Penicillin Fermentation Using Elemental Balancing (PENFERM)

Fermentacin de Penicilina usando Balance Elemental

PENFERM (PENicillin FERMentation)

Sumario
En este trabajo a partir de mtodos de balance elementales en combinacin con ecuaciones cinticas simples se formula un proceso no estructurado de lote alimentado para la produccin de penicilina.

Artculo original
Aplicacin de Mtodos de Balance en el Modelado de Fermentacin de Penicilina.

Por qu Penicilina?
El descubrimiento, desarrollo y subsecuente uso de la penicilina es un hito en la historia mdica. La penicilina previene el crecimiento de una gran cantidad de germenes; al ser rganico es posible usarlo en humanos.

Importancia biotecnolgica
Las penicilinas, conjuntamente con las cefalosporinas, fosfonicina, cicloserina, bacitracina, los glicopptidos telcoplanina y vancomicina inhiben selectivamente diferentes pasos de la sntesis del pptidoglicano (murena), sustancia que le confiere la forma, rigidez y estabilidad a la membrana celular de casi todas las bacterias de importancia mdica (Lozano Valds et al, 1998).

Qu hace la penicilina?
Previene la produccin de peptidoglicano, constitutiva de paredes celulares bacterianas; de esa manera la bacteria crece sin soporte hasta finalmente romperse (lisis).

Importancia biotecnolgica
Desde que se descubri la penicilina, la biotecnologa ha desempeado un papel de vital importancia en el tratamiento de las enfermedades humanas. Al principio se fabricaba en grandes cantidades haciendo crecer el hongo sobre miles de recipientes de leche, que actuaban como caldo de cultivo.
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INTRODUCCIN
El crecimiento de los microorganismos es un sistema abierto muy complejo en donde se realizan transferencias de masa y energa, y no es una excepcin que las leyes de la termodinmica y de la conservacin de las especies atmicas se cumplan en los cultivos bacterianos. (Vazquez Duhalt, 1985).
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Descripcin del Modelo

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Descripcin del modelo

Tipo de Modelo: No estructurado, no segregado.

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Descripcin del modelo

Un proceso por lote alimentado para la produccin con alimentacin continua de glucosa. Amonio, cido sulfrico y cido fosfrico son las fuentes de nitrogeno, azufre y fsforo, respectivamente.
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Descripcin del modelo

Se considera que el cido fosfrico esta presente de manera suficiente en el medio y, por lo tanto, no es alimentado. Oxgeno y el dixido de carbono son intercambiados por el microorganismo. El producto de la hidrlisis de la penicilina, el cido peniciloico, es tambin considerado en el modelo.
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Descripcin del modelo

Figura 1. Corrientes de entrada y salida para la penicilina en un reactor de lote alimentado.

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Qu hacer?
Definir balances de materia a partir del cuadro de componentes.

Descripcin del modelo

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Descripcin del Modelo

A) Balance Elemental

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A) Balance Elemental

A) Balance Elemental

A) Balance Elemental
Para el Carbono: Para el Hidrogeno:

Para el Nitrgeno:

A) Balance Elemental
Para el Oxigeno:

Para el Azufre:
Para el Fsforo:

A) Balance Elemental

A) Balance Elemental

En resumen
Carbono

De balance de Nitrgeno

Azufre

Fsforo

De balance de Nitrgeno e Hidrgeno

A partir del balance de entalpia con algunas sustituciones

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Descripcin del Modelo

B) Formulacin de las ecuaciones cinticas

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B) Formulacin de las ecuaciones cinticas

Tasa de consumo de sustrato glucosa:
Se usa la relacin de Fishman y Biryukov de forma Michaelis-Menten. (Heijenen et al, 1979)

B) Formulacin de las ecuaciones cinticas

Tasa de Formacin de Biomasa: Debido a ser ampliamente reportada la relacin lineal entre la tasa de consumo de sustrato y la tasa de crecimiento. Se usar:

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B) Formulacin de las ecuaciones cinticas

Tasa de conversin del precursor. Se asume que el cido fenilactico (precursor) solo es utilizado para la sintesis de penicilina.

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B) Formulacin de las ecuaciones cinticas

Tasa de sintsis de Penicilina Se asume que la tasa especifica de sntesis de Penicilina no es funcin de la tasa de crecimiento.

Si hubiera una mayor tasa de crecimiento entonces sera dependiente: 38

B) Formulacin de las ecuaciones cinticas

Ecuacin de la tasa de Hidrlisis de Penicilina La hidrlisis segn Benedict et al (Heijnen et al, 1979) es una reaccin de primer orden. La constante es 0,002 1/h.

