SISTEMA INMUNE

Inmunidad inespecfica (adaptiva) Inmunidad especfica (adaptiva)

REACCIN ANTIGENOANTICUERPO

Ac monoclonales

Son anticuerpos producidos en un laboratorio. A partir de una sola clula, modificada en el laboratorio, y que produce un nico tipo de anticuerpos, se obtiene una colonia de clulas (clones) que producen ese nico anticuerpo.

TCNICAS INMUNOANALITICAS
Reaccin de precipitacin 1. En medio liquido Floculacin Inmunonefelometra 2. Test de difusin en agar o geles Inmunodifusin Mtodo de Oudin Mtodo de Oakley Fulthorpe Mtodo de Ochterlony Inmunoelectroforesis Inmuno Difusin Radial Reaccin de aglutinacin 1. Aglutinacin -Aglutinacin Activa -Aglutinacin Pasiva Reacciones en fase solida 1. Inmunomarcacin Inmunomarcacin directa Inmunomarcacin Indirecta 2. Radioinmunoanlisis (RIA) 3. ELISA 4. Western Blot 5. Inmunofluorescencia -Inmunofluorescencia directa -Inmunofluorescencia indirecta

PRUEBAS DE UNIN SECUNDARIA

Los complejos se agregan y originan fenmenos perceptibles visualmente. Son reacciones no reversibles. Dependen en gran medida del estado fsico del antgeno, de la temperatura, de los electrolitos presentes en la reaccin, de la afinidad y avidez en la interaccin antgeno-anticuerpo, proporcin entre ambos, tipo de inmunoglobulina presente.

PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA

Aglutinacin Precipitacin

REACCIN DE PRECIPITACIN

Precipitacin
Exceso de AC Proporciones ptimas Exceso de Ag

AC ESPECFICO Ag SOLUBLE

MEDIO PROPORCIN

- VENTAJAS Y Y Y Existen varias pruebas Y Se observan fcilmente Y Y RETCULO Muy tiles SOLUBLE No se requiere equipo costoso Pueden ser cualitativas o cuantitativas - DESVENTAJAS Poseen baja sensibilidad

Y Y Y

Y Y Y

Ag/mg

En medio lquido: Floculacin

El producto final precipitado forma agregados visibles macro o microscpicamente. La caracterstica lipdica del antgeno es la condicin que la hace ser una reaccin de floculacin La prueba de VDRL sirve para determinar los anticuerpos conocidos como reaginas

Interpretacin Control Positivo: Presencia de floculacin mediana a grande. Control Negativo: Ausencia de floculacin.

Inmunonefelometra

Tiene su base en una reaccin inmunolgica, y la dinmica de formacin de dicho complejo (por lo cual es cintico) ser la clave para la valoracin de la concentracin del parmetro a determinar. Esta tcnica mide el aumento de la intensidad de la luz dispersada por los inmunocomplejos generados

Valores: Positivo: Se formara un anillo en la interfase de los lquidos Negativo: Sin presencia de anillo

Test de difusin en agar o geles

Inmunodifusin: Se basa en la formacin de bandas de precipitacin Ag-Ac en medios semislidos (generalmente de agarosa). Mtodo de Oudin: Detecta la presencia de un Ac Mtodo de Oakley Fulthorpe: Determina anto el Ag como el Ac Metodo de Ouchterlony: Determina la existencia o no de determinantes comunes entre Ag

Test de difusin en agar o geles

Placa de Petri
7 5. Antgeno especfico (reactivo)

3. Suero problema

4. Suero testigo (+) (reactivo)

1. Agar gel
6 5

1 7 4 2 3

6
5

2 7

2
7 4

2 7 4

3
4

6.Cmara hmeda 48 hs

7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIN

A D. NEGATIVO E. Fuertemente POSITIVO C B F. POSITIVO D G

2 7 4

A.

