina y agricultura. En el mercado hay 160 antibiticos en uso por un valor de 23,000 millones de U$S. Se han descripto 6,000 antibiticos de los cuales 4,000 se han aislado de Actinomycetes, y se describen alrededor de 500 antibiticos nuevos por ao. Una sola cepa de Streptomyces hygroscopicus produce aproximadamente 200 antibiticos. Muchos nuevos antibioticos se obtienen por semi-sintesis, es decir, por modificacion de antibioticos existentes

INHIBIDORES ENZIMATICOS Ej. Estatinas y acido zaragozico Inhibidores competitivos de la HMGCo A reductasa y escualeno ciclasa, por lo cual se emplean como anti- colesterolemicos. Microorganismo productor: Aspergillus terreus (hongos) Ej. Acido clavulanico (inhibe penicilasas) Ej. Acarbosa: Inhibidor de la glucosidasa intestinal. Disminuye la hiperglucemia y tambin la sntesis de triglicrido en los tejidos adiposos, el hgado y las paredes intestinales de individuos obesos, diabticos o con trastornos de la lipemia. Microorganismo productor: Actinoplanes (actinomycetes)

BIOPESTICIDAS Se aislaron en un principio como agentes antibiticos y luego, en las sucesivas investigaciones, surgieron nuevos usos o usos mas especficos. Fungicidas: kasugamycin, polyoxins, anfotericina Insecticidas: toxina de Bacillus thuringiensis Herbicidas: bialaphos antihelminticos: avermectinas Reguladores del crecimiento de plantas: giberellinas Inmunosupresores: ciclosporinas Agentes antitumorales: mitomycin, bleomycin Antivirales: inhibidores de la transcriptasa reversa y de la proteasa de HIV (ritonavir, nevirapine, etc)

EMPLEO DE LOS MICROORGANISMOS COMO VECTORES DE GENES HETEROLOGOS Los principales huespedes que se emplean para la produccion de proteinas recombinantes son E. coli, B. subtilis, S. cerevisiae, Pichia pastoris, Hansenula polimorpha y Aspergillus niger. Quimosina recombinante (Clonado del gen de la quimosina bovina en una levadura). Se emplea para la coagulacion de la caseina, en la obtencion de quesos.

Insulina humana (en E.coli) Hormona de crecimiento humana (en E.coli y levaduras) Vacuna Hepatitis (en levaduras ) Farmacos (interferon 2 alfa)
EMPLEO DE PLANTAS TRANSGENICAS CON GENES BACTERIANOS CLONADOS (bt)

MAIZ Y ALGODON BT

Uso de Microorganismos en biotransformaciones

Reacciones Quimicas realizadas por microorganismos: Oxidaciones
* Hidroxilacion : introduccion de grupos HO con regio y estereo especificidad. Ej obtencion de esteroides
Produccion de 11OH derivados y eliminacion de cadena lateral (cortisol, prednisolona, testosterona, etc)

* Epoxidaciones
* Desaturaciones * Rupturas oxidativa de anillos

Reducciones
Reacciones hidroliticas Condensaciones

Resolution of b-amino acid esters using P. cepacia lipase.

Resolution of pipecolic acid by oxidation with D-amino acid oxidase and recycling of the achiral oxidation product.

Overexpression in E.coli

Ingenieria metabolica: ruta artificial para la obtencion de hidrocortisona en levaduras

Artificial pathway for the biosynthesis of the hydrocortisone as rebuilt in yeast The enzymes in red come from human, bovine and plant organisms and their genes were engineered before introduction in yeast cells. Those in blue are original yeast enzymes whose genes were modified to change their expression levels. The green pathway is the main pathway for hydrocortisone production, the red one corresponds to controlled side reactions and the yellow one to secondary biosynthesis pathway coexisting with the major green one.

PRINCIPALES ETAPAS DE UN PROCESO DE PRODUCCION Bsqueda y seleccin de microorganismos (Screening)

Organismos mesofilos Organismos extremofilos SI BIEN LOS MICROORGANISMOS SON BUENOS PORDUCTORES DE UNA GRAN VARIEDAD DE COMPUESTOS, LOS PRODUCEN EN BAJA CANTIDAD, POR LO QUE SE REQUIERE :

Aumentar los rendimientos mediante:

Obtencin de mutantes (tecnicas de mutagnesis, recombinacin gentica, fusin de protoplastos) Empleo de tecnologa de DNA recombinante (para aumento del dosaje gentico de enzimas claves, utilizacin de nuevos sustratos, etc). Diseo y seleccin de medios de cultivo que maximicen la produccion, disminuyan los costos o faciliten la recuperacion de productos. Diseo y seleccin de las condiciones y sistemas de cultivo mas convenientes

PRINCIPALES PRODUCTOS
PRODUCTO ORGANISMO PRODUCCION (Ton/ao) 20 millones 2000 500,000 50,000

Solventes Etanol Acetona/butanol

Biomasa Starters para alimentos Proteina unicelular Acidos organicos Acido citrico Acido gluconico Acido lactico Aminoacidos Acido glutamico Lisina Fenilalanina arginina

Saccharomyces cerevisiae Clostridium acetobutylicum Levaduras y bacterias lacticas Candida utilis

Aspergillus niger Aspergillus niger Lactobacillus delbrueckii

250,000 50,000 50,000

Corynebacterium glutamicum Brevibacterium flavum Corynebacterium glutamicum Brevibacterium flavum

300,000 30,000 2000 1000

PRODUCTO Enzimas Proteasas Alfa-Amilasas Glucoa-amilasa Glucosa isomerasa Pectinasa Renina otras Vitaminas B12 Riboflavina Vacunas Difteria Tetanos Pertussis Polio Rubola Hepatitis B

ORGANISMO

PRODUCCION (Ton/ao) 600 500 500 500 100 50 50 10

Bacillus spp Bacillus amyloliquefasciens Aspergillus niger Bacillus coagulans Aspergillus niger Mucor o levaduras recombinantes

Propionibacterium shermanii Eremothecium ashbyii

Corynebacterium diphteriae Clostridium tetani Bordetella pertussis Virus atenuado crecido en rion de mono o celulas diploides humanas Idem anterior Antigenos de superficie expresados en levadura Claviceps paspali

< 0.1

Alcaloides del ergot

PRODUCTO Pigmentos Shikoninas Beta-carotenos Proteinas de uso teraputico Insulina Hormona de crecimiento Eritropoyetina FactorVIII-C Activador del plasminogeno Interferon alfa2

ORGANISMO

PRODUCCION (Ton/ao) < 0.1

Lithospermum (plantas) Levaduras E. coli recombinante E. coli recombinante o celulas de mamfero recombinante celulas de mamfero recombinante celulas de mamfero recombinante E. coli recombinante

< 0.1

Antibioticos Penicilinas Cefalosporinas Tetraciclinas Macrolidos (eritromicina) Polipeptidicos (gramicidina) Aminoglicosidos (estreptomicina) Aromticos (griseofulvina) Insecticidas Esporas bacterianas Anticuerpos monoclonales

Penicillum chrysogenum Cephalosporium acremonium Streptomyces aureofaciens Streptomyces erythreus Bacillus brevis Streptomyces griseus Penicillum griseofulvum

80,000 15,000 15,000 10,000 2,000 1,000

Bacillus thuringiensis Celulas de hibridoma

< 0.1 < 0..01