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Descripcin del Modelo

C) Ecuaciones de Balance

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C) Ecuaciones de Balance
Balance total de masa Las tasas individuales de alimentacin de glucosa, cido sulfrico y amonaco son ajustadas para igualar las tasas de consumo molar. Se desprecia la perdida de agua por evaporacin.

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Balances
Balance de masa para glucosa

Balance de masa para penicilina

Balance de masa para micelio

Balance de peso

Nomenclatura

C) Ecuaciones de Balance

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C) Ecuaciones de Balance
Component Balances Expressed in mol/h the dynamic balances are,

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Descripcin del Modelo

D) Relaciones Metablicas

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D) Relaciones Metablicas
The various metabolic relationships are given from:

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D) Relaciones Metablicas

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Programa en Berkeley-Madonna

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{ PENFERM } {ROELS MODEL OF PENICILLIN FERMENTATION}

{PENICILLIN PRODUCTION DOES NOT DEPEND ON GROWTH RATE}

{CONSTANTS} Q1=0.0245 {MAXIMUM GLUCOSE UPTAKE RATE} Q3=3.3E-4 {MAX SPEC. RATE OF PENIC. PRODN} K1=0.0056 {SATURATION CONSTANT FOR GLUCOSE} K3=0.002 {DEGRAD. CONSTANT FOR PENICILLIN} M=3.4E-3 {MAINTENANCE RATE FACTOR} Y2=3.67 {CONV. FACTOR (BIOMASS/GLUCOSE} Y3=0.46 {CONV. FACTOR(GLUCOSE/PENICILLIN} A=5{FLOW RATE PARAMETERS} B=500 M10=5500 {INITIAL GLUCOSE} M20=4000 {INITIAL BIOMASS} M30=0.001 M40=0 {INIT. PEN. AND PEN. ACID} G0=1E5 {INITIAL MASS IN THE BIOREACTOR}

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{INITIAL CONDITIONS} INIT M1=M10 INIT M2=M20 INIT M3=M30 INIT M4=M40 INIT G=G0

{GLUCOSE CONCENTRATION} C1=M1/G {BIOMASS CONCENTRATION} C2=M2/G {PENICILLIN CONCENTRATION} C3=M3/G {PENICILLOIC ACID CONCENTRATION} C4=M4/G
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{GLUCOSE IS CONSUMED ACCORDING TO MONOD KINETICS.} R1=-Q1*C1*M2/(K1+C1) {PENICILLIN DEGRAD. TO PENIC. ACID (FIRST ORDER)} R4=K3*M3 { SYNTHESIS RATE FOR MU GREATER THAN 0.01} R3=Q3*M2-R4

{PRECURSOR IS ONLY USED FOR PENICILLIN SYNTHESIS} R11=-(R3+R4) {BIOMASS FORMATION RATE} R2=-R1*Y2-M*Y2*M2-Y2*(R3+R4)/Y3 MU=R2/M2

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 {ELEMENTAL BALANCES} {NITROGEN BALANCE} R8=-(0.16*R2+2*(R3+R4)) {SULFUR BALANCE} R9=-(0.0046*R2+R3+R4) {PHOSPHORUS BALANCE} R10=-(0.0054*R2)

{CARBON BALANCE} R6=-(6*R1+R2+16*(R3+R4)+8*R11)

{OXYGEN AND HYDROGEN BALANCE} R5=6*R1+1.044*R2+18.5*(R3+R4)+9*R11
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 {ENTHALPY BALANCE} RH=-(669*R1+110.1*R2+196*R3+1961*R4+955*R11) {DERIVED PARAMETERS} {OXYGEN UPTAKE RATE} OUR=-R5 {CARBON DIOXIDE PRODUCTION RATE} CPR=R6

{RESPIRATORY QUOTIENT} RQ=CPR/OUR

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 {NITROGEN UTILISATION PARAMETERS} F2=.16*(-R2)/R8 {BIOMASS} F3=1-F2 {PENICILLIN} {SULFUR UTILISATION PARAMETERS} F4=.00468*(-R2)/R9 {BIOMASS} F5=1-F4 {PENICILLIN} {GLUCOSE UTILISATION PARAMETERS} G2=-R2/(Y2*R1) {GROWTH} G4=-M*M2/R1 {MAINTENANCE} G3=-(R3+R4)/(Y3*R1) {PRODUCT} {FLOW RATE OF GLUCOSE (LINEAR TIME DEPENDENCE)} F=A*time+B