NEGATIVO

B. POSITIVO C.
Dbilmente POSITIVO

I
G. POSITIVO

H. Banda INESPECFICA I. Banda INESPECFICA

Inmunoelectroforesis
Electroforesis para separar las protenas de la muestra en funcin de su carga. Aplicacin de un antisuero, mono o poli especfico, en un surco paralelo a la direccin del campo elctrico. El o los anticuerpos difunden durante 18-24h. Si se produce el reconocimiento Ag-Ac se forman bandas de precipitacin.

Inmuno Difusin Radial (IDR)

Un gel de agar se impregna con una anti-inmunoglobulina especfica para el isotipo de inters (subclase). La muestra del suero problema se coloca en un pozo cortado en el agar. En la zona de proporciones ptimas de Ag (Igs en el suero) y Ac (antiinmunoglobulina), se formar un precipitado en anillo alrededor del gel. El dimetro del anillo es proporcional a la concentracin del Ag (inmunoglobulina srica).

VALORES: Positivo: Se forma una banda de precipitacin en el punto en que ambos alcanzan equivalencia Negativo: Sin formacin de banda

REACCION DE AGLUTINACIN

YY + YY Y
Antgeno particulado (reactivo) Suero problema

Proporcin

Y
AGLUTINACIN
Medio

Aglutinacin en placa

1. Suero problema

2. Antgeno especfico (reactivo)

3. Mezclar

LECTURA E INTERPRETACIN

Con GRUMOS

Sin GRUMOS

AGLUTINACIN POSITIVA

Negativa

LAS REACCIONES DE AGLUTINACIN ACTIVA Se basan en el empleo de la partcula aglutinante como antgeno. LAS REACCIONES DE AGLUTINACIN PASIVA Se basan en el empleo de una partcula aglutinante inerte a la cual se la ha unido un antgeno.

VENTAJAS Muy utilizadas. Sencillas. Rpidas. Cualitativas o cuantitativas Econmicas DESVENTAJAS Muy sensibles. Reacciones hetero-especificas.

Pruebas de unin primaria

Miden la cantidad de inmunocomplejos (unin antgeno-anticuerpo), utilizando radioistopos, colorantes fluorescentes o enzimas.
Inmunomarcacin Radioinmunoanlisis (RIA) ELISA Western Blot Inmunofluorescencia.

REACCIONES EN FASE SOLIDA

Inmunomarcacin Las tcnicas de inmunomarcacin utilizando Ac conjugados permiten detectar la presencia de Ags en tejidos (inmunohistoqumica) o clulas (inmunocitoqumica). Radioinmunoanlisis (RIA) La tcnica de radioimnunoanlisis (RIA) Utiliza Ags o Acs radiomarcados con el istopo que permite cuantificar la presencia de pequeas cantidades de un determinado Ag o Ac en una muestra biolgica.

Determinacin de Ag por ELISA

ELISA "Sandwich" directo. En este modelo, el Ac especfico para el Ag de inters, se encuentra adsorbido en un soporte slido (placa de petri), sobre el que se aadir la muestra biolgica.

Determinacin de Acs por ELISA

Ag de inters se encuentra adsorbido en la placa de ELISA. Se pueden utilizar como antgenos, protenas virales o bacterianas e incluso virus completos

VALORES: Positivo: El cambio al color azul en los pozos. Negativo: No presenta cambio de color (trasparente).

Western Blot
La tcnica de Western Blot se basa en la separacin electrofortica de protenas en geles de poliacrilamida, la transferencia (blotting) de dichas protenas a un soporte slido (membrana de nitrocelulosa o nylon) y la posterior deteccin de una o ms bandas identificadas por Acs especficos.

INMUNOFLUORESCENCIA
Se usa fluorocromos (Rhodamina, Fluorescena) para detectar la reaccin Ag-Ac. El Ac est marcado con el componente fluorescente, y su presencia es detectada usando un microscopio de fluorescencia.

VALORES:

VENTAJAS Se pueden obtener resultados rpidos. No es necesario realizar cultivos. Se puede identificar microorganismos especficos en un grupo DESVENTAJAS Costos en reactivo y equipo Debe ser realizado por personal muy especializado. Los resultados no son 100% especficos