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{COMPONENT BALANCES} {GLUCOSE} M1'=R1+F {BIOMASS} M2'=R2 {PENICILLIN} M3'=R3 {PENICILLOIC ACID} M4'=R4 {TOTAL MASS BALANCE} G'=F/2.78+R8/14.71+R9/2.55 {GLUCOSE AND PENICILLIN CONC. ARE ALWAYS POSITIVE.} LIMIT M1 >= 0.0 LIMIT M3 >= 0.0

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Simulacin

Solucin en Berkeley-Madonna

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Variables de operacin

Consideraciones en el programa
El programa en Madonna cubre un tiempo de fermentacin de 200h con condiciones iniciales: 5500 mol glucosa, 4000 mol biomasa(micelio), 0 mol penicilina and 0.001 mol cido peniciloico acid en un peso inicial de medio=1x1O^5 kg.
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Figura 2. Produccin de Penicilina

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Figura 3. Produccin de Penicilina

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Ejercicios

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Ejercicio 1
Correr la simulacin usando 3 alimentaciones distintas de glucosa: a) F=1000mol/h b) F=500+5 t (mol/h) c) F=1500-5t (mol/h)

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Que esperar?

Masa miceliar vs tiempo (izquierda); Concentracin Miceliar vs tiempo (derecha).

Qu esperar?

Masa penicilina vs tiempo (izquierda); Concentracin penicilina vs tiempo (derecha).

Qu esperar?

Masa de cido peniciloico vs tiempo (izquierda); Concentracin cido peniciloico vs tiempo (derecha).

Qu esperar?

Masa de glucosa vs tiempo (izquierda); Tasa de crecimiento especfico ( ) vs tiempo (derecha).

Qu esperar?

Cociente de respiracin vs tiempo (izquierda), Tasa de consumo de Oxgeno vs tiempo (derecha)

Qu esperar?

Metabolismo de glucosa a alimentacin constante (izquierda) y metabolismo de glucosa a alimentacin incrementada (derecha).

Qu obtenemos?

Ejercicio 2
Estudiar la sensibilidad del proceso a cambios en los parmetros cinticos: a)Tasas mximas especificas de glucosa y biomasa. b)Constantes de saturacin de glucosa y biomasa. c)Biomasa d)Rendimientos de biomasa y penicilina.

Qu esperar?

Todas la expectativas se dan un esquema de alimentacin aumentado (B)

Efecto de los cambios de la tasa maxima de consumo de glucosa para la masa micelial (izquierda) y la masa de penicilina (derecha)

Qu esperar?

Efecto de los cambios de la constante de mantenimiento en la masa micelial (izquierda) y la masa de penicilina (derecha)

Qu esperar?

Efecto de la variacin de la constante de saturacin de glucosa en masa micelial (izquierda) y la masa de penicilina (derecha)

Qu esperar?

Efecto de la variacin del rendimiento de biomas en sustrato en masa micelial (izquierda) y la masa de penicilina (derecha)

Qu esperar?

Efecto de la variacin del rendimiento de producto en sustrato en masa micelial (izquierda) y la masa de penicilina (derecha)

Ejercicio 3
Usando el balance de calor dado,calcular el perfil dinmico de temperatura en el reactor. Probarlo con una simulacin

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Qu se hiz?
Agregando las lneas: {HEAT BALANCE} RH=-669*R1-110.1*R2-1961*R3-1961*R4955*R11 Obtuvimos.

Ejercicio 4
Delimitar un esquema de control para mantener una temperatura constante durante la fermentacin.

Nuevo Diagrama

Para conocer la temperatura

{TEMPERATURE} init T1=25 T1'=(G*Temp-25*F)/(G-F) Temp=rH/(G*0.999)+25 Bajo la suposicin que el Cp del medio es de un medio con unicamente glucosa (Cp=0.999kcal/kgC)

Perfil de Temperatura sin control

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Conclusiones
A partir del modelo establecido en base al balance elemental para la produccin de penicilina, se optimiz el proceso de produccin con respecto a el mtodo rudimentario de producir la penicilina en leche.

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Referencias
Dunn, I. J., Heinzle, E., Ingham, J. & Penosil, J. E. (2003). Biological reaction engineering: dynamic modelling fundamentals with simulation examples. Weinheim: WILEYVCH verlag gmbh & co. Kgaa Heijnen, J. J. & Roels, J. A. (1979). Application of balancing methods in modeling the penicillin fermentation. Biotechnology and bioengineering. 21: 2175-2201. Lozano Valds, D., Larrondo Muguercia, H., Herrera Torres, M. L., Rivero Arias, E., Zamora Marn, R. & Arajo Praderes, L. J. (1998). Penicilinas. Acta mdica. 8(1):28-39. Vazquez Duhalt (1985). Termodinmica biolgica. Cuernavaca: AGT Editor.

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